将白蔷薇提取物以及从中分离的加尔丹衍生化合物作为有效成分而包含的皮肤美白及皱纹改善用化妆品组合物的制作方法

本发明涉及一种将白蔷薇提取物作为有效成分而包含的功能性化妆品组合物，尤其涉及一种将白蔷薇提取物作为有效成分而包含的具有皮肤美白及皱纹改善功能的功能性化妆品组合物。

背景技术：

皮肤是使人们的身体免受外界刺激的人体最前沿的防御脏器，在美观方面其关注度也逐渐升高。于是，对多样的功能性化妆品的研究正在活跃进行，其中对皱纹缓解及美白功能的多样的功能性化妆品被推出已成为实情。

皮肤老化根据其原因而大致区分为内老化和外老化这两种，内老化(intrinsic aging)为随着年龄的增加而使生物体的生理功能降低的自然诱发的老化现象(aging process)，外老化(extrinsic aging)是由紫外线(UV)、干燥空气(dry air)、活性氧类(reactive oxygen species)以及应力(stress)等外界因素引起的老化现象。当由于这些因素而发生皮肤老化时，皮肤表面生成皱纹。

作为皱纹生成原因，被报道出多种原因，首先当皮肤暴露于过多的紫外线时，作为皮肤构成成分的胶原蛋白(Collagen)分解被促进，从而使皮肤失去弹力，并可能生成皱纹。而且，如果皮肤因过度的温度变化及湿度降低或者风等因素而变得过于干燥，则作为针对外界的防御墙的皮肤功能降低，于是间或生成皱纹。另外，如果皮肤暴露于活性氧类或自由基，则因氧化作用而生成过氧化脂质，并由此导致胶原蛋白等皮肤构成蛋白质变性，从而可能生成皱纹。

另外，如果发生皮肤老化，则发生皮肤的角质化，而且皮肤细胞的融合速率逐渐变慢，并使表皮细胞层变薄，而且角质层变厚，并且与真皮层之间的交界线变成直线。在真皮中，纤维芽细胞(human skin fibroblast)老化，于是纤维质与基质的生产性降低，而且细胞内过氧化物树脂急剧增加，并受到各种污染物质和应力等的影响，从而可能无法顺利执行细胞的功能，并且细胞的代谢活性降低，其结果因功能性、结构性损坏而生成皱纹，从而促进皮肤老化。因此，为了抑制因这种外界因素和内部因素引起的皮肤老化或皱纹的生成，正在研究多样的化妆品组合物乃是实情。

另外，如果对皮肤照射紫外线，则皮肤中的黑色素细胞被激活，于是因酪氨酸酶及TRP1、TRP2的作用而促进黑色素生成。生成的黑色素沉淀于皮肤中而发展成“黑斑”、“雀斑”，为了防止此，使用到包含有多样的化妆品组合物的美白化妆品。而且，已知紫外线促进皮脂、细胞膜等的氧化而引起各种皮肤障碍，尤其近来因臭氧层破坏，使紫外线增加，因此对有效的皮肤氧化防止技术方案提出更高的要求。

以往已知的具有美白效果的成分包括抗坏血酸磷酸酯盐、对苯二酚衍生物、胎盘提取物、曲酸、鞣花酸等，将这些成分配合的化妆品组合物普遍。尤其，近来利用到胎盘提取物的美白化妆品受到关注，然而这些胎盘提取物的供应量有限，而且伴随有伦理问题，因此其使用受限。因此，对于新型而有效的美白成分的开发的关注正在集中。

近来，报道出包含于植物的多酚等具有高美白效果，并提出使用到此的化妆品组合物。并且，黄酮类、羟基异黄酮类的美白效果也得到披露。然而，这些美白成分的效果微弱且保存时存在问题，而且在美白效果之外，无法发挥皱纹防止效果及老化防止效果。尤其，对于包含有化学成分的功能性化妆品而言，诱发皮肤刺激，因此存在对敏感皮肤不适合的问题，于是对于一种对皮肤的刺激较少且绿色环保的天然植物由来的功能性化妆品的关注正在集中。

另外，白蔷薇(white rose flower)是属于蔷薇属的种，以往对将蔷薇花提取物作为有效成分而包含的抗氧化、消炎、抗过敏等功效已经有所披露，然而与之相关的皮肤美白及皱纹改善效果却尚未得到研究。

对此，本申请的诸发明人将天然物质作为新型素材而进行了摸索，该素材对生物体没有副作用，而且可用于制造皮肤美白及皱纹改善效果优良的化妆品，在此过程中对白蔷薇提取物关注并进行了其功效试验，其结果乙醇提取物对酪氨酸酶的试管内活性进行有效抑制，从而表现出美白效果，并有效抑制胶原蛋白分解酶活性，从而发现了具有皱纹改善效果，据此完成了本发明。

技术实现要素：

技术问题

因此，本发明的目的在于提供一种对生物体没有副作用并具有皮肤美白及皮肤皱纹改善功效的功能性化妆品组合物。

技术方案

为了达到如上所述的本发明的目的，本发明提供一种将白蔷薇提取物作为有效成分而包含的皮肤美白或皮肤皱纹改善用化妆品组合物。

在本发明的一实施例中，所述白蔷薇提取物可以是将干燥化的白蔷薇花叶利用乙醇、丁醇或乙酸乙酯进行提取的提取物。

在本发明的一实施例中，所述白蔷薇提取物可通过抑制或阻碍酪氨酸酶的活性而抑制黑色素生成。

在本发明的一实施例中，所述白蔷薇提取物可通过抑制或阻碍MMP-1的活性而改善皮肤弹力。

并且，本发明提供一种将3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)作为有效成分而包含的皮肤美白或皮肤皱纹改善用化妆品组合物。

在本发明的一实施例中，所述3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)可从由如下的蔷薇组成的群中选择的一种蔷薇分离而成：白蔷薇(white rose flower)、红色桑德拉(Red Sandra)、红天鹅绒(Red Velvet)、第一红(First Red)、贵族(Nobless)、肯菲蒂(Konffetti)、我的心(My Heart)、佳娜红(Grand Gala)、德洛丽丝(Dolores)、罗得玫瑰(Rote Rose)、扎菲尔(Saphir)、梅塞德斯(Mercedes)、加布里埃拉(Gabriella)、弗里斯科(Frisco)、唯有爱(Only Love)、可可(Coco)、爱斯基摩(Escimo)、卡里布拉(Calibra)、米米罗斯(Mimi Rose)、小奇迹(Little Mable)、公主(Princess)、伊夫林(Evelien)、妩媚(Chaming)。

在本发明的一实施例中，所述3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)可从白蔷薇花叶提取物中由来。

在本发明的一实施例中，所述3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)可通过抑制或阻碍酪氨酸酶的活性而抑制黑色素生成。

在本发明的一实施例中，所述3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)可通过抑制或阻碍MMP-1的活性而改善皮肤弹力。

在本发明的一实施例中，所述组合物可被制剂化为从由如下之物组成的群中选择的一种：沐浴露润肤露、皮肤柔软剂、爽肤水、化妆水、沐浴露、牛奶沐浴露、保湿沐浴露、营养沐浴露、按摩霜、滋养霜、保湿霜、护手霜、精华素、滋养精华素、美容面膜、香皂、洗发水、洗面乳、洗面沐浴露、洗面霜、润肤露、洁面乳、乳液、口红、隔离霜、粉底、粉饼、散粉。

有益效果

本发明的白蔷薇花叶提取物或白蔷薇花叶由来的3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)通过阻碍酪氨酸酶活性的机理而抑制黑色素生成，从而具有美白效果，并通过阻碍MMP-1活性的机理而增进皮肤弹力，并具有改善皱纹的效果，因此将其作为有效成分而包含的本发明的组合物可作为对皮肤不产生刺激的皮肤美白及皮肤皱纹改善用功能性化妆品的素材而有效地利用。

附图说明

图1是利用乙醇、丁醇、乙酸乙酯而从白蔷薇花叶进行提取而得的提取物被观察MMP-1抑制效果的结果(黑色：1μg/mL、红色：3.2μg/mL、绿色：10μg/mL、黄色：32μg/mL、蓝色：100μg/mL)。

图2是利用乙醇、丁醇、乙酸乙酯而从白蔷薇花叶进行提取而得的提取物被观察酪氨酸酶抑制效果的结果(黑色：1μg/mL、红色：3.2μg/mL、绿色：10μg/mL、黄色：32μg/mL、蓝色：100μg/mL)。

图3是利用乙醇、丁醇、乙酸乙酯而从白蔷薇花叶进行提取而得的提取物被观察黑色素合成抑制效果的结果(黑色：1μg/mL、红色：3.2μg/mL、绿色：10μg/mL、黄色：32μg/mL、蓝色：100μg/mL)。

图4是将本发明的白蔷薇花叶层析物制造过程图示化的结果。

图5是对利用乙醇、丁醇、层析2而将从白蔷薇花叶提取而得的提取物按处理浓度分别测量DPPH自由基清除活性的结果。

图6是对利用乙醇、丁醇、层析2而将从白蔷薇花叶提取而得的提取物按处理浓度分别执行金属离子催化剂氧化抑制实验的结果。

图7是对利用乙醇、丁醇、层析2而将从白蔷薇花叶提取而得的提取物按处理浓度分别测量酪氨酸酶活性的结果。

最优实施方式

本申请的发明人在研究可防止皮肤老化并改善皮肤皱纹且具有皮肤美白效果的新型化妆品素材的过程中，确认到白蔷薇花叶提取物具有上述的功能。

因此，本发明的特征在于，提供一种将从白蔷薇花叶中提取的白蔷薇花叶提取物作为有效成分而包含的功能性化妆品组合物。

尤其，本申请的发明人在探索从天然物质中由来并对人体稳定、而且还可表现出卓越的美白效果和抗老化效果的素材的过程中，关注到白蔷薇提取物，并通过实验而确认了白蔷薇花叶提取物是否具有美白效果和皱纹改善效果。

即，根据本发明的一实施例，所述白蔷薇提取物通过抑制或阻碍MMP-1的活性，从而表现为改善皮肤弹力(参见图1)。

另外，黑色素作为存在于皮肤的色素，起到将身体从紫外线等外界刺激下保护的重要功能。然而，如果其过多生成而沉积，则生成斑点或雀斑，从而可能引起皮肤外观上的问题，进而促进皮肤老化，并诱发皮肤癌，因此可用于抑制黑色素过量生成的物质可使用为美白产品。

皮肤的颜色沉积由紫外线或炎症等刺激引发，而且还可能由遗传因素或激素、食品等化学物质等要素引起。黑色素的生物合成过程涉及到黑色素细胞(melanocyte)。即，黑色素的生物合成产生于被称为黑素体(melanosome)的特殊形态的黑色素细胞内的小器官，在该黑素体内的黑色素的生成中，被称为酪氨酸酶(tyrosinase)的酶起到最重要的作用。借助于该酶的作用，酪氨酸(tyrosine)转换为多巴(dopa)，并再通过一系列氧化过程而生成多巴醌(dopaquinone)，而且再变换成多巴色素(dopachrome)，从而最终形成黑褐色的黑色素。参与到该黑色素的色素形成的蛋白质基因中，酪氨酸酶(tyrosinase)、TRP-1(tyrosinase related protein-1)、TRP-2、ERK(Extracellular signal-regulated kinases)以及作为用于调节这种黑色素合成基因表达的主要转录因子的MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)的表达在黑色素合成过程中起到重要作用。

根据本发明的一实施例，本发明的白蔷薇花叶提取物将酪氨酸酶以浓度依赖方式进行阻碍，从而表现为具有抑制黑色素合成的活性(参见图2、图3)。

因此，对于抑制酪氨酸酶活性的本发明的白蔷薇花叶提取物而言，预计可使用为如下用途：预防皮肤的色素沉积，并实现皮肤的美白效果。

通过如上所述的结果，本申请的发明人基于实验而证实了如下事实：本发明的白蔷薇花叶提取物兼备有皮肤皱纹改善效果以及皮肤美白效果。

另外，本申请的发明人还额外地进行了如下实验：考察所述白蔷薇花叶提取物中尤其是哪个成分具有皮肤皱纹改善效果及皮肤美白效果。

其结果，可以确认如下的事实：相当于利用丁醇而对白蔷薇花叶进行提取而得的层析物的第 14个峰值的 3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)具有最理想的MMP-1活性阻碍功能及酪氨酸酶活性阻碍功能。

因此，本发明不仅提供一种白蔷薇花叶提取物，而且还可以提供一种将3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)作为有效成分的皮肤美白及皮肤皱纹改善用化妆品组合物。

根据本发明的白蔷薇提取物可使用基于本领域中公知的提取及分离方法来从天然物质中提取并分离而获得的物质，本发明中定义的提取物是利用适当的溶剂而从白蔷薇中提取之物，例如，将白蔷薇的粗提取物、极性溶剂可溶性提取物或者非极性溶剂可溶性提取物全部包括。优选地，可以是从白蔷薇花叶中提取的提取物。

作为用于从所述白蔷薇中提取出提取物的适当的溶剂，只要是药学准用的有机溶剂就都无妨使用，可以使用水或者有机溶剂。例如，虽然不限于此，但可将如下物质单独或混合而使用：提纯水；包括甲醇(methanol)、乙醇(ethanol)、丙醇(propanol)、异丙醇(isopropanol)、丁醇(butanol)等的碳原子数为1至4的醇类；丙酮(acetone)、乙醚(ether)、苯(benzene)、氯仿(chloroform)、乙酸乙酯(ethyl acetate)、亚甲基氯(methylene chloride)、己烷(hexane)以及环己烷(cyclohexane)等。优选地，可使用乙醇(酒精)、丁醇或者乙酸乙酯。

作为提取方法，可选用热提取法、冷浸提取法、换流冷却提取法、溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、超声波提取法、溶出法、压实法等方法之一。并且，所期望的提取物还可以额外执行普通的层析工艺，而且可以利用通常的提纯方法而被提纯。本发明的白蔷薇提取物的制造方法并不受限，并可利用公知的任意方法。

例如，包含于本发明的组合物中的白蔷薇提取物可将利用如上所述的热水提取或溶剂提取法而提取出的1次提取物借助于减压蒸馏、冻结干燥或者喷雾干燥等额外的过程而制造成粉末状态。而且，可以获得一种利用硅胶柱色谱法(silica gel column chromatography)、薄层色谱法(thin layer chromatography)、高效液相色谱法(high performance liquid chromatography)之类的多样的色谱而对所述1次提取物执行额外提炼的层析产物。

因此，在本发明中，白蔷薇提取物是涵盖包括提取、层析或提纯的各个步骤中获取的所有提取液、层析产物以及提纯物质及其稀释液、浓缩液或者干燥物的概念。

对制造根据本发明的一实施例的白蔷薇提取物的方法进行如下所述的更加具体的考察。

在本发明中，将干燥化的白蔷薇花叶进行粉碎而粉末化，然后在所述粉末中添加乙醇或者水，并在室温下提取24小时，然后再利用乙醇或者乙酸乙酯而将水提取物在室温下额外沉积24小时，从而制造成冻结干燥的粉末，通过这一过程，可获得白蔷薇花叶提取物。

并且，将所述丁醇提取物在100mg中添加1ml的甲醇，然后在10000rpm下进行2分钟的离心分离，并在通过离心分离而沉淀的球体中添加丁醇1ml，并进行层析，将如此处理的F2通过利用GC/MS(Agilent Technologies 5975C)而进行分析，其结果可通过第14个溶剂峰而获得3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)。

如上所述地从白蔷薇花叶中提取的提取物或者由此提炼的化合物在被制造成化妆品组合物的情况下，本发明的组合物不仅可以包括如上所述的白蔷薇花叶提取物，而且还可以包括通常利用于化妆品组合物的成分，例如可包括：硫氧化剂、稳定剂、溶解剂、维生素、颜料及香料之类的普通的辅助剂；以及载体。

而且，本发明的组合物除了可以使用如上所述的白蔷薇花叶提取物，还可以在并不与白蔷薇花叶提取物发生反应而有损皮肤保护效果的限度内，将以往使用至今的有机紫外线阻断剂混合而使用。

作为有机紫外线阻断剂可以使用从由如下的物质组成的群中选择的一种以上的物质：甘油PABA、甲酚曲唑三硅氧烷、甲酚曲唑、没食子酸酯三油酸酯、二苯基咪唑四磺酸盐、二乙基己基丁酰胺三嗪酮、二乙氨基羟基苯甲酸己酯、DEA-对甲氧酯、醌与二羟基丙酮的混合物、亚甲基双苯并三唑基四丁基甲基苯酚、4-甲基苄基樟脑、邻氨基苯甲酸甲酯、苯并酚-3(氧苯),苯并酚-4、苯并酚-8(二氧苯)、丁基甲氧基苯甲酰甲烷、二乙氧基苯酚甲氧基苯基三嗪、西诺沙酯、乙基二羟基丙基PABA、氰双苯丙烯酸辛酯、乙基己基二甲基PABA、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸异辛酯、乙基己基三嗪酮、异戊-P-甲氧基异戊酯、多晶硅-15(苄叉丙二酸二乙酯)、亚基对苯二甲酸酯及其盐类、DEA-水杨酸、氨基苯甲酸(对氨基苯甲酸)。

并且，本发明的化妆品组合物可制造成本领域中通常制造的任意制造形态，例如可制剂化为溶液、悬浊液、乳浊液、浆糊、凝胶、面霜、乳液、粉末、香皂、含界面活性剂的洁白剂、油、粉末粉底、乳浊液粉底、蜡粉底、喷雾等，然而并不局限于此。具体而言，本发明的化妆品组合物可制造成柔软化妆水、滋养化妆水、滋养霜、按摩霜、精华素、眼霜、洁面霜、洁面泡沫、卸妆水、美容面膜、喷雾水或者粉末的制造形态。

当本发明的制造形态为浆糊、霜或凝胶时，作为载体成分，可以使用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍、纤维素衍生物、聚乙烯乙二醇、硅、膨润土、氧化硅、滑石或者氧化锌等。

当本发明的制造形态为溶液或乳浊液时，作为载体成分，可利用溶剂、溶剂化试剂或者乳浊化剂，例如，可以使用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇、或者脱水山梨醇脂肪酸酯。

当本发明的制造形态为悬浊液时，作为载体成分，可以利用水、乙醇或丙二醇之类的液态稀释剂；乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯、聚氧乙烯脱水山梨醇酯之类的悬浊剂；微晶纤维素；铝金属氢氧化物；膨润土；亚酯或黄蓍等。

当本发明的制造形态为粉末或喷洒剂时，作为载体成分，可利用乳糖、滑石、氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰亚胺粉末，尤其当其为喷洒剂时，可额外包括氯氟化烃、丙烷/丁烷或二甲基乙醚之类的促进剂。

但本发明的制造形态为含界面活性剂的洁白化剂时，作为载体成分，可利用脂肪醇硫酸盐、脂族醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺Beta体、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、或者乙氧基化甘油脂肪酸酯等。

而且，本发明的特征还在于，将把白蔷薇花叶提取物或3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)作为有效成分而包含的化妆品组合物应用于人体皮肤，从而实现抗皮肤老化、改善皮肤皱纹或者皮肤美白效果。

本发明的化妆方法统称利用本发明的化妆品组合物的所有化妆方法。即，利用化妆品组合物的所有本领域公知方法均属于本发明的化妆方法。

本发明的化妆品组合物可单独或重复使用，或者可以与本发明以外的其他化妆品组合物重复使用。并且，根据本发明的化妆品组合物可根据通常的使用方法而使用，并可根据用户的皮肤状态或取向而改变其使用次数。

当本发明的化妆品组合物为香皂、含界面活性剂的洁白化剂制造形态或者不含有界面活性剂的洁白化剂制造形态时，涂布在皮肤之后可擦拭、卸下或者用水清洗。作为具体示例，所述香皂为液态香皂、粉状香皂、固体香皂以及油香皂，所述含界面活性剂的洁白化剂制造形态为洁面泡沫、卸妆水、洁面巾以及洁面美容面膜，所述不含有界面活性剂的洁白化剂制造形态为洗面霜、洗面乳、卸妆水以及洁面凝胶，然而并不局限于此。

以下，根据实施例而对本发明进行更加详细的说明。这些实施例仅用于更加具体地说明本发明，本发明的范围并不局限于这些实施例，这对于本领域中具有基本知识的人员而言想必不言而喻。

具体实施形态

<实施例1>

准备白蔷薇花叶

本发明中使用的白蔷薇花叶于2010年5月取自韩国忠清北道镇川，并在阳光下完全干燥而使用。完全干燥的花叶被利用转子速磨机(rotor speed mill,Laval Lab Inc.,Laval,Que)而粉碎，且被粉末化，然后利用70％乙醇喷洒剂而杀菌，并在80℃下干燥，然后直到使用为止在4℃下存放。

<实施例2>

制造白蔷薇花叶提取物

将上述准备的干燥白蔷薇花叶粉末分为两个部分，并利用乙醇或水而进行了提取。

首先，利用所述白蔷薇花叶粉末体积的10倍份量的70％乙醇(ethanol)而进行沉积并在室温下提取24小时而获得乙醇提取物。对于提取出的悬浊液，利用滤纸No.1而只将滤渣滤除，该滤液在50℃真空下浓缩，然后冻结干燥而1次获得提取物。以乙醇提取物获取的试料通过n-hexane、ethyl acetate(EA)、chloroform、n-butanol(BuOH)、蒸馏水而得到连续层析，并利用蒸发器而将各个层析物干燥化，然后使用于实验。

<实施例3>

白蔷薇花叶提取物的胶原蛋白分解酶(collagen matrixmetalloproteinase-1)抑制功效分析

作为用于测量所述白蔷薇花叶提取物的皱纹改善效果的一个环节，参考韩国校正工程研究协会(2004)的“美容相关功能性试验(pp.821-858)”的引导方案而测量了所述提取物的胶原蛋白分解酶(Collagen matrix metalloproteinase-1,MMP-1)活性抑制效果。

对其简要说明则如下：将25mg的源自牛筋的胶原蛋白(bovine tendon collagen)溶入到0.05M的三(羟甲基)-甲基-2-氨基乙磺酸(TES)缓冲体，并在37℃下静置15分钟。接着，将胶原酶-1和按浓度实验物质添加，然后在37℃下额外反应5小时。从反应液中取出0.2mL，并添加到1mL的A缓冲体[4％茚三甲基溶纤(2-甲氧乙醇)+0.2M柠檬酸钠0.71mM氯化亚锡]。沸腾20分钟之后添加n-丙醇，并静置15分钟，然后在600nm下测定了吸光度。以只添加不含有白蔷薇层析物的缓冲体(buffer)时的吸光度变化为基准(100％)，将基于按浓度白蔷薇层析物的吸光度减少以抑制率表示出。

其结果，如图1所示，乙醇层析物在100μg/mL下表现出41.7％的MMP-1活性抑制率，乙醇层析物在10μg/mL下表现出34.9％的活性抑制率，并在32μg/mL下表现出47.7％的活性抑制率，且在100μg/mL下表现出76.1％的MMP-1活性抑制率。另外，乙酸乙酯层析物表现出最强力的MMP-1活性抑制功效，其在3.2 μg/mL下表现为35.0％，在10μg/mL下表现为39.8％，在32μg/mL下表现为59.0％，并在100μg/mL下表现出83.1％的抑制率。

通过如上所述的结果，本申请的诸发明人确认了如下事实：白蔷薇花叶的乙醇提取物、丁醇提取物、乙酸乙酯提取物均抑制MMP-1的活性，因此，所述白蔷薇花叶的乙醇提取物、丁醇提取物、乙酸乙酯提取物表现出卓越的皱纹改善效果。

<实施例4>

白蔷薇花叶提取物的黑色素合成酶(tyrosinase)抑制功效分析

另外，为了测量白蔷薇花叶提取物的皮肤美白效果，通过参考韩国保健工程研究协会(2004)的“美容相关功能性试验(pp.821-858)”的引导方案而测量出作为黑色素合成酶的酪氨酸酶(tyrosinase)的活性抑制效果。

对其进行如下简要的说明。在96孔板的各个孔上，将蘑菇酪氨酸酶(2,000unit/mg)20μL和10mM L-二羟苯丙氨酸(L-DOPA)10μL添加于溶入到PBS(pH 6.8)的白蔷薇层析试料70μL(最终浓度1、3.2、10、32、100μg/mL)，然后在37℃下反应30分钟，然后利用酶标仪(Infinite 200,Tecan Group Ltd.,Switzerland)而在475nm下测量了吸光度。此时，以只添加不含有白蔷薇层析物的缓冲体时的吸光度变化为基准(100％)，以抑制率表示出基于按浓度白蔷薇层析物的吸光度减少。

其结果，如图2所示，乙醇层析物在32μg/mL下表现出29.4％的酪氨酸酶抑制率，在100μg/mL下表现出52.9％的酪氨酸酶抑制率；丁醇层析物在32μg/mL下表现出38.1％的酪氨酸酶抑制率，并在100μg/mL下表现出60.4％的酪氨酸酶抑制率。另外，乙酸乙酯层析物表现出最强的酪氨酸酶抑制率，其在32μg/mL下表现为44.3％，在100μg/mL下则表现出65.1％的抑制率，这已被确认。

<实施例5>

白蔷薇花叶提取物的黑色素合成抑制功效分析

本申请的诸发明人为了更加明确地认识白蔷薇花叶提取物的皮肤美白功效，在细胞水平下，通过参考韩国保健工程研究协会(2004)的“美容相关功能性试验(pp.821-858)”引导方案而测量出所述白蔷薇花叶提取物的黑色素合成抑制效果。

对其进行如下简要的说明。将B16小鼠黑色素瘤细胞以1x 10⁴cells/well(0.5mL)分注到96-孔板，并培养了24小时。利用按浓度白蔷薇层析及α-促黑素细胞激素(MSH)而进行处理，并在37℃下额外培养了3天。在培养液中添加0.15mL的1M NaOH而将细胞溶解，并煮沸5分钟而使黑色素溶出。取出溶出液0.1mL并在490nm下测量了吸光度。以合成黑色素制作成标准黑色线，并定量出浓度，且以未处理试料时的黑色素生成量为基准(100％)，表示出白蔷薇层析物的按浓度抑制率。

其结果，如图3所示，乙醇层析物在32μg/mL下表现出27.7％的黑色素合成抑制率，并在100μg/mL下表现出39.9％的黑色素合成抑制率，丁醇层析物在10μg/mL下表现出23.5％的黑色素合成抑制率，并在32μg/mL下表现出35.5％的抑制率，且在100μg/mL下表现出49.6％的黑色素合成抑制率。另外，乙酸乙酯层析物表现出最强力的黑色素合成抑制功效，其在10μg/mL下表现为30.2％，在32μg/mL下表现为54.4％，并在100μg/mL下表现出58.8％的黑色素合成抑制率。

通过如上所述的结果，诸发明人确认了如下事实：白蔷薇花叶的乙醇提取物、丁醇提取物、乙酸乙酯提取物均抑制酪氨酸酶的活性，并抑制黑色素合成。因此，所述白蔷薇花叶的乙醇提取物、丁醇提取物、乙酸乙酯提取物表现出卓越的美白效果。

<实施例6>

白蔷薇花叶提取物的成分分析

诸发明人旨在对表现出如上所述的皱纹改善及美白效果的白蔷薇花叶提取物的特定成分进行分析。为此，本申请的诸发明人在丁醇提取物100mg中添加1ml的甲醇，然后在10000rpm下离心分离2分钟，从而分离出上层液(层析物1；75％；以下称为“F1”)，并在沉淀的球体物中添加丁醇1ml，从而收获了层析物2(8％；以下称为“F2”)(参考图4)。

利用安装有CTC CombiPAL自动进样器系统(Palo Alto,CA,USA)的GC/MS(Agilent Technologies 5975C)而对所述F1和F2进行了分析。使用于试料分析的柱体为HP-5column(Agilent Technologies,250μm×0.25μm×30m)，对10μL的试料进行了分析。进样器温度(injector temperature)为250℃，GC烤炉在50℃下静置5分钟，并以每分钟3℃的间隔测量至280℃。考虑到溶剂峰，从4分钟以后开始收集了数据，并为了分析成分而使用到Wiley7N库数据。

其结果，可确认表1和表2所示的构成成分。

[表1-F1的构成成分分析表]

[表2-F2的构成成分分析表]

<实施例7>

白蔷薇花叶提取物的按成分胶原蛋白分解酶(collagen matrixmetalloproteinase-1)抑制功效分析

本申请的诸发明人为了确认白蔷薇花叶提取物中的尤其是哪个成分表现出皮肤皱纹改善效果，对所述F1中分析的36个构成成分及F2中分析的14个构成成分的MMP-1抑制功效进行了实验。

实验方法与实施例3所述的方法相同，实验结果，F2的第14个层析物即3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)中表现出尤为优良的MMP-1抑制功效，这已得到确认。

<实施例8>

3,5-二-O-甲基-加尔丹的黑色素合成酶(tyrosinase)抑制功效分析

本申请的诸发明人为了确认发挥卓越的MMP-1抑制功效的3,5-二-O-甲基-加尔丹是否也发挥作为黑色素合成酶的酪氨酸酶抑制功效，以与所述实施例4所述的方法相同的方法进行了实验。

其结果，确认了3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)的酪氨酸酶抑制活性也优良。

<实施例9>

3,5-二-O-甲基-加尔丹的黑色素合成抑制功效分析

最后，诸发明人通过实施例5中记载的实验方法而观察了源自所述3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)的酪氨酸酶抑制活性的黑色素合成抑制功效。

其结果诸发明人得以确认如下事实：不出所料，基于3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)处理，B16小鼠黑色素瘤细胞的黑色素合成可被有效地抑制。

<实施例10>

按处理浓度的白蔷薇花叶提取物的DPPH活性氧脱除功能分析

DPPH(2,2-联苯-1-苦味酰自由基)作为其本身非常稳定的自由基(free radical)，在517nm下是表现出特定光吸收的深紫色化合物，然而却在具有自由基(radical)脱除活性的抗氧化剂的作用下定量褪色。并且，基于自由基的脱除活性与包含脂质过氧化抑制活性在内的抗氧化活性表现出相关关系，因此属于广泛利用在抗氧化剂探索的实验方法。

因此，本申请的发明人为了确认白蔷薇花具有的DPPH活性氧脱除功能而检测出DPPH模式、乙醇(EtOH)提取物以及各个层析物的反应，并作为阳性对照组，将维生素C(Vit.C)处理之后通过利用微孔板-ELISA阅读器(SpectraMax plus 384,Molecular Devices,CA,USA)而在517nm下测定出吸光度，并确认了DPPH活性氧脱除性能。

将白蔷薇花的样品分别以1、10、25、50μg/mL的浓度进行处理，然后测量出DPPH活性氧脱除性能，其结果，在所有样品中，从10μg/mL的浓度开始表现出DPPH活性氧脱除功能(参考图5)。

<实施例11>

按处理浓度的白蔷薇花叶提取物的金属离子催化剂氧化抑制分析

有一种确认方法，利用金属离子催化反应而确认抗氧化物质的效果，所述抗氧化物质使BSA(牛血清白蛋白)之类的蛋白质或酶免受基于ROS(活性氧)的损伤，为了通过这种方法确认白蔷薇花提取物和层析物的金属离子催化剂氧化抑制力，进行了如下所述的实验。

首先，为了诱发自由基(Free radical)的生成，通过添加1mM的CuSO₄、10mM的H₂O₂的方式而利用了金属离子催化反应，在生成自由基之后，在SDS-聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel)中通过电泳而实验了提取物及层析物所具有的BSA蛋白质的保护效果。

将白蔷薇花样品分别以1、10、25、50μg/mL的浓度处理之后，对金属离子催化剂自由基(free radical)相关蛋白质保护效果进行了评估，其结果在乙醇(EtOH)提取物中从10μg/mL浓度表现出金属离子催化剂自由基所引起的蛋白质保护效果，反之在丁醇(BuOH)、F2层析物中却从1μg/mL的浓度开始观察出保护效果(参考图6)。

<实施例12>

按处理浓度的白蔷薇花叶提取物的体外(invitro)酪氨酸酶活性阻碍分析

本申请的诸发明人在白蔷薇花层析物中混合100mM磷酸钠缓冲体(pH 6.5)、L-酪氨酸、源自蘑菇的酪氨酸酶(mushroom tyrosinase)，并在37℃的温度下反应30分钟，然后利用OLYMPUS CKX 41(Olympus,Tokyo,Japan)而拍摄照片，然后通过强度(intensity)测量了酪氨酸酶活性阻碍性能。

将白蔷薇的花样品分别以10、25μg/mL的浓度进行处理，然后测量酪氨酸酶活性阻碍能力，其结果，在所有样品中均表现出酪氨酸酶活性阻碍性能，尤其在丁醇(BuOH)、F2层析物中以与作为阳性对照组的维生素C相近的水平表现出酪氨酸酶活性阻碍性能(参考图7)。

通过如上所述的结果，本申请的发明人以实验方式确认了白蔷薇花叶提取物具有皮肤美白及皱纹改善效果，并得知如下事实：在白蔷薇花叶提取物中，尤其是3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)基于MMP-1活性及酪氨酸酶活性抑制功效而发挥出皮肤美白及皮肤皱纹改善方面的卓越的效果。因此，包含有白蔷薇花叶提取物或3,5-二-O-甲基-加尔丹(3,5-di-o-methyl-gartanin)的化妆品组合物将会作为用于改善皮肤美白及皮肤皱纹的功能性化妆品的主要成分而有效地得到利用。

以下，作为本发明的化妆品制造形态示例，举例说明包含有本发明中作为有效成分的白蔷薇提取物(或者3,5-二-O-甲基-加尔丹)的化妆水、精华素、身体沐浴露等。然而，本发明的化妆品的制造形态并非务必局限于所述制造形态。

[制造形态例1]沐浴露润肤露

通过添加如下所述的成分及含量而根据一般方法制造出沐浴露润肤露。

白蔷薇提取物(或者3,5-二-O-甲基-加尔丹)——2.0重量％；1,3-丁二醇——5.2重量％；油酒精——1.5重量％；乙醇——3.2重量％；聚山梨酯20——3.2重量％；苯并酚9——2.0重量％；聚羧乙烯——1.0重量％；甘油——3.5重量％；香——微量；防腐剂——微量；提纯水——残余份量％。

[制造形态例2]精华素

通过以如下所述的成分及含量进行添加而根据一般方法制造出精华素。

白蔷薇提取物(或者3,5-二-O-甲基-加尔丹)——2.0重量％；鲸蜡硬脂酒精——1.0重量％；单硬脂酸甘油酯——0.8重量％；山梨醇单硬脂酸酯——0.3重量％；对羟基苯甲酸丙酯-—0.1重量％；聚山梨酯60——1.0重量％；矿物油——5.0重量％；环甲硅油——3.0重量％；二甲硅油——0.5重量％；尿囊素——0.1重量％；甘油——5.0重量％；酒精——2重量％；丙二醇——3.0重量％；香——微量；防腐剂——微量；提纯水——残余份量％。

[制造形态例3]身体沐浴露

通过以如下所述的成分及含量进行添加而根据一般方法制造出身体沐浴露。

白蔷薇提取物(或者3,5-二-O-甲基-加尔丹)——2.0重量％；烷基醚磷酸酯(30％)——30.0重量％；烷基醚磺基琥珀酸酯(30％)——20.0重量％；烷基酰胺Beta体(30％)——5.0重量％；丙二醇——5.0重量％；Beta体——5.0重量％；新型DAE——4.0重量％；纤维素胶——0.05重量％；水解蛋白质——0.1重量％；柠檬酸——微量；NaCl——微量；香——微量；防腐剂——微量；提纯水——残余份量％。

至此，以优选实施例为中心而对本发明进行了考察。本发明所属的技术领域中具有基本知识的人员能够在不脱离本发明的本质特性的范围内以变形形态实现，这想必是可以理解的。因此，所公开的实施例并非出于限定性观点，而是旨在说明。本发明的范围并未体现在前述的说明，而是反映于权利要求书，与之相同的范围内的所有区别应当解释为包含于本发明中。