GSKJ4HCL在制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病的药物中的用途的制作方法

本发明属药物化合物技术领域，涉及化合物gskj4hcl的药物新用途，具体涉及化合物gskj4hcl(c24h27n5o2·hcl)在制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病的药物中的用途，本发明通过药理作用实验证实所述化合物在体外与体内水平的新用途，尤其是在制备防治血管内膜增生药物中的用途。

背景技术：

研究公开了血管内膜增生是动脉粥样硬化，血管成形术，血管移植性动脉病等疾病的共同病理基础，其病理过程涉及血管平滑肌细胞的增殖与迁移，内皮功能紊乱以及细胞外基质的合成分泌与纤维化等。研究显示，新生内膜增生与血管重塑是临床上血管再狭窄及管腔治疗失败的主要原因；血管稳态的维持依赖于局部生长因子、血管活性物质以及血流动力学之间动态的相互作用，涉及代谢、氧化应激、炎症、生物活性物质、遗传和表观遗传调控等前沿热点问题，已引起本领域研究者的关注。

有关研究报道了靶向于表观遗传修饰酶的药物在恶性肿瘤，神经精神类疾病，代谢性疾病和炎症过程的调控中表现出良好前景，提示对于部分难治型疾病，表观遗传学的介入不失为新的切入点。已知gskj4hcl为组蛋白去甲基化酶jmjd3的特异性抑制剂，在肿瘤与炎症方面的研究居多；在这些病理过程中，jmjd3所介导的h3k27位点的甲基化修饰的去除能对疾病发生发展过程中基因表达的活跃状态进行调控；以血管平滑肌增殖迁移为主导的内膜增生过程同样包含相关基因的转录表达变化，有研究的实验结果也提示gskj4hcl通过抑制jmjd3参与细胞的增殖和血管重构过程。

迄今，尚未见化合物gskj4hcl对内膜增生性血管重构具有治疗作用的报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供化合物gskj4hcl的药物新用途，具体涉及化合物gskj4hcl(c24h27n5o2·hcl)在制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病的药物中的用途，本发明通过药理作用实验证实所述化合物在体外与体内水平的新用途，尤其是在制备防治血管内膜增生药物中的用途。

本发明所述的化合物gskj4hcl其分子式为：c24h27n5o2·hcl。

本发明进行了动物实验，采用c57bl/6j小鼠颈动脉结扎损伤模型，he染色法检测gskj4hcl对血管内膜增生厚度的影响；免疫荧光法检测gskj4hcl对g1/s-特异性周期蛋白-d1(cyclind1)和增殖细胞核抗原(pcna)蛋白表达水平的影响，实验结果显示，所述的化合物gskj4hcl能显著降低内膜增生厚度，并有效抑制cyclind1和pcna的蛋白表达水平；

本发明中，通过体外建立血小板源性生长因子(pdgf-bb)诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞(vsmcs)的细胞增殖与迁移模型，检测所述化合物gskj4hcl对细胞增殖和迁移活力的影响，采用brdu(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)法测定使用该抑制剂时细胞增殖水平的变化，结果显示，所述的gskj4hcl能显著抑制细胞增殖；transwell法检测结果显示其能显著抑制pdgf-bb诱导的细胞迁移；能抑制细胞增殖与迁移相关蛋白cyclind1以及，pcna与mmp9的表达水平；结果证实所述化合物对原代血管平滑肌细胞的增殖迁移过程产生抑制，具有抑制血管内膜增生的作用。

进一步的本发明所述的化合物gskj4hcl(c24h27n5o2·hcl)可制备防治血管内膜增生的药物，以及制备治疗与血管内膜增生相关的血管疾病的药物。

附图说明

图1：gskj4hcl对血管内膜增生厚度的影响，

其中显示了，sham:假手术组，injury:颈动脉结扎损伤组，gskj4：颈动脉结扎损伤+gskj4hcl给药组，20mg/kg/day。

图2：gskj4hcl对血管组织中细胞增殖相关蛋白表达水平的影响，

其中显示了，sham:假手术组，injury:颈动脉结扎损伤组，gskj4：颈动脉结扎损伤+gskj4hcl给药组，20mg/kg/day。

图3：gskj4hcl对pdgf-bb诱导的vsmcs细胞增殖水平的影响，

其中显示了，control:正常对照组，pdgf:模型组，pdgf+gskj4：gskj4，10μm。^:模型组与正常对照组相比，p<0.05；*:给予gskj4组与模型组相比，p<0.05。

图4：gskj4hcl对pdgf-bb诱导的vsmcs细胞迁移水平的影响，

其中显示了，control:正常对照组，pdgf:模型组，pdgf+gskj4：gskj4，10μm，^:模型组与正常对照组相比，p<0.05；*:给予gskj4组与模型组相比，p<0.05。

图5：gskj4hcl对pdgf-bb诱导的vsmcs细胞增殖迁移相关蛋白表达水平的影响，

其中显示了，control:正常对照组，pdgf:模型组，pdgf+gskj4：gskj4，10μm，^:模型组与正常对照组相比，p<0.05；*:给予gskj4组与模型组相比，p<0.05。

具体实施方式

实施例1gskj4hcl降低血管内膜增生厚度，抑制血管组织中细胞增殖相关蛋白的表达实验

体重21-24g雄性c57bl/6j小鼠，1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后仰卧固定，开颈部正中皮肤，切口长约2cm。钝性分离颈部肌肉，暴露左侧颈总动脉，在颈外动脉与颈内动脉“y形”分叉处以8-0号丝线完全结扎阻断血流，无菌生理盐水清洁后缝合颈部皮肤；待小鼠清醒后给予水和标准饲料分笼饲养；假手术组除不使用丝线结扎，其他操作与模型组相同；gskj4hcl以生理盐水溶解，将小鼠随机分为假手术组(sham,生理盐水,ip.n＝6)，模型组(injury,生理盐水，ip.n＝6)，模型+gskj4hcl组(injury+gskj4hcl,20mg/kg/day,n＝6)；连续给药28天后，取颈总动脉上自结扎位点以下长度约1cm的血管组织，假手术组取相同位置和长度的血管；4％多聚甲醛固定，包埋做冰冻切片。he染色观察内膜增生厚度；免疫荧光法对血管组织切片进行免疫荧光染色；

与模型组相比，gskj4hcl组可使内膜增生厚度显著降低(如图1所示)，给予gskj4hcl可明显抑制内膜增生过程中cyclind1与pcna蛋白的表达水平，对血管损伤处细胞的增殖产生抑制(如图2所示)。

实施例2.gskj4hcl抑制pdgf-bb诱导的vsmcs细胞增殖水平实验

大鼠原代平滑肌细胞培养于含10％胎牛血清的dmem培养基中，置于37℃，5％co2孵箱中培养，当细胞汇合度达80-90％时传代，细胞种96孔板，调整密度使细胞数量达到10^4个/孔，设置正常对照组(control，无药物干预，不加pdgf-bb)，模型组(model，无药物干预，20ng/mlpdgf-bb刺激48h),gskj4hcl组(gskj4hcl，10μm，提前4h预加后以pdgf-bb刺激)，brdu为胸腺嘧啶衍生物，常用于活细胞中新合成dna的标记，可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中新合成的dna中(细胞周期s期)，这种掺入可稳定存在，并随dna复制进入子细胞中，以brdu特异性抗体检测掺入的brdu可判断细胞增殖能力，brdu法结果显示，gskj4hcl能显著抑制pdgf-bb诱导的原代平滑肌细胞增殖(如图3所示)。

实施例3.gskj4hcl抑制pdgf-bb诱导的vsmcs细胞迁移水平实验

细胞增殖过程伴随着细胞迁移能力的增强，二者共同促进血管内膜增生过程的发生，以transwell法检测在pdgf-bb诱导下细胞迁移水平的变化，结果显示gskj4hcl能显著抑制 原代平滑肌细胞的迁移(如图4所示)。

实施例4.gskj4hcl抑制pdgf-bb诱导的vsmcs细胞增殖相关蛋白的表达实验

细胞种6孔板，各试验对照组以pdgf-bb诱导48h后裂解细胞收取蛋白，western-blotting法检测细胞增殖迁移相关蛋白cyclind1,pcna，mmp9，结果显示gskj4hcl能明显降低细胞增殖迁移相关蛋白的表达水平(如图5所示)。