本发明属于生物医药领域，涉及ga-13315联合化疗药物在抗肿瘤中的应用。
背景技术：
癌症是由于机体细胞失去正常调控，过度增殖而引起的疾病。过度增殖的细胞称癌细胞，癌细胞常可侵犯周围组织，甚至可经体内循环系统和/或淋巴系统转移到身体其他部分。癌症有许多类型，而病症的严重程度取决于癌细胞所在部位、恶性程度及是否发生转移。
目前，在我国肺癌是发病率、死亡率上升最快的恶性肿瘤，在北京，每5个癌症患者中就有1个患肺癌。与十几年前相比，肺癌的发病率增加了1倍，在北京、上海、广州、南京等大中城市，肺癌的发病率和死亡率已居各种肿瘤首位。云南省肺癌的发病率更高、是全国发病率的两倍。
临床上多数肺腺癌患者的预后较差，多数患者确诊时已为晚期，中位生存期约为3-6个月。在肺腺癌的综合治疗中，化疗具有不可替代的作用，而多种药物的联合应用是化疗的基本原则。目前国内外非小细胞肺癌诊疗指南均建议选择含铂类化疗药的两药联合方案为一线化疗标准方案，通过化疗可延长患者的生存时间。其中铂类化疗药中的顺铂(ddp)是治疗肺癌的重要基础用药，但ddp具有明显的肾脏毒性、耳神经毒性及明显的消化道反应，限制了其在临床的应用，更有部分患者因无法耐受或惧怕毒副反应而放弃化疗。
近年来，针对egfr主流突变的靶向药物吉非替尼、埃罗替尼、埃克替尼等对非小细胞肺癌的治疗取得明显成效，但这些临床用药以进口为主，价格昂贵，且在使用一定时间后均会不同程度地出现耐药，最终导致疗效的不理想。
尝试在基础化疗方案中加入毒副反应低的其它化疗药或靶向药，通过多种药物的联合应用，以降低高毒性化疗药的使用剂量，达到降低毒性、保持或提高疗效的结果，使晚期肿瘤患者获益。因此，为提高晚期患者的疗效、延长生存时间、提高生活质量，不断寻找能够改善治疗现状的药物或方法，是癌症治疗研究中的重要任务。
ga-13315(ga)，化学名13-氯-3,15二氧基赤霉酸甲酯，是从合成的一系列赤霉素衍生物中筛选出的、具有明显抗肿瘤活性的新四环二萜类化合物。ga能够抑制多种人源肿瘤细胞的生长增殖。作用机制研究结果显示，化合物ga具有抑制肿瘤细胞dna拓扑异构酶活性、抑制肿瘤血管新生、逆转耐药肿瘤细胞多药耐药性的作用。
本申请对ga-13315联合化疗药物对治疗癌症的影响进行研究，寻找一种毒副作用小、效果好的联合药物。
技术实现要素：
为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种毒副作用小、疗效好的联用药物组合物。
本发明的目的之二在于提供一种有效治疗癌症的手段，通过药物联用，降低化疗药物的毒副作用，增加化疗药物的效果。
本发明的目的之三，在于提供一种化疗药物减毒增效的手段，即ga-13315与化疗药物联用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括有效量的ga-13315和化疗药物，所述ga-13315包括选自ga-13315或其药学上可接受的盐。
其中，化疗药物包括但不限于烷化剂：环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、环己亚硝脲、氮烯咪胺等；抗代谢药：甲氨喋呤、氟脲嘧啶、阿糖胞苷、硫唑嘌呤、吉西他滨等；生物碱类抗癌药：紫杉醇，长春花碱，长春花新碱、羟喜树碱等；抗肿瘤抗生素：多柔比星、丝裂霉素c、博来霉素、更生霉素、米托蒽醌等；其他类药物：卡铂、顺铂、门冬酰胺酶等。
优选的，所述抗肿瘤药物为铂类抗肿瘤药物如顺铂、卡铂、奥沙利铂等临床常用化疗药物。
进一步，所述化疗药物为顺铂。
进一步，所述ga-13315与顺铂的重量比为1.5:1～3:0.5。
进一步，所述ga-13315与顺铂的重量比为1.5:1～3:0.5。
进一步，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。
药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体是本领域技术人员所公知的，包括但不限于能够被用作治疗药物给药载体的任何无活性物质。
本发明提供了上面所述的药物组合物在制备治疗肿瘤的产品中的应用。
进一步，所述肿瘤为肺癌。
本发明中的药物可以任何合适的方式给予受试者。例如可经静脉内、瘤内、腹膜内、肌肉内、眼内、皮下、口服、局部给药，或在自体干细胞移植之前，先体外后体内净化自体移植物内的恶性细胞。
本发明提供了ga-13315或其药学上可接受的盐在制备化疗药物减毒增效剂中的应用。
进一步，ga-13315或其药学上可接受的盐与化疗药物联用。当与化疗药物联用时，ga-13315即可与化疗药物同时给药，也可以分开给药。
本发明提供了一种治疗肿瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一活性成分ga-13315，和第二活性成分；
优选的所述第二活性成分为化疗药物；
更为优选的，所述化疗药物为顺铂。
附图说明
图1是化合物ga、ddp及二者联用对小鼠s180生长的影响图。
图2是化合物ga、ddp及二者联用对荷s180小鼠体重的影响图；其中，图a是小鼠体重变化曲线图，图b是实验前小鼠的体重，图c是实验后小鼠的体重。
图3是化合物ga、ddp和联合用药对荷s180小鼠脾脏、胸腺指数的影响图；其中，图a脾脏指数，图b胸腺指数。
图4是化合物ga联合ddp对荷s180小鼠骨髓增生程度的影响图。
图5化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌a549裸小鼠移植瘤体积的影响图，其中，图a肿瘤相对增殖率，图b相对肿瘤体积，图c实验前肿瘤体积，图d实验后肿瘤体积。
图6是化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌a549裸小鼠移植瘤重量和抑瘤率影响图；其中，图a移植瘤重量，图b抑瘤率。
图7是化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌a549裸小鼠体重的影响图；其中，图a体重变化曲线图；图b实验前小鼠体重，图c实验后小鼠体重。
图8是化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌a549裸小鼠脾脏指数的影响图。
图9是化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌xwlc-05裸小鼠移植瘤体积的影响图；其中，图a相对肿瘤体积，图b肿瘤相对增殖率，图c实验前肿瘤体积，图d实验后肿瘤体积。
图10是化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌xwlc-05移植瘤重量的影响图。
图11是化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌xwlc-05裸小鼠体重的影响图；其中，图a体重变化曲线图；图b实验前小鼠体重，图c实验后小鼠体重。
图12是化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌xwlc-05裸小鼠脾脏指数影响图。
图13是化合物ga联合ddp对裸小鼠外周血涂片和骨髓的影响图。
图14是化合物ga联合ddp对荷瘤裸小鼠肠道的影响图。
图15是化合物ga联合ddp对荷瘤裸小鼠肾脏的影响图。
具体的实施方式
本发明经过广泛而深入的研究，通过体外细胞实验和体内动物实验，发现ga-13315联合化疗药物顺铂对肺腺癌细胞具有协同和累加的治疗作用，同时可以降低产生相同疗效的顺铂所产生的毒副作用。
“联合治疗”包括同时应用本发明的化合物与其他生物活性成分(包括但不限于另外一种不同抗肿瘤药物)和非药物疗法(包括但不限于外科手术和放疗)。例如本发明所述化合物可以与其他制药活性化合物或非药物治疗联合应用，最好那些能增强本发明所述化合物药效的药物联用。本发明所述化合物可以与其他治疗方法同时使用或者在其他疗法之前或之后使用。一般来说，联合疗法包括在单个疗程或多个疗程中使用两种或多种药物/治疗方法。
本发明所述化合物可以与一种或多种传统化疗药剂联合应用。传统化疗药剂包括肿瘤学范畴内许多不同的治疗药物。这些药物可以在疾病的不同阶段使用，以缩小肿瘤、杀死手术后残余的癌细胞、诱导疾病缓解、维持缓解和/或减轻与癌症或其治疗有关的症状。该类药物包括但不限于烷化剂，如氮芥(例如，苯达莫司汀、环磷酰胺和美法仑)、亚硝基脲(如卡莫司汀、洛莫司汀和链脲菌素)、乙烯亚胺(例如，塞替派)、烷基磺酸盐(例如，白消安)、肼和三嗪(如六甲蜜胺、甲基苄肼、达卡巴嗪和替莫唑胺)、铂类药物(如卡铂、顺铂、奥沙利铂)、植物生物碱，如鬼臼毒素类(例如，依托泊苷)、紫杉烷类(如紫杉醇和多西他赛)、长春花生物碱(如，长春新碱、长春花碱和长春瑞滨)；抗肿瘤抗生素，如色霉素(例如，放线菌素和普卡霉素)、蒽环类药物(如阿霉素、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌和伊达比星)，及其他各种抗生素，如丝裂霉素和博来霉素；抗代谢物如叶酸拮抗剂(例如，氨甲喋呤)、嘧啶拮抗剂(例如，5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、卡培他滨和吉西他滨)、嘌呤拮抗剂(例如，6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤)和腺苷脱氨酶抑制剂(例如，克拉屈滨、氟达拉滨、奈拉滨和喷司他丁)、拓扑异构酶抑制剂，如拓扑异构酶ii抑制剂(例如，安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷和替尼泊苷)，及其他各种抗肿瘤剂，如核糖核苷酸还原酶抑制剂(羟基脲)、肾上腺皮质类固醇抑制剂(米托坦)、抗微管药物(雌莫司汀)、类维生素a(蓓萨罗丁、异维a酸和维甲酸(atra))。
本发明中的ga-13315与化疗药物可以同时或依次使用。在本发明中，同时给药是指在同一时期给予ga-13315和化疗药物进行联合用药，可以以配方剂的形式进行给药，也可以以在给药时进行调制的混合物的形式给药，还可以在同一时期给予其他形态的制剂。在同时给药进行使用时，可以从各自的路径进行给药，也可以从相同路径进行给药，给药剂型可以相同也可以各自不同。
本发明的药物组合物的给药途径可适当采用口服给药或胃肠外给药的任一种。作为用于口服给药的剂型，例如可从液体制剂、散剂、颗粒剂、片剂、肠溶剂和胶囊剂等任意剂型中适当选择。具有上述剂型药物组合物通过本领域技术人员所公知的方法制成制剂。例如，将其与药理学上可接受的载体或介质、具体而言与灭菌水或生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、香味剂、赋形剂、媒介物、防腐剂、粘合剂等适当组合，以通常认可的制药实施所要求的单位用量方式混和，之后通过冷冻干燥、压片成型等制剂化操作制成制剂。
ga-13315与水或水以外的药学上可接受的液体的无菌溶液或悬浮液剂等注射剂的形式，也可用于胃肠外。这些制剂中的有效成分量可适当选择，使得能够给予所指示的范围的适当用量。用于注射的无菌组合物可使用注射用蒸馏水这样的媒介物，按照通常制剂实施来进行配方。作为注射用水溶液，例如例示生理盐水、含有葡萄糖或其他辅助剂的等渗液(例如d-山梨醇、d-甘露糖、d-甘露醇、氯化钠)，可与适当的助溶剂(例如醇、具体如乙醇、多元醇、例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子性表面活性剂(例如聚山梨酯80(tm)、hco-50)适当联用。作为油性液体，例示芝麻油、大豆油，可与作为助溶剂的苯甲酸苄酯、苄醇联用。另外，还可与缓冲剂(例如磷酸盐缓冲液、乙酸钠缓冲液)、止痛剂(例如盐酸普鲁卡因)、稳定剂(例如苄醇、苯酚)、抗氧化剂适当配合。
本发明中“药学上可接受的载体”可以是一种也可以是多种，所述载体包括但不限于稀释剂如乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等；粘合剂如淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、蔗糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸盐、黄原胶、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素等；表面活性剂如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等；致湿剂如甘油、淀粉等；吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱土、硅胶、高岭土和皂粘土等；润滑剂如硬脂酸锌、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末、氢化植物油、硬脂富马酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗糖酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、十二烷基硫酸镁等；填充剂如甘露醇(粒状或粉状)、木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤藓糖、微晶纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙和碳酸氢钠等；崩解剂如交联乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基甲基、交联羧甲基纤维素钠、大豆多糖等。
本发明中的药物组合物可以使用不同的添加剂进行制备，例如稳定剂、杀菌剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、ph控制剂及表面活性剂。
稳定剂包括人类血清蛋白、l-氨基酸、糖及纤维素衍生物。l-氨基酸还可以包括甘氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一个。糖类包括单糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖等；糖醇，例如甘露醇、纤维醇、木糖醇等；二糖，例如蔗糖、麦芽糖、乳糖等；多聚糖，例如葡聚糖、羟丙基淀粉、硫化软骨素、透明质酸等及它们的衍生物。纤维素衍生物包括甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素及羟甲基纤维素钠。
表面活性剂包括离子或非离子表面活性剂，例如聚氧化乙烯烷基酯、山梨聚糖单酰基酯、脂肪酸甘油酯。
添加剂缓冲剂可以包括硼酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、谷氨酸及相应的盐(它们的碱金属或碱性稀土金属盐，例如钠盐、钾盐、钙盐及镁盐)。等渗剂包括氯化钾、氯化钠、糖及甘油。螯合剂包括乙二胺四乙酸钠及柠檬酸。
术语“药学上可接受的”是指可以用于制备药物组合物的物质，一般安全无毒，无生物学或其他不良作用，包括可用于兽药以及人类用药的物质。
本发明中“药学上可接受的盐”是化合物的药学上可接受盐，并具备所应有的药理活性。药学上可接受的盐包括本发明中化合物与无机酸或有机酸所形成的酸盐。药学上可接受的盐还包括本发明中化合物与无机或有机碱反应所形成的碱盐。如，无机碱盐(例如钠盐、钾盐等碱金属盐，钙盐、镁盐等碱土金属盐，铵盐)、有机碱盐(例如三乙胺盐、二异丙基乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己基胺盐、n，n′-二苄基亚乙基二胺盐等有机胺盐)、无机酸加成盐(例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)、有机羧酸加成盐或磺酸加成盐(例如甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐等)、碱性氨基酸盐或酸性氨基酸盐(例如精氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等)等
在本发明的上下文中，“治疗”是指给患有肿瘤或免疫疾病或有这个症状的受治疗者服用本发明中的化合物，目的是治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、改善、提高或影响该疾病或者疾病的症状。术语“有效量”指的是对受试者产生治疗作用所需的有效药剂数量。熟悉相关领域的人应认识到，有效数量可能会不同，这取决于用药途径、赋形剂使用及与其他药物共用的可能性。“受试者”系指人类和非人类动物。非人类动物的实例包括所有脊椎动物，例如哺乳动物，诸如非人类灵长类动物(特定言的为较高级灵长类动物)、狗、啮齿动物(例如小鼠或大鼠)、天竺鼠、猫，及非哺乳动物，诸如鸟、两栖动物、爬虫等。在一较佳实施例中，受试者为人类。在另一实施例中，受试者为实验动物或适用作疾病模型的动物。
术语“有效量”包括在本发明中使用的ga-13315和抗肿瘤的药物的无毒但足以提供期望治疗效果的量。所需的精确量将因对象而不同，其取决于诸如以下的因子：被治疗的物种，对象的年龄和一般病况，被治疗病况的严重性，施用的特定药剂以及施用模式等等。因此，不可能指定精确的“有效量”。然而，对于给定的情况，可以通过本领域普通技术人员根据症状的严重程度、复发的频率和治疗方案的生理应答，调整本发明药物组合物的剂量。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如sambrook等人，分子克隆：实验室手册(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1mtt检测化合物ga联合ddp对肺癌细胞的增殖影响
1、受试物及试剂配制
化合物ga设低、中、高3个剂量组，分别为1、3、9mg/kg。具体配制如下：称取一定量化合物ga，再加一定量的0.5％羧甲基纤维素钠(0.5％cmc-na)，按0.2ml/10g体重的给药体积配制成高剂量混悬液，中、低剂量由高剂量以0.5％cmc-na按比例稀释配制，灌胃给药。
2、细胞株及培养：人肺腺癌a549、spc-a-1、xwlc-05细胞系，培养同前。
3、ga设4、8、16、32、64μm5个受试浓度。用dmso溶解为50mg/ml贮存液，实验前用培养基稀释成所需浓度。ddp对照实验设1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100μm7个浓度，ns为阴性对照。联合用药方案为，ga8μm分别联合ddp3.125、6.25、12.5μm；ga16μm分别联合ddp3.125、6.25、12.5μm。
按以上给药方案分别作用于以上3株肺腺癌细胞，等体积培养基为阴性对照，同时设化合物ga最高受试浓度即64μm时相应的dmso浓度为溶媒对照，以消除dmso对细胞生长的影响。检测步骤同第一部分。
4、结果计算及分析
(1)细胞增殖抑制率计算公式同第一章。
(2)采用金氏公式对联合用药(q)进行分析：
q＝e(a+b)/(ea+eb－ea×eb)
e(a+b)：实际联合用药的抑制率，ea：a药的抑制率，eb：b药的抑制率。
参考标准：q>1.15，表示2种药物为协同作用，q在0.85～1.15区间，表示2种药物为相加作用，q<0.85，表示2种药物为拮抗作用。
5、结果
结果如表1-a、1-b、1-c所示，顺铂以较低浓度(3.125、6.25、12.5μm)单独作用于a549、spc-a-1、xwlc-05细胞24h、48h、72h，呈现出良好的量效关系和时效关系；化合物ga以较低浓度(8、16μm)单独作用于a549、spc-a-1细胞24h、48h、72h，亦呈现出良好的量效关系和时效关系，但活性强度低于ddp；化合物ga以较低浓度(8、16μm)单独作用于xwlc-05细胞24h、48h，显示出量效关系，但活性不明显；作用72h在活性下降，提示作用时间过长。
化合物ga8μm、16μm分别与不同浓度ddp(3.125、6.25、12.5μm)作用于a549、spc-a-1、xwlc-05细胞，均显示出良好的量效关系和时效关系，提示在一定的作用浓度和作用时间条件下，化合物ga与ddp联合应用，具有协同或相加的作用。
表1-a化合物ga联合ddp对肺腺癌细胞a549增殖的抑制率(％)
表1-b化合物ga联合ddp对肺腺癌细胞spc-a-1增殖的抑制率(％)
表1-c化合物ga联合ddp对肺腺癌细胞xwlc-05增殖的抑制率(％)
实施例2化合物ga联合ddp对小鼠肉瘤s180生长的影响
以小鼠移植性肉瘤s180为模型，初步检测化合物ga与ddp联用是否具有联合效应，为进一步的实验摸索受试药物剂量。
1、小鼠肉瘤s180模型建立
取接种5-8天后生长良好的腹水型小鼠s180细胞，用0.9％ns调细胞浓度为1.0×106/ml，接种于icr小鼠右侧腋部皮下，0.2ml/只，接种24h后分组给药。
2、实验方案：选取90只雌性icr小鼠，9只/组，接种24h后随机分为阴性对照组(等体积ns)、溶媒对照组(0.5％cmc-na)、阳性对照组(ddp1mg/kg)和化合物ga低(1mg/kg)、中(3mg/kg)、高(9mg/kg)各剂量组，另设ddp0.33mg/kg和0.11mg/kg剂量组。联合用药组1为：顺铂(0.5mg/kg)+ga中剂量(3mg/kg)，联合用药组2为：顺铂(0.33mg/kg)+ga中剂量(3mg/kg)。灌胃给药，1次/d，连续10d。末次给药24h后，颈椎脱臼处死小鼠，取肿瘤组织、胸腺、脾脏、肠、骨髓、肾组织，称瘤重、体重，计算抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数，制备骨髓、肠、肾脏组织病理切片，镜下观察组织损伤情况。
3、结果计算及分析：
抑瘤率％＝(对照组平均瘤重－治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％
脾脏指数(mg/10g)＝脾脏重量(mg)/小鼠去瘤体重(g)×10
胸腺指数(mg/10g)＝胸腺重量(mg)/小鼠去瘤体重(g)×10
脾脏指数(mg/10g)＝脾脏重量(mg)/小鼠去瘤体重(g)×10
对照组小鼠肿瘤平均重量小于1g或20％小鼠的瘤重小于400mg，表示肿瘤生长不良。在实验治疗期间给药组小鼠死亡超过20％或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15％者，表示药物的毒性反应，应当减少剂量重新实验。
按以下公式计算肿瘤体积(tumorvolume，tv)、相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)和相对肿瘤增殖率(t/c％)
tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤组织的长、宽径；
rtv＝vt/v0，其中v0为开始给药(d0)时测量所得肿瘤体积，vt为每个时间点测量时的肿瘤体积；
t/c(％)＝trtv/crtv×100％，trtv为治疗组rtv，crtv为阴性(溶媒)对照组rtv。
肿瘤生长抑制率(％)<40为无效；肿瘤生长抑制率(％)≥40，与对照组相比较，瘤重的差异经统计学分析具有显著性为有效。
以相对肿瘤增殖率(t/c％)评价受试物对人癌裸小鼠移植瘤的疗效。按以下标准(国内)评价：t/c(％)>60％为无效；t/c(％)≤60％，并经统计学分析p<0.05为有效。
骨髓组织根据成熟红细胞与有核细胞之比，可将骨髓增生程度分为5个等级，分别为：增生极度活跃、增生明显活跃、增生活跃、增生减低、增生极度减低。结合外周血涂片综合判定骨髓增生情况，分级如下：
增生极度活跃：红细胞与有核细胞之比为(0.5～2.0):1；
增生明显活跃：红细胞与有核细胞之比为(5～12):1；
增生活跃：红细胞与有核细胞之比为(16～32):1；
增生减低：红细胞与有核细胞之比为(35～70):1；
增生极度减低：红细胞与有核细胞之比为(100～300):1。
荷瘤裸鼠肠壁组织和肾脏组织的损伤按病理学原则进行形态学观察和评价。
4、结果
结果如表2-a、2-b以及图1～4所示，阳性对照ddp0.11、0.33、1mg/kg剂量对s180生长的抑瘤率分别为25.82％、36.69％和73.12％；ddp0.5mg/kg与ga3mg/kg剂量联用，对s180生长的抑瘤率为69.68％，ddp0.5mg/kg与ga3mg/kg联用，对s180的抑瘤率为69.68％，与高剂量ddp(1mg/kg)单独作用的强度接近；ddp0.33mg/kg与ga3mg/kg联用，对s180的抑瘤率为46.80％，与阴性对照组相比，差异均有显著性，p<0.01，同时两组联合用药组的脾脏、胸腺指数及体重下降及骨髓的增生情况均较高剂量ddp(1mg/kg)单独作用得到明显改善，提示在一定范围内降低ddp剂量、联合化合物ga，可增强疗效、降低毒性。
表2-a化合物ga、ddp及联合用药对荷肉瘤s180小鼠生长的影响
注：ig为灌胃给药；ip为腹腔注射给药。各组小鼠平均瘤重为计量资料，数据用
表2-b化合物ga、ddp及联合用药对荷肉瘤s180小鼠脾脏指数、胸腺指数的影响
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注：ig为灌胃给药；ip为腹腔注射给药。各组小鼠平均瘤重为计量资料，数据用x±sd表示。阳性对照和溶媒对照与阴性对照相比较:*：p<0.05，**：p<0.01，***：p<0.001。ga实验组与溶媒对照相比较：*：p<0.05，**：p<0.01，***：p<0.001。
实施例3化合物ga联合ddp对人肺腺癌a549和人肺腺癌xwlc-05裸小鼠异种移植瘤生长的影响
1、小鼠异种移植瘤模型的建立
spf级balb/c裸鼠，56只，雄性，6-7周，20±2g。饲养于spf级环境，维持昼夜节律，低噪音、恒温(25±2℃)、恒湿(60±5％)。
取体外培养处于对数生长期的a549细胞和xwlc-05细胞，以7×107/ml浓度、超净工作台内按0.2ml/只接种裸鼠腋下，待肿瘤长至1×1×1cm3大小左右进行体内传代。传2-3代后，取生长良好的肿瘤组织、剪切成1.5mm3左右大小的组织块，无菌条件下接种于裸小鼠右腋皮下，接种后约第10天，剔除移植瘤未生长、生长过缓或过快的裸小鼠，选择已形成100～300mm3大小移植瘤的裸小鼠进行体内实验。
2、实验方案
选取造模成功的48只雄性裸小鼠，6只/组，随机分为阴性对照组(等体积ns)，溶媒对照组(5％cmc-na)、阳性对照组(ddp1mg/kg)和化合物g低(1mg/kg)、中(3mg/kg)、高(9mg/kg)各剂量组，同时根据小鼠移植瘤实验的结果设置联合给药方案：联合用药组1：顺铂(0.5mg/kg)+ga中剂量(3mg/kg)；联合用药组2：顺铂(0.5mg/kg)+ga低剂量(1mg/kg)。给药途径同前，5次/w，连续4w(化合物ga联合ddp对人肺腺癌xwlc-05裸小鼠异种移植瘤生长的影响中，每周连续给药6d，间隔1d，持续3周)。每周称重3次，观察裸小鼠进食、精神、活动等情况，采用游标卡尺测量瘤径以计算肿瘤的大小，每周测量3次，计算肿瘤体积(tumorvolume，tv)、相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)和相对肿瘤增殖率t/c％。末次给药24h后，颈椎脱臼处死裸小鼠取肿瘤组织，称瘤重、计算抑瘤率、脾脏指数；同时评价裸鼠骨髓、肠、肾脏组织损伤情况。
3、结果计算及分析：肿瘤体积(tv)、相对肿瘤体积(rtv)和相对肿瘤增殖率(t/c％)、肿瘤抑制率计算及结果评价同实施例2。
联合用药的计算及评估同实施例1。
4、数据的分析处理
实体瘤疗效结果为计量资料，数据用
5、结果
化合物ga、ddp和二者联用对人肺癌a549裸小鼠移植瘤生长的影响如表3-a，3-c和图5～8所示，ddp0.5、1mg/kg作用于荷a549裸小鼠、其肿瘤的相对增殖率(t/c％)分别为49.23％和18.81％；化合物ga1、3、9mg/kg对a549的相对增殖率(t/c％)分别为61.07％、59.77％、47.33％。ddp0.5mg/kg与ga1、3mg/kg联用，a549的相对增殖率(t/c％)分别为40.47％、40.48％，相差无几，作用均强于各自单独应用，抑瘤率的结果亦相似，均显示为相加作用。同时观察到，联合用药并没有加剧动物体重和脾脏指数的下降，即降低了毒性。
化合物ga联合ddp对人肺腺癌xwlc-05裸小鼠异种移植瘤生长的影响的结果如表3-c、3-d和图9～12所示，ddp0.5mg/kg分别与化合物ga1mg/kg和3mg/kg联用，肿瘤的相对增殖率(t/c％)分别为25.91％和28.51％，抑瘤作用相差无几，均强于各自单独应用，抑瘤率的结果亦相似，显示为协同和相加作用，同时观察到，联合用药并未加剧动物体重和脾脏指数的下降，与ddp0.5mg/kg组比较，体重、脾脏指数无显著性差异，p>0.05，动物饮食及活动状态较好，显示出减毒增效的作用。
化合物ga联合ddp对人肺腺癌荷瘤裸小鼠重要脏器的影响的影响如图13～15所示，联合化合物ga明显降低了ddp单独作用有效剂量作用下所产生的毒副作用，尤其是对ddp肾脏毒性的改善，显示出了减毒增效的作用。
表3-a化合物ga、ddp和二者联用对人肺癌a549裸小鼠移植瘤生长的影响
注：ig为灌胃给药；ip为腹腔注射；d0：分组开始给药时间；d26：实际治疗疗效最佳时间。阳性对照和溶媒对照与阴性对照相比较:*：p<0.05，**：p<0.01，***：p<0.001。ga实验组与溶媒对照相比较：*：p<0.05，**：p<0.01，***：p<0.001。
表3-b化合物ga、ddp和联合用药对荷人肺癌a549裸小鼠脾脏指数、瘤重的影响
注：阳性对照和溶媒对照与阴性对照相比较:*：p<0.05，**：p<0.01，***：p<0.001。ga实验组与溶媒对照相比较：*：p<0.05，**：p<0.01，***：p<0.001。
表3-c化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌xwlc-05裸小鼠移植瘤生长影响
注：ig为灌胃给药；ip为腹腔注射给药；d0:：分组开始给药时间；d23：实际治疗疗效最佳时间。与阴性组比较：*：p<0.05；**：p<0.01；***：p<0.001。
表3-d化合物ga、ddp及联合用药对荷人肺癌xwlc-05裸小鼠脾脏指数的影响
注：与阴性组比较：*：p<0.05；**：p<0.01；***：p<0.001。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。