本发明属于天然产物分离技术领域，具体涉及一种提取白花杜鹃中活性成分的方法。
背景技术：
杜鹃属植物化学主要成分为土荆芥油素、异土荆芥油素、槲皮素、山奈素、金丝桃甙、红色素、谷甾醇等。杜鹃花科植物活性成分有良好的抗菌消炎作用,如秀丽杜鹃、汶川杜鹃、矮枇杷的抗菌作用就强于或相当于黄莲。但近年来，其作为神经药理学基质而更受重视。
James A.Klock等从黄杜鹃提取到的化学成分作为心血管药的治疗；Yoshiki等从兴安杜鹃中提取出2种新的色原烷衍生物1和色原烷衍生物2，另一种化合物色原烯3 具有潜在的抗艾滋病病毒活性；钟国华等以黄杜鹃作为麻醉剂，治疗温疟，有显著的减慢心率和降低血压作用。从华丽杜鹃叶分离的杜鹃素和Matleucinal能影响视觉。映山红的嫩叶是“红桃合剂”的主要成分，对慢性支气管炎有良好疗效，满山红、紫花杜鹃都有止咳化痰的功效。从大白花杜鹃叶中分离得到的木藜芦毒素在低剂量(1～100μg/kg)时有明显降压作用，还能诱发动物的传入神经、迷走神经、肌神经、颈神经、颈动脉神经和皮质神经产生强烈的突发效应，证明是一种高强度的肌兴奋剂。
另外，杜鹃花科植物中的黄杜鹃药液喷雾防治桑蟥、灌施防治地下害虫、浸渍处理蚜虫效果良好，熏蒸家蝇，致死时间与除虫菊粉相同，苏醒时间比除虫菊粉长，苏醒百分率比除虫菊粉低。据不完全统计，黄杜鹃对豆平蝽、甘蔗绵蚜、苎麻黄蛱蝶、菜粉蝶、稻瘿蚊、稻蝗、稻苞虫、负泥虫、叶蝉、甘薯金花虫、红蜘蛛等10科50余种重要经济害虫毒杀效果良好，因此，曾作为土农药在黄杜鹃产区广泛应用。
杜鹃花属中很多种类的活性成分已被研究，如黄毛杜鹃、日本杜鹃等。目前已从黄杜鹃中分离并鉴定出结构的活性成分有8种：分别是闹羊花素-Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ， Rhodomollein-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，Kalmanol和Grayanotoxin-Ⅲ。此外，还含有浸木毒素、石楠素、杜鹃花毒素、司帕拉沙酚、马醉木毒素等。
杜鹃花科植物分布广，品种多，其活性成分种类多，活性高，用途广，具有广阔的开发前景，我国杜鹃花科植物资源丰富，我们应加强研究并加以开发应用。
目前，尚未见采用超临界CO2萃取开花期白花杜鹃活性成分的报道，也未见有相关专利。
本发明以开花期白花杜鹃为提取原料，利用超临界CO2萃取方法进行生物活性成分的提取分离，其操作简便、方法简单、提取效率高等特点。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种提取率高、能耗低、操作简便的白花杜鹃中生物活性成分的新提取方法。
为了解决上述技术方案，本发明提供了如下的技术方案：
一种提取白花杜鹃中生物活性成分的方法，将开花期采摘的白花杜鹃粉碎后放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取温度为35-45℃、萃取压力15-25MPa、萃取时间为1.5-2.5h，得到淡黄色的活性成分的提取物。
作为优选，将开花期采摘的白花杜鹃在自然条件下户外晾干。
在自然条件下户外晾干的好处是：目的是让白花杜鹃的水分在自然环境温度下缓慢蒸发掉所含水分，而不破坏其组织结构或丢失其它所含化学成分。
作为优选，将开花期采摘的白花杜鹃粉碎后过200目筛。
选择该粉碎粒径的目的是：一方面是尽量不破坏白花杜鹃的组织结构，另一方面是在这个粒度条件下更加便于萃取。
作为优选，所述萃取压力为25MPa、萃取温度为40℃。
作为优选，所述萃取时的反应时间为2.5h。
本发明具有以下有益效果：
超临界CO2萃取法是用无毒、无残留的超临界CO2代替水或有机溶剂作提取溶剂，不仅可以在接近室温的条件下萃取，而且可以实现高选择性提取和分离，从而获得高质量的产品。并且超临界CO2提取不会产生三废，对环境保护极为有利，提取材料CO2价廉易得，可循环使用，生产成本较低。
在本发明提供的工艺参数范围内，针对开花期采摘的白花杜鹃花中生物活性成分提取效率高，提取速度快，工艺简单，节省试剂，耗能少，成本低，污染少，优于其它采用传统提取技术的提取方法。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为白花杜鹃GC/MS化学成分分析图谱。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
1、材料及方法
1.1仪器与试剂材料
安捷伦气相质谱仪(Agilent 6890-5973 GC/MS);开花期白花杜鹃花采摘自西藏自治区；氯仿等化学试剂均为色谱纯。
1.2提取方法
1.2.1开花期白花杜鹃原料处理
将开花期白花杜鹃花自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛，备用。
1.2.2活性成分提取
精密称取3g-3.8g粉碎后的开花期白花杜鹃于萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，进行提取，从接样口收集到0.00561g-0.02934g淡黄色提取物，用氯仿溶解备用。
1.2.3样品检测条件
进样口温度：270 ℃，升温程序：60 ℃，以10℃/min速率升至280℃，保持5min，以5℃/min速率升至290℃，保持3min，分流进样，分流比：20:1，载气：高纯氦气，纯度≥99.999%，流速1.0 mL/min。进样量：1μL。
2.试验结果
2.1提取率影响条件的优化结果
选用了对总提取率有主要影响的3个因素（萃取压力Mpa、萃取温度℃、萃取时间h）考虑三个水平，以L9(33)正交表进行试验影响因素优化。优化结果见表1、表2、表3。
表1 L9(33)正交试验影响因素水平表
表2 L9(33)正交试验结果
表3L9(33)正交试验方差分析
在实验范围内，考虑提取生产成本，最佳提取条件是A3B2C1，即开花期白花杜鹃粉碎为200目、萃取压力25MPa、萃取温度为40℃、反应时间2.5h为最佳提取条件。
2.2 GC/MS检测结果分析
将应用上述最优提取条件（即开花期白花杜鹃粉碎为200目、萃取压力25MPa、萃取温度为40℃、反应时间2.5h）提取的白花杜鹃活性成分采用气相色谱-质谱联用技术进行测定，具体参见图1，共检测分离出24种含量较高的化合物；经与质谱谱图数据库比对，初步鉴定主要为烷烃及其含氧衍生物（62.32%）、烯和醇（8.09%）、酯（4.87%）等化合物，其中包含有提高机体免疫力和抗肿瘤作用的角鲨烯（含量达4.79%）等活性成分。
实施例1
本发明的提取白花杜鹃中生物活性成分的方法如下：
（1）将开花期采摘的白花杜鹃在自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛；
（2）称取3 g白花杜鹃粉体放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取压力15MPa、萃取温度为35℃、萃取时间为2h，得到0.01034g淡黄色的活性成分提取物。
实施例2
本发明的提取白花杜鹃中生物活性成分的方法如下：
（1）将开花期采摘的白花杜鹃在自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛；
（2）称取3.5g白花杜鹃粉体放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取压力20MPa、萃取温度为45℃、萃取时间为1.5h，得到0.01229g淡黄色的活性成分提取物。
实施例3
本发明的提取白花杜鹃中生物活性成分的方法如下：
（1）将开花期采摘的白花杜鹃在自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛；
（2）称取3.7g白花杜鹃粉体放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取压力25MPa、萃取温度为40℃、萃取时间为2.5h，得到0.02934g淡黄色的活性成分提取物。
实施例4
本发明的提取白花杜鹃中生物活性成分的方法如下：
（1）将开花期采摘的白花杜鹃在自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛；
（2）称取3.5g白花杜鹃粉体放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取压力25MPa、萃取温度为35℃、萃取时间为1.5h，得到0.01876g淡黄色的活性成分提取物。
实施例5
本发明的提取白花杜鹃中生物活性成分的方法如下：
（1）将开花期采摘的白花杜鹃在自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛；
（2）称取3.4g白花杜鹃粉体放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取压力25MPa、萃取温度为45℃、萃取时间为2h，得到0.01808g淡黄色的活性成分提取物。
实施例6
本发明的提取白花杜鹃中生物活性成分的方法如下：
（1）将开花期采摘的白花杜鹃在自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛；
（2）称取3.8g白花杜鹃粉体放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取压力15MPa、萃取温度为45℃、萃取时间为2.5h，得到0.00561g淡黄色的活性成分提取物。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。