预防和/或治疗尿失禁的新的药物组合物的制作方法

本发明涉及具有快速骨骼肌肌钙蛋白活化的化合物作为用于预防和/或治疗尿失禁的药物组合物的新药物应用。

背景技术：

“尿失禁”是一种客观感觉到的尿液不自觉渗漏的病症，并且是社会和卫生问题(J.Clin.Pharm.Ther.，25(4)，251-263(2000))。尿失禁的典型类型是急迫性尿失禁、压力性尿失禁和混合性尿失禁，混合性尿失禁是两种类型的混合。

最常见的尿失禁类型是压力性尿失禁，据报道，约50％的患有尿失禁的女性患有压力性尿失禁(Int.Urogynecol.J.，11(5)，301-319(2000))。“压力性尿失禁”是与膀胱的收缩无关其中伴随与咳嗽、打喷嚏、运动等相关的腹部压力升高而尿液不自觉渗漏的病症。压力性尿失禁的原因主要分为两种原因。一个原因是膀胱颈和尿道高活动性，其中由于膀胱颈部基于骨盆底肌肉的松弛而下垂，使得腹部压力向尿道的传递变差，并且当腹部压力升高时，膀胱内压力升高而不增加尿道压力，导致尿渗漏。另一个原因是由于本身尿道括约肌功能不全导致括约肌功能降低，导致尿液随着腹压增加而渗漏。压力性尿失禁的发生很可能与由于年龄或分娩引起的骨盆底肌肉的脆化和/或括约肌功能的降低有关。特别地，由于怀孕或阴道分娩而对骨盆造成的创伤是持续性压力性尿失禁发病的已知的危险因素，并且据报道，在第一次分娩后5年内的压力性尿失禁的发生率为约30％(Neurourol.Urodyn.，21(1)，2-29(2002))。

“急迫性尿失禁”是其中在突然、不可抗拒的强烈排尿(尿急)之后尿不自觉地渗漏的病症。“混合性尿失禁”是其中发生不同类型的尿失禁的病症，并且在大多数情况下是急迫性尿失禁和压力性尿失禁的混合。

尿失禁对生活质量(QOL)有重大影响。急性感知失禁症状的患者具有有限的活动范围，并且感觉社交隔离和孤独。

报道对压力性尿失禁具有治疗效果的药物是具有5-羟色胺-去甲肾上腺素再摄取抑制作用(SNRI)的药物、具有选择性去甲肾上腺素再摄取抑制作用(NRI)的药物等。发现伴随咳嗽、打喷嚏、运动等的腹部压力和膀胱内压力的突然增加通过脊髓反射来收缩外尿道括约肌，但是去甲肾上腺素和5-羟色胺增加脊柱内Onuf的核兴奋性，其是支配外尿道括约肌的躯体运动神经的起源的核。具体地，据报道，SNRI和NRI药物通过加速Onuf核的兴奋性而激发包含躯体运动神经的阴部神经，并增加外尿道括约肌的收缩(非专利文献1和2)。

尽管据报道SNRI度洛西汀在临床研究中对压力性尿失禁有效，但是报道了不期望的药物不良反应例如自杀企图。批准度洛西汀为尿失禁治疗剂的国家仅限于欧洲。据报道，尽管NRI尼索西汀在临床前研究中增加了尿道内压并改善了由打喷嚏所引起的失禁(非专利文献2)，但尚未对压力性尿失禁进行临床研究。据报道，NRI(S,S)-瑞波西汀在临床研究中增加了尿道阻力，并且据报道对压力性尿失禁有效(非专利文献3和4)，但尚未获得医药上市批准作为尿失禁治疗剂。

具有α1受体激动剂作用的药物通过存在于尿道平滑肌中的α1受体将尿道收缩，并已经在临床研究中显示对压力性尿失禁有效，但尚未获得医药上市批准作为压力性尿失禁治疗剂，这是由于心血管不良药物反应如血压升高(非专利文献5)。

如前所述，提高尿道阻力以维持尿失禁的控制似乎作为用于压力性尿失禁的药物疗法是有效的，并且已经研究了基于几种作用机制的药物。然而，由于诸如不良药物反应的问题，尿失禁治疗剂尚未在全球获批，并且基于新的作用机制的压力性尿失禁治疗剂的开发将是非常需要的。

外尿道括约肌和支撑与膀胱和尿道等相关的结构的骨盆底肌是骨骼肌的类型。肌原纤维(其是骨骼肌的收缩器官)将称为肌节的单位连接在一起，包括薄肌动蛋白丝和脂肪肌动蛋白丝。骨骼肌通过肌动蛋白丝和肌球蛋白丝重复相互作用的收缩，使得这两种丝彼此滑过。

骨骼肌的收缩反应是由根据控制每个骨骼肌的躯体运动神经的激发从细胞内肌浆网释放钙离子引起的。与作为肌动蛋白丝的一种组分蛋白的肌钙蛋白复合物结合的细胞内钙离子改变肌钙蛋白复合物的结构，以允许所述肌动蛋白丝与肌球蛋白丝相互作用。因此，所述肌钙蛋白复合物在肌动蛋白丝中作为介导骨骼肌的收缩反应的调节蛋白起作用，其取决于钙离子的浓度。

骨骼肌被分类为快缩(fast-twitch)肌和慢缩(slow-twitch)肌，其中快缩肌的功能特征在于具有比慢缩肌更大的肌肉张力和更快的收缩速率。肌钙蛋白复合物在快缩肌和慢缩肌中结合肌钙蛋白的不同亚型以形成快缩肌和慢缩肌肌钙蛋白复合物。

已知具有快缩骨骼肌肌钙蛋白活化的药物作用于快缩肌肌钙蛋白复合物，以增加肌钙蛋白复合物对细胞内钙离子的敏感性，从而增加快缩肌的收缩力(非专利文献6)。

1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺(以下也称为“化合物A”)是具有快速骨骼肌肌钙蛋白活化作用的化合物(专利文献1)。已经显示化合物A在包含快缩肌组分的大鼠隔膜肌原纤维和大鼠趾长伸肌中将细胞内钙离子浓度和肌肉张力的浓度-响应曲线移动到左侧(专利文献2、3)。化合物A还据报道具有增强体外透壁电刺激诱导的大鼠隔膜的收缩反应的作用以及具有增强体内电刺激大鼠腓神经导致的趾长伸肌收缩反应的作用(专利文献2、3)。

外尿道括约肌和骨盆底肌是骨骼肌，据报道其包含快缩肌成分(非专利文献7、8)。

现有技术文件

专利文献

专利文献1：国际专利申请No.WO2011/133888

专利文献2：国际专利申请No.WO2013/155262

专利文献3：国际专利申请No.WO2013/151938

非专利文献

非专利文献1：Int.Urogynecol.J.，14(6)，367-372(2003)

非专利文献2：Am.J.Physiol.Renal.Physiol.，292(2)，639-646(2007)

非专利文献3：J.Urol.，181(6)，2628-2633(2009)

非专利文献4：American Urological Association.poster 1667(2008)

非专利文献5：Urology，62(4Suppl.1)，31-38(2003)

非专利文献6：Nat.Med.，18(3)，452-455(2012)

非专利文献7：Acta Neuropathol.，60(3-4)，278-282(1983)

非专利文献8：Neurourol.Urodyn.，17(3)，197-205(1998)

技术实现要素：

本发明解决的问题

本发明解决的问题是提供一种预防和/或治疗尿失禁的新的药物组合物，在某一方面，提供预防和/或治疗压力性尿失禁的药物组合物，和在某一方面，提供预防和/或治疗混合性尿失禁的药物组合物，其不同于常规药物。

解决问题的手段

作为解决这些问题的广泛研究的结果，本发明人发现了包含1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐作为活性成分的药物组合物，可用于预防和/或治疗尿失禁，因此完善了本发明。

具体地，本发明涉及预防和/或治疗尿失禁的药物组合物，在某一方面，涉及预防和/或治疗压力性尿失禁的药物组合物，和在某一方面，涉及预防和/或治疗混合性尿失禁的药物组合物，其包含1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐，和药学上可接受的赋形剂或其盐。

本发明还涉及预防和/或治疗尿失禁的治疗剂，在某一方面，涉及预防和/或治疗压力性尿失禁的治疗剂，和在某一方面，涉及预防和/或治疗混合性尿失禁的治疗剂，其包含1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐。

本发明还涉及预防和/或治疗尿失禁的治疗剂，在某一方面，涉及预防和/或治疗压力性尿失禁的治疗剂，和在某一方面，涉及预防和/或治疗混合性尿失禁的治疗剂，其包含1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐，和药学上可接受的赋形剂。

本发明还涉及1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐在制备预防和/或治疗尿失禁的药物组合物中的用途，在某一方面，制备预防和/或治疗压力性尿失禁的药物组合物，和在某一方面，制备预防和/或治疗混合性尿失禁的药物组合物；本发明还涉及1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐用于预防和/或治疗尿失禁的用途，在某一方面，涉及预防和/或治疗压力性尿失禁的用途，和在某一方面，涉及预防和/或治疗混合性尿失禁的用途；本发明还涉及1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐，其用于预防和/或治疗尿失禁，在某一方面，其用于预防和/或治疗压力性尿失禁，和在某一方面，其用于预防和/或治疗混合性尿失禁；和预防和/或治疗尿失禁的治疗方法，在某一方面，预防和/或治疗压力性尿失禁的治疗方法，和在某一方面，预防和/或治疗混合性尿失禁的治疗方法，包括以下或由以下组成：向受试者给药有效剂量的1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺或其盐。“受试者”是指需要预防和/或治疗尿失禁的人或其它动物，且在某些方面，是指需要预防和/或治疗尿失禁的人。

本发明效果

作为本发明的药物组合物的活性成分的化合物A或其盐预期作为以下药物组合物的活性成分：用于预防和/或治疗尿失禁的药物组合物，在某一方面，用于预防和/或治疗压力性尿失禁的药物组合物，和在某一方面，用于预防和/或治疗混合性尿失禁的药物组合物，因为化合物A增强了由透壁电刺激取出的大鼠尿道所诱导的外尿道括约肌的收缩反应，并增强了由电刺激大鼠阴部神经而增加尿道内压的反应。

该说明书包括日本专利申请No.2014-183434的说明书、权利要求和附图的内容，其为本申请的优先权文件。

附图简述

图1是显示实施例1的结果的图。纵轴表示添加测试物质之后相对于添加该测试物质之前，透壁电刺激取出的大鼠尿道所诱导的外尿道括约肌的收缩反应的百分比(％)(平均值±标准误差)。*表示发现与溶剂添加组具有显著性差异，其使用Dunnett多重比较程序测试的统计学水平小于5％(p<0.05)，**表示发现与溶剂添加组具有显著性差异，其使用相同的程序测试的统计学水平小于1％(p<0.01)。

图2是显示实施例2的结果的图。纵轴表示添加测试物质之后相对于添加该测试物质之前，电刺激大鼠阴部神经所诱导的增加尿道内压的反应的百分比(％)(平均值±标准误差)。*表示发现与溶剂添加组具有显著性差异，其使用Dunnett多重比较程序测试的统计学水平小于1％(p<0.01)，**表示发现与溶剂添加组具有显著性差异，其使用Dunnett多重比较程序测试的统计学水平小于0.1％(p<0.001)。

本发明实施方案

本发明将在以下详细描述。

如之前所述，化合物A具有的化学名为1-[2-({[反-3-氟-1-(3-氟吡啶-2-基)环丁基]甲基}氨基)嘧啶-5-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺，且为之前引用的专利文献1的实施例14中所述的化合物。化合物A的化学结构如下所示。

化学表示1

在本说明书中，“尿失禁”是尿不自觉地渗漏的病症；其实例包括压力性尿失禁、急迫性尿失禁、混合性尿失禁、功能性尿失禁和反射性尿失禁。

“压力性尿失禁”是指与膀胱的收缩无关伴随与咳嗽、打喷嚏、运动等相关的腹部压力升高而尿不自觉地渗漏的病症，“急迫性尿失禁”是其中在突然、不可抗拒的强烈排尿(尿急)之后尿不自觉地渗漏的病症。“混合性尿失禁”是其中发生压力性尿失禁和急迫性尿失禁二者的病症。

本发明的药物组合物的应用为用于尿失禁，在某一方面，用于压力性尿失禁或混合性尿失禁，在某一方面，用于压力性尿失禁，和在某一方面，用于混合性尿失禁。本发明的药物组合物可用于以下疾病，该疾病可通过增强外尿道括约肌的收缩而预防或治疗。

本发明具有以下方式。

(1)预防和/或治疗尿失禁的药物组合物，其包含化合物A和药学上可接受的赋形剂。在某一方面，预防和/或治疗压力性尿失禁的药物组合物，其包含化合物A和药学上可接受的赋形剂。在某一方面，预防和/或治疗混合性尿失禁的药物组合物，其包含化合物A和药学上可接受的赋形剂。

(2)用于预防和/或治疗尿失禁的药剂，其包含化合物A。在某一方面，用于预防和/或治疗压力性尿失禁的药剂，其包含化合物A。在某一方面，用于预防和/或治疗混合性尿失禁的药剂，其包含化合物A。

(3)化合物A在制备用于预防和/或治疗尿失禁的药物组合物中的用途。在某一方面，化合物A在制备用于预防和/或治疗压力性尿失禁的药物组合物中的用途。在某一方面，化合物A在制备用于预防和/或治疗混合性尿失禁的药物组合物中的用途。

(4)化合物A用于预防和/或治疗尿失禁的用途。在某一方面，化合物A用于预防和/或治疗压力性尿失禁的用途。在某一方面，化合物A预防和/或治疗混合性尿失禁的用途。

(5)用于预防和/或治疗尿失禁的化合物A。在某一方面，用于预防和/或治疗压力性尿失禁的化合物A。在某一方面，用于预防和/或治疗混合性尿失禁的化合物A。

(6)预防和/或治疗尿失禁的治疗方法，包括以下或由以下组成：向受试者给药有效剂量的化合物A。在某一方面，预防和/或治疗压力性尿失禁的治疗方法，包括以下或由以下组成：向受试者给药有效剂量的化合物A。在某一方面，预防和/或治疗混合性尿失禁的治疗方法，包括以下或由以下组成：向受试者给药有效剂量的化合物A。

化合物A或其盐可按照之前引用的专利文献1(国际专利申请No.WO2011/133888)的实施例14所述的方法获得，或通过该方法的修饰方法获得。

“化合物A的盐”是指化合物A的药学上可接受的酸加成盐；具体地，与无机酸的酸加成盐，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、或磷酸、或与有机酸的酸加成盐，所述有机酸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、苹果酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、丙二酸、马来酸、乳酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、酒石酸、抗坏血酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、2-羟基乙磺酸、硬脂酸、或水杨酸。“化合物A或其盐”包括化合物A的溶剂合物，具体地，例如，水合物或乙醇合物；和化合物A的溶剂合物的酸加成盐。

“化合物A或其盐”的一种模式为化合物A。

含有化合物A或其盐的药物组合物可以通过常规使用的方法制备，使用本领域中常规使用的赋形剂；即药物赋形剂、药物载体等。

组合物可以通过使用片剂、丸剂、胶囊、颗粒、粉末、液体等口服给药，或通过任何非口服模式进行给药，例如关节内、囊内、静脉内、肌肉内、或其它注射剂、栓剂、透皮溶液、软膏、透皮贴剂、经粘膜溶液、经粘膜贴剂或吸入剂。

片剂、粉末、颗粒等用作用于口服给药的固体组合物。这种固体组合物中的一种或多种活性成分与至少一种惰性赋形剂混合。根据常规方法，组合物可以含有惰性添加剂，例如润滑剂或崩解剂、稳定剂或增溶剂。片剂或胶囊可根据需要用糖衣或胃肠或肠溶材料的薄膜进行包衣。

用于口服给药的液体组合物含有药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆、酏剂等，并且含有常规使用的稀释剂如纯水或乙醇。液体组合物还可以含有惰性稀释剂以外的增溶剂、保湿剂、助剂(如悬浮剂)、增甜剂、调味剂、香料或防腐剂。

用于非口服给药的注射剂包含无菌水性或非水性溶剂、悬浮剂或乳剂。水性溶剂包括例如注射用蒸馏水或生理盐水。非水性溶剂包括例如醇(如乙醇)。这种组合物还可以含有张度剂、防腐剂、保湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂或增溶剂。将组合物灭菌，例如通过细菌截留过滤器过滤或通过照射。组合物也可制成无菌固体组合物，并在使用前溶解或悬浮于无菌水或无菌注射溶剂中。

在标准口服给药的情况下，合适的每日剂量为约0.001-100mg/kg，优选0.01-30mg/kg，更优选0.1-10mg/kg体重，一次给予或分开2-4次给予。在静脉内给药的情况下，每日一次给予0.0001-10mg/kg体重，或分开给予，每日给予多次。作为经粘膜剂，给予约0.001-100mg/kg体重。考虑到受试者的症状、年龄和性别，可以根据个体情况适当地确定剂量。

尽管这将根据给药途径、剂型、施用部位以及赋形剂和添加剂的类型而不同，但是本发明的药物组合物含有0.01-99重量％，在某些模式下，0.01-50重量％的化合物A或其盐作为活性成分。

本发明的药物组合物可以与被认为对尿失禁(特别是压力性尿失禁或混合性尿失禁)有效的各种类型的治疗剂组合使用。该治疗剂可以同时、随后单独、或在任意时间间隔之后给药。如果同时施用，该治疗剂可以与药物组合物一起配制或与药物组合物分开配制。

实施例

本发明药物组合物的药理作用通过以下实施例证实。

实施例1

使用取出的大鼠尿道评价化合物A对由透壁电刺激诱导的外尿道括约肌收缩反应的增强作用的测试

实验方法

从10周龄SD雌性大鼠(Japan SLC，Inc.)中取出尿道。将取出的尿道垂直切开，然后切成宽度约3mm的样本条，将其在圆形方向上悬挂在装有Krebs-Henseleit缓冲液的10-mL组织总管(tissue buses)中。将Krebs-Henseleit缓冲液用95％O₂和5％CO₂充气，并在37℃保温。静息张力设定为约0.5g，且使用张力传感器(TB-611T；Nihon Kohden)、放大器(AP-621G；Nihon Kohden)和界面(PowerLab 8/30；AD Instruments)记录等长收缩。静息张力稳定后，通过透壁电刺激(刺激电压：20V，脉冲宽度：30μsec，刺激频率：0.2Hz，刺激时间：15秒)确认外尿道括约肌的收缩反应(mg)。在不存在测试物质的情况下，通过透壁电刺激(刺激电压：20V，脉冲宽度：30μsec，刺激频率：20Hz，刺激时间：1秒)以30秒间隔引起外尿道括约肌的收缩反应三次后，将溶剂(二甲基亚砜：DMSO)或溶于DMSO中的化合物A(终浓度为10或30μmol/L)添加至组织总管中，并在15分钟后在相同条件下通过透壁电刺激以30秒间隔引发3次收缩反应。计算加入测试物质之前和之后各自电刺激三次的收缩反应的平均值，并计算每个浓度组在加入测试物质之后的收缩反应相对于加入测试物质之前的收缩反应的百分比。在每组中进行n＝6的测试后，通过Dunnett多重比较程序将化合物A添加组与溶剂添加组进行比较，并且当p<0.05时视为显著不同。

效果

如图1所示，化合物A增强了通过透壁电刺激取出的大鼠尿道诱导的外尿道括约肌的收缩反应。

实施例2

评价化合物A对增加尿道内部压力(其通过电刺激大鼠阴部神经诱导)的反应的增强作用的测试

实验方法

用乌拉坦(1.2g/kg，sc；Sigma-Aldrich)麻醉体重200-350g的SD雌性大鼠(日本SLC,Inc.)，将导管(PE-50；Becton Dickinson)置于颈静脉中用于给药测试物质。进行剖腹术，将膀胱的圆顶切开以允许膀胱中的尿排出。将微芯片压力传感器导管(3.5Fr；Millar Instruments)从外尿道口插入膀胱以测量尿道内部压力。将大鼠俯卧，将背部切开，并且分离多个左边和右边的阴部神经并与刺激电极保持在适当位置。将微芯片压力传感器导管连接到放大器(AP-601G；Nihon Kohden)和界面(PowerLab 8/30；AD Instruments)，并且将尿道内部的压力传感器部分固定在靠近具有最大尿道内压的位点的位置(距离尿道口约10-15mm)，同时测量尿道内压。每1分钟对阴部神经进行电刺激(刺激电压：最大10V，脉冲宽度：50μsec，刺激频率：20Hz，刺激时间：400msec)，在证实增加尿道内压(mmHg)的稳定化反应后，将溶剂(13.3％DMSO，13.3％聚乙二醇400，13.3％Tween 20，和60％蒸馏水)或溶于溶剂的化合物A以1mL/kg静脉内给药，最终剂量为3或10mg/kg。计算在施用测试物质前通过三次电刺激增加尿道内压的反应的平均值作为施用测试物质之前的水平，且计算每个治疗组在施用测试物质后约三分钟通过电刺激增加尿道内压的反应相对于给予测试物质之前的值的百分比。在每组中进行n＝6的测试后，通过Dunnett多重比较程序将化合物A组与溶剂组比较，并且当p<0.05时视为显著不同。

效果

如图2所示，化合物A增强了通过电刺激大鼠阴部神经增加尿道内部压力的反应。

如前所述，化合物A是通过刺激外尿道括约肌的主导神经来增强外尿道括约肌的收缩力，从而明显增加尿道内压，这表明可通过增加尿道阻力来控制尿失禁。因此，期望具有快缩肌肌钙蛋白活化作用的化合物A作为尿失禁(特别是压力性尿失禁或混合性尿失禁)的治疗剂和/或预防剂。

工业应用

为本发明药物组合物的活性成分的化合物A或其盐预期作为以下药物组合物的活性成分：预防和/或治疗尿失禁的药物组合物，在某一方面，预防和/或治疗压力性尿失禁的药物组合物，和在某一方面，预防和/或治疗混合性尿失禁的药物组合物。

本文引用的所有出版物、专利和专利申请全部引入本文作为参考。