脑心通中药组合物在制备治疗脑出血药物中的应用的制作方法

本发明涉及脑心通中药组合物的新应用。

背景技术：

我国心血管病患病率及死亡率逐年上升，占居民疾病死亡构成的40％以上，成为我国居民的首位死因。心血管疾病的防治方案中，多采用抗血小板治疗。血小板功能改变与血栓形成有着密切的关系，脑血管动脉出现闭塞，会导致脑部血液供应障碍，造成局部脑组织缺血缺氧性坏死。目前抗血栓形成的药物包括抗血小板聚集药物、抗凝药物以及溶栓药物。其中，抗血小板聚集药物包括环氧酶抑制剂、P₂Y₁₂受体拮抗剂及其他作用靶点的药物。环氧酶抑制剂如阿司匹林，通过失活细胞内的环氧化酶，阻断血栓烷A₂的转化途径，达到抑制血小板聚集的目的。以氯吡格雷为代表的噻吩吡啶类药物，不可逆地抑制ADP与血小板膜P₂Y₁₂受体结合，使偶联的糖蛋白IIb/IIIa受体构象改变，抑制血小板聚集。

几十年来，阿司匹林以及噻吩吡啶类的抗血小板药物能够有效减少动脉闭塞事件的风险，成为预防、治疗心脑血管疾病的主要手段之一。然而，最初人们只关注抗血小板药物能降低血栓事件的发生，但是随着时间的推移，这些药物的不良反应逐渐引起人们的重视。以阿司匹林为例，研究表明服用阿司匹林的患者总体上较其发生非致死性严重颅外出血的风险增加了50％，发生脑出血的风险增加了四分之一。该种药物导致的出血在临床上属继发性出血。因此临床用药应谨慎使用抗血小板聚集药物，以减少缺血性事件发生，同时避免增加脑出血风险。

脑心通胶囊源于清代·王清任《医林改错·卷下·瘫痿伦》的补阳还五汤，系根据现代人体质及发病特点在“补阳还五汤”的基础上加入虫类药和活血化瘀药等16味中药组成的现代中药方剂。脑心通胶囊由黄芪66份、赤芍27份、丹参27份、当归27份、川芎27份、桃仁27份、红花13份、制乳香13份、制没药13份、鸡血藤20份、牛膝27份、桂枝20份、桑枝27份、地龙27份、全蝎13份、水蛭27份组成。具有益气活血，化瘀通络的功效，主要适应症为气虚血滞、脉络瘀阻证。临床上，主要用于各种心脑血管疾病，通过保护血管内皮、抗凝溶栓、稳定和消退动脉粥样硬化、保护神经细胞、防止缺血再灌注损伤等方面起到治疗作用。

但目前没有任何文献公开脑心通胶囊具有降低脑出血危险性方面的作用。

技术实现要素：

本发明采用双光子荧光成像技术，活体观测服用抗血小板药物的小鼠脑动脉出血状况，发现脑心通胶囊与抗血小板药物联用后可降低脑动脉继发性出血，促进脑出血的清除，以达到降低脑出血危险性的作用。

由此，本发明首次公开了：脑心通中药组合物在制备治疗脑出血或促进脑出血淤血清除药物中的新应用。

并进一步公开：脑心通中药组合物在制备治疗抗血小板聚集药物导致继发性脑出血或继发性脑出血淤血清除药物中的新应用。

尤其是脑心通中药组合物与抗血小板聚集药物联用可降低脑动脉继发性出血，促进脑出血的清除，以达到降低脑出血危险性方面的应用。

所述的抗血小板聚集药物包括环氧酶抑制剂药物或P₂Y₁₂受体拮抗剂药物。

所述环氧酶抑制剂药物包括阿司匹林；所述的P₂Y₁₂受体拮抗剂药物包括氯吡格雷、普拉格雷或替格瑞洛。

本发明首次公开脑心通中药组合物治疗脑出血或促进脑出血淤血清除的作用，尤其是与抗血小板药物联用后可降低脑动脉继发性出血，促进脑出血的清除，以达到降低脑出血危险性的作用。脑心通中药组合物为纯中药制剂无副作用，为降低抗血小板药物治疗心血管病导致脑出血副作用提供了安全可靠的新途径。

本发明所述的脑心通中药组合物是指以中药制剂脑心通胶囊的配方为基础，按中医用药原理通过组分加减或配比变化所得的配方组合物及其临床上适用的制剂。

附图说明

图1是阿司匹林与脑心通胶囊联用前后，出血量的荧光灰度值折线图。

图2是氯吡格雷与脑心通胶囊联用前后，出血量的荧光灰度值折线图。

图3是阿司匹林与脑心通胶囊联用前后，脑动脉壁损伤后30min内出血

情况(方框区域即为灰度值取样点)。

图4是氯吡格雷与脑心通胶囊联用前后，脑动脉壁损伤后30min内出血情况(方框区域即为灰度值取样点)。

图5是替格瑞洛与脑心通胶囊联用前后，出血量的荧光灰度值折线图。

图6是普拉格雷与脑心通胶囊联用前后，出血量的荧光灰度值折线图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步的说明。

实施例一：脑心通胶囊与传统抗血小板药物联用后的抗脑动脉出血作用

1.实验动物：

C57雄性小鼠，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(粤)2013-0002。

2.药品分组与处理

模型对照组：通过激光损伤脑微动脉壁建立出血模型，腹腔注射生理盐水0.1mL/10g。

阿司匹林组：实验前提前6天进行阿司匹林灌胃给药，给药剂量13.0mg/kg。

阿司匹林与脑心通胶囊联用组：实验前提前6天进行灌胃给药，取脑心通胶囊粉末和阿司匹林加注射用生理盐水配置成悬浊液，脑心通胶囊给药剂量1.25g/kg，阿司匹林13.0mg/kg。

氯吡格雷组：实验前提前6天进行氯吡格雷灌胃给药，给药剂量9.75mg/kg。

氯吡格雷与脑心通胶囊联用组：实验前提前6天进行灌胃给药，取脑心通胶囊粉末和氯吡格雷加注射用生理盐水配置成悬浊液，脑心通胶囊给药剂量1.25g/kg，氯吡格雷9.75mg/kg。

3.实验方法：

取C57小鼠随机分为5组，即模型对照组、阿司匹林组、阿司匹林-脑心通胶囊联用组、氯吡格雷组、氯吡格雷-脑心通胶囊联用组，每组3只小鼠，各组小鼠分别提前6天给药。各组小鼠按10ml/kg的剂量腹腔注射浓度为4.2％的水合氯醛溶液进行麻醉，剪开头皮，剔除覆盖在头骨上的筋膜，暴露头骨，选取合适区域，用牙科打磨机小心按圆形轮廓打磨待观察区域头骨。待头骨边缘呈半透明状态后轻轻按压头骨，观察到其边缘软化即可，随后将定制铝合金头板(中间暴露待观察区域头骨)粘于骨窗上方，以10mL/kg剂量尾静脉注射浓度为1.5％的FITC荧光剂后，置于双光子显微镜下，800nm激发波长进行荧光成像。选择直径30μm左右的动脉血管，提高激光透过率，对选定血管的内皮聚焦5-15s，造成血管壁破裂出血，建立脑动脉出血模型。于出血部位周围选取4个取样点计算血浆荧光灰度变化率，评估出血程度：

灰度变化率＝即时灰度值/初始(造模前)灰度值

随后以计算得到的灰度变化率为纵坐标，以观测时间点为横坐标绘制折线图。折线图中0min时为初始正常值(均为1)，5min开始造模出血。荧光灰度值反映了血浆在血管壁外的分布情况，灰度变化率反映了即时出血量，灰度值下降的越慢，说明动脉出血的越严重。

4.实验结果：

表1.各组小鼠出血模型下出血量灰度变化率(X±SD)

如表1可知，阿司匹林和氯吡格雷组小鼠整体灰度值较模型对照组下降得慢，至30min仍处于较高水平。

如图1和图3可见，5min时阿司匹林组在所有实验组中灰度变化率最大，代表较大的出血量，反映了阿司匹林的抗血小板聚集作用，抑制初级凝血。

如图2和图4可见，氯吡格雷组10-30min内灰度变化率处于较高水平，下降缓慢。因氯吡格雷不可逆地抑制纤维蛋白与血小板结合，影响二级凝血功能，提示其可能增加出血风险。两种药物均具有抗血小板作用，使动脉破裂后血液持续外流、出血量增加，导致灰度值高于模型对照组。

阿司匹林、氯吡格雷与脑心通胶囊联用后，灰度变化趋势接近模型对照组，说明联用给药后的小鼠出血状况更接近模型小鼠。5-10min内灰度下降明显快于单个给药组，提示脑心通胶囊具有一定抗脑出血作用，可降低造模后的出血量；10-30min内，灰度值趋于平稳且处于较低水平，说明血浆清除快于单个给药组，提示脑心通胶囊可加速出血后淤血的清除，在脑动脉出血后对脑组织具有一定保护作用。

实施例二：脑心通胶囊与新型抗血小板药物联用后的抗脑动脉出血作用

1.实验动物：

C57雄性小鼠，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(粤)2013-0002。

2.药品分组与处理

模型对照组：通过激光损伤脑微动脉壁建立出血模型，腹腔注射生理盐水0.1mL/10g。

替格瑞洛组：实验前提前6天进行替格瑞洛灌胃给药，给药剂量11.7mg/kg。

替格瑞洛与脑心通胶囊联用组：实验前提前6天进行灌胃给药，取脑心通胶囊粉末和替格瑞洛加注射用生理盐水配置成悬浊液，脑心通胶囊给药剂量1.25g/kg，替格瑞洛11.7mg/kg。

普拉格雷组：实验前提前6天进行普拉格雷灌胃给药，给药剂量13.0mg/kg

普拉格雷与脑心通胶囊联用组：实验前提前6天进行灌胃给药，取脑心通胶囊粉末和普拉格雷加注射用生理盐水配置成悬浊液，脑心通胶囊给药剂量1.25g/kg，普拉格雷13.0mg/kg。

3.实验方法：

取C57小鼠随机分为3组，即模型对照组、替格瑞洛组、替格瑞洛-脑心通胶囊联用组、普拉格雷组和普拉格雷-脑心通胶囊联用组，每组3只小鼠，各组小鼠分别提前6天给药。各组小鼠按10ml/kg的剂量腹腔注射浓度为4.2％的水合氯醛溶液进行麻醉，剪开头皮，剔除覆盖在头骨上的筋膜，暴露头骨，选取合适区域，用牙科打磨机小心按圆形轮廓打磨待观察区域头骨。待头骨边缘呈半透明状态后轻轻按压头骨，观察到其边缘软化即可，随后将定制铝合金头板(中间暴露待观察区域头骨)粘于骨窗上方，以10mL/kg剂量尾静脉注射浓度为1.5％的FITC荧光剂后，置于双光子显微镜下，800nm激发波长进行荧光成像。选择直径30μm左右的动脉血管，提高激光透过率，对选定血管的内皮聚焦5-15s，造成血管壁破裂出血，建立脑动脉出血模型。于出血部位周围选取4个取样点计算血浆荧光灰度变化率，评估出血程度：

灰度变化率＝即时灰度值/初始(造模前)灰度值

随后以计算得到的灰度变化率为纵坐标，以观测时间点为横坐标绘制折线图。折线图中0min时为初始正常值(均为1)，5min开始造模出血。荧光灰度值反映了血浆在血管壁外的分布情况，灰度变化率反映了即时出血量，灰度值下降的越慢，说明动脉出血的越严重。

4.实验结果

表2.各组小鼠出血模型下出血量灰度变化率

替格瑞洛与普拉格雷同样作用于P₂Y₁₂受体，以抑制ADP介导的血小板活化和聚集，但替格瑞洛的作用是可逆的。临床研究表明，替格瑞洛组和氯吡格雷组的主要出血发生率相似。而普拉给雷具有更高的前体药物至活性代谢物转化率以及更高的生物利用度，带来的出血事件风险也相对较大。表2显示，替格瑞洛与普拉格雷组小鼠整体灰度值较模型对照组下降得慢，至15min仍处于较高水平，下降缓慢，说明其相对模型组有较高的出血量。

从图5和图6可见，替格瑞洛、普拉格雷与脑心通胶囊联用后，灰度变化趋势接近模型对照组，说明联用给药后的小鼠出血状况更接近模型小鼠。5-10min内灰度下降明显快于单个给药组，提示脑心通胶囊具有一定抗脑出血作用，可降低造模后的出血量；10-30min内，灰度值趋于平稳且处于较低水平，说明血浆清除快于单个给药组，提示脑心通胶囊可加速出血后淤血的清除，在脑动脉出血后对脑组织具有一定保护作用。