一种治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方及其应用

1.本发明属于医药领域，特别涉及一种治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方及其应用。


背景技术：

2.绝经后骨质疏松症是严重威胁中老年人健康的公共卫生问题，全球患者约2亿。在我国60岁以上的女性中，骨质疏松的患病率高达40％～50％，其中约30％～50％将经历骨质疏松相关的骨折，这将非常严重地影响老年人的身体健康和生活质量，导致缩短寿命。在我国，据统计，骨质疏松及其相关骨折患者超过9000万，年医药费用超250亿元，严重增加了国家及家庭财力与人力负担(《骨质疏松症中国白皮书》，2009)。虽然目前市场上治疗骨质疏松症的药物品种繁多，但大多数骨质疏松治疗的药物仍存在安全性差、副作用大以及不能有效减少骨折风险等诸多弊端。
3.绝经后骨质疏松症主要原因是雌激素缺乏，发生于女性患者，遗传、生活方式、营养等多因素均参与发病均与发病有关，骨质疏松症家族史、或具有影响骨量的特殊基因的妇女、钙摄入不足、缺乏体力活动、大量吸烟及饮酒、早绝经或绝经前行双侧卵巢切除术者均为高危因素。目前治疗骨质疏松症药物主要有基本补充剂，抑制骨吸收药物和促骨形成药物。基本补充剂主要有钙剂和维生素d。临床上抑制破骨细胞的骨吸收的药物主要有双磷酸盐、雌激素及其受体调节剂、降钙素等。促进骨形成的药物主要有甲状旁腺激素、锶盐类药物和维生素k2等。但药物的毒副作用限制了长期使用，例如雌激素及其受体调节剂可增加引起乳腺癌和子宫出血以及静脉血栓形成的风险；双膦酸盐类药物可引起下颌骨坏死和非典型股骨骨折的副作用。因此，寻求有效的治疗药物仍是目前亟需研究的问题。
4.骨质疏松属中医属“骨痿”、“骨痹”等范畴。中医认为，“肾主骨、生髓藏精”，说明人骨骼的生长、发育均依赖于肾精。特别是妇女绝经以后，肾气由盛转衰，往往会出现肾精亏虚，肾精虚少，导致骨髓的空虚，不能滋养骨骼，便会出现骨失所养，引发骨质疏松，此外随着年龄增长，往往会伴随着血瘀的发生，血瘀而致骨骼营养障碍，加重骨质疏松的发生。治疗当以补肾壮骨活血为法，诸多中药组方应用于治疗，但存在着携带、服用不便，成分不明确等不足。


技术实现要素：

5.针对上述内容，为弥补现有治疗绝经后骨质疏松症药物的不足，本发明的首要目的在于提供一种治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方。
6.本发明的另一目的在于提供所述的治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方的应用。
7.本发明的目的通过下述技术方案实现：
8.一种治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方，包含如下按重量比计算的中药活性成分，枸杞多糖：淫羊藿苷：虎杖苷：槲皮素：丹参素钠＝(50～350):(6～100):(50～
180):(1～10):(10～100)，计量单位为mg，计量区间为最小和最大剂量。
9.所述的治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方优选为如下按重量比计算的任意一组：
10.(1)枸杞多糖：淫羊藿苷：虎杖苷：槲皮素：丹参素钠＝50:6:50:1:10；
11.(2)枸杞多糖：淫羊藿苷：虎杖苷：槲皮素：丹参素钠＝350:50:180:10:100；
12.(3)枸杞多糖：淫羊藿苷：虎杖苷：槲皮素：丹参素钠＝200:30:120:5:60；
13.(4)枸杞多糖：淫羊藿苷：虎杖苷：槲皮素：丹参素钠＝50:100:120:1:100；
14.(5)枸杞多糖：淫羊藿苷：虎杖苷：槲皮素：丹参素钠＝80:15:80:3:20；
15.(6)枸杞多糖：淫羊藿苷：虎杖苷：槲皮素：丹参素钠＝200:30:160:8:80。
16.优选的，所述的治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方中所述枸杞多糖经高效液相色谱法(hlpc法)测定，纯度在90％以上；所述淫羊藿苷、虎杖苷、槲皮素、丹参素钠分别经hlpc法测定，其含量均不低于98％。
17.所述的治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方在制备治疗绝经后骨质疏松症药物中的应用。
18.所述的治疗绝经后骨质疏松症药物还含有一种或多种药学上可接受的辅料。
19.所述的辅料优选为赋形剂、缓释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、抗菌剂、芳香剂、抗氧剂、ph调节剂、保护剂、稀释剂、润滑剂、溶媒、基质或载体材料中的至少一种。
20.所述的治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方可以采用本领域的常规方法制备成各种剂型，例如颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊或口服液等口服制剂。
21.本发明选取补肾壮骨和活血化瘀中药的活性成分，该方由枸杞多糖、淫羊藿苷、虎杖苷、槲皮素、丹参素钠组成，现代药理学研究表明，枸杞多糖是中药枸杞的活性成分，具有调节免疫、保护生殖系统功能、调节血脂和降血糖、延缓衰老多种功效，并可以促进成骨细胞的增殖和分化。淫羊藿苷具有增强性腺功能、调节机体免疫功能、促进骨生长、延缓衰老、对心、脑血管系统的保护作用，可以促进成骨细胞分化，抑制破骨细胞分化。虎杖苷是中药虎杖的活性成分，可改善微循环、抗氧化、降血脂、抗脂质过氧化等作用，也有较好的促成骨细胞增殖和分化的作用。槲皮素存在于多种植物及中药中，具有较好的祛痰、止咳作用，还有降低血压、降血脂、增加冠脉血流量等作用，具有较强的促成骨细胞分化的作用。丹参素钠是丹参活性成分丹参素的钠盐，相比丹参素具有化学稳定性好的优势，具有抑制血小板聚集、抗菌消炎、增强机体免疫、抗动脉粥样硬化、降血脂作用等作用，可以提高去势大鼠的骨量，抑制破骨细胞分化。这五种中药活性成分组合方不仅符合中医补肾活血治疗绝经后骨质疏松的原则，也符合了现代医学的药理机制，实验显示该组方能够提高去卵巢大鼠的骨密度，改善骨微细结构等，相比传统中药复方，具有成分清楚、剂型小、方便携带等优势，并且选取的成分符合中药传统组方原则。对其进一步研究开发，将有较好的社会和经济意义。
22.本发明涉及的中药活性成分简介如下：
23.1.枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides)，溶于水，蛋白多糖，分子量为22～25kd；由六种己碳糖(鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖)组成的多糖侧链和18种氨基酸组成的蛋白主链，通过β型-糖苷键或α型吡喃糖/呋喃糖，以glycan-o-der
方式连接。
24.2.淫羊藿苷(icraiin)，分子式：c
33
h
40
o
15
；分子量：676.6617；cas号：56692-02-5；化学结构式：
[0025][0026]
3.虎杖苷(polydatin)，分子式：c
20
h
22
o8；分子量：390.40；cas号：27208-80-6；化学结构式：
[0027][0028]
4.槲皮素(quercetin)，分子式：c
15
h
10
o7；分子量：302.23；cas号：117-39-5；化学结构式：
[0029][0030]
5.丹参素钠(salvianic acid a sodium)，分子式：c9h9nao5；分子量：220.16；cas号：67920-52-9；化学结构式：
[0031][0032]
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0033]
本发明原料丰富，制备方法便捷，有效用于治疗绝经后骨质疏松症，可开发为治疗绝经后骨质疏松症的新药，将具有较高的经济和社会效益，是中药上的创新。
附图说明
[0034]
图1是各组大鼠股骨骨组织骨小梁he染色结果照片图。
[0035]
图2是各组大鼠股骨骨小梁微ct检测结果图。
[0036]
图3是各组大鼠腰椎微ct检测结果图。
具体实施方式
[0037]
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0038]
实施例1
[0039]
本发明在具体实施中，本发明中药活性成分组分方由枸杞多糖50mg、淫羊藿苷6mg、虎杖苷50mg、槲皮素1mg、丹参素钠10mg组成。
[0040]
实施例2
[0041]
本发明在具体实施中，本发明中药活性成分组分方由枸杞多糖350mg、淫羊藿苷50mg、虎杖苷180mg、槲皮素10mg、丹参素钠100mg组成。
[0042]
实施例3
[0043]
本发明在具体实施中，本发明中药活性成分组分方由枸杞多糖200mg、淫羊藿苷30mg、虎杖苷120mg、槲皮素5mg、丹参素钠60mg组成。
[0044]
实施例4
[0045]
本发明在具体实施中，本发明中药活性成分组分方由枸杞多糖50mg、淫羊藿苷100mg、虎杖苷120mg、槲皮素1mg、丹参素钠100mg组成。
[0046]
实施例5
[0047]
本发明在具体实施中，本发明中药活性成分组分方由枸杞多糖80mg、淫羊藿苷15mg、虎杖苷80mg、槲皮素3mg、丹参素钠20mg组成。
[0048]
实施例6
[0049]
本发明在具体实施中，本发明中药活性成分组分方由枸杞多糖200mg、淫羊藿苷30mg、虎杖苷160mg、槲皮素8mg、丹参素钠80mg组成。
[0050]
实施例7
[0051]
实施例1～6任一所述的中药组分方混匀，按一定比例加入医药制剂上可以接受的辅料，按照常规制剂方法分别制成胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂或口服液。
[0052]
上述实施例中所述枸杞多糖经高效液相色谱法(hlpc法)测定，纯度在90％以上；所述淫羊藿苷、虎杖苷、槲皮素、丹参素钠分别经hlpc法测定，其含量均不低于98％。
[0053]
效果实施例1药物疗效研究
[0054]
上述仅是给出的几个实施例，在研制过程中，发明人经反复多次实验，均取得了相同或相似的结果，方法有效可行，原料丰富，具有较好的实际应用价值。本发明治疗绝经后骨质疏松症的中药活性成分组方，具有补肾壮骨活血的功效，有效用于绝经后骨质疏松症的治疗。本发明反复研究了各实施例所得的该组方治疗模型大鼠绝经后骨质疏松症的疗效，均取得了满意的治疗效果，有关研究资料如下：
[0055]
1.实验材料
[0056]
1.1动物：雌性spf级sd大鼠72只，6月龄，体重380
±
20g(动物合格证号：scxk(粤)2013-0002，广东省实验动物中心)。
[0057]
1.2药物：
①
钙尔奇d片(美国惠氏-百宫制药有限公司，0.1g/片)，临用前将药物研细，加生理盐水配成1.0mg/ml的混悬液；
②
中药活性成分组方：枸杞多糖购于北京索莱宝科
技有限公司(sp9311，北京)，淫羊藿苷(110737，北京)、虎杖苷(111575，北京)、槲皮素(100081，北京)、丹参素钠(110855，北京)购于中国食品药品检定研究院。
[0058]
1.3主要仪器：prodigy型双能x线骨密度仪：ge公司，美国；micro-ct仪：zkks-sharp-mct。硬组织电动切片机leica2500型，德国。leicaqwinv3.2图象分析系统，德国。
[0059]
2.实验方法
[0060]
2.1模型制备
[0061]
大鼠术前12小时禁食不禁水，手术前称重后腹腔注射2％戊巴比妥钠(0.2ml/100g)全身麻醉，待大鼠麻醉静卧不动后，腹面向上仰卧位固定于板上。使用剃毛刀在下腹正中手术开口区剃毛，铺手术洞巾，碘伏、酒精消毒，取大鼠下腹部正中，沿腹白线纵行切口2～3cm，打开腹腔，逐层分离肌层及结缔组织，暴露双侧卵巢，卵巢是呈深粉红色颗粒状组织，多被其周围脂肪组织所掩盖，提起后用丝线结扎其周围相连血管及输卵管等组织，切除卵巢，逐层缝合腹膜层、肌层、皮层关腹，75％医用酒精消毒腹部伤口。为预防感染，腹腔注射青霉素1ml/只(无菌生理盐水配制，8万单位/ml)。假手术组开腹后切除少量脂肪保留卵巢，其他处理同前。
[0062]
2.2分组和给药
[0063]
大鼠随机分为假手术组、模型组、组方低剂量组、组方中剂量组、组方高剂量组、钙尔奇d组，每组12只。造模12周，第13周起，假手术组、模型组生理盐水灌胃；组方低、中、高剂量组采用中药活性成方组方(实施例1组方)36.0、72.0、114.0mg/kg/d灌胃，用前用生理盐水配成混悬液；钙尔奇d组采用钙尔奇d(0.1g/kg/d)灌胃，每天1次，第24周结束后取材。
[0064]
2.3取材与指标测定
[0065]
2.3.1一般情况：观察大鼠的精神状况、活动、皮毛、分泌物、进食进水量变化、大小便，以及体重等体征的变化。
[0066]
2.3.2骨密度的检测：分别在各组大鼠干预的第4周、第8周、第12周，每组随机抽取4只，腹腔注射2％戊巴比妥钠进行麻醉，将大鼠腹面朝下平摊在扫描板上，四肢展开，双能x线骨密度分析仪(dxa)开启检测扫描，获得骨密度扫描图像，测量每组大鼠全身、头部、第4、5腰椎、股骨、股骨近端、股骨远端、肱骨的骨密度(bmd)。采用小动物bmd软件分析数据，比较各组大鼠不同时期各个部位骨密度。
[0067]
2.3.3骨小梁微结构的检测：术后24周，用乙醚麻醉并心脏取血处死全部大鼠，取新鲜骨组织固定、包埋，以制作骨切片。骨组织he染色观察骨小梁结构：
[0068]
(1)骨组织的脱钙处理，股骨和腰椎标本取材后经自动脱水机脱水，并用一次性的注射器针探测性刺骨组织，直到可轻易刺穿后，取出，放入水流中冲淋12h。
[0069]
(2)骨组织切片：取出股骨和腰椎组织，流水下冲洗30min；浸入95％乙醇i，95％乙醇ii中各2h；依次浸入无水乙醇i，ii，iii，浸泡的时间依次为1h，1h，0.5h；依次浸入二甲苯i，ii，iii，浸泡时间依次为1h，1h，0.5h；石蜡i，ii，iii分别处理0.5h，1h，0.5h；包埋机进行包埋；轮转切片机切片，选择远端干骺端切成厚度约3μm的连续切片，贴在防脱玻片上，65℃烘烤至少1h。(3)染色：将烘干后的切片取出，浸入二甲苯i，ii，各浸泡5min脱蜡；浸入无水乙醇i，ii各1min；接着依次使用95％，80％，70％乙醇处理，时间依次为：1min、1min、5min，蒸馏水，1min；切片使用苏木素染色10min；流水冲洗1min；l％的盐酸3s；流水冲洗12min；蒸馏水冲洗2min；伊红染色20s；自来水流水冲洗，3s；80％乙醇，30s；90％，95％乙醇，各1min；
无水乙醇i，ii，浸泡各3min；切片浸入二甲苯i，1min；二甲苯ii，1min；二甲苯iii，1min透明；中性树胶封片。
[0070]
使用光学显微镜观察股骨骨组织显微结构形态学变化，包括骨小梁数目、骨小梁厚度、骨小梁间隙、骨髓腔大小、骨小梁连接点数及游离末端数的变化等。使用leica dmla全自动显微镜及leica qwinv3.2全自动图象分析系统对大鼠胫骨近端生长板上方腔隙的松质骨进行测定分析。用全自动图像分析系统直接测出的参数、单位、及测量方法见表1，然后通过公式对直接测出的参数进行计算(计算公式见表2)，用于分析。
[0071]
表1骨小梁各参数的名称、单位
[0072][0073]
计算所得的参数如下：
[0074]
骨小梁面积百分比：指骨小梁占骨组织面积的百分率，反映骨量的多少。
[0075]
骨小梁宽度：用于描述骨小梁结构形态，解释骨量的变化。其变化可影响骨量，在数量一定的条件下，宽度越宽，骨量越多。
[0076]
骨小梁数量：用于描述骨小梁结构形态，解释骨量的变化。其变化可影响骨量，在宽度一定的条件下，数量越多，骨量越多。
[0077]
骨小梁分离度：指骨小梁之间的平均距离，用于描述骨小梁结构形态。分离度越大，骨小梁之间距离就越大，骨就越疏松。
[0078]
骨小梁连接点数：形成网状的骨小梁在单位面积内交叉连接点个数，用于描述骨小梁结构形态，反映骨小梁网状结构的连接性。
[0079]
骨小梁游离末端数：单位视野中骨小梁断端的数目，用于描述骨小梁结构形态，反映骨小梁网状结构的连接性。
[0080]
表2骨小梁参数的计算公式
[0081][0082]
2.3.3micro-ct骨微结构检测：骨密度检测后，迅速解剖分离大鼠双侧股骨、胫骨、
肱骨及第5腰椎，剔除附着的肌肉和筋膜等软组织，仅保留骨组织，用无菌纱布搽拭干净，将大处理好的大鼠股骨及第5腰椎骨放入小动物micro-ct仪器，沿长轴垂直固定于样品固定器内，设置电压60kv，功率40w，校正后开始扫描，对同一标本扫描获得不同截面的图片，并对腰椎和股骨组织为松质骨感兴趣区域(region of interest，roi)进行三维重建，使用microview软件进行定量分析，主要分析的参数包括骨小梁数量(trabecular number，tb.n)、骨小梁厚度(trabecular thickness，tb.th)、骨小梁间距(trabecular separation，tb.sp)、骨体积分数(bone volume/total volume，bv/tv)、结构模型指数(structure model index，smi)。
[0083]
3.实验结果
[0084]
3.1一般情况
[0085]
在24周观察期间，各组大鼠毛色洁白有光泽，精神活泼，活动正常，饮食进水量正常，12周时检测骨密度，造模成功率100％，模型组和低剂量组各死亡1只，死亡率0.03％。
[0086]
3.2对骨结构形态学的影响
[0087]
光镜和微ct图像直接观察，骨切片显示模型组与假手术组相比，骨小梁数目减少，骨小梁壁变薄、变细，骨小梁连接点数减少，游离末端数增多，骨小梁间隙增大，骨髓腔增宽，说明骨质疏松模型的复制是成功的。组方各组及钙尔奇d对照组与模型组相比，骨小梁结构明显改善，即骨小梁数目增加，骨小梁壁变厚，骨小梁连接点数增加，游离末端数减少，骨小梁间隙减小，骨小梁髓腔减小等(见附图1～3)。
[0088]
3.2对各组大鼠全身骨密度的影响
[0089]
结果显示(见表3)，模型组的全身骨密度明显低于假手术组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)；和模型组比较，中药活性成分组方各组以及钙尔奇d组均明显高于模型组，差异具有统计学意义(p<0.01或0.05)；和钙尔奇d组比较，中药活性成分组方中剂量组和高剂量组均明显高于钙尔奇d组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)。
[0090]
表3术后24周各组大鼠骨密度变化的比较
[0091][0092]
注：采用单因素方差分析，#p<0.05，与模型组比较；##p<0.01，与模型组比较；
△
p<0.01，与假手术组比较；&p<0.01，与钙尔奇d组比较。
[0093]
3.3对各组大鼠骨小梁宽度变化的影响
[0094]
结果显示(见表4)，模型组的骨小梁宽度明显低于假手术组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)；和模型组比较，中药活性成分组方各组以及钙尔奇d组均明显高于模型组，差异具有统计学意义(p<0.01或0.05)；和钙尔奇d组比较，中药活性成分组方中剂量组和高
剂量组均明显高于钙尔奇d组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)。
[0095]
表4各组骨小梁宽度变化的比较
[0096][0097]
注：采用单因素方差分析，#p<0.05，与模型组比较；##p<0.01，与模型组比较；
△
p<0.01，与假手术组比较；&p<0.01，与钙尔奇d组比较。
[0098]
3.4对各组大鼠骨小梁数量变化的影响
[0099]
结果显示(见表5)，模型组的骨小梁数量明显低于假手术组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)；和模型组比较，中药活性成分组方各组以及钙尔奇d组均明显高于模型组，差异具有统计学意义(p<0.01或0.05)；和钙尔奇d组比较，中药活性成分组方中剂量组和高剂量组均明显高于钙尔奇d组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)
[0100]
表5各组骨小梁数量变化的比较
[0101][0102]
注：采用单因素方差分析，#p<0.05，与模型组比较；##p<0.01，与模型组比较；
△
p<0.01，与假手术组比较；&p<0.01，与钙尔奇d组比较。
[0103]
3.5对各组大鼠骨小梁分离度变化的影响
[0104]
结果显示(见表6)，模型组的骨小梁分离度明显高于假手术组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)；和模型组比较，中药活性成分组方各组以及钙尔奇d组均明显低于模型组，差异具有统计学意义(p<0.01或0.05)；和钙尔奇d组比较，中药活性成分组方中剂量组和高剂量组均明显低于钙尔奇d组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)
[0105]
表6各组骨小梁分离度变化的比较
[0106][0107]
注：采用单因素方差分析，#p<0.05，与模型组比较；##p<0.01，与模型组比较；
△
p<0.01，与假手术组比较；&p<0.01，与钙尔奇d组比较。
[0108]
3.6对各组大鼠骨小梁连接点数变化的影响
[0109]
结果显示(见表7)，模型组的骨小梁连接点数明显低于假手术组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)；和模型组比较，中药活性成分组方各组以及钙尔奇d组均明显高于模型组，差异具有统计学意义(p<0.01或0.05)；和钙尔奇d组比较，中药活性成分组方中剂量组和高剂量组均明显高于钙尔奇d组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)。
[0110]
表7各组骨小梁连接点数变化的比较
[0111][0112]
注：采用单因素方差分析，#p<0.05，与模型组比较；##p<0.01，与模型组比较；
△
p<0.01，与假手术组比较；&p<0.01，与钙尔奇d组比较。
[0113]
3.7对各组大鼠骨小梁游离末端数变化的影响
[0114]
结果显示(见表8)，模型组的骨小梁游离末端数明显高于假手术组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)；和模型组比较，中药活性成分组方各组以及钙尔奇d组均明显低于模型组，差异具有统计学意义(p<0.01或0.05)；和钙尔奇d组比较，中药活性成分组方中剂量组和高剂量组均明显低于钙尔奇d组，在统计学上具有显著差异(p<0.01)。
[0115]
表8各组骨小梁游离末端数变化的比较
[0116][0117]
注：采用单因素方差分析，#p<0.05，与模型组比较；##p<0.01，与模型组比较；
△
p<0.01，与假手术组比较；&p<0.01，与钙尔奇d组比较。
[0118]
4.结论
[0119]
本发明所述的中药活性成分组方各剂量组以及钙加维生素d均能不同程度地改善绝经后骨质疏松症模型大鼠的骨密度，使骨小梁数目增加，骨小梁壁变厚，骨小梁连接点数增加，游离末端数减少，骨小梁间隙减小，骨小梁髓腔减小等，尤以中药活性成分组方高剂量组尤为显著。
[0120]
效果实施例2药物不良反应研究
[0121]
在本组合方实施例的急性毒性试验中，采用所用实施例1组方，根据急性毒性预试验确定给药剂量(见表9)，制备药物混悬液，动物采用spf级sd大鼠60只，3月龄，雄鼠体重350
±
30g，雌鼠250
±
30g(动物合格证号：scxk(粤)2013-0002，广东省实验动物中心)，随机分为6组，每组10只，雌雄各半，分别为空白对照组和中药活性成分组分方1，2，3，4，5组。实验前禁食不禁水12h后，给药组按10ml
·
kg-1
体重灌胃给药1次，计算1日内给药量，用前用蒸馏水配成混悬液，对照组灌胃等体积的蒸馏水，进行急性毒性试验观察。
[0122]
各组灌胃给药后，每笼5只正常饲养，给药后2h之内，每15min观察1次；给药后2～4h之内，每30min观察1次；给药后4～8h之内，每1h观察1次；给药后8～24h之内，每4h观察1次；给药后第2d起，每天观察一次，称取体重，密切观察各大鼠的动度进食、饮水情况及14d内可能出现的动度、异常肌肉运动、瞳孔改变、眼球凸出、眼睑下垂、对外反应、异常分泌物、大小便异常、呼吸异常、皮肤颜色改变等毒性反应和死亡情况。若有大鼠死亡，则将死亡大鼠解剖，肉眼观察心、肝、肾、肺、脑、脾、胃、小肠等脏器的改变，14d观察期结束后，将每组存活的大鼠处死进行解剖，按照上述同样方法对主要脏器大体病理变化进行肉眼观察。
[0123]
给大鼠灌胃中药活性成分组方不同剂量后大鼠不同时间累积死亡数及大鼠累积死亡-时间情况见表9。根据各剂量组大鼠死亡数量及给药剂量，计算中药活性成分组方ld
50
及95％可信限，结果见表10。
[0124]
表9中药活性成分组方大鼠灌胃后不同时间的累积死亡数
[0125]
[0126][0127]
表10中药有效成分组方灌胃给药ld
50
及95％可信限
[0128][0129]
中药活性成分组方所导致的大鼠死亡多发生于1～3d，4d以后存活动物未发现死亡现象。中药活性成分组方灌胃给药的最大给药剂量ld
100
为4500.0mg
·
kg-1
·
d-1
，最小给药剂量ld0为2644.8mg
·
kg-1
·
d-1
，采用bliss计算法处理，计算的半数致死量ld
50
值为3256.6mg
·
kg-1
·
d-1
，95％的可信限为3056.4～3457.9mg
·
kg-1
·
d-1
。
[0130]
大鼠急性毒性症状观察及体重变化情况：大鼠给药后活动减少、安静，随着时间的增加，个别大鼠出现走路不稳，仰卧、昏睡、四肢、尾巴充血，间歇性抽搐而逐渐死亡，大鼠死亡多发生于1～3d，存活大鼠多于4d后上述症状减轻，4d～7d逐渐恢复正常。活动、摄食饮水等多在给药第7～8d后基本恢复正常。正常大鼠解剖，肉眼下观察心、肝、脾、肺、肾、肝等重大脏器的变化，未见明显异常。灌胃后存活大鼠在观察期间体重无明显变化。
[0131]
在药效学实验中，采用中药活性成方组方低、中、高剂量组(实施例1组方)36.0、72.0、114.0mg
·
kg-1
·
d-1
灌胃，用前用生理盐水配成混悬液，每天1次，连续灌胃12周，实验大鼠排尿、排便、饮水、摄食量、血常规、尿常规和肝、肾功能均未见明显异常。
[0132]
综上所述，本发明所述的中药活性成分组方治疗绝经后骨质疏松症具有较好的疗效，能够提高骨密度、改善骨微细结构等，以高剂量尤为显著，且组分方具有成分清楚、剂型小、方便携带等优势，为绝经后骨质疏松症治疗用药上的创新，具有较高的实用价值。
[0133]
以上所述实施例，仅是本发明较佳的实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以将较佳实施例揭露如上，但并不是对本发明进行限定，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，均可利用上述揭示的技术内容做出些许改动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属本发明技术方案的范围内。