本发明涉及对皮肤安全且具有优良的皮肤美白效果的安全性高的含有来源于绿茶叶柄的提取物的皮肤美白用组合物。
背景技术：
：人的肤色是根据制造黑色素的黑素细胞(melanocyte)的活动性、血管的分布、皮肤厚度、以及是否含有类胡萝卜素、胆红素等人体内外的色素等各种因素而决定。特别是，黑素细胞在酪氨酸酶(tyrosinase)等各种酶的作用下产生叫做黑色素的黑色色素，这成为最重要因素。黑色素的形成与遗传因素、激素分泌、压力等相关的生理因素和紫外线照射等环境因素的影响有关。众所周知，存在于皮肤的黑色素具有从紫外线等保护身体的重要功能，但是黑色素产生过多，就会成为促进色素沉着、皮肤老化且诱发皮肤癌的主要原因。为了治疗或减轻皮肤色素异常沉着症状和暴露于紫外线等产生的过度黑色素沉着，以往，人们将抗坏血酸(ascorbicacid)、曲酸(kojicacid)、熊果苷(arbutin)、氢醌(hydroquinone)、谷胱甘肽(glutathione)、或者这些衍生物、具有阻碍酪氨酸酶活性的物质等混合使用在化妆品或医药品中，但是这些物质存在美白效果不充分、对皮肤的安全性问题、以及混合于化妆品中时剂型内的稳定性问题等，因此其使用受限。技术实现要素：本发明人发现，以往不使用而扔掉的绿茶叶柄的提取物对皮肤无刺激且具有优良的皮肤美白效果，由此完成本发明。因此，本发明的目的是提供通过使用来源于绿茶叶柄的提取物，得到优良的皮肤美白效果的组合物。为达到上述目的，本发明提供含有来源于绿茶叶柄的提取物作为有效成分的美白用皮肤外用剂组合物。本发明通过使用以往不使用而扔掉的绿茶叶柄，在废弃资源再利用方面具有优异的利用价值。另外，本发明的组合物由于含有来源于绿茶叶柄的提取物，对皮肤安全且剂型稳定性高，显示优异的皮肤美白效果，能够减少痣、雀斑等色素沉着症状，改善皮肤黯淡，使肤色均匀且明亮。附图说明图1是表示绿茶叶柄提取物的HPLC(高效液相色谱)分析结果的谱图。具体实施方式本发明的组合物通过含有绿茶叶柄提取物作为有效成分，能够提供优良的皮肤美白效果。绿茶(Greentea)是通常利用茶树(Camelliasinensis)的叶子。在本发明的特征在于，虽然不限定茶树的种类和栽培天数，但是使用部位为叶柄。另外，本发明中使用的叶柄为干燥或未干燥的叶柄均可。本发明中使用的绿茶的叶柄是也叫做叶茎的部位，叶柄的维管束用于连接茎的维管束和叶片的维管束，以往是在茶树上摘取叶子后扔掉的部位。但是，本发明人对绿茶叶柄进行分析的结果，与绿茶叶含有的成分种类及含量具有很大差异，从而可以预测到与绿茶叶提供的效果差异很大。另外，由于利用以往不使用而扔掉的绿茶叶柄来制备来源于绿茶叶柄的提取物，并且将其用于商品，所以可用作高附加价值的功能性材料及应用产品，因此本发明在废弃资源再利用方面也具有优良的利用价值。本发明中使用的来源于绿茶叶柄的提取物可通过本领域公知的方法进行制备，其方法没有特别限定，但是优选采用用于提取绿茶叶柄中含有的水溶性成分的方法。具体地说，在干燥的绿茶叶柄中加入相对于绿茶叶柄重量的5倍的热水，具体为加入温度为80～90℃的精制水，并进行提取。保持该温度，加热搅拌2小时，并降温到常温，然后只分离水溶性成分，并进行第一次过滤。将相对于滤液总重量的2倍的乙醇一边搅拌一边缓缓加入到滤液，除去上清液中的叶绿素，只收集沉淀物并热风干燥。热风干燥时保持30～40℃，以便防止热变性。通过这样的方法，能够制备本发明中使用的来源于绿茶叶柄的提取物。通过这样的方法制备的来源于绿茶叶柄的提取物是，含有0.90％的儿茶素、0.12％的咖啡因，其组成成分的含量与含有22.1％的儿茶素、4.61％的咖啡因的一般绿茶叶提取物不同，由此显示的效果也不相同。本发明的组合物中，来源于绿茶叶柄的提取物的含量可以是相对于组合物总重量的0.001～20重量％。当来源于绿茶叶柄的提取物的含量为相对于组合物总重量不足0.001重量％时，美白效果的表现微弱；而当其含量为20重量％以上时，就会诱发皮肤刺激感。本发明的组合物具有优良的皮肤美白效果，且对皮肤安全、稳定性高，因此优选在产业上利用。本发明的组合物可作为皮肤外用剂组合物进行剂型化，特别是可作为化妆品组合物进行剂型化，并且剂型化时可以含有化妆品学或皮肤科学上允许的介质或基剂。另外，本发明的组合物可提供适用于局部的所有剂型，例如，可提供溶液、油相分散在水相里得到的乳液、水相分散在油相里得到的乳液、悬浮液、固体、胶体、粉末、膏体、泡沫(foam)、或气溶胶组合物的剂型。这些剂型的组合物可以通过本领域通常方法来制备。另外，本发明涉及的组合物，除了上述物质之外，在不损害主要效果的范围内，优选可含有能够提高主要效果的其他成分。此外，本发明涉及的组合物进一步含有保湿剂、软化剂、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、PH调节剂、有机和无机颜料、香料、凉爽剂或止汗剂。上述成分的混合量是，在不损害本发明的目的和效果的范围内，本领域人员能够容易选定，其混合量可以为相对于组合物总重量的0.01～5重量％，具体地，可以为0.01～3重量％。此外，本发明的组合物可作为药学组合物进行剂型化。当本发明涉及的组合物使用于医药品时，将常用的无机或有机载体加入到本发明中使用的有效成分中，剂型化成固体、半固体、或液体形态的口服剂或非口服剂，并且本发明涉及的上述药学组合物可以通过口服、非口服、直肠、局部、经皮、静脉内、肌肉内、腹腔内、皮下等进行投药。作为上述口服剂型，可举出片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、细粒剂、粉剂、乳浊液、糖浆、糖丸剂等。另外，作为上述非口服剂型，可举出注射剂、点滴剂、软膏、乳剂、喷剂、悬浮剂、油剂、栓剂等。本发明涉及的组合物利用通常方法，能够将有效成分容易剂型化，而且此时可适当使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、保鲜剂、稳定剂、缓冲剂、悬浊剂、以及其他常用的辅助剂。本发明药学组合物的有效成分的投入用量是，根据被给予对象的年龄、性别、体重、病理状态以及其严重程度、给予途径或诊断者的判断而不同。根据这些因素决定其适当用量是本领域人员的水平范围内，其一天投入用量是例如0.1mg/kg/日至100mg/kg/日，更具体地说5mg/kg/日至50mg/kg/日，但是并不限定在此。下面通过实施例进一步详细说明本发明。这些实施例仅仅是为了举例说明本发明，在本领域中具有通常知识的人员自然明白本发明的范围并不限定于这些实施例。实施例1：制备来源于绿茶叶柄的提取物在干燥的绿茶叶柄(购买处：庄园株式会社)中，以绿茶叶柄的5倍重量比的量加入温度为80～90℃的精制水，一边保持温度，一边加热搅拌两个小时。降温到常温后，只分离水溶性成分，利用日本滤纸AdventecNo.131(AdventecMFS,Inc.,日本)进行第一次过滤。将相对于滤液总重量的2倍量的乙醇一边搅拌一边缓缓加入到滤液，除去上清液的叶绿素，只收集沉淀物，一边保持30～40℃的温度，一边热风干燥，获得白色粉末状的来源于绿茶叶柄的提取物(收率：1～3％)。对比例1：制备绿茶叶提取物在爱茉莉太平洋雪绿茶制造工厂，在玉露二次叶茶中，以绿茶叶的5倍重量比的量加入温度为80～90℃的精制水，一边保持温度，一边加热搅拌2小时。降温到常温后，只分离水溶性成分，利用日本滤纸AdventecNo.131(AdventecMFS,Inc.,日本)进行第一次过滤。过滤后，利用减压蒸馏装置进行浓缩，然后利用冻干装置进行干燥，获得黄褐色粉末状的绿茶叶提取物。试验例1：定量分析从绿茶叶柄中提取的成分为了确认绿茶叶柄中含有的成分，对实施例1中制备的绿茶叶柄提取物进行HPLC分析，其结果如图1和表1所示。实验中使用的液相色谱仪是沃特斯公司(Waters公司)的Alliance2695，是将该液相色谱仪与2996光电二极管阵列紫外-可见分光光度计(PDA)结合的系统。色谱柱使用沃特斯公司(Waters公司)的SymmetryC18柱(4.6mm×7.5cm，3.5μm)，数据处理是使用沃特斯公司(Waters公司)的EmpowerII程序。注入量(injectionvolume)为20.00μl。表1(C：儿茶素，GC：没食子儿茶素，CG：儿茶素没食子酸酯，GCG：没食子儿茶素没食子酸酯，EC：表儿茶素，EGC：表没食子儿茶素，ECG：表儿茶素没食子酸酯，EGCG：表没食子儿茶素没食子酸酯，CAF：咖啡因)上述表1各组成成分的峰面积百分比(％Area)是指图1表示的色谱的面积，其面积随着成分的含量越多而越大。通过将各成分的面积比例与标准面积比较，定量绿茶叶柄提取物的成分，其结果可确认绿茶叶柄提取物中含有0.90％的总儿茶素和0.12％的咖啡因。试验例2：利用黑色素瘤-a(Melan-a)细胞来评价黑色素生成抑制能力将上述实施例1中获得的来源于绿茶叶柄的提取物的黑色素生成抑制效果与对比例1中获得的来源于绿茶叶的提取物、以及作为公知的皮肤美白物质的熊果苷的黑色素生成抑制效果进行了比较和评价。细胞使用了来源于同系繁殖的C57BL老鼠胚胎的正常表皮成黑素细胞的黑色素瘤-a细胞。在48孔板上，以1.5×104细胞数/孔进行接种后，培养24小时。培养24小时后和培养4天后，用试验物质进行处理。作为这里使用的试验物质，使用了将上述实施例1和对比例1中获得的提取物溶解在二甲基亚砜(DMSO)的溶液，并且熊果苷是将熊果苷溶解在水中的1％的溶液稀释成按下述表2所示的试验物质的实验浓度来使用于培养基上。另外，为了比较，对比群没有进行任何试验物质的处理。用试验物质进行处理后，除去培养基，利用杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)洗涤细胞，通过导出液体(tapping)来去除。然后，将分别加入100μl的2N氢氧化钠(NaOH)溶液，在培养箱中进行1小时的培养。将90μl的细胞溶解物转移到96孔板上，利用酵素免疫微盘分析仪(ELISAReader)(美国伯腾多功能酶标仪，Synergy2，BIOTEK，USA)测定475nm的吸光度。另外，利用二喹淋甲酸(BCA)检测法，对蛋白质进行定量。在10μl/孔试剂中分别加入200μl的二喹淋甲酸(BCA,Bicinchoninicacid)溶液(a液：thermo23228，b液：PIERCE1859078)后，在培养箱中放置30分钟，然后测定560nm的吸光度。其结果是如下述表2所示，通过下述数学式1，将对比群的黑色素的量与用试验物质处理后的黑色素的量的比例，以百分率计算得到的。另外，此时的黑色素量是使用了利用以上述BCA方法测定的结果进行修改的蛋白质修改值。数学式1表2试验物质黑色素量(％)对比群(无添加)100实施例1(3.12ppm)83.1实施例1(6.25ppm)78.4实施例1(12.5ppm)73.9实施例1(25ppm)68.3对比例1(25ppm)97.6熊果苷(25ppm)73.5从上述表2可知，在用绿茶叶提取物处理的对比例1的情况中，黑色素的量几乎没有减少，而在用绿茶叶柄提取物处理的情况，即使用很低的量进行处理，也能减少黑色素的量。而且，在用更低于熊果苷处理浓度的浓度处理时，也能得到与熊果苷相同程度的黑色素减少效果；用相同量进行处理时，得到更加优异的黑色素减少效果。由此可见，绿茶叶柄提取物具有与绿茶叶提取物不同的性能，可用作非常优良的皮肤美白物质。试验例3：皮肤稳定性的评价为了观察本发明中使用的来源于绿茶叶柄的提取物对皮肤刺激的情况，进行了对人体皮肤直接刺激试验。试验进行两次，第一次是以健康的成年女性34名、男性6名总共40名(平均年龄35.1岁)作为试验对象进行试验；第二次是以女性28名、男性2名总共30名(平均年龄30.1岁)作为试验对象进行试验。具体地说，将上述实施例1中获得的来源于绿茶叶柄的提取物溶解在水中，制成10％浓度的溶液，将其溶液以20mg/cm2的量均匀涂敷在背部皮肤上。涂敷后，在此部位附着贴布，经过24小时后除去贴布，然后在30分钟后实施第一次读取，经过24小时后实施第二次读取，以最后的读取视为确认效果。为了观察试剂对皮肤刺激的强度，根据皮肤的阳性反应的情况，给予加重值(对－，+，++，+++，++++上分别给予0，1，2，3，4的数值)，求出皮肤的平均反应度。当平均反应度为1以上时，判断为刺激显示阳性。具体的判断标准如下述表3所示。另外，皮肤平均反应度的计算是通过下述数学式2进行，其结果判断标准如表4所示。表3判断标准反应加重值判断标准－0：无反应+1：微弱红斑++2：边界清晰的弱红斑、浮肿以及丘疹+++3：明显的红斑、丘疹以及水泡++++4：大水泡数学式2表4结果判断标准皮肤平均反应度判断标准0.0～0.91.0～2.93.0～4.95.0以上无刺激轻刺激中刺激强刺激测定结果是，使用来源于绿茶叶柄的提取物后的皮肤平均反应度为0.0～0.9之间，因此最终判断为对皮肤无刺激。下面说明本发明涉及的组合物的剂型例，药学组合物和化妆品组合物可以采用多种剂型，但是本发明并不限定在此，只是为了具体说明。剂型例1：柔肤水(爽肤水)以下述表5所述的组成，利用通常方法，制备柔肤水。表5剂型例2：营养化妆水(乳液)以下述表6所述的组成，利用通常方法，制备营养化妆水。表6剂型例3：营养霜以下述表7所述的组成，利用通常方法，制备营养霜。表7混合成分含量(重量％)实施例1的来源于绿茶叶柄的提取物2.0甘油3.0丁二醇3.0流动石蜡7.0β-葡聚糖7.0卡波姆0.1辛酸/癸酸甘油三酯3.0角鲨烷5.0鲸蜡硬脂基葡糖苷1.5失水山梨醇硬脂酸酯0.4聚山梨醇酯601.2三乙醇胺0.1防腐剂、色素、香料适量精制水剩余量剂型例4：按摩霜以下述表8所述的组成，利用通常方法，制备按摩霜。表8剂型例5：面膜以下述表9所述的组成，利用通常方法，制备面膜。表9混合成分含量(重量％)实施例1的来源于绿茶叶柄的提取物0.2甘油4.0聚乙烯醇15.0透明质酸5.0β-葡聚糖7.0尿囊素0.1壬基苯基醚0.4聚山梨醇酯801.2乙醇防腐剂6.0适量防腐剂、色素、香料适量精制水剩余量剂型例6：软膏以下述表10所述的组成，利用通常方法，制备软膏。表10混合成分含量(重量％)实施例1的来源于绿茶叶柄的提取物0.2甘油8.0丁二醇4.0流动石蜡15.0β-葡聚糖7.0卡波娒0.1辛酸/癸酸甘油三酯3.0角鲨烷1.0鲸蜡硬脂基葡糖苷1.5失水山梨醇硬脂酸酯0.4鲸蜡硬脂醇1.0蜜蜡4.0防腐剂、色素、香料适量精制水剩余量如上详细记载本
发明内容的特征部分，对于具有本领域通常知识的的技术人员，这些具体技术只是优选实施方式，很明显本发明并不限定在此。因此，本发明的实质性范围是由权利要求书以及与此均等物而定义。当前第1页1 2 3