化疗栓塞用乳液组合物及其制备方法与流程

本发明涉及一种乳液组合物，其包括含有抗癌剂和生物相容性聚合物的聚合物纳米粒子，以及能够用于化疗栓塞的水溶性造影剂和水不溶性造影剂。
背景技术：
：tace(经动脉化疗栓塞)是一种通过将抗癌剂注入导致癌组织的动脉并使用栓塞材料来阻断对癌组织的营养供应以治疗癌症的方法。代表性经动脉化疗栓塞作为肝动脉栓塞使对肝癌的局部抗癌作用最大化，并且在许多情况下，它起到姑息性治疗的作用。肝癌是一种预后不良的恶性肿瘤，其在韩国排名第二，并且在世界排名第三。对于70％或更多的肝癌患者，根治性手术是不可能的，即使进行根治性手术，5年内其他部位复发的概率也是50％或更多。在晚期肝癌中响应全身化疗的可能性非常低(在10％以内)，并且，已经开发出各种图像引导疗法作为非手术治疗的替代。由于图像引导疗法应用于肝癌，有两个是代表性的：一个是经动脉化疗栓塞(tace)，其为一种通过肝动脉局部注射抗癌剂并使栓塞与肝动脉并行的疗法，而另一个是射频消融(rfa)。由于95％或更多的供给肝癌组织的血流转移到肝动脉，但75％或更多的供给周围健康组织的血流转移到肝门静脉并且只有25％转移到肝动脉，tace是一种不会对正常组织造成伤害的安全有效的治疗方法。tace需要安全的给药材料，因为它每年重复进行3～4次。通常用于常规动脉化疗栓塞的药物是阿霉素(doxorubicin)、顺铂、表阿霉素、米托蒽醌、丝裂霉素c等。这些水溶性抗癌剂不能直接溶解在水不溶性造影剂中，因此它制备成水包油或油包水乳液的形式，其中在将它溶解在如pamiray的水溶性造影剂中之后它均匀地分布在碘油(lipiodol，碘化油)如的水不溶性造影剂中。该乳液通过就在给药患者之前制备它来使用，因为在一定时间内发生相分离。通过进行化疗栓塞并另外施用明胶海绵粒子、聚乙烯醇粒子等，促进了癌组织的缺血性坏死并且防止了药物的损失。然而，在给药的乳液中，在给药后的短时间内发生相分离，因此同时吸收抗癌剂，抗肿瘤作用不持久，并且可能引起全身暴露引起的副作用。tace中给药的大多数细胞毒性抗癌剂在肝脏中代谢，因此可以表现出肝毒性。因此，患者表现出后栓塞综合征，日常生活困难，住院2～3天是不可避免的，因此医疗费用高。近年来，选择性地使用化疗栓塞用粒子(药物洗脱珠，deb)是一种通过制备成非吸收性聚乙烯醇等并通过离子交换法将药物吸附到化疗栓塞粒子上进行给药的产品，并且其粒径在40～900μm范围内。优点在于：与乳液的液滴相比，粒子范围是均匀的并具有再现性，并且随着药物缓慢释放，药物的系统性暴露很少。然而，由于药物在给药后未完全释放，在给药后第28天仅释放少于50％，并且在90天后释放约90％，因此药物以高浓度相比较慢地积聚在癌症组织中。另外，由于吸收药物需要1～2小时或更长的时间并且在药物完全释放后粒子残留在体内，可能引起正常组织的坏死，并且tace重复过程可能很难。而且，由于与常规tace方法相比药物成本高，患者的费用负担很大。如上所述，用于常规tace和deb的药物限于水溶性抗癌剂，并且尚没有使用如紫杉醇的水不溶性抗癌剂。紫杉醇是一种细胞毒性抗癌剂，已证明了其对卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等各种癌症具有强抗肿瘤作用，但它是不溶性的，因此不能以乳液的形式给药。在通过将抗癌剂溶解在碘油中进行给药的情况下，碘油穿透癌组织以及正常组织，并且它容易积聚在除肝脏中，特别是积聚在肺之外的组织中，因此可以显示出毒性。由于与包含水溶性造影剂的油包水乳液相比粘度低，因此癌组织保留时间短。作为商业上可获得的紫杉醇注射剂，存在百时美施贵宝公司开发的taxolcremophorel用作增溶剂，并且在给药前以微乳液的形式进行给药。然而，由于引起了诸如由增溶剂引起的过敏反应等毒性，因此不适合于tace。技术实现要素：[技术问题]本发明的一个目的是提供一种化疗栓塞用乳液组合物，包含：聚合物纳米粒子，其包含水溶性抗癌剂、水不溶性抗癌剂或它们的组合，和包含亲水性(a)嵌段和疏水性(b)嵌段的两亲性嵌段共聚物；水溶性造影剂；和水不溶性造影剂。本发明的另一个目的是提供一种化疗栓塞用乳液组合物的制备方法，以及一种用于预防或治疗癌症的医药组合物，其包含化疗栓塞用乳液组合物。[技术方案]因此，为了实现上述目的，本发明开发了一种组合物，其通过制备一种乳液组合物可以稳定地给药水不溶性抗癌剂以及水性抗癌溶液并且控制药物的释放速率，该乳液组合物通过以下方式形成：制备包含作为活性成分的抗癌剂和两亲性嵌段共聚物的聚合物纳米粒子，并将它们溶解在水溶性造影剂中，然后再次将它们分散在水不溶性造影剂中。在下文中，将对本发明进行更详细的描述。本发明的一个实施方式提供一种化疗栓塞用乳液组合物，包含：聚合物纳米粒子，其包含水溶性抗癌剂、水不溶性抗癌剂或它们的组合作为活性成分，和包含亲水性(a)嵌段和疏水性(b)嵌段的两亲性嵌段共聚物；水溶性造影剂；和水不溶性造影剂。用作活性成分的抗癌剂包括可以没有限制地化疗栓塞用抗癌剂，例如，水溶性抗癌剂可以是选自由阿霉素、伊达比星、表阿霉素、丝裂霉素c和伊立替康所组成的组中的一种或多种，并且水不溶性抗癌剂可以是选自由紫杉醇和多烯紫杉醇所组成的组中的一种或多种。迄今为止，水不溶性抗癌剂，特别是紫杉醇尚未用于化疗栓塞，但本发明的乳液组合物将紫杉醇应用于将它以化疗栓塞的乳液组合物的形式给药。基于100重量％的聚合物纳米粒子，抗癌剂的含量可以为0.01～30重量％，优选为1～20重量％，更优选为5～10重量％。另外，基于总乳液组合物，本发明组合物中包含的抗癌剂的浓度可以以1～40mg/ml，优选为1～10mg/ml。本发明组合物中包含的两亲性聚合物是包含亲水性(a)嵌段和疏水性(b)嵌段的聚合物。两亲性聚合物中包含的亲水性(a)嵌段可以是选自由聚亚烷基二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺及其衍生物所组成的组中的一种或多种。例如，亲水性(a)嵌段可以是选自由单甲氧基聚乙二醇、单乙酰氧基聚乙二醇、聚乙二醇、聚乙烯与丙二醇的共聚物和聚乙烯基吡咯烷酮所组成的组中的一种或多种。另外，两亲性聚合物中包含的疏水性(b)嵌段可以是选自由聚酯、聚酸酐、聚氨基酸、聚原酸酯和聚磷腈所组成的组中的一种或多种，并且例如，疏水性(b)嵌段可以是选自聚交酯、聚乙交酯、聚己内酯、聚二氧六环-2-酮、聚交酯与乙交酯的共聚物、聚交酯与聚二氧六环-2-酮的共聚物、聚交酯与聚己内酯的共聚物和聚乙交酯与聚己内酯的共聚物所组成的组中的一种或多种，或者其盐。可以使用数均分子量为500～50,000da，优选为1,000～5,000da的亲水性嵌段(a)或疏水性(b)嵌段。基于100重量％的聚合物纳米粒子，本发明的组合物中包含的两亲性嵌段共聚物可以为1～30重量％，优选为1～20重量％。另外，两亲性嵌段共聚物中包含的亲水性(a)嵌段和疏水性(b)嵌段的重量比可以为2:8至8:2，优选为6:4至4:6。例如，作为本发明的两亲性嵌段共聚物，可以使用mpeg-聚(d,l-丙交酯)。本发明组合物中包含的聚合物纳米粒子可以包括芯中的药物，并且可以是两亲性嵌段共聚物形成膜以形成胶束的药物。在聚合物纳米粒子的内部，当包含两亲性嵌段共聚物或水不溶性抗癌剂的疏水基团时，水不溶性抗癌剂被定位，并且，在其外部，当包含两亲性嵌段共聚物或水溶性抗癌剂的亲水基团时，水溶性抗癌剂被定位。聚合物纳米粒子的尺寸优选为可以溶解在水溶性造影剂中的尺寸，例如，聚合物纳米粒子的直径可以为10～60nm。本发明组合物中包含的聚合物纳米粒子可以还包括含有羧酸作为端基的聚乳酸衍生物。当还包含聚乳酸衍生物时，两亲性嵌段共聚物和聚乳酸衍生物重量比可以为5:95至95:5，优选为60:40至90:10。聚乳酸的羧酸端基可以用二价或三价金属离子固定。二价或三价金属离子可以通过与聚乳酸衍生物的羧酸端基离子键合而形成更硬的纳米粒子。基于1当量的聚乳酸衍生物的羧酸端基，二价或三价金属离子优选以0.5～10当量进行组合，优选以0.5～1当量进行组合。例如，二价或三价金属离子可以是选自由钙(ca2+)、镁(mg2+)、钡(ba2+)、铬(cr3+)、铁(fe3+)、锰(mn2+)、镍(ni2+)、铜(cu2+)、锌(zn2+)和铝(al3+)所组成的组，但不限于此。例如，含有羧酸端基的聚乳酸衍生物可以是选自由以下式1～式至6所组成的组中的一种或多种。[式1]ro-chz-[a]n-[b]m-coom在式1中，a是-coo-chz-；并且b是-coo-chy-、-coo-ch2ch2ch2ch2ch2-或-coo-ch2ch2och2；并且r是氢原子、乙酰基、苯甲酰基、癸酰基、棕榈酰基、甲基或乙基；并且z和y为氢原子、甲基或苯基；并且m是na、k或li；并且n是1～30的整数；并且m是0～20的整数。[式2]ro-chz-[coo-chx]p-[coo-chy’]q-coo-chz-coom在式2中，x是甲基；并且y′是氢原子或苯基；并且p是0～25的整数，并且q是0～25的整数，但是p+q是5～25的整数；并且r是氢原子、乙酰基、苯甲酰基、癸酰基、棕榈酰基、甲基或乙基；并且m是na、k或li；并且z是氢原子、甲基或苯基。[式3]ro-pad-coo-w-m’在式3中，w-m′是并且pad选自由d，l-聚乳酸、d-聚乳酸、聚扁桃酸、d，l-乳酸与乙醇酸的共聚物、d，l-乳酸与扁桃酸的共聚物、d，l-乳酸与己内酯的共聚物和d，l-乳酸与1，4-二氧六环-2-酮的共聚物所组成的组；并且r是氢原子、乙酰基、苯甲酰基、癸酰基、棕榈酰基、甲基或乙基；并且m独立地是na、k或li。[式4]s-o-pad-coo-q在式4中，s是并且l是-nr1-或-o-，其中，r1是氢原子或c1-10烷基；并且q是ch3、ch2ch3、ch2ch2ch3、ch2ch2ch2ch3或ch2c6h5；并且a是0～4的整数；并且b是1～10的整数；并且m是na、k或li；并且pad选自由d，l-聚乳酸、d-聚乳酸、聚扁桃酸、d，l-乳酸与乙醇酸的共聚物、d，l-乳酸与扁桃酸的共聚物、d，l-乳酸与己内酯的共聚物和d，l-乳酸与1，4-二氧六环-2-酮的共聚物所组成的组；[式5]在式5中，r′是pad-o-c(o)-ch2ch2-c(o)-om，其中，pad选自由d，l-聚乳酸、d-聚乳酸、聚扁桃酸、d，l-乳酸与乙醇酸的共聚物、d，l-乳酸与扁桃酸的共聚物、d，l-乳酸与己内酯的共聚物和d，l-乳酸与1，4-二氧六环-2-酮的共聚物所组成的组；并且m是na、k或li；并且a是1～4的整数；[式6]yo-[-c(o)-(chx)a-o-]m-c(o)-r-c(o)-[-o-(chx’)b-c(o)-]n-oz在式6中，x和x′独立地为氢、具有1～10个碳原子的烷基或具有6～20个碳原子的芳基；并且y和z独立地为na、k或li；并且m和n独立地为0～95的整数，并且满足5<m+n<100；并且a和b独立地为1～6的整数；并且r是-(ch2)k-、具有2～10个碳原子的二价烯基、具有6～20个碳原子的二价芳基或它们的组合，其中，k是0～10的整数。本发明乳液组合物中使用的水溶性造影剂是包含碘化物、优选碘帕醇的水溶液，并且可以使用名称为pamiraytm的产品。另外，水不溶性造影剂是碘化油，并且它可以是选自罂粟果来源的碘化油、大豆来源的碘化油和乙碘油所组成的组中的一种或多种，并且优选地，可以使用名称为lipiodoltm的产品作为罂粟果来源的碘化油。本发明中使用的水不溶性造影剂和水溶性造影剂的粘度分别为在37℃下10～40mpa。当给药乳化的抗癌剂纳米粒子时，这是为了容易地使血管通过并确保使乳液在癌组织中停留足够的时间。更优选地，水不溶性造影剂和水溶性造影剂的粘度分别为在37℃下20～30mpa。优选地，溶解有聚合物纳米粒子的水溶性造影剂与水不溶性造影剂的体积比可以为1:2至1:10，并且更优选地，它可以为1:3至1:5。根据本发明的乳液组合物可以是油包水乳液的形式，其中纳米粒子溶解在水溶性造影剂中的溶液在水不溶性造影剂中形成液滴。因此，当在体内给药乳液组合物时，药物释放可主要由乳液液滴控制，并且药物释放可次要由纳米粒子控制。因此，可以减少由药物快速释放引起的全身毒性，并且特别是，释放药物在癌组织中持续，从而增强抗肿瘤效果。优选地，乳液组合物的液滴的尺寸可以为10～100μm，优选为20～40μm。乳液组合物的粘度可以经调节进行使用以适合化疗栓塞，并且它可以为在37℃下20～50mpa，优选为25～45mpa。作为乳液组合物使用的化疗栓塞可以优选为经动脉化疗栓塞(tace)，其是一种通过将抗癌剂注入导致癌组织的动脉并使用栓塞材料来阻断对癌组织的营养供应以治疗癌症的方法。作为另一个实施方式，本发明涉及一种用于预防或治疗癌症的医药组合物，其包含该乳液组合物。癌症包括血管生成依赖性癌症，并且优选地，它可以是选自由肝癌、卵巢癌、乳腺癌和非小细胞肺癌所组成的组中的一种或多种，并且更优选地，它是肝癌。肝门静脉的内径为50～100μm，并且肝门静脉末端的内径为15～50μm，并且肝窦为5～8μm，并且末端毛细血管后静脉为25μm或更小，并且肝动脉为35～45μm。本发明的组合物特别是由于液滴的尺寸特征而可以具有内径与肝动脉相同的血管的选择性，并且难以进入非常狭窄的血管，如肝窦。本发明的医药组合物的特征在于：在乳液制备后0～2小时，优选0～1小时内给药，并且它具有优异的稳定性，因为与用于化疗栓塞的常规组合物相比，聚合物纳米粒子中抗癌剂的运动长时间保持低水平。可以根据患者的年龄、性别、体重和症状的严重程度，通过医生的决定来控制药物组合物的剂量，并且例如，重复治疗可以为至少每3个月一次。它可以例如通过为实体癌供给血液的动脉(如肝动脉)以5～15ml的量给药。作为一个实施方式，本发明包括使用该乳液组合物对动物，优选除人类以外的动物，进行化疗栓塞的方法。与乳液组合物有关的事项可以应用于使用乳液组合物的方法。作为其他实施方式，本发明提供一种化疗栓塞用乳液组合物的制备方法，其包括：制备包含水溶性抗癌剂、水溶性抗癌剂或其组合的纳米粒子作为活性成分和包含亲水性(a)嵌段和疏水性(b)嵌段的两亲性嵌段共聚物的步骤；将聚合物纳米粒子溶解于水溶性造影剂的步骤；以及通过将溶解在水溶性造影剂中的聚合物纳米粒子溶液分散在水不溶性造影剂中来制备乳液的步骤。与乳液组合物有关的事项可以应用于乳液组合物的制备方法。在制备纳米粒子的步骤中，可以通过将药物和生物相容性聚合物溶解在有机溶剂中并且随后将其干燥来制备纳米粒子。乳液组合物可以通过将制备的纳米粒子溶解在水溶性造影剂中并将它分散到水不溶性造影剂中来制备，使得纳米粒子溶解在水溶性造影剂中的溶液形成液滴。有机溶剂可以是选自由甲醇、乙醇、二氯甲烷和乙腈所组成的组中的一种或多种，但不限于此。制备纳米粒子的步骤，具体而言，对溶解有抗癌剂和两亲性嵌段共聚物的有机溶剂进行减压和加热以除去溶剂，从而获得均匀的基质，并随后通过添加纯净水将其再次溶解用于注射。之后，在使用聚乳酸钠盐或聚扁桃酸钠盐的情况下，可以通过添加二价金属以形成离子键并获得硬质粒子，并随后通过过滤和冻干进行灭菌来制备。作为根据本发明的具体一个实施方式，通过该方法制备的溶液可以在25℃下稳定5小时或更长时间并且可以在37℃下稳定2小时或更长时间，并且溶液中的药物浓度可以为1～40mg/ml，更优选为10～30mg/ml。在制备乳液的步骤中，作为将溶液分散在水不溶性造影剂中的方法，可以采用使用三通旋塞的泵方法、使用超声波的方法等，但不限于此。本发明的一个实施方式提供一种预防或治疗癌症的方法，其包括：对需求的受试者给药化疗栓塞用乳液组合物的步骤，化疗栓塞用乳液组合物包含：聚合物纳米粒子、水溶性抗癌剂、水不溶性抗癌剂或其组合作为活性成分，和包含亲水性(a)嵌段和疏水性(b)嵌段的两亲性嵌段共聚物；水溶性造影剂；和水不溶性造影剂。在本文中，“受试者”包括任何人类或非人类动物。术语“非人类动物”包括非人类脊椎动物，例如非人灵长类动物、绵羊、狗和啮齿动物(例如小鼠、大鼠和豚鼠)，但不限于此。在本文中，“抗癌剂”增强了受试者的癌症消退。在其他实施方式中，用于治疗药物的有效量增强了癌症消退至癌症被去除的程度。“增强癌症消退”意味着当单独给药有效剂量的抗癌剂或将其与其他抗癌剂联合给药时，肿瘤生长或尺寸减少，或肿瘤坏死，或者至少一种疾病症状的严重程度减少，或者没有疾病症状的时期的频率和可持续性增加，或者防止由于疾病疼痛引起的损伤或紊乱。本发明的方法可以应用于血管生成依赖性癌症，优选地，选自由肝癌、卵巢癌、乳腺癌和非小细胞肺癌中的一种或多种，并且更优选地，它可以应用于肝癌。乳液组合物可以进行动脉内给药，并且例如，癌症是肝癌，并且动脉内给药可以是肝动脉输注或经动脉化疗栓塞。[有益效果]根据本发明的乳液组合物，抗癌剂可以以油包水乳液的形式给药，因此水不溶性抗癌剂以及水溶性抗癌剂可用于化疗栓塞，并且它可以具有对比狭窄的动脉血管更大的动脉血管的选择性。根据本发明的乳液组合物制备成两亲性嵌段共聚物，因此它具有优异的生物相容性，并且药物缓慢释放两次，因此抗肿瘤效果持久并且全身毒性低。附图说明图1示出了在储存紫杉醇聚合物纳米粒子溶液之后的药物的沉淀量的变化。图2示出了紫杉醇聚合物纳米粒子乳液的药物释放测试结果。图3示出了在给药紫杉醇聚合物纳米粒子乳液和阿霉素乳液之后的癌组织尺寸的变化。图4示出了在给药紫杉醇聚合物纳米粒子乳液、阿霉素乳液和紫杉醇溶液之后的活肿瘤部分结果。图5示出了在用紫杉醇聚合物纳米粒子乳液、阿霉素乳液和紫杉醇溶液的tace之后的ast变化。图6示出了在用紫杉醇聚合物纳米粒子乳液、阿霉素乳液和紫杉醇溶液的tace之后的alt变化。具体实施方式在下文中，将通过实施例详细描述本发明。然而，以下实施例仅用于说明本发明，并且本发明不受以下实施例的限制。<实施例1>聚合物纳米粒子制备称量450mg的紫杉醇、7600mg的mpeg-聚(d,l-丙交酯)和1642mg的聚乳酸钠盐，并将其放入圆底烧瓶中并完全溶解在少量二氯甲烷中，然后使用旋转蒸发仪在40℃的温度下完全除去溶剂。向其中加入纯化水，使其完全溶解并无菌过滤，并且药物浓度为20mg/ml，然后将其冻干，从而制备聚合物纳米粒子。<实施例2>纳米粒子和水溶性造影剂溶液的制备和溶解度的制备将实施例1中制备的紫杉醇聚合物纳米粒子溶解到pamiray250tm(dongkookpharmaceutical)作为水溶性造影剂中，以使紫杉醇浓度为20mg/ml。将制备的溶液在37℃的温度下以200rpm搅拌，并对药物随时间的沉淀量定量，从而证实药物溶解度的变化。将测试溶液各等分500μl，并且在0、0.5、1、2、3、4和8小时后，将测试溶液过滤(millexhv,pvdf,0.22μm)，并且通过hplc测量过滤的溶液中的纳米粒子中的药物浓度。hplc测量条件示于下表1中。[表1]柱poroshell120pfp,4.6mm×150mm,2.7μm流速0.6ml/min移动床乙腈/水(45/55,v/v)检测器和波长uv,227nm柱温30℃图1示出了在将紫杉醇纳米粒子溶液保存在37℃下之后的药物沉淀量的变化，并且证实了药物在制备后2小时在37℃的温度下的溶解度保持在约20mg/ml。<实施例3>油包水(w/o)乳液制备和稳定性评价将实施例2的溶液和作为水不溶性造影剂的lipiodoltm分别填充到注射器中，使得体积比为1:4，然后使用三通旋塞器进行泵送50次或更多次，以制备乳液。为了评价制备的乳液的稳定性，通过在25℃下用光学显微镜观察液滴随时间推移的尺寸变化。结果，可以证实在制备后立即形成尺寸为10～30μm的均匀液滴。另外，为了证实移动到水不溶性造影剂的紫杉醇的量，作为制备的乳液中的连续相的碘油层，通过等分500μl并在搅拌的同时在37℃的温度下储存1小时，然后超滤(截留分子量：100kda)，在表1的分析条件下hplc分析碘油层中的药物量。该结果示于图2，并且证实了在制备后立即和1小时后移至碘油层的紫杉醇小于总量的10％。<实施例4>肝癌动物中的化疗栓塞4.1动物模型制造在通过对斯普拉格道利(spraguedawley)大鼠进行剖腹术以暴露左肝叶后，接种1×107个n1-s1大鼠肝癌瘤细胞(首尔国立大学医院)以制造肝癌动物模型。12天后，进行mri以证实肿瘤形成并测量肿瘤的尺寸。4.2化疗栓塞在将实施例4.1中制备的大鼠的颈动脉剥离并用线捆扎以防止止血之后，使用24gmedicut刺穿颈动脉。然后，依次插入微导线和微导管。在透视的诱导下实施腹主动脉血管造影术后，将实施例3的乳液给药至肝动脉，并且以20mg/ml的浓度将作为对照药物的阿霉素溶解在作为水溶性造影剂的pamiray250tm中，并且将其与碘油以1:4(pamiray:碘油)的体积比混合的溶液和紫杉醇溶解在作为水不溶性造影剂的lipiodoltm中的溶液以相同的剂量给药。然后，在计算机断层扫描和磁共振成像中，证实了碘油沉积在肿瘤内，并且在通过模型小鼠的颈动脉插入导管后，进行化疗栓塞。4.3癌组织尺寸测量在进行实施例4.2的化疗栓塞后1周、2周和3周后，使用磁共振测量癌组织的尺寸变化，并且该结果示于图3中。如图3所示，证实了当使用水溶性造影剂和油造影剂给药紫杉醇聚合物纳米粒子作为乳液时，癌组织的尺寸与阿霉素乳液相比没有增加。4.4活肿瘤部分测量在用实施例2中制备的紫杉醇聚合物纳米粒子乳液和作为对比例的阿霉素乳液和紫杉醇溶液进行tace后第7天，通过活组织检查来分离正常肝组织和癌组织。将分离的组织用苏木精和曙红染色，从而证实活肿瘤部分，并且该结果示于图4中。如图4所示，证实了：尽管使用水不溶性抗癌剂，紫杉醇聚合物纳米粒子乳液给药组的活肿瘤部分与水溶性抗癌剂阿霉素乳液对照组相似，并且当与紫杉醇溶液给药对照组比较时肿瘤存活部分低。4.5ast和alt测量为了证实肝毒性，通过在对紫杉醇聚合物纳米粒子乳液、阿霉素乳液和紫杉醇溶液tace之前和1、3和7天之后，通过收集血液来测量ast和alt。测量结果示于图5和图6，并且在所有试验组中证实了在tace的第1天ast和alt显著增加，但在第3天它们几乎完全恢复。特别地，证实了：与给药紫杉醇碘油溶液相比，当给药紫杉醇纳米粒子乳液制剂时，在给药的第1天ast和alt的增加相对较小。当前第1页12