一种蛹虫草浸提液及其制备方法和应用以及蛹虫草饮料与流程

本发明属于食品饮料加工领域，具体涉及一种蛹虫草浸提液及其制备方法和应用以及蛹虫草饮料。

背景技术

蛹虫草(cordycepsmilitaris)又名北虫草，是虫草属的模式种，在生物分类学上与冬虫夏草(cordycepssinensis)同属于虫草属(cordyceps)。蛹虫草含有虫草多糖、虫草素、核苷类、甾醇类等营养成分和人体必需的氨基酸、维生素和过氧化物歧化酶(superoxidedismutase，sod)等多种生物活性物质，在调整中枢神经功能、延长睡眠、抗炎、抗癌、抗菌、抗衰老等方面都有良好功效，是一种良好的营养和滋补佳品。

近年来，随着社会人口的老龄化和生活水平的不断提高，高血脂症、动脉粥样硬化及由之演变而来的心、脑血管血栓栓塞性疾病的发病率逐年增加，它严重威胁人类的生命和健康，其发病率已经超过癌症和糖尿病的发病率跃居人类死亡原因的首位。现有常规的血栓药如组织型纤溶酶原激活剂(t-pa)、t-pa的突变体(reteplase瑞替普酶)、rt-pa的嵌合体等，不仅造价高，疗程长，而且副作用明显，对肝肾损伤较大，还易引发脑出血等风险。因此，对血栓疾病的预防变得极其重要。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种蛹虫草浸提液及其制备方法和应用以及蛹虫草饮料。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种蛹虫草浸提液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将蛹虫草菌丝体烘干、粉碎，得到蛹虫草粉末；

(2)将所述蛹虫草粉末与水混合，浸提1～3h，固液分离，得一次上清液和固体残渣；所述蛹虫草粉末的质量和水的体积比为1g:40～60ml；

(3)将所述固体残渣与水混合，浸提1～3h，固液分离，得二次上清液；所述固体残渣的质量和水的体积比为1g:20～30ml；

(4)将所述一次上清液和所述二次上清液合并，得到蛹虫草浸提液。

优选的，所述步骤(1)粉碎的粒径为50～80目。

优选的，所述步骤(2)或步骤(3)中浸提的温度独立为50～70℃。

优选的，所述步骤(2)或步骤(3)中固液分离的方式为离心，所述离心的转速独立为8000～12000r/min，离心的时间独立为10～20min。

本发明提供了上述制备方法制备得到的蛹虫草浸提液，所述蛹虫草浸提液中纤溶酶的活力为3～5u/ml。

本发明提供了一种具有逆转血栓倾向功能的蛹虫草饮料，所述蛹虫草饮料包括上述的蛹虫草浸提液，在所述蛹虫草饮料中蛹虫草浸提液的体积分数为5％～90％。

优选的，所述蛹虫草饮料还包括玉米肽、玫瑰花浸提液、黑木耳浸提液和决明子浸提液中的一种或多种。

优选的，所述蛹虫草饮料还包括辅料；所述辅料为蜂蜜、柠檬酸和乙基麦芽酚中的一种或多种。

本发明还提供了上述蛹虫草浸提液在制备预防或治疗血栓疾病的药物中的应用。

有益效果：本发明提供了一种蛹虫草浸提液的制备方法，以蛹虫草菌丝体为原料，经烘干、粉碎和两次水提，最终制得了蛹虫草浸提液。本发明提供的制备方法简单。制得的蛹虫草浸提液纤溶酶活力在3～5u/ml，具有良好的逆转血栓倾向功能。

本发明还提供了一种蛹虫草饮料，所述蛹虫草饮料中包括玉米肽、玫瑰花浸提液、黑木耳浸提液或决明子浸提液中的功能因子，不仅具有良好的逆转血栓倾向功能，还具有抗氧化、保护心脑血管、醒脑明目等功效。

附图说明

图1为本发明实施例2所述血纤维蛋白平板，其中图1-a表示蛹虫草浸提液将血纤维蛋白溶解后形成的透明圈，图1-b表示生理盐水对照未形成透明圈；

图2为本发明实施例2所述家兔颈动脉横截面的he染色图，其中，图2-a为正常组横截面，图2-b为实验组横截面。

具体实施方式

本发明提供了一种蛹虫草浸提液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将蛹虫草菌丝体烘干、粉碎，得到蛹虫草粉末；

(2)将所述蛹虫草粉末与水按比例混合，每1g蛹虫草粉末配比40～60ml水，浸提1～3h，固液分离，得一次上清液和固体残渣；

(3)将所述固体残渣与水按比例混合，每1g固体残渣配比20～30ml水，浸提1～3h，固液分离，得二次上清液；

(4)将所述一次上清液和所述二次上清液合并，得到蛹虫草浸提液。

本发明优选先将蛹虫草菌丝体烘干。在本发明中，所述烘干的温度优选为30～40℃，更优选为35℃，在此温度下最有利于保护蛹虫草纤溶酶的活性。所述烘干的时间优选为100～120min，更优选为100min。本发明对所述蛹虫草菌丝体的来源不作特别限定，本领域常规市售的产品均可。本发明对所述烘干所使用的器械不作特别限定，本领域常规用于烘干的工具均可。

得到烘干后的蛹虫草菌丝体后，本发明将所述烘干后的蛹虫草菌丝体进行粉碎，得到蛹虫草粉末。在本发明中，所述粉碎的程度优选为50～80目，更优选为60目。本发明对粉碎用工具和粉碎的方法不作特别限定，本领域常规用于食品粉碎的工具和方法均可。

得到蛹虫草粉末后，本发明将所述蛹虫草粉末与水混合，利用浸提法，将蛹虫草中的有效成分溶入水体中。在本发明中，所述蛹虫草粉末与水的混合比例优选按照每1g蛹虫草粉末配比40～60ml水，更优选按照每1g蛹虫草粉末配比50ml水。所述浸提时的水温优选为50～70℃，更优选为60℃。所述浸提的时间为1～3h，优选为2h。

浸提结束后，本发明将固液分离，得到一次上清液和固体残渣。在本发明中，所述固液分离的方法优选为过滤或离心，更优选为离心。所述离心的转速优选为8000～12000r/min，更优选为10000r/min。所述离心的时间优选为10～20min，更优选为15min。

得到一次上清液和固体残渣后，本发明将将所述固体残渣与水混合，利用浸提法，将固体残渣中残余的有效成分溶入水体中。在本发明中，所述固体残渣与水的混合比例优选按照每1g蛹虫草粉末配比20～30ml水，更优选按照每1g蛹虫草粉末配比25ml水。所述浸提时的水温优选为50～70℃，更优选为60℃。所述浸提的时间为1～3h，优选为2h。

浸提结束后，本发明将固液分离，得到二次上清液。在本发明中，所述固液分离的方法优选为过滤或离心，更优选为离心。所述离心的转速优选为8000～12000r/min，更优选为10000r/min。所述离心的时间优选为10～20min，更优选为15min。

得到二次上清液后，本发明将所述一次上清液和所述二次上清液合并，得到蛹虫草浸提液。经测定，所述蛹虫草浸提液中的纤溶酶活力在3～5u/ml，具有良好的逆转血栓倾向功能。

本发明提供了一种具有逆转血栓倾向功能的蛹虫草饮料，所述蛹虫草饮料包括上述蛹虫草浸提液。在本发明中，所述蛹虫草浸提液在所述蛹虫草饮料中的体积分数优选为5％～90％，更优选为50％～75％。

在本发明中，所述蛹虫草饮料优选还包括其他活性物质，所述其他活性物质优选为玉米肽、玫瑰花浸提液、黑木耳浸提液、决明子浸提液中的一种或多种。当所述活性物质为两种时，所述活性物质优选包括蛹虫草浸提液和黑木耳浸提液，或蛹虫草浸提液和决明子浸提液；当所述活性物质为三种时，所述活性物质优选包括玉米肽、玫瑰花浸提液和蛹虫草浸提液。

在本发明中，所述玉米肽是以玉米蛋白粉为原料，通过蛋白酶水解得到的具有生物活性的小分子肽，在很大的ph范围内能彻底溶解于水，对热极其稳定，安全可靠，无毒副作用，是一种天然的食品蛋白。玉米肽中富含多种人体所必需的氨基酸，并且易于人体吸收。特殊的氨基酸组成和连接方式赋予玉米肽多种生物活性，如抗疲劳、促进乙醇代谢、抗氧化、抗癌等。本发明对所述玉米肽的来源不做特别限定，本领域常规市售玉米肽产品均可。在本发明中，所述玉米肽添加质量优选占所述蛹虫草饮料总质量的0.5～2％，更优选为1％。

在本发明中，所述玫瑰花浸提液的功能是掩盖玉米肽带来的嗅觉上的异味和味觉上的苦味，同时还具有抗氧化的功效。本发明对所述玫瑰花浸提液的制备方法不作特别限定，本领域常规将玫瑰花应用于食品饮料加工的水提方法均可。在本发明中，所述玫瑰花浸提液的添加量优选为所述蛹虫草浸提液体积的1/3～2/3倍，更优选为1/2倍。

在本发明中，所述黑木耳浸提液营养物质丰富，不仅富含钙、磷、铁等人体所需的矿物质元素，还含有卵磷脂、脑磷脂和人体所必需的氨基酸。本发明对所述黑木耳浸提液的制备方法不作特别限定，本领域常规将黑木耳应用于食品饮料加工的水提方法均可。在本发明中，所述黑木耳浸提液的添加量优选为所述蛹虫草浸提液体积的1/5～2/5倍，更优选为1/3倍。

在本发明中，所述决明子浸提液营养丰富，除含有多糖类、蛋白质、脂肪酸、无机元素、氨基酸、维生素外，还含有大黄酚、决明素、蒽醌类、非皂化物质、萘并－吡喃酮类等成分。本发明对所述决明子浸提液的制备方法不作特别限定，本领域常规将决明子应用于食品饮料加工的水提方法均可。在本发明中，所述决明子浸提液的添加量优选为所述蛹虫草浸提液体积的1/5～2/5倍，更优选为1/3倍。

在本发明中，所述蛹虫草饮料优选还包括辅料，所述辅料为蜂蜜、柠檬酸、乙基麦芽酚中的一种或多种。当所述辅料为两种时，所述辅料优选包括蜂蜜和柠檬酸；当所述活性物质包括玉米肽时，所述辅料优选包括乙基麦芽酚。

在本发明中，所述蜂蜜除了富含糖类物质外，还含有少量的维生素、氨基酸、蛋白质、有机酸及多种人体必需的微量元素。此外，蜂蜜中还含有多种酶类物质，主要包含葡萄糖氧化酶、淀粉酶及转化酶等，其中转化酶可将蜂蜜中蔗糖转化为具有旋光性的单糖，即α-果糖和α-葡萄糖。在本发明中，所述蜂蜜添加质量优选占所述蛹虫草饮料总质量的3～10％，更优选为8％。

在本发明中，所述柠檬酸用于调节蛹虫草饮料的酸度。所述柠檬酸添加质量优选占所述蛹虫草饮料总质量的0.005～0.02％，更优选为0.01～0.015％。

在本发明中，所述乙基麦芽酚用于提升蛹虫草饮料的香度，去除玉米肽或其他成分的苦臭味。所述玉米肽添加质量优选占所述蛹虫草饮料总质量的0.05～0.15％，更优选为0.1％。

本发明还提供了上述蛹虫草浸提液在制备预防或治疗血栓疾病的药物中的应用。以上述蛹虫草浸提液为唯一活性成分，或以上述蛹虫草浸提液配合其他活性成分，使用本领域可以接受的载体，采用本领域常规药物制备方法即可制得本发明所述预防或治疗血栓疾病的药物。在本发明中，所述其他药用活性成分包括真菌多糖、虫草素、小分子活性肽、类黄酮化合物等，其他药用活性成分与蛹虫草浸提液的质量配比为0～100:1。

下面结合实施例对本发明提供的一种蛹虫草浸提液及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

将蛹虫草菌丝体烘干、粉碎，过60目筛，在60℃、料液比1:50条件下用水浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，按料液比1:25向沉淀中加入水，相同条件下再次浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，将两次上清液合并，即为蛹虫草浸提液。

实施例2

(1)采用血纤维蛋白平板法证明蛹虫草浸提液具有溶解血纤维蛋白的作用。

血纤维蛋白平板含有血纤维蛋白原和凝血酶，可溶性的血纤维蛋白原在凝血酶的作用下形成纤维蛋白单体，血纤维蛋白单体自发缔结，多聚化形成不溶的肉眼可见的血纤维蛋白凝胶，将实施例1所述蛹虫草浸提液加到此平板凝胶表面，经过短时间培养后，即可将血纤维蛋白溶解，在平板凝胶表面形成肉眼可见的透明溶圈。

血纤维蛋白平板的配制：以配制10个平板为例，将0.25g琼脂糖溶于50ml生理盐水中，置于45℃水浴保温30min后，再加入200u的凝血酶混匀；0.2g牛血纤维蛋白原溶于巴比妥钠缓冲液(ph7.8)，置于45℃水浴中保温5min，分别取5ml纤维蛋白原溶液和5ml凝血酶溶液混合倒入平板(直径9cm)中，水平静置30min后放入4℃备用。

纤溶酶酶活力标准曲线制备：尿激酶标准品的配制，将50000u/支的尿激酶用生理盐水稀释为30、25、20、15、10、5、1u/ml贮存备用。每一浓度的尿激酶标准品取10ul×3点平板，37℃保温6h，量直径取平均值。以x为溶圈直径(cm)，y为酶活性(u/ml)所得回归方程y＝0.1219e^4.6981x，r²＝0.978。

蛹虫草浸提液酶活力测定：用微量移液器取10μl蛹虫草浸提液点在血纤维蛋白平板表面，每个平行重复三次，37℃保温6h后测定平板表面形成的透明溶圈直径(详见图1)，以生理盐水作为对照，将溶圈直径带入公式即可计算出酶活力。

在图1中，图1-a代表蛹虫草浸提液将血纤维蛋白溶解后形成的透明圈，图1-b代表生理盐水对照未形成透明圈。图1表明，本发明制备得到的蛹虫草浸提液具有良好的逆转血栓倾向的功能。

(2)本发明用实施例1所述蛹虫草浸提液饲喂大鼠血栓倾向动物模型，大鼠适应性喂养一周后，直接饲喂高脂饲料17d，进行造模，正常组喂基础饲料，模型组饲喂高脂饲料和饮用水24天，正常组饲喂基础饲料和饮用水24天，实验组饲喂高脂饲料和饮用水17天后，再饲喂基础饲料和蛹虫草浸提液7天。24天晚上禁食禁水，于25天处死，取心脏血，测定血浆中各指标含量。经过大鼠血栓倾向动物模型试验证明，蛹虫草纤溶酶可以有效降低动物模型血清中总胆固醇、甘油三脂和高密度脂蛋白胆固醇水平，并能升高低密度脂蛋白胆固醇含量；有效的延长血浆凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间，同时降低了纤维蛋白原含量；降低纤溶酶原激活剂抑制物和纤溶酶原活性含量、同时升高组织纤溶酶原激活剂活性含量和纤溶酶活性，说明其可以有效的预防和逆转有血栓倾向的高血脂症。从内脏指数看，与血栓倾向模型组比较，蛹虫草纤溶酶对大鼠内脏具有一定的保护作用。

(3)本发明用实施例1所述蛹虫草浸提液饲喂家兔动脉血栓模型，实验采用正常家兔，正常组对其灌胃生理盐水，实验组灌胃蛹虫草浸提液。于末次灌胃2h后，通过改良挂线法进行家兔动脉血栓模型的建立。实验结束后，处死家兔，制作家兔颈动脉切片，并对其进行病理学观察，结果如图2所示。图2结果表明，正常组家兔颈动脉管腔内充满血栓，血管内弹力膜损伤严重，蛹虫草实验组家兔颈动脉管腔内存在血栓，但对家兔动脉血栓已有部分软化、溶解、吸收，血管内膜未见明显损伤，说明其对血栓形成有预防作用。

实施例3

将蛹虫草菌丝体烘干、粉碎，过60目筛，在60℃、料液比1:50条件下用水浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，按料液比1:25向沉淀中加入水，相同条件下再次浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，将两次上清液合并，即为蛹虫草浸提液。

取1g玫瑰花加入500ml水在80℃下浸提30min，制得玫瑰花浸提液。

按照蛹虫草浸提液:玫瑰花水＝2:1的体积比，将蛹虫草浸提液和玫瑰花浸提液混合，然后加入玉米肽、乙基麦芽酚、蜂蜜和柠檬酸，制得具有逆转血栓倾向功能的蛹虫草饮料。其中，以所述蛹虫草饮料为基准，各组分添加的质量百分比如下：1％玉米肽、0.1％乙基麦芽酚、8％蜂蜜、0.015％柠檬酸。

经测定，所述蛹虫草饮料中的纤溶酶活力为2.78u/ml；虫草素含量为12.43μg/ml；多糖含量为199mg/ml；对于dpph自由基清除能力，每毫升饮料中约相当于含有0.3mg/ml的vc；对于·oh自由基清除能力，每毫升饮料中约相当于含有0.42mg/ml的vc；对于还原力能力，每毫升饮料中约相当于含有0.25mg/ml的vc。制得的饮料成品具有溶解血栓、抗氧化、抗疲劳、提高免体力等功效。

实施例4

将蛹虫草菌丝体烘干、粉碎，过60目筛，在60℃、料液比1:50条件下用水浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，按料液比1:25向沉淀中加入水，相同条件下再次浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，将两次上清液合并，即为蛹虫草浸提液。

取干黑木耳用水泡发，去除根部洗净，按干重1:200进行匀浆，按湿重1:5在60℃下浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，按料液比1:2.5向沉淀中加入水，相同条件下再次浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，将两次上清液合并，即为黑木耳浸提液。

按照蛹虫草浸提液：黑木耳浸提液＝3:1的体积比，将蛹虫草浸提液和黑木耳浸提液混合，然后加入乙基麦芽酚、蜂蜜和柠檬酸，制得具有逆转血栓倾向功能的蛹虫草饮料。其中，以所述蛹虫草饮料为基准，各组分添加的质量百分比如下：0.1％乙基麦芽酚、8％的蜂蜜、0.015％的柠檬酸。

经测定，所述蛹虫草饮料中的纤溶酶活力为4.28u/ml；虫草素含量为9.32μg/ml；多糖含量为180mg/ml；对于dpph自由基清除能力，每毫升饮料中约相当于含有0.03mg/ml的vc；对于·oh自由基清除能力，每毫升饮料中约相当于含有0.42mg/ml的vc；对于还原力能力，每毫升饮料中约相当于含有0.188mg/ml的vc。制得的饮料成品具有溶解血栓、抗氧化、抗癌、提高免体力等功效。

实施例5

将蛹虫草菌丝体烘干、粉碎，过60目筛，在60℃、料液比1:50条件下用水浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，按料液比1:25向沉淀中加入水，相同条件下再次浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，将两次上清液合并，即为蛹虫草浸提液。

取炒熟烘干粉碎后的决明子，在60℃、料液比1:20条件下用水浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，按料液比1:10向沉淀中加入水，相同条件下再次浸提2h，冷却，10000r/min离心15min，获得上清液，将两次上清液合并，即为决明子浸提液。

按照蛹虫草浸提液：决明子浸提液＝3:1的体积比，将蛹虫草浸提液和决明子浸提液混合，然后加入蜂蜜和柠檬酸，制得具有逆转血栓倾向功能的蛹虫草饮料。其中，以所述蛹虫草饮料为基准，各组分添加的质量百分比如下：8％的蜂蜜、0.01％的柠檬酸。

经测定，所述蛹虫草饮料中的纤溶酶活力为3.09u/ml；虫草素含量为9.32μg/ml；多糖含量为189mg/ml；对于dpph自由基清除能力，每毫升饮料中约相当于含有0.03mg/ml的vc；对于·oh自由基清除能力，每毫升饮料中约相当于含有0.2mg/ml的vc；对于还原力能力，每毫升饮料中约相当于含有0.188mg/ml的vc。制得的饮料成品具有溶解血栓、抗氧化、抗疲劳、提高免体力等功效。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。