本发明涉及一种具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物及其应用。
背景技术：
现代医学证明，衰老的根源在于自由基增多和细胞衰老，从而造成人体内环境恶化、器官功能衰退。而内环境恶化，自由基增多，细胞衰老是由于过度疲劳(机体能量失衡)形成的结果。
英国科学家研究发现，过度劳累会导致人体细胞过早衰老，从而使人容易早老。从事体力工作的人细胞衰老速度平均比不做体力工作的同龄人快7年。为评估细胞衰老程度，研究人员对细胞端粒的长度进行了测量。端粒是保护染色体端位的DNA(脱氧核糖核酸)基元，细胞中端粒的长度主宰着细胞是否进入老化。细胞每分裂一次端粒就会变短一些，因此端粒越短，细胞分裂次数越多，细胞也就越老化。研究发现，从事体力劳动者的细胞端粒比同年龄非体力劳动者的细胞端粒平均短140个DNA碱基对，由于细胞端粒平均每年会损失20个碱基对，这表明体力劳动者的细胞老了约7年。
疲劳是机体过用(超限)而引起的功能降低并出现机体不适的状态，主要表现为疲劳困倦，可出现头晕、健忘、睡眠质量下降等伴随症状。疲劳的产生与能源物质消耗、代谢产物堆积、内环境稳定性失调、自由基影响等因素关系密切。
中医治疗衰老和疲劳以“补虚”为主，本发明以“活血化瘀”为主，以“补虚”为辅，与单纯的“补虚”方法比较，具有更显著的效果。血瘀如不除，只是一味求补，非但效果不佳，而且会造成愈补愈滞，愈补愈虚之弊。本发明的中药组合物不仅“祛瘀”，更能“生新”，“生新”层面包含“生新血、生新物、生新脉、化旧生新”四个方面，能有效的缓解体力疲劳，同时具有延缓衰老之功效，且无明显副作用。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，而提供一种具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物及其应用，在延缓衰老、抗疲劳产生和发展、促进疲劳恢复的各方面都具有显著效果。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物，由以下重量百分比的原料混合而成：5～15％的红曲、5～15％的三七提取物、30～50％的川芎提取物、30～50％的银杏叶提取物；上述各原料混合即可制得所述的中药组合物。
上述技术方案中，所述的中药组合物优选由以下重量百分比的原料混合而成：10％的红曲、10％的三七提取物、40％的川芎提取物、40％的银杏叶提取物。
本发明还提供一种上述的具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物在制备具有预防和缓解疲劳及衰老的药物或保健食品方面的应用。
本发明还提供一种预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂，含有所述的具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物；
所述的预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂，由重量百分比为65～90％的中药组合物和余量的辅剂制成；
所述的辅剂为膳食营养补充剂、填充剂或崩解剂中的任意一种、两种及以上以任意比例混合而成的混合物；
所述的膳食营养补充剂为矿物质、维生素、纳豆、蛋白质粉中的任意一种或两种以任意比例混合而成的混合物；其中：矿物质为硒、锌、钙、镁、钾、铁、铬、锰中的任意一种、两种及以上以任意比例混合而成的混合物，维生素为β-胡萝卜素、维生素B1、维生素B6、维生素C、维生素D、维生素E中的任意一种、两种及以上以任意比例混合而成的混合物，蛋白质粉为大豆分离蛋白、乳清蛋白、豌豆蛋白、胶原蛋白中的任意一种、两种及以上以任意比例混合而成的混合物；
所述的填充剂为符合《中国药典》药用辅料标准规定的常用药用辅料，如淀粉；
所述的崩解剂为符合《中国药典》药用辅料标准规定的常用药用辅料，如微晶纤维素或硬脂酸镁。
本发明还提供一种预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将所述比例的红曲、三七提取物、川芎提取物、银杏叶提取物混合均匀后得到具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物；
(2)将所述比例的辅剂研磨至80-100目后得到辅剂粉体；
(3)将避光状态下将所述比例的步骤(1)得到的中药组合物和步骤(2)得到的辅剂粉体采用等量递增法混合均匀后得到预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂；
上述技术方案中，可以进一步将得到的中药制剂按照常规方法加工成胶囊剂、片剂或者颗粒剂。
本发明中，所述的预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂，服用方法为：口服，一日2次，每次800mg。
本发明的中药组合物通过上述几种原料药的配伍，通过多种作用基理发挥功效，并且在多种功效之间产生协同效应，有效作用于机体，在延缓衰老、抗疲劳产生和发展、促进疲劳恢复的各方面都具有显著效果。
本发明中药制剂的延缓衰老、抗疲劳产生和发展、促进疲劳恢复的功效可通过以下动物实验证明：
动物实验I——延缓衰老的实验
1.实验材料
1.1试验样品与试剂
本发明实施例1制备的中药胶囊剂；D-半乳糖(上海试剂工厂)，用灭菌生理盐水配成5％浓度；超氧化物岐化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。
1.2实验动物与分组
SPF级雌性昆明种健康小鼠50只，体重为18～22g，随机分为5组。实验动物由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，实验动物许可证号SCXK(湘)2009-0012。饲料由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供。分笼放开饲养，室温22～24℃，相对湿度52％～56％，自由饮水、进食，每周称重1次。
1.3仪器与厂家
低温超速离心机(德国贝卡曼公司)；分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；722可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)；电热鼓风干燥箱(上海福玛实验设备有限公司)；电热恒温培养箱(上海福玛实验设备有限公司)。
1.4剂量选择
实验设0.20g/kg·BW、0.40g/kg·BW、1.20g/kg·BW(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)低、中、高三个剂量组、阴性对照组及模型组。试验时，分别称取2.00g、4.00g、12.00g样品加蒸馏水至200ml，配成相应剂量受试液，供各剂量组灌胃。对照组和模型组给予等体积生理盐水。实验动物按每10g体重0.2mL的容量灌胃，每日一次，连续至少30天。实验期间动物自由摄食饮水。
2.实验方法
2.1给药
样品组每天灌胃给予0.20g/kg·BW、0.40g/kg·BW、1.20g/kg·BW的溶液；模型组给予等体积生理盐水，灌胃给药，每天1次，并同时颈背部皮下注射5％的D-半乳糖0.5mL；空白组给予同体积的灭菌生理盐水，连续给药6周，每周记录1次体重，并随时观察动物的生长情况。
2.2血清的制备与生化指标的测定
给D-半乳糖及受试药6周后，小鼠摘除眼球取血，摘取小鼠眼球取血约1ml，放入离心机，以3000r·min-1离心15min，分离出血清。SOD的测定，采用黄嘌呤氧化酶法，按照谷光甘肽过氧化物酶试剂盒的说明测定血清GSH-Px的活性，具体步骤严格遵循试剂盒说明书进行。
2.3数据处理 实验数据用表示，组间比较采用t检验判定差别。
3实验结果
3.1样品对小鼠血清SOD含量的影响
表1-1 样品对小鼠血清SOD含量的影响
注：*与模型组比较，P<0.05；**与模型组比较，P<0.01；#与空白组比较，P<0.05.
由上表可见，模型组血清SOD明显低于空白对照组(P<0.05)，样品低剂量组能增加血清SOD含量，与对照组比较差别有显著性(P＜0.05)，中、高剂量组与对照组比较，能明显增加血清SOD含量，有高度显著性差异(P＜0.01)。
3.2样品对小鼠血清GSH-Px含量的影响
表1-2 样品对小鼠血清GSH-Px含量的影响
注：*与模型组比较，P<0.05；**与模型组比较，P<0.01；#与空白组比较，P<0.05.
由上表可见，模型组血清GSH-Px明显低于空白对照组(P<0.05)，样品低剂量组能增加血清GSH-Px含量，与对照组比较差别有显著性(P＜0.05)，中、高剂量组与对照组比较，能明显增加血清GSH-Px含量，有高度显著性差异(P＜0.01)。
4.结果小结
模型组血清SOD及GSH-Px活性明显低于空白对照组，给予样品后，均能使D-半乳糖所致衰老的小鼠血清SOD及GSH-Px活性显著回升，提示样品能增强小鼠体内抗氧化酶活性，有利于清除自由基，具有抗衰老作用。
动物实验II——中药组合物缓解疲劳作用的实验
1.实验材料
1.1试验样品
本发明实施例三制备的中药胶囊剂。
1.2实验动物与分组
SPF级雄性昆明种健康小鼠160只，体重为18～22g。分笼放开饲养，室温22～24℃，相对湿度52％～56％。
将小鼠分为Ⅰ组(负重游泳试验)、Ⅱ组(血清尿素)、Ⅲ组(血乳酸测定)、Ⅳ组(肝糖原测定)，共4组，每组40只。每组随机分为对照组、低、中、高剂量组，每组10只小鼠。
1.3仪器和试剂
动物称重天平、电子天平、离心机、细胞破碎仪、水浴箱、振荡器、OLYMPUSAU400全自动生化分析仪、SBA401C生物传感分析仪、7222分光光度计、游泳箱(大小约53cm×40cm×35cm)、铅皮、计时器、血色素吸管、加样器、吸量管、试管。
血清尿素测试盒，由上海复星长征医学科学有限公司提供；肝糖原测试盒，由南京建成生物工程研究所提供。
1.4剂量选择
受试动物分为三个剂量级：高剂量为1.20g/kg·BW、中剂量为0.40g/kg·BW、低剂量为0.20g/kg·BW，分别相当于人体推荐用量的30倍、10倍、5倍。高、中、低剂量受试液配置时，分别取样品内容物12.00g、4.00g、2.00g加蒸馏水至200ml，分别给予受试动物灌胃，每天一次，对照组给予等体积的蒸馏水，灌胃体积为0.2mL/10g·BW，连续30天。
2.实验方法
2.1负重游泳试验
末次灌胃30min后，置于游泳箱中游泳，水深约30cm，水温25℃±1.0℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间作为负重游泳时间(s)。游泳时间为计量资料，若剂量组游泳时间明显长于对照组游泳时间，且差异具有显著性(P＜0.05)，可判定受试物有延长小鼠负重游泳时间的作用。
2.2血清尿素测定
末次灌胃30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后拔眼球采血。于4℃静置3h后2000转/分离心15min，取血清用全自动生化分析仪测定血清尿素。所得数据为计量资料，若剂量组血清尿素含量明显低于对照组，且差异具有显著性(P＜0.05)，可判定受试物有减少疲劳小鼠尿素产生的作用。
2.3肝糖原测定：蒽酮法
末次灌胃30min后，处死动物，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，取肝脏100mg，余下操作按测试盒说明书进行肝糖原测定。所得数据为计量资料，若剂量组肝糖原含量明显高于对照组，且差异具有显著性(P＜0.05)，可判定受试物有促进小鼠肝糖原储备的作用。
2.4血乳酸测定
末次灌胃30min后，内眦静脉丛取血20μl，然后在温度为30℃的水中不负重游泳10min后停止，分别于运动后0min和20min同上采血20μl，测定血乳酸，计算血乳酸曲线下面积。
血乳酸曲线下面积＝1/2×(游泳前血乳酸值+游泳后0min的血乳酸值)×10+1/2×(游泳后0min的血乳酸值+游泳后20min的血乳酸值)×20
所得数据为计量资料，若剂量组血乳酸曲线下面积明显低于对照组，且差异具有显著性(P＜0.05)，可判定受试物有降低小鼠血乳酸曲线下面积的作用。
2.5结果判定
负重游泳试验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原三项生化指标中任意两项指标阳性，即可判定受试物具有缓解体力疲劳的作用。
3.结果及分析
3.1样品对大鼠体重的影响：
表3-1 样品对大鼠体重的影响(Ⅰ组)
表3-2 样品对大鼠体重的影响(Ⅱ组)
表3-3 样品对大鼠体重的影响(Ⅲ组)
表3-4 样品对大鼠体重的影响(Ⅳ组)
由上表可见，各剂量组小鼠实验初、中、末期体重与对照组组比较均无显著性差异(*P＞0.05)。
3.2样品对小鼠负重游泳时间的影响
表3-5 样品对小鼠负重游泳时间的影响
注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可见，低剂量组与蒸馏水对照组比较，能增加小鼠负重游泳的时间，有显著性差异(*P＜0.05)，中、高剂量组与蒸馏水对照组比较，能明显增加小鼠负重游泳的时间，有高度显著性差异(**P＜0.01)。
3.3样品对小鼠血清尿素的影响
表3-6 样品对小鼠血清尿素的影响
注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可见，中、低剂量组与蒸馏水对照组比较，能降低小鼠血清尿素水平，具有显著性差异(*P＜0.05)，高剂量组与蒸馏水对照组比较，能明显降低小鼠血清尿素水平，有高度显著性差异(**P＜0.01)。
3.4样品对运动后小鼠血乳酸变化的影响
表3-7 样品对运动后小鼠血乳酸变化的影响
注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可见，低剂量组与蒸馏水对照组比较，血乳酸曲线下面积降低，有显著性差异(*P＜0.05)，中、高剂量组与蒸馏水对照组比较，血乳酸曲线下面积降低明显，有高度显著性差异(**P＜0.01)。
3.5样品对运动后小鼠肝糖原储备的影响
表3-8 样品对运动后小鼠肝糖原储备的影响
注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可见，低剂量组与蒸馏水对照组比较，能增加小鼠肝糖原储备，有显著性差异(*P＜0.05)，中、高剂量组与蒸馏水对照组比较，能明显增加小鼠肝糖原储备，有高度显著性差异(**P＜0.01)。
4.小结
本发明样品经灌胃给予小鼠不同剂量30天后，同时进行小鼠负重游泳、血清尿素、肝糖原含量及血乳酸曲线下面积等4项指标检测，结果表明本发明样品能延长小鼠负重游泳时间，减少疲劳小鼠的血清尿素产生，增加小鼠肝糖原的储备量，加速运动后血乳酸的清除速度。可以认为本发明的中药组合物具有缓解体力疲劳的作用。
总之，通过上述各种实验可以证明，本发明的中药组合物能延缓衰老，降低乳酸、血清尿素水平，有效缓解运动后产生的四肢乏力、困倦、肌肉酸痛、厌食等不适感觉。
具体实施方式
以下对本发明技术方案的具体实施方式详细描述，但本发明并不限于以下描述内容：
本发明中的中药原料均为现有的市售产品，例如红曲可购自浙江三禾生物工程有限公司，其余原料可购自陕西森弗生物技术有限公司。
实施例1：
一种预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂，由以下方法制备而成：
(1)称取以下重量的中药提取物：红曲40g、三七提取物40g、银杏叶提取物150g、川芎提取物150g；将各原料混合均匀即得具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物，菌检后待用；
(2)将纳豆粉18g、硬脂酸镁2g分别研磨至80-100目后混合均匀得到辅剂粉体，菌检后待用；
(3)将步骤(1)得到的具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物、步骤(2)得到的辅剂粉体采用等量递增法混合均匀后得到预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂；
将得到的中药制剂用全自动胶囊机填充成胶囊，每粒胶囊内容物为400mg，共制得1000粒；将胶囊整粒、抛光、检验、包装，该胶囊剂的人体推荐量为每人(成人)每天2次，每次2粒。
实施例2：
一种预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂，由以下方法制备而成：
(1)称取以下重量的中药提取物：红曲40g、三七提取物40g、银杏叶提取物140g、川芎提取物140g；将各原料混合均匀即得具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物，菌检后待用；
(2)将淀粉28g、硬脂酸镁2g、富硒酵母9.8g、维生素B10.08g、维生素B60.12g分别研磨至80-100目后混合均匀得到辅剂粉体，菌检后待用
(3)将步骤(1)得到的具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物、步骤(2)得到的辅剂粉体采用等量递增法混合均匀后得到预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂；
将得到的中药制剂用全自动胶囊机填充成胶囊，每粒胶囊内容物为400mg，共制得1000粒；将胶囊整粒、抛光、检验、包装，该胶囊剂的人体推荐量为每人(成人)每天2次，每次2粒。
实施例3：
一种预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂，由以下方法制备而成：
(1)称取以下重量的中药提取物：红曲32g、三七提取物32g、银杏叶提取物160g、川芎提取物160g；将各原料混合均匀即得具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物，菌检后待用；
(2)将微晶纤维素216g研磨至80-100目得到辅剂粉体，菌检后待用；
(3)将步骤(1)得到的具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物、步骤(2)得到的辅剂粉体采用等量递增法混合均匀后得到预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂；
将得到的中药制剂用60％～80％乙醇制粒，干燥，压制成0.6g/片中药片剂1000片；该片剂的人体推荐量为每人(成人)每天2次，每次2片。
实施例4：
一种预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂，由以下方法制备而成：
(1)称取以下重量的中药提取物：红曲35g、三七提取物35g、银杏叶提取物160g、川芎提取物160g；将各原料混合均匀即得具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物，菌检后待用；
(2)将维生素E粉16g、微晶纤维素194g分别研磨至80-100目后混合均匀得到辅剂粉体，菌检后待用；
(3)将步骤(1)得到的具有缓解疲劳、延缓衰老的中药组合物、步骤(2)得到的辅剂粉体采用等量递增法混合均匀后得到预防和缓解疲劳及衰老的中药制剂；
将得到的中药制剂用60％～80％乙醇制粒，干燥，压制成0.6g/片中药片剂1000片；该片剂的人体推荐量为每人(成人)每天2次，每次2片。
上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。