用于治疗运动神经元疾病(例如ALS)的左西孟旦的制作方法

本发明涉及一种使用左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐作为药物治疗运动神经元疾病以及缓解与运动神经元疾病有关的骨骼肌力量或功能损失的方法。

发明背景

由于神经肌肉输入受限或神经肌肉接头的信号传递失败所导致的肌肉无力会导致被称为运动神经元疾病的许多疾病的显著功能丧失和死亡率增加。所述运动神经元疾病包括，例如，肌萎缩侧索硬化症(als)、脊髓性肌萎缩症(sma)、进行性神经性腓骨肌萎缩症(cmt)和重症肌无力(mg)。肌萎缩侧索硬化症(als)是一种上、下运动神经元的退行性疾病，其最初导致进行性肌肉功能障碍，并最终导致肌肉瘫痪。疾病进展通常比较线性，在发病3-5年后出现因呼吸衰竭导致的死亡。但是，患者的疾病进展速率可能发生变化，并且患者间的存活率也有差异(carosciojt等人,neurolclin5(1),1987,1-8)。

不幸的是，有证据支持的用于减缓als患者的疾病进展或改善其生活质量的可选方案很少(millerrg等人,neurology73(15),2009,1218-1226)。尽管减缓疾病进展是非常重要的，但改善功能表现的治疗将有利于als患者，即使该治疗不能直接改变疾病的病理生理学基础。尽管进行了大量尝试，但市场上仍然没有改善神经肌肉功能的疗法。因此，如果肌肉对神经输入的响应或肌肉收缩的力量和耐力可以通过治疗提高，则als患者的功能状态就可以直接保持或改善，即使其潜在的疾病过程仍在继续。

左西孟旦是[[4-(1,4,5,6-四氢-4-甲基-6-氧代-3-哒嗪基)苯基]亚肼基]丙二腈的(-)-对映体，目前用于急性失代偿性严重心力衰竭患者的短期治疗。左西孟旦通过增强心脏肌丝对钙的敏感性增加心脏收缩力。左西孟旦有一种活性代谢物(r)-n-[(4-1,4,5,6-四氢-4-甲基-6-氧代-3-哒嗪基)苯基]乙酰胺(ii)，其存在于施用左西孟旦的人体中。参见szilagyis等人，eurjpharmacol.2004,486(1):67-74；kivikkom等人,circulation,2003,107(1):81-6。

迫切需要能够改善运动神经元疾病如als患者的功能状态的药物。

发明概述

现已发现，口服施用左西孟旦或其活性代谢物(ii)可以在重症肌无力的实验模型中改善骨骼肌功能。在这个模型中，用抗肌肉烟碱型乙酰胆碱受体的抗体使神经肌肉接头的功能丧失，从而在动物中产生肌肉无力。结果表明，左西孟旦及其活性代谢物(ii)可用于治疗神经肌肉输入减少的疾病例如运动神经元疾病。

一方面，本发明提供了一种治疗运动神经元疾病的方法，包括给需要治疗的患者施用左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了一种在患有运动神经元疾病的患者中缓解肌肉力量或功能损失的方法，包括给有此需要的患者施用左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了一种在患者中缓解与运动神经元疾病有关的骨骼肌力量或功能损失的方法，包括给所述患者施用左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了用于治疗运动神经元疾病的化合物，所述化合物是左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了用于缓解与运动神经元疾病有关的肌肉力量或功能损失的化合物，所述化合物是左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了用于缓解与运动神经元疾病有关的骨骼肌力量或功能损失的化合物，所述化合物是左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐在制备用于治疗运动神经元疾病的药物中的用途。

另一方面，本发明提供了左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐在制备用于缓解与运动神经元疾病有关的肌肉力量或功能损失的药物中的用途。

另一方面，本发明提供了左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐在制备用于缓解与运动神经元疾病有关的骨骼肌力量或功能损失的药物中的用途。

以上提到的运动神经元疾病包括但不限于肌萎缩侧索硬化症(als)、重症肌无力(mg)、脊髓性肌萎缩症(sma)或进行性神经性腓骨肌萎缩症(cmt)。

附图概述

图1：重症肌无力模型中药物治疗的效果。显示了与基线相比，动物能够停留在旋转杆(rotarod)上的时间长度的变化百分比。在第2天口服药物治疗后0.5小时、1小时和2小时进行测定。治疗组为溶媒、左西孟旦和活性代谢物(ii)。or-1896表示左西孟旦的活性代谢物(ii)。

图2：重症肌无力模型中药物治疗的效果。显示了动物在跑步机上运动持续时间的变化。在第3天口服药物治疗后2小时进行测定。or-1896表示左西孟旦的活性代谢物(ii)。

发明详述

本发明涉及一种治疗运动神经元疾病和缓解运动神经元疾病中的肌肉、尤其是骨骼肌的力量或功能损失的方法。本文所用的术语“运动神经元疾病”是指主要(但不一定完全)影响运动神经元、神经肌肉输入或神经肌肉接头的信号传递的疾病。以上提到的运动神经元疾病包括但不限于肌萎缩侧索硬化症(als)、重症肌无力(mg)、脊髓性肌萎缩症(sma)或进行性神经性腓骨肌萎缩症(cmt)。本文所用的术语“骨骼肌”指的是附着在骨骼或其他结缔组织上的横纹肌，通常与至少一个关节相连。本文所用的术语“缓解”指的是减轻或抑制。

根据本发明的一个实施方案，左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐用于缓解与运动神经元疾病有关的骨骼肌力量或功能的损失。根据本发明的另一个实施方案，所述骨骼肌为附着在骨骼或其它结缔组织上并且与至少一个关节相连的横纹肌。根据本发明的另一个实施方案，关节为滑膜关节。

左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐的施用可以是肠内施用，如口服或直肠施用；胃肠外施用，如静脉内施用；或经皮肤或经粘膜施用。口服施用是优选的途径。

左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐可以根据患者的需要每天施用一次或多次，或定期施用，例如每周或每两周一次。

左西孟旦或其活性代谢物(ii)可以根据患者的年龄、体重及病情以约0.1到10毫克，优选约0.2至5毫克的每日剂量范围对病人口服施用，每天给药一次或一天分数次给药。对于运动神经元疾病病人的长期治疗，相对较低的口服剂量通常是优选的，例如口服每日剂量从约0.1至约5毫克，优选从约0.2至约4毫克，更优选从约0.25至约3毫克，例如从约0.5毫克至2毫克。

左西孟旦可以以约0.01到5μg/kg/分钟、通常约0.02到3μg/kg/分钟，例如约0.05到0.4μg/kg/分钟的输液速度静脉输注给药。活性代谢物(ii)可以以约0.001到约1μg/kg/分钟、优选约0.005到约0.5μg/kg/分钟的输液速度静脉内给药。

根据本发明的一个实施方案，本发明的活性成分可以与一种或多种用于治疗运动神经元疾病的其它活性成分一起、例如与利鲁唑一起向患有运动神经元疾病的患者给药。

左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐可以利用本领域已知的原则配制成适于本发明的治疗的药物剂型。本发明的活性成分可以直接向患者给药，或者优选与合适的药物赋形剂一起以片剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、乳液、混悬液或溶液的形式给药，其中在制剂中的活性化合物的含量为约0.5到100％重量。组合物中的合适成分的选择是本领域普通技术人员的常规技能。显然，适当的载体、溶剂、凝胶形成成分、分散液形成成分、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、润湿化合物、控释成分和该技术领域常用的其它成分也可以使用。

对于活性成分以片剂或胶囊形式的口服施用，合适的载体和赋形剂包括例如微晶纤维素、海藻酸、玉米淀粉、硬脂酸、乳糖、硬脂酸镁、磷酸钙和滑石粉。对于控释口服组合物，可以使用控制释放的成分。典型的控制释放的成分包括亲水性凝胶形成聚合物如羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素或它们的混合物；植物油脂，包括植物固体油如氢化大豆油、硬化蓖麻油或蓖麻籽油(以商品名cutinahr出售)、棉籽油(以商品名sterotex或lubritab出售)或它们的混合物；脂肪酸酯类如饱和脂肪酸的甘油三脂或它们的混合物，如三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三山嵛酸甘油酯(以商品名compritol出售)和棕榈酸硬脂酸甘油酯。

片剂可以通过将一种或多种活性成分与载体和赋形剂混合并将粉状混合物压成片剂来制备。胶囊可以通过将活性成分与载体和赋形剂混合并将粉状混合物置于胶囊、例如硬明胶胶囊或hpmc胶囊中来制备。通常，片剂或胶囊含有约0.1到5毫克、更通常是约0.2到3毫克、例如0.25到2毫克或0.25到1毫克左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。

适于静脉内给药的制剂(如注射或输液制剂)包括活性成分和溶媒的无菌等渗溶液、优选水溶液。通常，静脉滴注溶液含有约0.01到0.1mg/ml左西孟旦或其活性代谢物(ii)或它们的药学上可接受的盐。该药物制剂也可以是用于在使用前用水性溶媒稀释的静脉输液浓缩液的形式。这种浓缩液可包含作为溶媒的药学上可接受的有机溶剂如无水乙醇。

左西孟旦或其活性代谢物(ii)的盐可以通过已知的方法制备。药学上可接受的盐可用作活性药物，但是优选的盐是碱金属或碱土金属盐。

实施例

制药实施例

实施例1：口服胶囊:

3号硬明胶胶囊

胶囊形式的药物制剂通过将各成分混合并将粉状混合物置于硬明胶胶囊中进行制备。

实施例2：用于静脉输液的浓缩溶液

通过将柠檬酸、kollidonpf12和左西孟旦在无菌制备容器中在搅拌下溶于无水乙醇来制备浓缩液。将由此产生的本体溶液通过无菌过滤器(0.22μm)过滤。然后将无菌过滤的本体溶液无菌灌装到8毫升和10毫升的注射瓶(5毫升和10毫升的填充量)中并用胶塞封闭。

静脉滴注浓缩液在使用前用水性溶媒稀释。通常将浓缩液用水性等渗溶媒例如5％的葡萄糖溶液或0.9％的氯化钠溶液稀释以获得水性静脉输液，其中左西孟旦的量一般在约0.001–1mg/ml的范围内，优选约0.01–0.1mg/ml。

实验1

左西孟旦及其活性代谢物(ii)在抗体诱导的雌性lewis大鼠重症肌无力模型中的效果

方法

在重症肌无力的实验模型中研究左西孟旦及其活性代谢物(ii)对骨骼肌无力的效果(russellaj等人，natmed18(3),2012,452-5)。通过在第0天腹膜内注射500μg/kgnachrα1/3/5抗体(sc-58604,santacruzbiotechnology)在雌性lewis大鼠中诱导重症肌无力。将施用抗体48小时后肌肉力量与基线相比下降40-70％的动物随机分入以下治疗组：1)溶媒对照(n＝6)(0.5％甲基纤维素5ml/kg口服)、2)左西孟旦(n＝6)(0.25mg/kg口服)、3)活性代谢物(ii)(n＝6)(0.025mg/kg口服)。

采用加速旋转杆测试(rotarod,ugobasile,comerio,意大利)检测协调性、平衡和运动技能的获得。将大鼠放置在一个在5分钟的时间内从4rpm平稳地加速到40rpm的杆上。记录每个动物能够停留在杆上的时间长度。进行三次连续测量。在抗体注射前一天，大鼠接受四次试验训练，并且在注射当天接受两次试验训练。在第2天(即，诱导重症肌无力48小时后)口服治疗后0.5小时、1小时和2小时测定不同药物治疗对rotarod反应的效果。

运动能力利用与呼吸气体分析系统连接的密闭的跑步机(accupacer跑步机,accuscaninstruments,usa)进行测量。排练和运动能力测量开始时，使大鼠熟悉跑步机室15分钟(restmill)。运动程序包括以10米/分钟的速度跑15分钟，直到大鼠即使在电击刺激下也无法跟上该速度。在抗体注射前一天，大鼠接受三次的试验训练，并且在注射当天接受两次试验训练。在第3天(即，诱导重症肌无力72小时后)口服治疗后1小时和2小时测定不同药物治疗对跑步机反应的效果。

结果

不同药物治疗在旋转杆试验中的效果如图1所示。左西孟旦及其活性代谢物(ii)产生急性和短暂的肌肉功能改善，在单次口服施用后0.5到1小时达到峰值。药物反应的持续时间与左西孟旦(t¹/20.7小时)和活性代谢物(ii)(大鼠的t¹/25小时)的药代动力学相关。

不同药物治疗在跑步机试验中的效果如图2所示。在第3天重复给药的给药后2小时发现左西孟旦及其活性代谢物(ii)对骨骼肌的积极作用。