防治棘胸蛙烂皮病的全灭活疫苗及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明提供一种具有防治棘胸蛙烂皮病的全灭活疫苗制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 棘胸蛙养殖被认为是目前最具潜力的养殖项目之一，在中国长江以南地区发展较 快。然而，病害严重影响了其进一步规模化发展。目前，应用免疫学技术防治水生动物细菌 性疾病，已越来越多的受到各国水生动物疾病防治工作者的重视。相对于抗生素，研发"高 效、实用、低价、安全"的疫苗防治技术逐渐成为国际水产疫病防控的主要问题。
[0003] 疫苗的免疫方式在很大程度上决定了疫苗的使用与推广。周永灿（2001)等的研 宄表明，肌肉注射法免疫效果最好，其最高凝集抗体效价达426. 7 ;与肌肉注射法相比，口 服免疫法和喷雾免疫法的最高凝集抗体效价出现较晚。周末等人（2009)对林蛙红腿病进 行免疫实验，结果显示肌肉注射法和口服免疫法均能取得较好的免疫效果，浸泡免疫法次 之。
[0004] 疫苗的保存期也是疫苗大规模使用的制约因素。胡成钰等（2001)在牛蛙红腿病 菌苗免疫试验中对疫苗的保存期进行的研宄，结果显示菌苗在4-10°C环境下，保存120? 180d，攻毒试验蛙仍有70 %左右的存活率。
[0005] 烂皮病对棘胸蛙养殖业危害巨大，但到目前为止，对于该病的致病病原，尚没有统 一的定论，目前发现的导致棘胸娃烂皮病的致病菌主要有葡萄球菌（Staphylococcus)、奇 异变形杆菌（Proteusmirabilis)等。
[0006] 上文中提及的参考文献具体如下：
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【发明内容】
[0018] 本发明要解决的技术问题是提供一种使用安全且能有效防治棘胸蛙烂皮病的全 灭活疫苗及其制备方法。
[0019] 为了解决上述技术问题，本发明提供一种防治棘胸蛙烂皮病的全灭活疫苗的制备 方法，包括以下步骤：
[0020] 1)、以琼氏不动杆菌、鲁氏不动杆菌、约氏不动杆菌这三种菌作为致病菌，对每种 致病菌分别进行如下处理：
[0021] 取〇D_值为0. 2的致病菌的菌悬液，加入体积浓度为40%的甲醛溶液从而配制成 甲醛的体积浓度为0. 2%的疫苗；将所述疫苗于37°C恒温箱中灭活处理96h;从而分别得3 种致病菌的甲醛灭活苗；
[0022] 2)、将3种致病