烟酰胺在预防唾液腺放射损伤方面的新用途的制作方法

本发明涉及烟酰胺在预防唾液腺放射损伤方面的新用途，属于医药卫生领域。

背景技术

烟酰胺(nicotinamide,nam)又称尼克酰胺，是烟酸的酰胺化合物，是维生素b3的一种衍生物，也是人体能量代谢中辅酶i和辅酶ii的组成部分，其结构如式(i)所示：

临床实践中，nam用于糙皮病、口炎、舌炎的防治，以及治疗冠心病、病毒性心肌炎、风湿性心脏病及少数洋地黄中毒等伴发的心律失常。目前，已有专利cn106715455a(中国)描述了烟酰胺核苷类药可用于治疗患有或者易患线粒体疾病或病症的受试者，或用于增加患有或易患胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病或其并发症的受试者的胰岛素敏感性，所述疾病或病症将受益于增加的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide,nad)水平。专利cn101601679a(中国)描述了nam单核苷酸在制备防治脑卒中的药物或保健食品中的应用，阐明nam单核苷酸本身是机体内源性的保护物质，具有很高的药物安全性。

唾液腺放射损伤是头颈部肿瘤放疗的常见并发症。临床表现为放疗实施过程中和放疗后，病人出现严重的口干症状，影响正常的语言、味觉、进食等正常生理功能，大大降低了病人的生活质量。如何应对头颈部肿瘤放疗引起的唾液腺损伤，是亟待解决的临床难题之一。近年来，随着放疗技术的日益进步，唾液腺放射损伤的程度有所缓解，临床医生也在寻求一些其他的手段来尽量保护唾液腺的功能，如人工唾液的应用、唾液腺移植手术的开展等，但这些手段未从根本上改变唾液腺受照射后功能下降的现象。有报道在动物实验中采用基因转导的方式治疗唾液腺放射损伤，取得一定的疗效，但其效用比较短暂，且短期内难以应用到临床当中。

技术实现要素：

为解决现有技术问题，本发明提供一种烟酰胺(nam)在制备预防唾液腺放射损伤的药物中的应用，并具有良好的效果。

本发明所述的放射损伤为放射治疗(放疗)造成的放射损伤。

本发明所述的放射损伤为内放射和外放射治疗造成的放射损伤。内放射治疗即为内部(体内)放射治疗，是将放射源以各种形式(包括口服或植入)置于身体内的一种治疗方式，例如放射碘治疗；外放射治疗即为外部(体外)放射治疗，是临床上通常所说的放射治疗，是将放射源置于身体外的一种治疗方式。

本发明以原代培养的大鼠原代颌下腺细胞和wistar大鼠为模型，经实验研究发现nam在唾液腺细胞和组织具有良好预防放射损伤效果，即有效改善放射线引起的唾液腺细胞活力下降、腺体组织结构破坏及细胞凋亡等，并在细胞水平发现nam能够减轻辐射引起的腺泡细胞nad水平的降低。这些研究结果表明nam能够改善辐射细胞的能量代谢，为临床预防唾液腺辐射损伤提供了一种新方法。

本发明的预防唾液腺放射损伤的药物的剂型可以为片剂、胶囊、丸剂、乳剂、注射剂、糖浆、口服液、颗粒剂或贴剂。

(一)在细胞水平，nam(50-200μm)能够预防大鼠颌下腺细胞辐射损伤。

(二)在组织和器官水平，nam(500mg/kg)能够预防大鼠放射性唾液腺损伤。

本发明nam预处理可以提高原代培养大鼠颌下腺细胞的活力，减少辐射损伤后唾液腺细胞中nad合成限速酶烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamidephosphoribosyltransferase,nampt)的降低，提高了细胞nad水平。从而提示nam促进了细胞中线粒体氧化磷酸化代谢及系列以nad为底物的调控线粒体的重要蛋白质(如sirt1/pgc-1α等)的代谢活动。同时，本发明在动物模型中亦发现nam预处理能够提高大鼠颌下腺抵御辐射损伤的能力，nam预处理在组织学水平对颌下腺组织形态结构具有保护作用，减轻辐射损伤，并显著减轻辐射引起的颌下腺腺泡细胞的凋亡。

本发明的有益效果：

本发明通过细胞和动物实验最终明确了nam可有效预防唾液腺放射损伤。本发明中的nam可制备成预防唾液腺放射损伤的药物，为临床治疗放射性唾液腺损伤提供了一种新的方法。本发明提出含nam的药物可以对放射损伤的唾液腺产生如下效果：

1.提高辐射后腺泡细胞存活率；

2.预防唾液腺组织辐射损伤；

3.减轻唾液腺辐射所致的细胞凋亡。

附图说明

图1.nam对辐射损伤颌下腺细胞形态与细胞密度的影响。

图2.nam对辐射损伤颌下腺细胞活力的影响。

图3.nam对辐射损伤颌下腺细胞中nampt蛋白表达水平的影响。

图4.nam对辐射损伤颌下腺细胞nad水平的影响。

图5.nam对辐射损伤大鼠颌下腺组织形态的的影响。

图6.nam对放射损伤大鼠颌下腺细胞凋亡的影响，其中a为细胞形态图，b为tunel法检测定量图。

具体实施方式

下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

下述实施例中的放射损伤为外放射治疗造成的放射损伤。

实施例1：nam预防乳鼠颌下腺细胞放射损伤的实验研究

1.目的

探讨nam对大鼠颌下腺细胞辐射损伤的防治作用。

2.材料与方法

本实施例采用第三代对数生长期的原代培养乳鼠颌下腺细胞，随机分为空白组(control，缩写cont)、单纯nam组(nam)、单纯放射组(ir)和nam预处理组(nam+ir)，以rs2000生物学x-ray辐照仪行5gyx-ray照射(照射前，nam干预组(单纯nam组和nam预处理组)分别以50μm、200μmnam预处理30min，其中50μmnam预处理30min为：以50μm烟酰胺预孵育原代培养乳鼠颌下腺细胞30min，200μmnam预处理30min为：以200μm烟酰胺预孵育原代培养乳鼠颌下腺细胞30min；对照组(空白组和单纯放射组)仅给予同体积的pbs缓冲溶液)。(1)剂量200μmnam预处理30min，各组分别于照射后6h、12h、24h和48h进行形态学观察，并以prestobluecellviabilityassay试剂盒检测细胞活力；(2)剂量50μmnam预处理30min，检测细胞中nampt蛋白的表达水平；(3)剂量50μmnam预处理30min，检测各组细胞nad水平。

3.结果

(1)图1.nam对辐射损伤颌下腺细胞形态与细胞密度的影响。bar＝50μm。光镜下形态学观察发现：nam预处理组细胞生长状态良好，细胞形态与密度与正常细胞相近。

(2)图2.nam对辐射损伤颌下腺细胞活力的影响。*p<0.05与空白对照组比较；#p<0.05与单纯照射组比较。细胞活力实验显示：nam显著促进了辐射后腺泡细胞的细胞活力，从而证明了nam促电离辐射损伤后唾液腺细胞存活的直接作用。

(3)图3.nam对辐射损伤颌下腺细胞中nampt蛋白表达水平的影响。细胞免疫荧光结果提示：nam显著增加了辐射后颌下腺细胞nampt蛋白的表达，表明nam对辐射损伤颌下腺细胞的保护作用与nampt蛋白上调有关。

(4)图4.nam对辐射损伤颌下腺细胞nad水平的影响。*p<0.05与空白对照组比较；#p<0.05与单纯照射组比较。nad检测结果显示：nam显著上调了辐射后颌下腺细胞nad水平，表明nam对辐射损伤细胞的保护作用可能与nad介导的线粒体能量代谢途径相关。

4.结论

nam可有效减轻辐射对颌下腺细胞的损伤，其机制是nam促进nampt合成，提高细胞nad水平，从而改善nad介导的线粒体能量代谢。

实施例2：nam预防大鼠颌下腺组织放射损伤的实验研究

1.目的

探讨nam对颌下腺组织放射损伤的防治作用。

2.材料与方法

本研究采用24只wistar大鼠(体重180-230g，雌雄不限)，随机分为空白组(control，缩写cont)、单纯nam组(nam)、单纯放射组(ir)和nam预处理组(nam+ir)，以rs2000生物学x-ray辐照仪行20gyx-ray照射(照射前半小时，nam干预组(单纯nam组和nam预处理组)经灌胃给予nam500mg/kg，对照组(空白组和单纯放射组)仅给予等体积生理盐水)。7天后，麻醉下取颌下腺组织，制作石蜡切片，行he染色，光镜下观察颌下腺组织形态的变化，tunel法检测各组细胞的原位凋亡。

3.结果

(1)图5.nam对辐射损伤大鼠颌下腺组织形态的的影响。光镜观察发现：单纯辐射组大鼠颌下腺腺体萎缩，空泡性变，核固缩；给予nam的大鼠颌下腺组织较单纯辐射组腺小叶结构清楚，腺泡结构完整，与正常颌下腺组织结构相似。

(2)图6.nam对放射损伤大鼠颌下腺细胞凋亡的影响，其中a为细胞形态图，b为tunel法检测定量图。*p<0.05与空白对照组比较；#p<0.05与单纯照射组比较。tunel结果显示：单纯辐射组大鼠颌下腺组织中凋亡细胞数量较空白对照组显著增多(87±9.07)，而给予nam的颌下腺凋亡细胞明显降低(19.4±4.97)。

4.结论

nam可有效预防唾液腺辐射损伤，抵御辐射所致的细胞凋亡可能是其机制。

对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应仍属于本发明技术方案保护的范围内。