本发明涉及一种包含噻吗洛尔和尿囊素的药物组合物，更特别的是指盐酸噻吗洛尔、马来酸噻吗洛尔和尿囊素的复方外用乳膏剂或凝胶剂。
背景技术：
婴幼儿血管瘤（Infantile hemangioma,IH）是一种儿童时期最常见的良性肿瘤，新生儿发病率为10%-12%，男女比例为1:3-1:5。通常根据病灶位置分为浅表型、深部型和混合型；根据病变发展过程分为增生期、消退期和消退完成期。婴幼儿血管瘤的典型临床表现是出生后1年内快速增殖，以后逐渐缓慢消退。
尽管婴幼儿血管瘤可自行消退，但仍有约10%的患儿出现溃疡、感染、疼痛，甚至失明、窒息等严重并发症；另因其好发于头面部，使之成为患儿家长的严重的心理负担。目前，婴幼儿血管瘤的增殖及消退机制尚未完全明确，治疗上也无根治方法。
根据血管瘤的部位、大小、范围、深度（浅表血管瘤、深部血管瘤、混合型血管瘤）、分期、功能影响以及对患儿的心理影响等不同因素，其治疗方法的选择也不相同：较小、处于稳定期或消退期的血管瘤可以采用等待观察；浅表血管瘤可采用局部外用软膏；深部血管瘤可采用类固醇激素、平阳霉素瘤内注射治疗；多发性、重症或生长迅速的血管瘤首选口服激素或普萘洛尔治疗，治疗无效时亦可采用干扰素皮下注射治疗；早期血管瘤的首选治疗方案一般不推荐手术治疗。
但是以上治疗效果不一，且全身用药副反应大，给患儿及患儿家属心理、生理和经济上带来极大的负担。
近年来，局部药物外用治疗血管瘤取得较满意的效果，且用药方便并尽可能避免全身副反应。在治疗药物的研究中，自法国医师Leaute-Labreze C等，于2008年6月在《新英格兰医学杂志》上首次报道普萘洛尔用于该疾病的治疗后，此方法立即引起了各国学者的关注，为血管瘤的治疗开辟了新途径，开创了β-受体阻滞药治疗血管瘤的先河。
近年来，其他β-受体阻滞药如噻吗洛尔、醋丁洛尔、阿替洛尔在治疗婴幼儿血管瘤方面也显示出巨大的潜力，疗效被不断证实。
2010年，同样为β-受体抑制剂的马来酸噻吗洛尔（Timolol Maleate）滴眼液，被报道可外用治疗浅表型婴幼儿血管瘤；另有文献报道了2008年5月-2013年12月发表大量的有关β-受体阻滞药，噻吗洛尔局部外用治疗婴幼儿血管瘤的国内外文献。
尿囊素作为日化产品的添加剂，不仅可促进肌肤、毛发最外层的吸水能力，而且有助于角质蛋白分子的亲水力。因此，可以改善和润湿皮肤，赋予肌肤、毛发及口唇以柔软、富于弹性、光泽并防干、防裂。具有促进上皮细胞生长、软化角质增加皮肤的柔软性、弹性和光泽的作用。
润肤和修复作用
尿囊素广泛地应用于护肤类化妆品中，尤其是婴幼儿的保健和敏感皮肤，其对粗糙的皮肤具有良好的润肤作用，能够使皮肤光滑丰腴。尿囊素在润肤的同时具有修复作用。使用含0.5%尿囊素的护肤品可明显改善表皮间的水分损失，减轻红肿现象。
保湿作用
尿囊素具有促进肌肤，毛发最外层组织的吸水能力，减少水分损失，使皮肤柔软有弹性、有光泽和防止皮肤干裂等功效。
尿囊素作为药物，具有促进细胞生长，加快伤口愈合，软化角质蛋白等生理功能，是皮肤创伤的良好愈合剂和抗溃疡药剂。可用作缓解和治疗皮肤干燥症、鳞屑性肤疾患、皮肤溃疡、消化道溃疡及炎症，痤疮均有较好疗效。
在目前公开发表的文献中，未见有噻吗洛尔和尿囊素联合使用的报道。
技术实现要素：
本发明提供了一种的新的外用药物组合物，本发明的药物组合物含有噻吗洛尔和尿囊素。
本发明还提供一种新的外用制剂，本发明的外用制剂含有噻吗洛尔和尿囊素药物组合物。
本发明中噻吗洛尔可以是游离碱的形式，也可以是药学上可以接受的任意盐的形式。优选马来酸噻吗洛尔、盐酸噻吗洛尔。
本发明药物组合物中优选噻吗洛尔和尿囊素质量比为1:0.1-1:10。更优选噻吗洛尔和尿囊素质量比为1:0.1-1:5。
本发明的外用制剂，优选噻吗洛尔的有效含量为0.1-5%。
本发明的外用制剂，可以是半固体的外用制剂，也可以是外用溶液剂。半固体的外用制剂可以是凝胶剂、软膏剂、乳膏剂。
优选本发明的外用制剂为凝胶剂。
本发明凝胶剂的基本组成包括：凝胶形成高分子材料、保湿剂、防腐剂和水。凝胶形成高分子材料起到凝胶成型和载药的作用；可分为天然高分子、半合成高分子和合成高分子三类：①天然高分子：淀粉、海藻酸盐等；②半合成高分子：改性纤维素和改性淀粉，如羧甲基纤维素、甲基纤维素等；③合成高分子：卡波姆、聚丙烯酸类等；保湿剂起到保持水分和润湿皮肤的作用，常用的有甘油、丙二醇的低分子醇类：防腐剂起到防腐的作用，保持凝胶不受微生物的污染，常用的有羟苯酯类等。
本发明凝胶剂中形成凝胶剂的高分子材料优选选自卡波姆（carbopol）类聚合物、羟丙甲纤维素（HPMC）、甲基纤维素（MC）、聚乙二醇（PEG）、羧甲基纤维素（CMC）类、透明质酸钠，或其两者及两者以上的混合物；其中可以选择性添加保湿剂，保湿剂选自丙二醇、甘油、乙醇、苯甲醇、苯乙醇等低分子醇类以及二乙二醇单乙基醚（Transcutol P）、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（Labrasol），或其两者及两者以上的混合物。
优选本发明的外用制剂为乳膏剂。
本发明的外用制剂为乳膏剂时，组成乳膏剂油相的成分优选选自，液体石蜡、硬脂酸、油酸、凡士林、蜂蜡、甘油硬脂酸脂、十六十八醇、甲基硅油，或其两者及两者以上的混合物。组成乳膏剂的乳化剂优选选自十二烷基硫酸钠、硬脂酸钠、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚山梨酯、甘油聚乙二醇-75-硬脂酸酯、聚乙二醇-7-硬脂酸酯、卡波姆（carbopol）类聚合物，或其两者或两者以上的混合物。
本发明创造性地将噻吗洛尔和尿囊素联合使用，制成半固体外用制剂（比如凝胶剂、软膏剂、乳膏剂等），研究人员惊奇地发现，由于加入了尿囊素，结果极大地提高了噻吗洛尔外用治疗血管瘤疗效，并且克服了由于外用制剂长期使用带来的不良反应问题，提高了病人的顺应性，极大地改善了婴幼儿患者的生活质量，非常有利于这类疾病的积极治疗，具有巨大的经济和社会效益。
现有技术中，均是以噻吗洛尔为主药，配制成水溶液剂或普通凝胶剂使用；现有技术中的噻吗洛尔外用药物制剂存在一些不可克服的缺陷，严重影响了该药物的使用和推广。
首先，溶液剂作用时间短、易流淌而难于停留于病灶部，剂量无法控制，不利于精确给药；应用于口周、眼周病灶时，易流入口内、眼内，而引起潜在的全身不良反应；所以溶液剂显然不是婴幼儿血管瘤治疗的优选的给药剂型。
其次，普通的凝胶剂和乳膏等剂型，虽然可以克服溶液剂给药的缺点，但是药物经过皮肤给药对血管瘤进行治疗，药物发挥药效的关键的步骤是：（1）皮肤为药物透过进入血管瘤起作用的屏障器官，药物经皮肤吸收的量的大小是噻吗洛尔外用治疗血管瘤的主要关键因素；（2）血管瘤的治疗是一个长期的过程，通常连续用药时间持续在6个月以上。外用乳膏、凝胶、溶液剂等长期使用通常会带来皮肤发红、瘙痒、脱皮甚至溃烂等症状，特别是婴幼儿患者，他们皮肤娇嫩，抗刺激性弱；皮肤瘙痒、溃烂是患者中断治疗的主要因素，严重影响到了病人的治疗。
本发明研究人员通过试验验证惊奇地发现，（1）本发明所述的含尿囊素的药物组合和制剂，药物噻吗洛尔的经皮吸收的量比对照处方显著提高，这正是本发明所述的含尿囊素制剂的药物疗效提高的原因所在。（2）在提高药物的疗效的同时，尿囊素可以增加和促进表皮接合剂基质的水合能力，并直接作用于角蛋白，使其结合水的能力增加，使皮肤变得光滑、润湿和柔韧，具有很好的安抚皮肤的作用。
因此噻吗洛尔和尿囊素的组合使用，不仅起到增加噻吗洛尔透皮吸收的作用，更重要的是：同时对于克服长期用药带来的刺激性、皮肤干燥、溃疡，有很好的缓解和安抚作用，极大地提高了病人用药的顺应性，改善婴幼儿患者的生活质量。
本发明的药物组合物和外用制剂，可以采用药剂学的常用方法制备。
本发明一种具体实施方式中的通用制备方法简要概述如下，具体处方下的工艺参数不排除有所调节的可能。
凝胶剂的制备方法：取卡波姆，加适量纯化水搅匀，使卡波姆充分分散；另取氢氧化钠溶于纯化水中，逐渐加入卡波姆混悬液中，调节pH至4-9范围，形成凝胶；药物组合物以及其余组分分次加入，搅匀即得。
乳膏剂的制备方法：将处方中的油脂性和油溶性成分一起加热至80℃左右成油溶液（油相），另将药物组合物以及水溶性组分溶于水中并一起加热至80℃成水溶液（水相）。油相与水相混合时，将水相加入油相中。搅拌30分钟后，继续搅拌下冷却到室温即得。
本发明组合物外用药物制剂的效果，主要通过药物透皮吸收对比研究、药效学对比研究以及临床疗效的验证等三个方面体现出来。
药物透皮吸收对比研究
采用改良的Franz立式扩散池进行试验，以离体的小型猪皮肤为吸收屏障，皮肤固定在供给池与接收池之间，将皮肤角质层面向供给池一侧，供给池中均匀涂上被测制剂（直径2.0cm）。利用HPLC测定药物透过的浓度进行比较，来说明本发明组合物的意义。由试验结果可以看出，含有尿囊素的组合物制剂，可以使得噻吗洛尔的透皮吸收的药物浓度提高几乎一倍。因此大大提高了药物的治疗效果。由此证明了本发明的创新性和可行性。
药效学对比研究
建立裸鼠的肿瘤模型：取原代培养的HemSC和HUVEC，同时用胰酶消化后，取1×106个HemSC+5×105个HUVEC，混悬于200μL的Matrigel，转入每只裸鼠背侧注射入200μL Matrigel即1.5×106个细胞，每周注射1次0.1mg/只的17β-雌二醇，2周后建模成功后，进行药效学试验，主要观察指标为肿瘤体积的大小。
药效试验结果证实：和不含尿囊素的物制剂比较，同时含有噻吗洛尔和尿囊素的组合物制剂在药效学模型上具有惊人的治疗效果，药物治疗效果极大地提高，这也和透皮试验的结果相吻合，也为本发明的创新性和可行性提供了实验数据的支持。
临床疗效的验证
我们选取25名1~6月龄患有浅表型婴幼儿血管瘤的患儿，对组合物制剂进行了为期3个月的外用药物治疗。结果表明，25名病例中，无一例出现瘤体局部皮肤发红、蜕皮、皮肤破溃、溃疡或严重全身反应。20名患者血管瘤症状完全消失，其余5名症状虽然没有完全消退，但均有很大程度的改善。所有患儿家长对治疗效果和副作用评价均非常满意。这一初步的临床试用，从临床的角度证明了本发明的创新性和可行性。
下面通过具体的实施例进行详细的说明。本发明并不仅仅局限于以下实施例。
实施例1.
制备过程：将处方中的油脂性和油溶性成分（液体石蜡、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯）一起加热至80℃左右成油溶液（油相），另将水溶性组分（甘油、氢氧化钠）溶于水中并一起加热至80℃成水溶液（水相）。油相与水相混合时，将水相加入油相中。搅拌30分钟后，将马来酸噻吗洛尔、尿囊素、羟苯乙酯，依次加入，继续搅拌30分钟，搅拌下冷却到室温，即得马来酸噻吗洛尔乳膏剂。
实施例2.
制备过程：将处方中的油脂性和油溶性成分（甲基硅油、硬脂酸、十六十八醇）一起加热至75℃左右成油溶液（油相），另将水溶性组分（马来酸噻吗洛尔、丙二醇、尿囊素、甘油聚乙二醇-75-硬脂酸酯、羟苯乙酯）溶于水中并一起加热至70℃成水溶液（水相）。油相与水相混合时，搅拌30分钟后，于搅拌下冷却到室温，即得马来酸噻吗洛尔乳膏剂。
实施例3.
制备过程：将处方中的油脂性和油溶性成分（液体石蜡）加热至30℃左右成油溶液（油相），另将水溶性组分（HPMC、马来酸噻吗洛尔、丙二醇、尿囊素、聚山梨酯80、羟苯甲／丙酯）溶于水中并一起加热至30℃成水溶液（水相）。油相与水相混合，搅拌30分钟后，即得马来酸噻吗洛尔乳膏剂。
实施例4.
制备过程：将处方中的油脂性和油溶性成分（液体石蜡）加热至30℃左右成油溶液（油相），另将水溶性组分（聚氧乙烯氢化蓖麻油、马来酸噻吗洛尔、丙二醇、尿囊素、羟苯甲／丙酯）溶于水中并一起加热至30℃左右成水溶液（水相），水相和油相混合，搅拌30分钟；卡波姆分散于水后用氢氧化钠调节pH为4-6，也加入到以上混合物中，继续搅拌30分钟混合均匀后，即得马来酸噻吗洛尔乳剂型凝胶。
实施例5.
制备过程：将卡波姆分散于水后用氢氧化钠调节pH为4-6，形成凝胶备用；将处方中马来酸噻吗洛尔、尿囊素、甘油、羟苯丙酯溶于水中；将该混合物的水溶液加入到备用的凝胶中，混合，搅拌30分钟，即得马来酸噻吗洛尔凝胶剂。
实施例6.
制备过程：将羧甲基纤维素钠溶于水形成凝胶备用；将处方中马来酸噻吗洛尔、尿囊素、丙二醇、二乙二醇单乙基醚、羟苯乙酯溶于水中；将该混合物的水溶液加入到备用的凝胶中，混合，搅拌30分钟，即得马来酸噻吗洛尔凝胶剂。
实施例7.
制备过程：将处方中的油脂性和油溶性成分（辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、二乙二醇单乙基醚）加热至60℃左右成油溶液（油相），另将水溶性组分（盐酸噻吗洛尔、尿囊素、聚氧乙烯氢化蓖麻油、羟苯乙酯）溶于水中并一起加热至60℃成水溶液（水相）。油相与水相混合，持续搅拌45分钟后，即得马来酸噻吗洛尔乳膏剂。
实施例8.
为了进一步说明本发明的创新性和可行性，我们将本发明药物组合物和实施例中的外用制剂进行了透皮试验测定，将组合物和制剂处方中的尿囊素去掉后，作为对比进行比对试验，证明尿囊素的对噻吗洛尔的透皮吸收促进作用。
透皮试验方法
采用改良的Franz立式扩散池进行试验，本法是目前文献中较常见的局部用制剂的体外透过性研究方法。扩散池由供给池和接收池组成，将皮肤固定在供给池与接收池之间，将皮肤角质层面向供给池一侧，供给池中均匀涂上被测制剂（直径2.0cm）。接收池中加入7ml的接收液，接收池底部凹槽中放入磁力搅拌子，搅拌速度300rpm，温度 (37±0.5)℃。开始试验后，于0、1、2、4、6、8、10h定时取样，每次吸取3ml 接收液，随即补等量的接收液，过滤后利用HPLC测定药物浓度。
仪器
透皮扩散试验仪（TK-12B型），上海铠凯科技贸易有限公司；改良的Franz立式扩散池（有效透过面积3.14cm2，接收池体积7ml），上海铠凯科技贸易有限公司。
试验动物皮肤
小型猪皮肤（巴马香猪），性别：雄性，年龄：2.0个月，由第三军医大试验动物学教研室提供。
试验结果
以实施例5为基本处方，对不同比例组合物的透皮试验结果进行了测定。其中马来酸噻吗洛尔的含量为0.5%固定不变，测定了马来酸噻吗洛尔：尿囊素比例为0.5:0（即无尿囊素组），0.5:0.05，0.5:0.1，0.5:0.3，0.5:0.5，0.5:1.0，0.5:2.5的组合物透皮试验结果。
结果如下：
由试验结果可以看出，含有尿囊素的组合物的制剂，可以使得噻吗洛尔的透皮吸收的药物浓度大幅度提高。当马来酸噻吗洛尔：尿囊素比例为提高到0.5:0.3时，透皮吸收的药物浓度几乎提高了一倍；之后再增加尿囊素的浓度，仍然可以继续提高透皮吸收的药物浓度，但是增加幅度有所减慢。因此含有尿囊素的组合物大大提高了药物的治疗效果。由此证明了本发明的创新性和可行性。
实施例1，2，3，4，6代表了组合物的不同剂型，对其透皮吸收试验测定的结果如下表，对比处方为相应实施例中不含尿囊素的处方：
由试验结果可以看出，在所有实施例中含有尿囊素的组合物的制剂，可以使得噻吗洛尔的透皮吸收的药物浓度提高几乎一倍多，因此大大提高了药物的治疗效果。由此证明了本发明的创新性和可行性。
同时对实施例4和5中的组合物处方进行了初步的药效学研究。
实验性血管瘤裸鼠模型的建立：取原代培养的HemSC和HUVEC，同时用胰酶消化后，取1×106个HemSC+5×105个HUVEC，混悬于200μL的Matrigel，转入每只裸鼠背侧注射入200μLMatrigel即1.5×106个细胞，每周注射1次0.1mg/只的17β-雌二醇（100μL DMSO溶解），2周后将裸鼠处死，观察其成瘤效果，对移植瘤组织进行HE染色以及SP法免疫组织化学Glut-1和CD31检测，验证血管瘤模型是否构建成功。建模成功后，进行药效学试验，主要观察指标为肿瘤体积的大小。
将成功建立血管瘤模型的30只小鼠分为3组，分别为空白对照组（简称空白组）、凝胶给药组1（实施例4）、凝胶给药组2（组方同实施例4，但是无尿囊素）。
空白对照组（简称空白组）：不做任何处理。
凝胶给药组：待血管瘤模型构建2周后，将凝胶均匀涂抹于瘤体表面，厚度约1mm，轻轻按摩直至药物吸收，1次/d；每次外涂前轻拭瘤体表面残留药物基质，使得药物可以充分吸收；连续处理2周；观察到第20天。
以下是动物分组和试验结果（肿瘤体积大小）：
实施例4和实施例5的以上试验结果证实：和不含尿囊素的物制剂比较，同时含有噻吗洛尔和尿囊素的组合物制剂在药效学模型上具有惊人的治疗效果，药物治疗效果极大地提高，这也和透皮试验的结果相吻合，也为本发明的创新性和可行性提供了实验数据的支持。
实施例9.
为了验证本发明的创新性和可行性，我们选取25名1~6月龄患有浅表型婴幼儿血管瘤的患儿，均取得家长知情和许可，对实施例4制剂进行了初步的临床试用，进行为期3个月的外用药物治疗，以视觉模拟评分法评价疗效，并记录不良反应。
结果表明，25名病例中，无一例出现瘤体局部皮肤发红、蜕皮、皮肤破溃、溃疡或严重全身反应。20名患者血管瘤症状完全消失，其余5名症状虽然没有完全消退，但均有很大程度的改善。所有患儿家长对治疗效果和副作用评价均非常满意。
这一初步的临床试用，从临床的角度证明了本发明的创新性和可行性。
参考文献
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