本发明涉及生物医药领域，更具体地，涉及一种疫苗稀释液及其制备方法。
背景技术：
疫苗是指用各类病原微生物制作的用于预防接种的生物制品。免疫接种的目的是诱发机体产生对接种抗原强大的免疫反应，以保护机体免受相应病原体的侵袭。
猪瘟是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的传染病，具有高度传染性和致死性，在自然条件下只感染猪。猪瘟疫苗系用猪瘟兔化弱毒苗，能够有效控制猪瘟。
冻干猪瘟疫苗在使用前需要用疫苗稀释液进行稀释，通常选用注射用水或生理盐水，但这样稀释出来的疫苗，疫苗所产生的免疫效价整齐度不高，进而影响猪瘟疫苗的免疫效果，有待改进。
技术实现要素：
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种疫苗稀释液及其制备方法，能够提高疫苗稀释后产生的免疫效价的整齐度。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种疫苗稀释液，按重量份数计，原料内包括以下组分：生理盐水100-120份；硬脂酸铝0.5-2份；灵芝多糖3-6份。
通过采用上述技术方案，硬脂酸铝具有乳化的作用，提高疫苗稀释液混合均匀度的同时，还能够提高疫苗稀释液与疫苗混合后的混合均匀度，进而提高疫苗稀释后产生的免疫效价的整齐度。
硬脂酸铝具有缓释作用，能够延缓免疫原在机体内的存留时间，使之持续缓慢释放，增强巨噬细胞的吞噬和杀菌能力，进而提高免疫原所引起的免疫反应。
灵芝多糖是一种良好的中药活性成分，能够提高吞噬细胞的吞噬功能，增加体液免疫的细胞功能，进而提高疫苗的效价，配合硬脂酸铝的缓释作用，进一步提高了灵芝多糖对免疫效价的提升。
灵芝多糖还可作为冻干保护剂使用，可在疫苗冻干前加入，以提高疫苗冻干制剂的稳定性。
本发明进一步设置为：按重量份数计，所述疫苗稀释液原料内包括，花青素4-7份。
通过采用上述技术方案，花青素是一种黄酮类化合物，具有较强的抗氧化、抗炎、一直癌细胞生长等能力，同时花青素对T、B淋巴细胞增殖有明显的影响，能够增强网状内皮系统的吞噬功能、提高NK细胞活性，对免疫功能具有增强作用。
本发明进一步设置为：按重量份数计，所述疫苗稀释液原料内包括，桔梗皂苷3-6份。
通过采用上述技术方案，桔梗皂苷能够活化机体内T、B淋巴细胞，提高机体内NK细胞和CTL细胞的活性，对机体免疫功能具有增强作用。
本发明进一步设置为：按重量份数计，所述疫苗稀释液原料内包括，脂质体5-10份。
通过采用上述技术方案，肌肉注射脂质体能够产生抗原缓慢释放效应，脂质体有通过自然途径被巨噬细胞摄入的倾向，因而能够将抗原引向抗原递呈细胞，进而增强机体免疫应答。同时，脂质体中的磷脂酰胆碱等是细胞膜的正常成分，可以生物降解，使用安全性高。
花青素在生理条件下不稳定，在体内的生物利用度较低，利用脂质体载体可以提高花青素的稳定性，进而提高其生物利用度，同时硬脂酸铝能够提高脂质体和花青素之间的结合度，以进一步提高其生物利用度，进一步提高花青素对免疫功能的增强作用。
桔梗皂苷具有溶血性，与胆甾醇结合生成不溶性分子复合物，破坏红细胞的渗透性而发生崩解，而脂质体内的胆固醇则能够与桔梗皂苷发生结合，克服桔梗皂苷的溶血性，同时保留桔梗皂苷的免疫增强作用。硬脂酸铝能够提高桔梗皂苷和硬脂酸铝之间的结合度，以进一步降低皂苷的溶血性。克服桔梗皂苷的溶血性后，则能够避免桔梗皂苷与胆甾醇的结合，提高桔梗皂苷的有效浓度，进而进一步提高桔梗皂苷的免疫增强作用。
本发明的另一目的在于提供一种疫苗稀释液的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
通过采用上述技术方案，硬脂酸铝能够提高免疫原所引起的免疫反应，同时硬脂酸铝能够提高疫苗稀释液的混合均匀度，还能够提高疫苗稀释液与疫苗混合后的混合均匀度，进而提高疫苗稀释后产生的免疫效价的整齐度。
从免疫学观点来看，采用纳米技术制备的疫苗稀释液的均匀性好，配合硬脂酸铝的乳化效果，进一步提高疫苗和疫苗稀释液之间混合的均匀度，进而进一步提高疫苗稀释后产生的免疫效价的整齐度。
通过0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行除菌，能够有效去除疫苗稀释液内的细菌和微生物，保证了疫苗稀释液的无菌性和使用的安全性。
本发明进一步设置为：步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、花青素进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液。
通过采用上述技术方案，
本发明进一步设置为：步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、花青素、桔梗皂苷进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液。
通过采用上述技术方案，花青素是一种黄酮类化合物，具有较强的抗氧化、抗炎、一直癌细胞生长等能力，同时花青素对T、B淋巴细胞增殖有明显的影响，能够增强网状内皮系统的吞噬功能、提高NK细胞活性，对免疫功能具有增强作用。桔梗皂苷能够活化机体内T、B淋巴细胞，提高机体内NK细胞和CTL细胞的活性，对机体免疫功能具有增强作用。
本发明进一步设置为：步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、花青素、桔梗皂苷、脂质体进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液。
通过采用上述技术方案，肌肉注射脂质体能够产生抗原缓慢释放效应，脂质体有通过自然途径被巨噬细胞摄入的倾向，因而能够将抗原引向抗原递呈细胞，进而增强机体免疫应答。同时，脂质体中的磷脂酰胆碱等是细胞膜的正常成分，可以生物降解，使用安全性高。
花青素在生理条件下不稳定，在体内的生物利用度较低，利用脂质体载体可以提高花青素的稳定性，进而提高其生物利用度，同时硬脂酸铝能够提高脂质体和花青素之间的结合度，以进一步提高其生物利用度，进一步提高花青素对免疫功能的增强作用。
桔梗皂苷具有溶血性，与胆甾醇结合生成不溶性分子复合物，破坏红细胞的渗透性而发生崩解，而脂质体内的胆固醇则能够与桔梗皂苷发生结合，克服桔梗皂苷的溶血性，同时保留桔梗皂苷的免疫增强作用。硬脂酸铝能够提高桔梗皂苷和硬脂酸铝之间的结合度，以进一步降低皂苷的溶血性。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1.硬脂酸铝能够提高疫苗稀释后产生的免疫效价的整齐度；
2.硬脂酸铝具有缓释作用，能够延缓免疫原在机体内的存留时间，使之持续缓慢释放，增强巨噬细胞的吞噬和杀菌能力，进而提高免疫原所引起的免疫反应；
3.灵芝多糖是一种良好的中药活性成分，能够提高吞噬细胞的吞噬功能，增加体液免疫的细胞功能，进而提高疫苗的效价，配合硬脂酸铝的缓释作用，进一步提高了灵芝多糖对免疫效价的提升；
4.花青素具有较强的抗氧化、抗炎、一直癌细胞生长等能力，同时花青素对T、B淋巴细胞增殖有明显的影响，能够增强网状内皮系统的吞噬功能、提高NK细胞活性，对免疫功能具有增强作用；
5.桔梗皂苷能够活化机体内T、B淋巴细胞，提高机体内NK细胞和CTL细胞的活性，对机体免疫功能具有增强作用；
6.肌肉注射脂质体能够产生抗原缓慢释放效应，脂质体有通过自然途径被巨噬细胞摄入的倾向，因而能够将抗原引向抗原递呈细胞，进而增强机体免疫应答。同时，脂质体中的磷脂酰胆碱等是细胞膜的正常成分，可以生物降解，使用安全性高；
7.花青素在生理条件下不稳定，在体内的生物利用度较低，利用脂质体载体可以提高花青素的稳定性，进而提高其生物利用度，同时硬脂酸铝能够提高脂质体和花青素之间的结合度，以进一步提高其生物利用度，进一步提高花青素对免疫功能的增强作用；
8.桔梗皂苷具有溶血性，与胆甾醇结合生成不溶性分子复合物，破坏红细胞的渗透性而发生崩解，而脂质体内的胆固醇则能够与桔梗皂苷发生结合，克服桔梗皂苷的溶血性，同时保留桔梗皂苷的免疫增强作用。硬脂酸铝能够提高桔梗皂苷和硬脂酸铝之间的结合度，以进一步降低皂苷的溶血性。
具体实施方式
实施例1：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
实施例2：一种疫苗稀释液，与实施例1的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
实施例3：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、花青素进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
实施例4：一种疫苗稀释液，与实施例3的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
实施例5：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、桔梗皂苷进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
实施例6：一种疫苗稀释液，与实施例5的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
实施例7：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、花青素、脂质体进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
实施例8：一种疫苗稀释液，与实施例7的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
实施例9：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、桔梗皂苷、脂质体进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
实施例10：一种疫苗稀释液，与实施例9的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
实施例11：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、硬脂酸铝、灵芝多糖、花青素、桔梗皂苷、脂质体进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
实施例12：一种疫苗稀释液，与实施例11的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
对比例1：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、灵芝多糖、花青素、脂质体进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
对比例2：一种疫苗稀释液，与对比例1的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
对比例3：一种疫苗稀释液，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗稀释液的制备方法包括以下步骤：
步骤1，将生理盐水、灵芝多糖、桔梗皂苷、脂质体进行混合并搅拌均匀，获得备用混合液；
步骤2，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米混合液；
步骤3，采用0.2μm微孔滤膜对纳米混合液进行滤过除菌。
对比例4：一种疫苗稀释液，与对比例3的不同之处在于，原料中各组分及重量份数如表1所示。
试验方法：疫苗采用猪瘟活疫苗，每组取10只体型相近的8周龄断奶雄性仔猪，做好编号。免疫前1d从每头仔猪前腔静脉采血2ml，分离血清测定猪瘟抗体水平，并获得免疫前抗体水平的平均值，试验组于第2d每头注射表1内的疫苗和疫苗稀释液的混合液，第15d从每头仔猪的前腔静脉采血2ml，分离血清测定猪瘟抗体水平。每组仔猪的猪瘟抗体水平中，计算猪瘟抗体水平，获得每组免疫后抗体水平的平均值和方差。其中，猪瘟抗体水平采用ELISA检测方法对血清样本进行猪瘟病毒抗体水平检测。
表1
表1-续
具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不用于限制本发明，凡在本发明的设计构思之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。