本发明公开了一种利用泥鳅制备渗透促进剂的方法，属于渗透促进剂领域。
背景技术：
由于细胞膜的天然屏障作用，大多数具有治疗作用的极性分子、多肽、寡聚核苷酸很难进入细胞内发挥药效作用，因此很多具有良好治疗功能的大分子生物活性物质在实际应用中受到了极大的限制。研究人员用治疗活性药物的透皮给药途径来把药物释放进哺乳动物、包括人的全身循环。不过，尽管对药物的透皮释药来说已经开发了许多方式，但对于外用化学物质的渗透来说，人及其它动物的皮肤仍是一种优秀的屏障。皮肤的最外层是角质层，它对渗透提供了最大的抵抗性，而往里的皮肤层相对容易渗透。对皮肤疾患和疾病的适当治疗来说，使药理活性剂透过角质层并在病变部位达到适当的浓度是很重要的，病变部位可能是角质层、活的表皮、表皮一真皮连接、真皮本身、或所有上述皮肤层，具体位置取决于皮肤疾患或皮肤疾病的类型。
尽管已有多种渗透促进剂被用来促进治疗剂的吸收进入及通过皮肤，但当渗透促进剂经过较长时间阶段后与所给药物不能共存时便产生了严重问题，因此当将促进剂与药物共同配制用于包括人在内的温血动物的药学上可接受的组合物中时，会导致药物不稳定并产生降解。所以，如果不把该渗透促进剂和药物混合在一起并不把它们存放在一起，药物就不会在一段时间后变得不稳定并降解产生所不希望的和潜在有害的副产物。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题：针对渗透促进剂相对分子质量大、稳定性差、皮肤渗透率较低，导致大多数具有治疗作用的极性分子、多肽、寡聚核苷酸很难进入细胞内发挥药效作用的问题，提供了一种利用泥鳅制备渗透促进剂的方法，本发明从泥鳅中分别提取泥鳅滑液和泥鳅肉，将利用白糖分离泥鳅滑液后加入纳米二氧化钛，用紫外光照射催化得照射后的粘液，将泥鳅肉用复合酶酶解后得到的酶解液和照射后的粘液混合，混合后再加水混合，用树脂柱层析后洗脱，收集洗脱液并旋转蒸发，得浓缩液与肉豆蔻酸异丙酯、薄荷酮、茴香醚和柠檬烯混合，即可得到渗透促进剂，本发明制备得到的渗透促进剂无毒、无刺激性及无过敏反应，能可逆地降低皮肤的屏障性能，而又不损害皮肤的其它功能，皮肤渗透率高，而且与药物之间不会发生相互作用，不影响药效。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）选取40～50只鲜活的泥鳅，放入3～5L自来水中，不添加食物，饥饿养殖5～7天，将养殖后的泥鳅取出，撒50～70g蔗糖在泥鳅表面，搅拌混合10～15min，使泥鳅表面滑液和蔗糖混合，静置30～50min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鳅备用；
（2）将上述收集后的粘液装入烧杯中，并向烧杯中加入粘液质量0.3～0.5%纳米二氧化钛，超声分散5～10min后放入紫外灯下，在波长为250～400nm条件下照射10～15min，将照射后的粘液备用；
（3）将步骤（1）刮液后的泥鳅表面用质量分数2%氯化钠溶液洗涤3～5次，洗涤后去除泥鳅头、尾巴和血，将剩下的泥鳅肉放入绞肉机中绞碎成肉糜，将肉糜在-25～-20℃温度下冷冻3～5h；
（4）将上述冷冻后的肉糜在25℃温度下解冻3～5h，将解冻后的肉糜按质量比1:5与去离子水混合，放入高速匀浆机中匀浆20～30min得浆液，向浆液中加入浆液质量5～7%复合蛋白酶，在40～50℃下酶解1～3h，酶解后在100℃下加热5～7min，冷却至室温后在7000～9000rpm和4℃条件下离心分离15～20min，得上清液；所述的复合蛋白酶为动物蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶按质量比3:2:2:1混合；
（5）将上述上清液和步骤（2）照射后的粘液混合20～30min后得混合液，将混合液按体积比1:8与去离子水混合，混合后经过HP-20树脂柱层析，层析后先用去离子水洗脱2～3次，去除洗脱液后再依次用质量分数30%乙醇溶液、质量分数50%乙醇溶液和质量分数80%乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发至原体积20～30%，收集浓缩液；
（6）按重量份数计，分别选取60～70份上述浓缩液、3～6份肉豆蔻酸异丙酯、2～5份薄荷酮、3～6份茴香醚和1～3份柠檬烯，搅拌混合均匀后即可得到渗透促进剂。
本发明的应用方法：按重量份数计，分别选取40～50份聚丙烯酸树脂、20～22份癸二酸二丁酯、3～5份琥珀酸，25～35份无水乙醇，搅拌混合1～3h后得压敏胶液，向压敏胶液中加入本发明制备得到的渗透促进剂，加入量为300～500mg/mL，搅拌均匀，制得含药压敏胶液，将含药压敏胶液涂布在防粘层上，涂覆量为8～10mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆盖背衬膜，包装，即可得贴剂。
本发明的有益效果是：
（1）本发明制备得到的渗透促进剂无毒、无刺激性及无过敏反应；
（2）本发明制备得到的渗透促进剂能可逆地降低皮肤的屏障性能，而又不损害皮肤的其它功能，皮肤渗透率高，生物利用活性高；
（3）本发明制备得到的渗透促进剂与药物之间不会发生相互作用，不影响药效。
具体实施方式
选取40～50只鲜活的泥鳅，放入3～5L自来水中，不添加食物，饥饿养殖5～7天，将养殖后的泥鳅取出，撒50～70g蔗糖在泥鳅表面，搅拌混合10～15min，使泥鳅表面滑液和蔗糖混合，静置30～50min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鳅备用；将上述收集后的粘液装入烧杯中，并向烧杯中加入粘液质量0.3～0.5%纳米二氧化钛，超声分散5～10min后放入紫外灯下，在波长为250～400nm条件下照射10～15min，将照射后的粘液备用；将刮液后的泥鳅表面用质量分数2%氯化钠溶液洗涤3～5次，洗涤后去除泥鳅头、尾巴和血，将剩下的泥鳅肉放入绞肉机中绞碎成肉糜，将肉糜在-25～-20℃温度下冷冻3～5h；将上述冷冻后的肉糜在25℃温度下解冻3～5h，将解冻后的肉糜按质量比1:5与去离子水混合，放入高速匀浆机中匀浆20～30min得浆液，向浆液中加入浆液质量5～7%复合蛋白酶，在40～50℃下酶解1～3h，酶解后在100℃下加热5～7min，冷却至室温后在7000～9000rpm和4℃条件下离心分离15～20min，得上清液；所述的复合蛋白酶为动物蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶按质量比3:2:2:1混合；将上述上清液和照射后的粘液混合20～30min后得混合液，将混合液按体积比1:8与去离子水混合，混合后经过HP-20树脂柱层析，层析后先用去离子水洗脱2～3次，去除洗脱液后再依次用质量分数30%乙醇溶液、质量分数50%乙醇溶液和质量分数80%乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发至原体积20～30%，收集浓缩液；按重量份数计，分别选取60～70份上述浓缩液、3～6份肉豆蔻酸异丙酯、2～5份薄荷酮、3～6份茴香醚和1～3份柠檬烯，搅拌混合均匀后即可得到渗透促进剂。
实例1
选取40只鲜活的泥鳅，放入3L自来水中，不添加食物，饥饿养殖5天，将养殖后的泥鳅取出，撒50g蔗糖在泥鳅表面，搅拌混合10min，使泥鳅表面滑液和蔗糖混合，静置30min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鳅备用；将上述收集后的粘液装入烧杯中，并向烧杯中加入粘液质量0.3%纳米二氧化钛，超声分散5min后放入紫外灯下，在波长为250nm条件下照射10min，将照射后的粘液备用；将刮液后的泥鳅表面用质量分数2%氯化钠溶液洗涤3次，洗涤后去除泥鳅头、尾巴和血，将剩下的泥鳅肉放入绞肉机中绞碎成肉糜，将肉糜在-25℃温度下冷冻3h；将上述冷冻后的肉糜在25℃温度下解冻3h，将解冻后的肉糜按质量比1:5与去离子水混合，放入高速匀浆机中匀浆20min得浆液，向浆液中加入浆液质量5%复合蛋白酶，在40℃下酶解1h，酶解后在100℃下加热5min，冷却至室温后在7000rpm和4℃条件下离心分离15min，得上清液；所述的复合蛋白酶为动物蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶按质量比3:2:2:1混合；将上述上清液和照射后的粘液混合20min后得混合液，将混合液按体积比1:8与去离子水混合，混合后经过HP-20树脂柱层析，层析后先用去离子水洗脱2次，去除洗脱液后再依次用质量分数30%乙醇溶液、质量分数50%乙醇溶液和质量分数80%乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发至原体积20%，收集浓缩液；按重量份数计，分别选取60份上述浓缩液、3份肉豆蔻酸异丙酯、2份薄荷酮、3份茴香醚和1份柠檬烯，搅拌混合均匀后即可得到渗透促进剂。
按重量份数计，分别选取40份聚丙烯酸树脂、20份癸二酸二丁酯、3份琥珀酸，25份无水乙醇，搅拌混合1h后得压敏胶液，向压敏胶液中加入本发明制备得到的渗透促进剂，加入量为300mg/mL，搅拌均匀，制得含药压敏胶液，将含药压敏胶液涂布在防粘层上，涂覆量为8mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆盖背衬膜，包装，即可得贴剂。
实例2
选取45只鲜活的泥鳅，放入4L自来水中，不添加食物，饥饿养殖6天，将养殖后的泥鳅取出，撒60g蔗糖在泥鳅表面，搅拌混合13min，使泥鳅表面滑液和蔗糖混合，静置40min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鳅备用；将上述收集后的粘液装入烧杯中，并向烧杯中加入粘液质量0.4%纳米二氧化钛，超声分散7min后放入紫外灯下，在波长为350nm条件下照射13min，将照射后的粘液备用；将刮液后的泥鳅表面用质量分数2%氯化钠溶液洗涤4次，洗涤后去除泥鳅头、尾巴和血，将剩下的泥鳅肉放入绞肉机中绞碎成肉糜，将肉糜在-23℃温度下冷冻4h；将上述冷冻后的肉糜在25℃温度下解冻4h，将解冻后的肉糜按质量比1:5与去离子水混合，放入高速匀浆机中匀浆25min得浆液，向浆液中加入浆液质量6%复合蛋白酶，在45℃下酶解2h，酶解后在100℃下加热6min，冷却至室温后在8000rpm和4℃条件下离心分离17min，得上清液；所述的复合蛋白酶为动物蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶按质量比3:2:2:1混合；将上述上清液和照射后的粘液混合25min后得混合液，将混合液按体积比1:8与去离子水混合，混合后经过HP-20树脂柱层析，层析后先用去离子水洗脱2次，去除洗脱液后再依次用质量分数30%乙醇溶液、质量分数50%乙醇溶液和质量分数80%乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发至原体积25%，收集浓缩液；按重量份数计，分别选取65份上述浓缩液、4份肉豆蔻酸异丙酯、4份薄荷酮、5份茴香醚和2份柠檬烯，搅拌混合均匀后即可得到渗透促进剂。
按重量份数计，分别选取45份聚丙烯酸树脂、21份癸二酸二丁酯、4份琥珀酸，30份无水乙醇，搅拌混合2h后得压敏胶液，向压敏胶液中加入本发明制备得到的渗透促进剂，加入量为400mg/mL，搅拌均匀，制得含药压敏胶液，将含药压敏胶液涂布在防粘层上，涂覆量为9mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆盖背衬膜，包装，即可得贴剂。
实例3
选取50只鲜活的泥鳅，放入5L自来水中，不添加食物，饥饿养殖7天，将养殖后的泥鳅取出，撒70g蔗糖在泥鳅表面，搅拌混合15min，使泥鳅表面滑液和蔗糖混合，静置50min后，用刮板刮下表面粘液，收集粘液，刮液后的泥鳅备用；将上述收集后的粘液装入烧杯中，并向烧杯中加入粘液质量0.5%纳米二氧化钛，超声分散10min后放入紫外灯下，在波长为400nm条件下照射15min，将照射后的粘液备用；将刮液后的泥鳅表面用质量分数2%氯化钠溶液洗涤5次，洗涤后去除泥鳅头、尾巴和血，将剩下的泥鳅肉放入绞肉机中绞碎成肉糜，将肉糜在-20℃温度下冷冻5h；将上述冷冻后的肉糜在25℃温度下解冻5h，将解冻后的肉糜按质量比1:5与去离子水混合，放入高速匀浆机中匀浆30min得浆液，向浆液中加入浆液质量7%复合蛋白酶，在50℃下酶解3h，酶解后在100℃下加热7min，冷却至室温后在9000rpm和4℃条件下离心分离20min，得上清液；所述的复合蛋白酶为动物蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶按质量比3:2:2:1混合；将上述上清液和照射后的粘液混合30min后得混合液，将混合液按体积比1:8与去离子水混合，混合后经过HP-20树脂柱层析，层析后先用去离子水洗脱3次，去除洗脱液后再依次用质量分数30%乙醇溶液、质量分数50%乙醇溶液和质量分数80%乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发至原体积30%，收集浓缩液；按重量份数计，分别选取70份上述浓缩液、6份肉豆蔻酸异丙酯、5份薄荷酮、6份茴香醚和3份柠檬烯，搅拌混合均匀后即可得到渗透促进剂。
按重量份数计，分别选取50份聚丙烯酸树脂、22份癸二酸二丁酯、5份琥珀酸，35份无水乙醇，搅拌混合3h后得压敏胶液，向压敏胶液中加入本发明制备得到的渗透促进剂，加入量为500mg/mL，搅拌均匀，制得含药压敏胶液，将含药压敏胶液涂布在防粘层上，涂覆量为10mL/m2，涂覆后自然干燥，干燥完全后覆盖背衬膜，包装，即可得贴剂。