芋螺毒素安诺吉斯肽在制药中的新应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了芋螺毒素安诺吉斯肽在制药中的新应用。安诺吉斯肽有良好的抗炎效果，特别是在治疗炎症引起的疼痛方面，更具体来说是在治疗关节炎痛和炎症引起的内脏痛方面具有显著的效果，其可显著减轻疼痛，减少炎症因子的释放，可通过皮下注射或者肌肉注射给药，过程简单、操作方便。
【专利说明】芋螺毒素安诺吉斯肽在制药中的新应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，特别是涉及芋螺毒素安诺吉斯肽在制药中的新应用。
【背景技术】
[0002]疼痛是一种与组织损伤或者潜在组织损伤相关的不愉快的主观感觉和情感体验。疼痛分为急性疼痛和慢性疼痛等。急性疼痛往往病因明确，为疾病或组织损伤所致的急性症状，持续时间较短，伴有自主的、行为的和心理反应。急性疼痛具有积极的生物学作用，使机体避免重复造成最初疼痛的动作。临床上常见的急性疼痛主要包括急性炎症、分娩痛、术后痛、急性神经痛等。慢性疼痛是组织损伤痊愈后仍然持续存在的一种疼痛，发病慢，病程长，常伴有自主神经功能紊乱。临床上慢性疾病包括软组织、关节和骨疼痛，深部组织和内脏痛，神经损伤性疼痛，癌性疼痛等。疼痛是一把双刃剑，它是一种警报信号，有利于个体规避伤害是机体病变的提示信号，提醒病人求医，同时也是帮助医生诊断病情的依据；然而它往往是许多疾病的主诉症状，是痛苦的根源，造成器官功能障碍，造成药物滥用、自杀等社会问题。因此，镇痛是当今研究的一个重点问题。
[0003]依据疼痛病理机制，慢性疼痛可分为伤害性或炎症性疼痛(对疼痛刺激的适当反应)和神经(病理) 性疼痛(由神经系统损害诱发的不适当反应)。伤害性或炎症性疼痛，是一种常见的疼痛。内脏痛是根据身体部位的疼痛反应给出的说法，是一种常见的慢性疼痛类型，病因复杂，范围弥漫、定位不明确；牵涉到其他部位；伴有运动和自主神经反射，例如恶心、呕吐，肾绞痛引起的下背部肌肉紧张。内脏痛的治疗比较麻烦，缺乏特异性地治疗方案。
[0004]目前，主要的镇痛药物主要分为三类:阿片类镇痛药物、非留体类解热镇痛抗炎药(NSAID)和辅助性镇痛药。阿片类药物是一种良好的镇痛剂，然而它也存在很多副作用，耐受性，成瘾性，产生急性毒性等等。NSAID大多为有机酸，与血浆蛋白有高度结合力，从而增加药物在炎症部位的浓度而发挥作用。多数病人对NSAID均能耐受。但几乎无一种NSAID是安全的，主要毒性反应除胃肠道和肾脏方面外，尚有中枢神经系统、血液系统、皮肤和肝脏等副作用，这些副作用的发生常与剂量有关。
[0005]使用天然活性产物治疗疼痛的历史由来已久，天然镇痛药物包括中草药、动物和海洋生物类镇痛活性成分。其中，海洋药物是天然产物的重要来源，芋螺毒素是很重要的一种海洋活性药物。芋螺毒素(Conotoxin，CTX)是由生活在热带海洋中的肉食性软体动物芋螺(Conus)分泌出来的，用于麻醉猎物的小肽类毒素。它们是由10~41个氨基酸残基组成的，富含半胱氨酸(Cys)的动物神经肽毒素。其毒性极大，可引起动物出现惊厥、颤抖、甚至麻痹死亡。芋螺毒素的化学结构新颖，生物活性强，作用靶位的选择性高，已成为药理学和神经科学的有力工具和新药开发的新来源，因而引起了全世界科学家们的广泛重视。
[0006]至今，已从多种芋螺中分离到了上百种芋螺毒素，数种芋螺毒素已申请美国专利。它们在镇痛、局部缺血性保护、癫痫治疗、某些疾病诊断和受体研究中具有广泛的应用价值，有的已进入临床研究或已被FDA正式批准为治疗新药，用作特异诊断试剂和镇痛药。如由Olivera等从幻芋螺(Conusmagus)中分离的ω-CTXMVI IA，已被美国FAD正式批准为治疗顽痛的药物，其商品名为Ziconotide广泛用作神经生物学探针和无成瘾性镇痛剂，并具有多种药物发展前景；沿脊髓传递的Ziconotide能阻断伤害感受器释放神经传递素，阻止疼痛信号传入大脑，临床表现出强大的镇痛作用，效果优于吗啡等现有的镇痛剂，用于艾滋病、癌症及神经痛患者的治疗，无成瘾性，且疗效确切。来源不同的ω -CTX，尽管其氨基酸序列不同，但在结构上的差异都不是很大，如来自地纹芋螺(C.geographus)的GVIA、GVIC、GVIIA和GVIIB等，和来自幻芋螺MVIA、MVIIC、以及来自线纹芋螺(C.striatus) ω-CTX等，在药理学方面有相似的作用。a -CTX能结合并阻断小细胞肺癌表面相关的nAChR受体，在小细胞肺癌的诊断和治疗中有潜在价值，这将是CTX的又一个研究领域。芋螺毒素备受关注，已成为海洋毒素研究的热点。
[0007]我国关于芋螺毒素研究的报道不多，大多为综述芋螺毒素的研究概况及应用前景。卢柏松等，魏开华等对我国的少数几种芋螺(线纹芋螺，织锦芋螺和桶形芋螺)的毒素基因或毒液成份进行了研究。我国近海的芋螺约有70种，主要分布在海南岛，西沙群岛和台湾，大多数种类的芋螺毒素研究还未展开。因此，开展我国南海芋螺毒素的生化、生理、药理，尤其是其分子生物学领域的探索研究，对于推动我国多肽科学的发展，促进多肽药物的开发，具有不容忽视的理论价值和应用价值。
[0008]天然信号芋螺毒素安诺吉斯肽(又名ltl4a_7)是一个由13个氨基酸组成的多肽，氨基酸序列方向从N到C端为:MCPPLCAPSCTNC，实际分子质量:1335.92，纯度:95%。
【发明内容】
[0009]本发明的目的在于提供天然的信号芋螺毒素安诺吉斯肽在制药中的新应用。
[0010]解决上述技术问题的具体技术方案如下:
[0011]芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用。
[0012]芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗炎症引起的疼痛的药物中的应用(即在制备抗炎镇痛药物中的应用)。
[0013]芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗关节炎引起的疼痛的药物中的应用。
[0014]芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗炎症引起的内脏痛的药物中的应用。
[0015]在其中一些实施例中，所述药物的剂型为皮下注射剂型或肌肉注射剂型。
[0016]本发明所述天然的信号芋螺毒素安诺吉斯肽在制药中的应用具有以下优点和有益效果:
[0017]本发明经发明人大量的实验和研究表明，安诺吉斯肽对治疗炎症性疾病具有良好效果，特别是在治疗炎症引起的疼痛方面即抗炎镇痛方面效果明显，更具体的是在治疗关节炎痛和炎症引起的内脏痛方面具有显著的效果，其可显著减轻疼痛，减少炎症因子的释放；另外，其通过皮下注射或者肌肉注射给药，实验过程简单、操作方便。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1为皮下注射安诺吉斯肽在福尔马林实验中对小鼠舔趾时间的影响图；
[0019]图2为肌肉注射安诺吉斯肽后大鼠跖曲关节疼痛评分的影响图；其中，图2-A表示左侧致炎足关节评分的影响图，图2-B表示右侧正常足关节评分的影响图；[0020]图3为肌肉注射安诺吉斯肽后大鼠跖曲关节机械压痛阈值的影响图；其中，图3-A表示各组左侧致炎足机械压痛阈值的影响图，图3-B表示各组右侧正常足机械压痛阈值的影响图；
[0021]图4为肌肉注射安诺吉斯肽后对致炎足浸泡液中IL-1 β浓度的影响图；
[0022]图5为第一次肌肉注射安诺吉斯肽后对大鼠腹壁撤退反射阈值(CRD)的影响图；
[0023]图6为连续多次肌肉注射安诺吉斯肽后对大鼠腹壁撤退反射阈值(CRD)的影响图；
[0024]图7为Elisa法检测安诺吉斯肽对组织匀浆液中炎症因子IL-1 β和BK含量，及血清中CORT含量的影响图；
[0025]图8为Elisa法检测安诺吉斯肽对血浆和血清中炎症因子TNF-α含量的影响图。【具体实施方式】
[0026]本发明将运用三大炎症模型来研究安诺吉斯肽在治疗炎症性疾病中的效果，具体研究的 是其抗炎镇痛作用效果，一个急性炎症模型和两大慢性炎症模型。急性模型:福尔马林实验(Formalintest);慢性模型:佐剂关节炎模型和内脏痛模型,具体如下:
[0027](一 )、福尔马林实验(Formalin test)
[0028]一、实验材料
[0029]SPF级昆明小鼠，雌雄各半，18_22g。
[0030]甲醛溶液；生理盐水(空白对照组)；盐酸曲马多溶液20mg/kg(对照药)；安诺吉斯肽低剂量组(iyg/kg)，安诺吉斯肽中剂量组(?ομ g/kg)，安诺吉斯肽高剂量组(100 μ g/kg),皮下注射。
[0031]实验分组:空白组(生理盐水)，曲马多(20mg/kg)，安诺吉斯肽组(lyg/kg, 10 μ g/kg, 100 μ g/kg)。
[0032]二、实验方法
[0033]先将小鼠放于固定器中，于右腿足背大脚趾与第二脚趾间皮下注射20 μ I的药物(生理盐水/曲马多溶液/安诺吉斯肽溶液)；3min后，于右足底第二脚趾与第三脚趾间，皮下注射2.5%的福尔马林溶液(甲醛溶液)，然后将小鼠放于烧杯中，观察60min内小鼠藤脚趾的时间，每隔5min记录一次。
[0034]实验评定所用指标:小鼠舔脚趾时间。
[0035]三、实验结果
[0036]结果参见表1和图1。
[0037]表1皮下注射安诺吉斯肽对福尔马林小鼠舔趾行为影响
[0038]
【权利要求】
1.芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用。
2.芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗炎症引起的疼痛的药物中的应用。
3.芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗关节炎引起的疼痛的药物中的应用。
4.芋螺毒素安诺吉斯肽在制备治疗炎症引起的内脏痛的药物中的应用。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为皮下注射剂型或肌肉注射剂 型。
【文档编号】A61K38/10GK104013952SQ201410281260
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年6月20日 优先权日:2014年6月20日
【发明者】徐安龙, 项辉, 张晗, 杨文静, 王磊, 任政华, 陈尚武, 张丹 申请人:中山大学