本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种大麦若叶提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
大麦为禾本科大麦属单子叶植物，是一种药食同源植物。大麦麦苗中含有丰富的营养物质，目前，以麦苗为原料制成的食品已风靡多个国家。大麦若叶为大麦生长到20-30公分的幼苗，此时期的幼苗叶片所含营养物质最为丰富，研究表明，大麦若叶中的物质具有抗氧化的作用，能够清除自由基，保护人体免受自由基的损伤。
自由基又称游离基，是具有非偶电子的基团或原子，自由基可通过电子转移、加成、脱氢等多种方式与生物体内的多糖、氨基酸、蛋白质、核酸、脂类等物质相互作用，造成这些物质氧化性损伤，进一步使细胞坏死或突变。
如何提供一种可清除自由基的纯天然物质，是自由基清除领域亟待解决的问题之一。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题是提供一种大麦若叶提取物及其制备方法和应用，可制备出纯天然的大麦若叶提取物，该提取物具有自由基清除功能。
为解决上述技术问题，本发明提供一种大麦若叶提取物的制备方法，包括以下步骤：将大麦若叶进行干燥，并粉碎至60-80目，获得大麦若叶干粉；取大麦若叶干粉，加入蒸馏水，混合均匀，将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理2-4min，其中，超声波频率为25-40khz，大麦若叶干粉与蒸馏水的料液比为1g:10-20ml；在超声波处理后的液体中加入2-3倍体积的无水乙醇，而后进行微波处理，微波功率为500-700w，微波时间为4-6min；将微波处理后的液体放置2-3h，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得大麦若叶提取物。
其中，大麦若叶干粉为70目。
其中，超声波处理时间为3min、频率为35khz。
其中，大麦若叶干粉与蒸馏水的料液比为1g:15ml。
其中，超声波处理后的液体与无水乙醇的体积比为1:2.5。
其中，微波处理时间为5min、微波功率为600w。
其中，利用蒸馏水对获得的大麦若叶提取物进行溶解，而后上大孔吸附树脂柱，以蒸馏水洗至流出液无色后，再以75-85%的乙醇洗脱，洗脱液的洗脱量为3-4bv，收集洗脱液，对洗脱液进行干燥，获得纯化的大麦若叶提取物。
为解决上述技术问题，本发明提供一种上述制备方法制备得到的大麦若叶提取物。
为解决上述技术问题，本发明提供一种大麦若叶提取物作为清除自由基药物或保健品的应用。具体地，大麦若叶提取物作为清除自由基药物或保健品的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。
本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明的大麦若叶提取物的制备方法包括以下步骤：将大麦若叶进行干燥，并粉碎至60-80目，获得大麦若叶干粉；取大麦若叶干粉，加入蒸馏水，混合均匀，将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理2-4min，其中，超声波频率为25-40khz，大麦若叶干粉与蒸馏水的料液比为1g:10-20ml；在超声波处理后的液体中加入2-3倍体积的无水乙醇，而后进行微波处理，微波功率为500-700w，微波时间为4-6min；将微波处理后的液体放置2-3h，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得大麦若叶提取物。上述方法制备的大麦若叶提取物为纯天然物质，可对自由基进行清除。上述制备方法具有以下特点：简单、易操作；由于对大麦若叶细胞通过超声波、微波充分破碎，可更好地对大麦若叶中的物质进行提取，且可减少提取时间、提高提取效率；制备出的大麦若叶提取物具有较高的提取率，且无毒、无害；利用大孔吸附树脂柱可制备出更纯的大麦若叶提取物。
具体实施方式
实施例1
大麦若叶提取物的制备方法包括以下步骤：将大麦若叶进行干燥，并粉碎至70目，获得大麦若叶干粉；取大麦若叶干粉，加入蒸馏水，混合均匀，将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理3min，其中，超声波频率为35khz，大麦若叶干粉与蒸馏水的料液比为1g:15ml；在超声波处理后的液体中加入2.5倍体积的无水乙醇，而后进行微波处理，微波功率为600w，微波时间为5min；将微波处理后的液体放置2.5h，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得大麦若叶提取物。
本实施例制备的大麦若叶提取物可对自由基进行清除，由于其为纯天然物质，对人体无副作用。
实施例2
大麦若叶提取物的制备方法包括以下步骤：将大麦若叶进行干燥，并粉碎至70目，获得大麦若叶干粉；取大麦若叶干粉，加入蒸馏水，混合均匀，将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理2.5min，其中，超声波频率为30khz，大麦若叶干粉与蒸馏水的料液比为1g:15ml；在超声波处理后的液体中加入2倍体积的无水乙醇，而后进行微波处理，微波功率为550w，微波时间为4.5min；将微波处理后的液体放置2.5h，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得大麦若叶提取物。
本实施例制备的大麦若叶提取物可对自由基进行清除，由于其为纯天然物质，对人体无副作用。
实施例3
在实施例1的基础上，利用蒸馏水对获得的大麦若叶提取物进行溶解，而后上大孔吸附树脂柱，以蒸馏水洗至流出液无色后，再以80%的乙醇洗脱，洗脱液的洗脱量为3.5bv，收集洗脱液，对洗脱液进行干燥，获得纯化的大麦若叶提取物。
实施例4
在实施例2的基础上，利用蒸馏水对获得的大麦若叶提取物进行溶解，而后上大孔吸附树脂柱，以蒸馏水洗至流出液无色后，再以80%的乙醇洗脱，洗脱液的洗脱量为3.5bv，收集洗脱液，对洗脱液进行干燥，获得纯化的大麦若叶提取物。
实施例5
大麦若叶提取物片剂的制备：将实施例1或实施例2制备的大麦若叶提取物用单冲压片机打成直径为7mm，重量为350mg的片，即得大麦若叶提取物片剂。
实施例6
大麦若叶提取物胶囊剂的制备：将实施例1或实施例2制备的大麦若叶提取物以350mg填充入1号肠溶胶囊，即得大麦若叶提取物胶囊剂。
实施例7
大麦若叶提取物颗粒剂的制备：将实施例1或实施例2制备的大麦若叶提取物加水制成软材，过15目筛进行造粒，干燥后即得大麦若叶提取物颗粒剂。
实施例8
大麦若叶提取物散剂的制备：将实施例1或实施例2制备的大麦若叶提取物过250目筛，即得大麦若叶提取物散剂。
下面通过实验说明本发明大麦若叶提取物的自由基清除效果。
称取dpph（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼），利用乙醇进行溶解，使其浓度为0.1mmol/l；称取实施例1制备的大麦若叶提取物、实施例2制备的大麦若叶提取物，利用双蒸水进行溶解，分别制成10个浓度梯度的溶液，浓度梯度具体为：0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.4mg/ml、1.6mg/ml、1.8mg/ml、2.0mg/ml；取体积为v1的dpph溶液，加入等体积的无水乙醇，混匀，室温，避光放置20min，在517nm处测吸光度a0。
在实施例1制备的大麦若叶提取物制成的10个溶液中分别加入体积为v1的dpph溶液和无水乙醇，按照上述方法，测吸光度a1，其中，加入的无水乙醇和提取物溶液的体积之和为v1；在各提取物溶液中，加入无水乙醇，其中，加入的无水乙醇和提取物溶液的体积均为v1，按照上述方法，测吸光度a2；根据吸光度计算清除率：清除率=[a0-（a1-a2）]/a0×100%。
在实施例2制备的大麦若叶提取物制成的10个溶液中分别加入体积为v1的dpph溶液和无水乙醇，按照上述方法，测吸光度a1，其中，加入的无水乙醇和提取物溶液的体积之和为v1；在各提取物溶液中，加入无水乙醇，其中，加入的无水乙醇和提取物溶液的体积均为v1，按照上述方法，测吸光度a2；根据吸光度计算清除率：清除率=[a0-（a1-a2）]/a0×100%。
以大麦若叶提取物浓度为横坐标、清除率为纵坐标绘制曲线，根据曲线的线性回归方程，计算清除自由基的半抑制浓度（ic50）。
实验结果：实施例1制备的大麦若叶提取物对自由基的清除能力的ic50为1.50mg/ml，实施例2制备的大麦若叶提取物对自由基的清除能力的ic50为1.52mg/ml。根据实验结果可以看出，实施例1和实施例2制备的大麦若叶提取物表现出强的自由基清除能力，具有良好的抗氧化活性。
利用上述实验方法计算大麦若叶总黄酮对自由基清除能力的ic50，通过计算，ic50值为3.16mg/ml。根据计算结果，可以看出实施例1或实施例2制备的大麦若叶提取物较大麦若叶总黄酮具有更好的自由基清除能力。
利用上述实验方法计算实施例3、实施例4制备的大麦若叶提取物对自由基清除能力的ic50，实施例3制备的大麦若叶提取物对自由基的清除能力的ic50为1.47mg/ml，实施例4制备的大麦若叶提取物对自由基的清除能力的ic50为1.48mg/ml。根据实验结果可以看出，实施例3、实施例4制备的大麦若叶提取物较实施例1、实施例2制备的大麦若叶提取物具有更好的自由基清除能力。
综上所述，本发明的大麦若叶提取物可对自由基进行清除，且其为纯天然物质，对人体无副作用。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。