一种埃米银口服液及其制备方法与其在治疗胃癌中的应用与流程

本发明属于医药技术领域，涉及一种应用于抑制胃癌细胞、促进组织修复的埃米银口服液及其制备方法与其在治疗胃癌中的应用。

背景技术：

近二十年来，亚洲地区(尤其是中国、韩国和日本)的胃癌发病率和死亡率呈逐年上升趋势，并且明显高于欧美等国家。而且，胃癌的发病率在世界癌症发病率中位居第四位，死亡率位居第二位，严重威胁着人类健康。我国是胃癌高发国家，胃癌发病例数和死亡例数分别占全球胃癌发病和死亡的42.6％和45.0％，在全球183个国家中位于发病率第5位、死亡率第6位。因此，胃癌是严重危害中国居民健康的主要疾病之一。目前我国对于胃癌的治疗方法是在确诊胃癌后，先经过相关的检查，再明确病理分期。对于i、ii、iii期的病人，如果状态允许建议手术治疗，术后根据病人的病理分期、状态等因素可能还要进行辅助放化疗、免疫治疗等；对于iv期也就是通常说的晚期患者，建议行以化疗为主的舒缓治疗。部分病人根据发病原因，可以考虑联合靶向治疗或者参加临床研究。上述的治疗方法一般需要切除部分乃至全部胃脏，术后的化疗也会严重影响癌症病人的生活质量。对于晚期患者的舒缓治疗副作用也大，无法兼顾治疗及生活质量，因此在胃癌治疗领域中寻找一种新的高效无毒的药物仍是迫在眉睫的事情。

技术实现要素：

为了解决上述治疗方法存在的问题，本发明提供了一种埃米银口服液及其制备方法与其在治疗胃癌中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种埃米银口服液，其成分配比如下：埃米级单质银粉末：0.5～1.0g/l；药用蔗糖：50.0～100.0g/l；高纯度蒸馏水：899.0～949.5g/l；其中：所述埃米级单质银粉末中银的纯度≥99.99％，银颗粒粒径为1～30埃米(ang)，银颗粒形状为球形或椭圆形，椭圆形的粒径指其长直径。

一种上述埃米银口服液的制备方法，包括如下步骤：

步骤一、将埃米级单质银粉末加入高纯度蒸馏水中，得到埃米银溶液；

步骤二、使用超声波设备对步骤一的埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为5～15kw，频率为30～60khz，分散时间为50～70s；

步骤三、向步骤二分散后的埃米银溶液中加入药用蔗糖，并再次使用超声波设备对埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为10～20kw，频率为110～150khz，分散时间为10～20s；

步骤四、将步骤三分散后的埃米银溶液进行加热灭菌，控制加热灭菌温度为100～120℃，时间为30～60分钟，于洁净无菌环境下自然冷却，得到埃米银口服液。

上述埃米银口服液具有抑制胃癌细胞、促进组织修复的作用，可用于治疗胃癌，其使用方式为直接吞服，服用剂量需根据具体病情决定，一般是0.0002mg/kg，一日两次，6天一个疗程。

相比于现有技术，本发明具有如下优点：

1、本发明的埃米银注射液具有显著抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力。恶性肿瘤细胞膜表面呈较高的负电荷性，负电荷的增加与膜表面的酸性粘多糖、dna、蛋白质的侧链电荷有关，特别是与唾液酸量的增加或显露有关。而埃米银和银离子因为带有正电荷，均能与细胞内外带负电的蛋白及核酸分子结合，干扰蛋白的合成和dna的复制与转录，从而破坏癌细胞正常的生命活动。相比目前临床一线使用的胃癌治疗口服用药如5-fu类药物、卡培他滨或者s-1，其副作用要更为轻微。

2、本发明采取的药品原料和溶剂均无毒无害，制备工艺简单，可全程使用全自动化生产线进行批量生产，而且生产过程中所产生的废液只含有果糖及微量银离子，只需去除有机化及采取沉淀法回收废银即可，过程简单绿色环保。

附图说明

图1为埃米银口服液对胃癌细胞活力的影响；

图2为埃米银口服液对胃癌细胞克隆形成能力的影响；

图3为埃米银口服液对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响；

图4为各组小鼠体重及各组织重量；

图5为埃米银对胃壁结构、肝脏和脾脏的内部结构和形态；

图6为埃米银对胃、肝脏和脾脏内活化的caspase-3表达量的影响。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

实施例1：

本实施例提供了一种埃米银口服液，所述埃米银口服液可用于治疗胃癌，其含有如下浓度的成分：埃米级单质银粉末：1.0g/l；药用蔗糖：100.0g/l；高纯度蒸馏水：899.0g/l。

埃米银材料是近年来新兴的一种埃米技术，其是将单质金属银和其他含银化合物利用物理或化学的方法制成埃米级别的金属粉末，粒径大多为100埃米以下，故称为埃米银。获取流程大致如下：输入一定尺寸以下的金属丝至爆炸室并采用高压电离爆破，然后通风收集金属蒸汽，利用通风系统送至缓冲区，进行冷却、消磁、超声波打散、旋风式风力分离分级收集粉体至保存罐，再加入惰性气体进行钝化工作获得成品。

本实施例中，所述埃米级单质银粉末中银的纯度≥99.99％，银颗粒粒径为50埃米(ang)，银颗粒形状为椭圆形。

本实施例中，所述埃米银口服液的制备步骤如下：

步骤一、将粒径为5ang的椭圆形埃米级单质银粉末加入到高纯度蒸馏水中，得到球形埃米级单质银粉末浓度为1.0g/l的椭圆形埃米银溶液；

步骤二、使用超声波设备对步骤一的椭圆形埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为5kw，频率为40khz，分散时间为60s；

步骤三、向步骤二分散后的椭圆形埃米银溶液中加入药用蔗糖，控制药用蔗糖的浓度为100g/l，然后再次使用超声波设备对椭圆形埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为10kw，频率为120khz，分散时间为10s；

步骤四、将步骤三分散后的椭圆形埃米银溶液加热到100℃，灭菌30分钟，然后于洁净无菌环境下自然冷却，得到埃米银口服液。

实施例2：

本实施例与实施例1不同的是，所述埃米银口服液含有如下浓度的成分：埃米级单质银粉末：0.8g/l；药用蔗糖：80.0g/l；高纯度蒸馏水：919.2g/l，具体制备步骤如下：

步骤一、将粒径为25ang的球形埃米级单质银粉末加入到高纯度蒸馏水中，得到球形埃米级单质银粉末浓度为0.8g/l的球形埃米银溶液；

步骤二、使用超声波设备对步骤一的球形埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为15kw，频率为50khz，分散时间为60s；

步骤三、向步骤二分散后的球形埃米银溶液中加入药用蔗糖，控制药用蔗糖的浓度为80g/l，然后再次使用超声波设备对球形埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为15kw，频率为140khz，分散时间为15s；

步骤四、将步骤三分散后的球形埃米银溶液加热到100℃，灭菌30分钟，然后于洁净无菌环境下自然冷却，得到埃米银口服液。

实施例3：

本实施例与实施例1不同的是，所述埃米银口服液含有如下浓度的成分：埃米级单质银粉末：0.5g/l；药用蔗糖：50.0g/l；高纯度蒸馏水：949.5g/l，具体制备步骤如下：

步骤一、将粒径为10ang的球形埃米级单质银粉末加入到高纯度蒸馏水中，得到球形埃米级单质银粉末浓度为0.5g/l的球形埃米银溶液；

步骤二、使用超声波设备对步骤一的球形埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为8kw，频率为50khz，分散时间为60s；

步骤三、向步骤二分散后的球形埃米银溶液中加入药用蔗糖，控制药用蔗糖的浓度为50g/l，然后再次使用超声波设备对球形埃米银溶液进行分散处理，控制超声波功率为15kw，频率为150khz，分散时间为15s；

步骤四、将步骤三分散后的球形埃米银溶液加热到100℃，灭菌30分钟，然后于洁净无菌环境下自然冷却，得到埃米银口服液。

埃米银口服液的抗癌机理基本上可以归结为以下三点：1、能与癌细胞的表面蛋白等接触或者是埃米银直接穿过细胞膜进入胞体，介导癌细胞细胞膜的破裂，从而导致癌细胞内容物的释放，诱导癌细胞的死亡；2、埃米银表面能持续释放银离子，导致局部区域银离子浓度较高，进而介导更强的抗癌效应；3、埃米银和其所释放的银离子能诱导胞内活性氧(ros)产生，引起癌细胞dna损伤和蛋白氧化，诱导癌细胞凋亡。

在细胞实验研究中，本发明使用了sgc-7901胃癌细胞株。首先，采用细胞活力试剂盒(cck-8法)分析了埃米银对胃癌细胞的毒性。如图1所示，当用梯度浓度的埃米银分别处理胃癌细胞24小时或48小时后，经计算得到埃米银对胃癌细胞的半数致死浓度分别为31ng/μl和13ng/μl。

同时，采用细胞平板克隆形成实验分析了埃米银对胃癌细胞增殖能力的影响。正常的单个胃癌细胞能够形成细胞克隆集落，但2ng/μl的埃米银就可以抑制约80％的细胞克隆，4ng/μl的埃米银甚至可以抑制约100％的细胞克隆(图2)。

肿瘤细胞的迁移和侵袭能力是评价肿瘤在体内发生和发展的重要指标。本发明采用划痕实验在细胞水平验证了不同浓度的埃米银梯度地抑制了胃癌细胞的迁移和侵袭能力(图3)。

本发明采用c57bl/6小鼠建立了埃米银的口服给药模型。小鼠被随机地分为3组：溶剂对照组、低剂量埃米银组(500ppm)和高剂量埃米银组(1000ppm)。3组小鼠被连续口服给予相应剂量药物15天。在第16天，上述3组小鼠被安乐死，收集小鼠的血清、胃、肝、脾、肾、肺、脑和心等主要脏器，并记录小鼠体重和各个脏器的重量。从宏观分析，各个主要脏器的外观没有明显差异。同时，上述3组小鼠的体重和主要脏器的重量没有较大改变(图4)。

将小鼠的胃、肝脏和脾脏进行固定和石蜡切片，采用h&e染色法分析脏器内部的组织结构和细胞形态。实验结果表明，高低剂量的埃米银都没有对胃壁结构、肝脏和脾脏的内部结构和形态造成显著差异(图5)。血清中主要反映肝损伤的指标总胆红素和反映肾损伤的指标肌酐也没有明显上升(表1)。

表1不同处理组小鼠血清中总胆红素和肌酐的含量

由于埃米银杀死肿瘤细胞的分子机制是促进肿瘤细胞的凋亡，因此，本发明也采用免疫组织化学法分析了胃、肝脏和脾脏内凋亡细胞的数量有无增加。caspase-3是一种凋亡相关蛋白，是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶，也是细胞杀伤机制的重要组成部分。caspase-3主要在细胞浆表达，caspase-3阳性表达越高，表示发生凋亡的细胞越多。实验结果表明，高低剂量的埃米银都没有造成胃壁、肝脏和脾脏内的caspase-3的表达量上升和凋亡细胞的增加(图6)。

综上所述，埃米银注射液具有显著抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力。埃米银经口服连续给药15天后，主要脏器的外观和重量无明显改变；h&e染色和免疫组化分析表明，埃米银给药后主要脏器的组织结构和活化的caspase-3的表达量无明显改变。