亚甲兰在治疗早期百草枯急性中毒中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属急救医学领域，具体涉及亚甲兰在治疗早期百草枯急性中毒中的应用。用于治疗因百草枯中毒导致肺纤维化的疾病。采用亚甲兰对百草枯中毒患者进行早期干预治疗，可明显增加百草枯中毒患者肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性，降低丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性，从而减轻百草枯中毒后肺组织的病理损伤，抑制百草枯中毒肺纤维化的发生与发展，降低百草枯中毒患者的病死率从而改善患者预后。
【专利说明】亚甲兰在治疗早期百草枯急性中毒中的应用
【技术领域】
[0001]本发明公开了亚甲兰在治疗早期百草枯急性中毒中的应用，属急救医学领域。
【背景技术】
[0002]百草枯是目前世界范围内普遍使用的有机杂环类速效触杀型脱叶除草剂。其对人畜有较强毒性，急性中毒后无特效药物进行救治，病死率极高。目前针对百草枯中毒的治疗仍以减少吸收或促进排泄为主，因此，探寻一种高效低毒的治疗早期百草枯急性中毒有效药物已成为急救医学关注的重点。
[0003]亚甲蓝(methylene blue, MB)系还原剂,易溶于水,易穿过细胞膜,相对无毒副作用，是已被批准的临床用药。从19世纪引进生物学界开始，亚甲兰一直被广泛使用:亚甲兰作为染料用于神经解剖学和细菌学；在生物化学研究中，亚甲兰充当氧化还原作用的指示齐U。作为解毒剂，亚甲兰用于治疗亚硝酸盐等中毒引起的高铁血红蛋白血症；同时，亚甲兰亦用于治疗氰化物中毒和异环磷酰胺诱导性脑病。Demirbilek等报道亚甲兰可缓解脓毒血症大鼠急性肺损伤Ieinbixnim等研究发现MB对肝或胰脏缺血再灌注诱导的ALI有保护作用。因此，本发明的目的是将亚甲兰应用于百草枯急性中毒后的急救，减轻百草枯中毒后肺组织的病理损伤，抑制百草枯中毒肺纤维化的发生与发展，降低百草枯中毒患者的病死率从而改善患者预后。
【发明内容】
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[0004]本发明公开亚甲兰在治疗早期百草枯急性中毒中的用途，用于治疗因百草枯中毒导致肺损伤的疾病。
[0005]本发明通过以下实验证明百草枯在治疗因百草枯中毒导致肺损伤疾病的疗效:将36只大鼠随机分成对照(NS)组、百草枯(PQ)组、亚甲蓝(MB)组和亚甲蓝治疗(PQ+MB)组、亚甲蓝预防(MB+PQ)组，每组6只。动物模型建立后，麻醉固定取材，再通过对各鼠肺组织的病理切片观察，生物活性物质的测定等一系列实验，得出亚甲兰对百草枯误服后对肺损伤有一定保护作用。
[0006]1.MPO活性检测
[0007]支气管肺泡灌洗液离心后上清液与试剂混合、水浴等，于波长460nm处测定各管吸光度。NS、MB、PQ、PQ+MB组大鼠支气管肺泡灌洗液中细胞计数分别是(36±4) X 104ml、(34±2) X1Vml、((230±7) X 104/ml、(117±5) X 104/ml。与 NS 组比较，PQ 组大鼠支气管肺泡灌洗液中细胞计数增加(P〈0.05)，MPO活性增加(P〈0.05);与PQ组比较，PQ+MB组大鼠BALF中细胞计数减少(P〈0.05)，MPO活性降低(P〈0.05);与NS组比较，PQ+MB组大鼠BALF中细胞计数增加(P〈0.05) ,MPO活性增加(P〈0.05)。MPO是中性粒细胞的特异性标志，其活性水平代表中性粒细胞功能和活性状态。亚甲兰可缓解中性粒细胞介导的炎性反应，抑制中性粒细胞释放活性氧自由基发挥作用。
[0008]2.MDA含量测定
[0009]采用10%肺组织匀浆。分别设定标准管、标准空白管、测定管和测定空白管测定肺组织MDA含量。NS、MB、PQ、PQ+MB组大鼠MDA含量分别是(4.17 + 1.10) nmol/mg、(4.12 ± 1.10) nmol/mg、(22.37 ± 1.32) nmol/mg、(7.56 ± 1.11) nmol/mg。PQ 组大鼠肺组织MDA含量高于NS组(P〈0.05) ；PQ+MB组大鼠肺组织MDA与PQ组比较减少(P〈0.05);与NS组比较，PQ+MB组大鼠肺组织MDA增加(P〈0.05)。通过实验证明了亚甲兰是通过减少肺组织内的MDA含量；减少了活性氧自由基的生成来缓解百草枯的毒性。
[0010]3.肺组织SOD含量测定
[0011]采用2%肺组织匀浆。分别设定测定管和对照管。NS组、PQ组、MB组和PQ+MB组大鼠肺组织 SOD 活性分别是(21.98±2.12)U/mg、(12.88±4.33)U/mg、(5.86土 L 05)U/mg、(20.93±2.99)U/mg。PQ组大鼠肺组织SOD活性与NS组相比降低(P〈0.05) ;PQ+MB组大鼠肺组织SOD活性高于百草枯组(P〈0.05) ；PQ+MB组大鼠肺组织SOD活性与生理盐水组比较无明显差异(P>0.05)。亚甲兰提高了 SOD活性，减少了 MDA含量；充分说明亚甲兰是通过减少活性氧自由基的生成来缓解百草枯的毒性。
[0012]4.肺组织LDH活性测定
[0013]采用1%肺组织匀浆。分别设定空白管、标准管、测定管和对照管与生理盐水组(34849±2397.5U/g)及亚甲兰组(23017±2277.8U/g)比较。与生理盐水组比较，百草枯组大鼠肺组织LDH活性升高(P〈0.05);百草枯+亚甲兰组大鼠肺组织LDH活性与百草枯组比较降低(P〈0.05)，与生理盐水组相比升高(P〈0.05)。说明亚甲兰通过降低LDH的活性来缓解百草枯对机体的毒性作用。
[0014]5.肺组织病理学观察
[0015]将取下的右肺下叶在中性甲醛溶液中固定24h后，脱水、石蜡包埋、切片，经苏木素伊红(hematoxylin eosin, HE)染液染色观察肺损伤程度。NS组及MB组大鼠肺泡腔清晰，结构完整，肺泡壁光滑，肺泡腔及肺间质无渗出物。PQ组大鼠肺泡间隔增宽、间质水肿及大量炎细胞浸润，毛细血管扩张、充血，部分肺泡断裂，肺泡腔内水肿液聚集。PQ+MB组大鼠肺损伤明显减轻，表现为肺泡间隔增宽不明显，肺泡腔内渗出减少，间质水肿及炎细胞浸润减轻。
【具体实施方式】
[0016]下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。
[0017]实例一
[0018]在发现患者误服或有意口服百草枯后，在O?Ih之内使用亚甲兰2mg/kg。
【权利要求】
1.亚甲兰在治疗早期百草枯急性中毒中的应用。
2.根据权利要求1所述的亚甲兰在治疗早期百草枯急性中毒中的应用，其特征在于:亚甲兰应用时间为百草枯急性中毒后O?Ih ;用量为2mg/kg ;注射方式为静脉注射。
【文档编号】A61K31/5415GK104257660SQ201410527248
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月9日 优先权日:2014年10月9日
【发明者】范红斌, 庞庆丰, 杜斌, 陈俊良 申请人:江南大学