1.本发明涉及用于治疗和/或预防移植物抗宿主疾病(gvhd)的组合物和方法。具体来说，本发明可用于在接受或将接受潜在免疫活性移植例如同种异体造血干细胞移植的患者中防止抗生素引发的肠道微生物菌群的破坏，并减少或阻止gvhd的发生，尤其是在人类中。
背景技术：
2.移植物抗宿主疾病(gvhd)是移植相关的发病和死亡的主要原因。gvhd可以在免疫活性移植后发生。具体来说，gvhd可能在同种异体细胞移植例如干细胞移植和/或骨髓移植后发生。gvhd也可能在输血后发生。在gvhd中，所述移植的免疫细胞可以将所述宿主的细胞识别为外来的并攻击它们。患有gvhd的患者通常可能具有三种器官例如皮肤(皮疹/皮炎)、肝脏(肝炎/黄疸)和胃肠道(腹痛/腹泻)的症状表现。症状可以非常显著并且甚至可能引起宿主死亡。
3.移植物抗宿主疾病主要可以分类为急性移植物抗宿主疾病和慢性移植物抗宿主疾病。当gvhd在同种异体造血干细胞移植后100天内开始时，它是急性的，并且通常是供体免疫细胞针对宿主组织的反应。活化的供体t细胞通常在随着准备方案开始的炎性级联反应之后损伤宿主上皮细胞。据统计，约35％
‑
50％的造血干细胞移植(hsct)接受者/患者可能发生急性gvhd。具体的风险通常取决于干细胞来源、患者年龄、调制和使用的gvhd预防/治疗。急性gvhd通常根据涉及的器官的数目和程度来分期和分级(0
‑
iv级)。患有iii/iv级急性gvhd的患者倾向于具有伴有高死亡率的不良结果。慢性gvhd是hsct后最主要和常见的副作用，在20％
‑
70％的在血液和骨髓祖细胞移植后活过100天的患者中发生，并且是移植后死亡的主因。
4.目前，标准的gvhd预防方案是非特异性的：通过靶向免疫细胞的增殖过程的例如甲氨蝶呤、他克莫司、依维莫司、西罗莫司、吗替霉酚酸酯或环孢菌素a进行免疫抑制。此外，gvhd治疗通常涉及皮质类固醇的给药。然而，由于这些免疫抑制药剂具有非特异性效果，它们的毒性非常高，并且受损的免疫系统变得对传染病例如细菌感染非常敏感。
5.在任何hsct之前，将接受者置于准备方案(调制阶段)下，这将他们置于中性白细胞减少的状态下，因此使他们对各种不同的感染非常易感。在发热的情况下，当害怕细菌感染时，患者将被给药抗生素治疗以在最早期阶段平息感染。不论抗生素是口服还是肠胃外给药，所给药的药剂都有值得注意的部分以活性形式到达结肠，在那里它与肠道微生物菌群，即在胃肠道中、主要是盲肠和结肠中生活的大量共生细菌发生接触。作为这个过程的结果，所述微生物菌群的组成被深刻地改变，影响厌氧细菌(在正常对象和动物的肠中执行主要的生理作用)和好氧细菌两者。
6.在hsct接受者中，已将生态失调(dysbiosis)或肠道微生物菌群的失衡与包括gvhd在内的许多疾病相关联。长期以来一直怀疑微生物菌群与gvhd之间的关系，但仍然未被充分理解。一些最近的工作证实了微生物组多样性的丧失与gvhd严重性(holler等，
2014.biology of blood and marrow transplantation 20(5):640
–
645)和相关的死亡率(taur等，2014.blood 124(7):1174
–
1182)的提高之间的直接关联。此外，肠道微生物菌群在gvhd发生中的作用的更直接的证据来自于在患者中进行的研究，所述研究显示出共生细菌、特别是布劳特氏菌属(blautia)的共生细菌的丰度的提高与那些患者中致死性gvhd发病率的降低之间的关联性(jenq等，2015.biology of blood and marrow transplantation 21(8):1373
–
1383)。
7.最近还已显示，抗生素、特别是广谱抗生素的使用导致gvhd严重性的提高和肠损伤(shono等，2016.science translational medicine 8(339):339ra71)。此外，最近的研究强调了抗生素在急性gvhd的严重性和总体存活率中的有害作用(routy等，2017.oncoimmunology 6(1):e1258506)。
8.然而，为了在移植对象中预防和治愈细菌感染，抗生素的使用是必需的。因此，对于在这个患者群体中允许使用抗生素并预防和/或治疗gvhd的医药上有效的解决方案，存在着高度的尚未满足的医学需求。
技术实现要素：
9.本发明是基于下述观察，即gvhd与在免疫活性移植物给药例如hsct和抗生素治疗后发生的肠道微生物菌群的重大变化相关，表明抗生素相关的生态失调可能是gvhd初现和/或严重性的原因之一。抗生素不是可能引起生态失调的仅有药剂。因此，阻止此类药剂的次级效应也是合乎需要的。
10.因此，除了其他事物之外，本发明提供了基于使用适合于使引起生态失调的药剂失活的物质，在需要的对象中治疗或预防gvhd或降低其风险的组合物和方法。
11.在某些实施方式中，所述物质是吸附剂。在其中所述引起生态失调的药剂是抗生素的其他实施方式中，所述物质是抗生素失活酶。
12.因此，在一个实施方式中，本发明涉及一种吸附剂，其用于在对象中治疗或预防gvhd或降低gvhd的风险或严重性的方法中。
13.本发明还涉及一种抗生素降解酶，其用于在对象中治疗或预防gvhd或降低gvhd的风险或严重性的方法中。
14.所述对象(或者被称为“宿主”)可以是同种异体细胞、组织或器官例如脐带血、骨髓、外周血、干细胞(例如造血干细胞和成体或胚胎干细胞)、血液制品和潜在地含有免疫活性细胞的实体器官的接受者。
15.在某些实施方式中，所述对象是潜在免疫活性移植例如造血干细胞(hsc)、骨髓、外周血(pbsc)和脐带血移植的接受者。
16.在某些实施方式中，所述潜在免疫活性移植是脐带血移植。在某些实施方式中，所述脐带血移植选自单次脐带血移植、双次脐带血移植、多次脐带血移植、操作的脐带血移植及其组合。在某些实施方式中，所述操作的脐带血移植包括离体扩增的脐带血移植。在某些实施方式中，所述操作的脐带血移植包括在移植之前用前列腺素处理所述脐带血。在某些实施方式中，所述操作的脐带血移植包括在移植之前从所述脐带血剥离t
‑
细胞。
17.在某些实施方式中，所述潜在免疫活性移植是骨髓移植。在某些实施方式中，所述免疫活性移植是外周血移植。适合的骨髓或外周血可以从儿童或成年人获得。骨髓和外周
血可以在移植之前以任何适合的方式操作。
18.在某些实施方式中，所述潜在免疫活性移植是干细胞移植。在某些实施方式中，所述干细胞移植是同种异体干细胞。在某些其他实施方式中，所述干细胞来自于成年人。
19.在某些实施方式中，所述潜在免疫活性移植是胚胎干细胞移植。在某些实施方式中，所述潜在免疫活性移植是器官移植。在某些实施方式中，所述潜在免疫活性移植对应于血液制品的灌输。血液制品的灌输可以包括但不限于血液、血清、血浆和血小板灌输以及衍生产品的输注。
20.在特定实施方式中，所述潜在免疫活性移植不是人类胚胎干细胞。
21.在另一个特定实施方式中，所述对象是免疫受损的对象。在其他特定实施方式中，所述对象通过免疫抑制治疗的作用或由于疾病而免疫受损，例如由细菌或病毒感染引起的免疫缺陷，例如可能作为被人免疫缺陷病毒(hiv)感染的结果的获得性免疫缺陷综合征(aids)。
22.一方面，所述物质以治疗有效量给药，使得gvhd的至少一种症状或特点被抑制，或在强度、严重性、持续时间或频率方面降低，或在发作上被延迟。在某些实施方式中，所述gvhd的至少一种症状或特点选自肝损伤、皮疹、黄疸、肠道炎症、粘膜的脱落、腹泻、腹痛、恶心和呕吐。在某些实施方式中，所述gvhd是急性gvhd。在某些实施方式中，所述gvhd是慢性gvhd。在某些实施方式中，所述待治疗的对象是容许接受移植的免疫受损对象。
23.在其他特定实施方式中，所述物质以治疗有效量在足够的时间内给药，以确保gvhd或其至少一种症状被抑制，或在强度、严重性、持续时间或频率方面降低，或在发作上被延迟。具体来说，所述物质可以定期给药，例如每天一次、两次、每天三次或每天超过三次。例如，所述物质可以与所述引起生态失调的药剂同时给药到所述对象，总时间相同或长出几天。说明性的治疗过程包括例如在7天内进行引起生态失调的药剂的治疗，其中所述物质也在暴露于所述药剂的7天期间给药。在另一个实施方式中，所述物质可以在使用所述引起生态失调的药剂的疗法开始之前和/或之后一天或更多天给药，以确保大多数残留的药剂被消除。例如，所述物质可以在药剂给药的第一天之前的一天首先给药，并持续到药剂给药的最后一天之后两天。
24.在本发明的情形中，所述物质可以是吸附剂，其可用于在药剂的口服或肠胃外给药后吸附并因此从肠中除去任何残留的所述药剂或其代谢物，所述残留的药剂或其代谢物原本在到达肠下部和/或结肠时将会在宿主中引起不良作用。
25.在特定实施方式中，所述对象已接受、接受或将接受用于治疗感染的抗生素。在这个实施方式中，给药所述物质是为了防止所述抗生素对特别是在肠的下部例如末端回肠、盲肠或结肠中的肠道微生物菌群的不良作用。
26.在另一个特定实施方式中，所述对象不接受抗生素治疗。在这种情形中，给药所述吸附剂是为了防止由于抗生素给药之外的其他原因引起的肠道共生微生物菌群的破坏。例如，所述吸附剂可用于通过影响有害细菌例如艰难梭菌(clostridium difficile)的萌发或生长、通过防止毒素的产生或通过吸附由这些有害细菌释放的毒素，来治疗由所述有害细菌引起的感染。具体来说，所述宿主中的不良作用，可以由可能对肠道微生物菌群或肠组织具有严重不良作用的任何其他分子或毒素，例如但不限于细菌毒素和释放到胃肠道中的分子、包括由致病性微生物产生的那些分子引起。
27.所述物质可以被配制成用于递送到肠的所需部分。为了降低抗生素或对肠或肠道微生物菌群具有局部不良作用的其他分子的浓度，在所述抗生素的吸收完成后尽可能最早的时间释放所述物质可能是优选的，并且快速释放是优选的。理想情况下，所述物质的剂型被选择成足以显著降低肠中所述不需要的药剂(例如抗生素、其他药物或细菌或真菌毒素)的浓度，并且也使得所述物质在释放时仍然有效。代表性的剂型包括胶囊、片剂、球丸，以及在所述不想要的药剂可以破坏肠道微生物菌群之前对结肠中的所述药剂的去除提供相对快的效果的其他适合的剂型。
28.发明详述
29.当在本文中使用时，术语“急性”在与组织损伤和相关疾病、障碍或病症相结合使用时，具有医学领域的任何技术人员所理解的含义。例如，所述术语通常是指在疾病、障碍或病症中存在症状的突然或严重发作。在某些实施方式中，急性损伤由缺血或创伤事件造成。通常，术语“急性”与术语“慢性”对比使用。
30.当在本文中使用时，术语“慢性”在与组织损伤和相关疾病、障碍或病症相结合使用时，具有医学领域的任何技术人员所理解的含义。通常，术语“慢性”是指涉及持久和/或反复发作的症状的疾病、障碍或病症。慢性疾病、障碍或病症通常经过长时间发展。术语“慢性”与术语“急性”对比使用。在某些实施方式中，慢性疾病、障碍或病症由细胞变性引起。在某些实施方式中，慢性疾病、障碍或病症由年龄相关的细胞变性引起。
31.当在本文中使用时，术语“预防”在与疾病、障碍和/或病症的发生相结合使用时，是指降低发生所述疾病、障碍和/或病症的风险。
32.在本发明的情形中，疾病、障碍和/或病症的“风险”包括特定个体将会发生疾病、障碍和/或病症(例如gvhd)的可能性。在某些实施方式中，风险被表示为百分率。在某些实施方式中，风险从0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90直至100％。在某些实施方式中，风险被表示为相对于与参比样本或一组参比样本相关的风险的风险。在某些实施方式中，参比样本或一组参比样本具有疾病、障碍、病症和/或事件(例如gvhd)的已知风险。在某些实施方式中，参比样本或一组参比样本来自于与特定个体可比的个体。在某些实施方式中，相对风险为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更高。
33.当在本文中使用时，术语“免疫活性移植”表示从供体获得的组织移植，所述移植含有所述供体的免疫活性细胞或含有所述供体的可以分化成免疫细胞的免疫活性细胞。所述移植的免疫活性细胞例如t细胞可能攻击并破坏宿主细胞，并从而引起gvhd。
34.gvhd
35.gvhd在本领域中是公知的(参见例如ferrara,j.等，“移植物抗宿主疾病”(graft
‑
versus
‑
host disease)，lancet.2009；373(9674):1550
‑
61；macmillan,m.等，“无亲缘关系的供体脐带血移植后的急性移植物抗宿主疾病：风险因子的分析”(acute graft
‑
versus
‑
host disease after unrelated donor umbilical cord blood transplantation:analysis of risk factors)，blood,2009,113(11):2410
‑
2415；matsumura,t.等，“用于成年人急性成淋巴细胞性白血病的同种异体脐带血移植：涉及日本的256位患者的回顾性调查”(allogeneic cord blood transplantation for adult acute lymphoblastic leukemia:retrospective survey involving 256patients in japan)，leukemia.2012jan 17epub；kobayashi,k.等，“30位患有血液恶性肿瘤的成年人的无亲缘
关系的供体脐带血移植的临床结果”(clinical outcomes of unrelated donor umbilical cord blood transplantation for 30adults with hematological malignancies)，anticancer res.,2009(5):1763
‑
70)。个体的免疫系统通过识别某些细胞表面蛋白起作用，所述细胞表面蛋白中的一些被称为主要组织相容性复合物蛋白或mhc蛋白。存在另外的也可以对免疫识别事件有贡献的次要组织相容性蛋白。个体哺乳动物的免疫系统可以将其自己或其同卵孪生子的mhc蛋白识别为自身的，并因此不破坏其自己的细胞或其同卵孪生子的细胞。同一物种的成员可能共享主要和/或次要组织相容性抗原，并且因此个体可能不会将其物种的另一个成员的细胞识别为非自身的，这取决于所述两个个体的mhc蛋白之间的差异程度。当个体的免疫系统将同一物种的其他成员的细胞识别为非自身时，所述第一位个体的免疫系统可以进而破坏所述第二位个体的细胞。在人类中，主要组织相容性蛋白被称为“hla”抗原。
36.当组织例如骨髓、血细胞或实体器官从一位个体移植到另一位个体时，所述接受者可能将所述供体的细胞识别为非自身的，并且所述接受者的免疫系统可能破坏所述供体的细胞。因此，在组织移植中，所述接受者可以经受免疫抑制性药物和/或辐照。然而，在gvhd中，移植患者可能也经受相反方向上的免疫识别，即所述供体的组织可能含有免疫活性细胞，其进而破坏所述接受者的细胞。在特定情况下，当患者接受来自于健康供体的hsct移植时，由于移植的原因可能是存在有害的、通常为恶性的细胞，因此首先通过放疗或化疗消融所述患者的免疫系统。在这种情况下，所述移植的免疫系统可以将所述患者的细胞识别为非自身的并攻击它们。
37.gvhd可以在任何同种异体细胞例如脐带血、骨髓、外周血、成体干细胞、胚胎干细胞、血液制品和/或含有免疫活性细胞的实体器官从供体转移到接受者时发生。因此，当在所述供体和接受者之间存在mhc抗原性差异时，所述接受者具有发生gvhd的风险。来自于所述供体的t
‑
淋巴细胞在hla抗原的基础上识别所述差异并攻击新的身体即所述接受者的身体，尽管大多数患者和供体的hla标志物尽可能近地匹配。具体来说，当供体移植物中的免疫活性t细胞被输注到免疫受损的接受者中时，引起gvhd。然而，除了当所述患者和供体是同卵孪生子时之外，在供体与患者之间许多次要标志物不同。在移植之前，对所述供体和接受者进行大量分型，以确保所述供体和接受者在免疫学上非常接近。gvhd也可能在供体和接受者的次要组织相容性抗原之间存在抗原性差异时发生。因此，在mhc匹配的人之间也可能发生gvhd。此外，接受定向输血例如从hla纯合的儿童向杂合的亲代的输血的手术患者，也可能发生gvhd。在某些实施方式中，gvhd在血液被灌输到免疫受损的患者(例如在高剂量免疫抑制剂下的器官移植患者、患有原发性免疫缺陷症的儿童或患有aids的hiv感染的患者)中时发生。
38.存在两种已知形式的gvhd—急性和慢性gvhd。急性gvhd可能在移植后的前100天内发生。不希望被特定理论束缚，据认为供体的组织中存在的t
‑
细胞和/或移植时的细胞可以攻击患者的皮肤、肝脏、胃和/或肠。急性gvhd的最早体征可以是在手、足和面部出现的皮疹。除了起泡的皮肤之外，患有严重gvhd的患者也可因供体的t
‑
细胞攻击胃和肠而发生大量水样或血样腹泻并伴有痉挛。黄疸(皮肤和眼变黄)是gvhd疾病涉及肝脏的常见指示。急性gvhd疾病的严重性可以通过涉及的器官的数目和症状的程度来评估。
39.急性gvhd病例可以根据临床严重性分为不同的期(参见例如irani,j.等，“严重急
性胃肠移植物抗宿主疾病：当代癌症护理中新出现的手术困境”(severe acute gastrointestinal graft
‑
vs
‑
host disease:an emerging surgical dilemma in contemporary cancer care)，arch surg.2008；143(11):1041
‑
5)。1期包括在少于25％的身体上的皮疹。2期包括在超过25％的身体上的皮疹并伴有轻度肝或胃肠障碍。3期包括与严重晒伤相似的皮肤发红和中度肝、胃和肠问题。4期包括起泡、剥落的皮肤和重度肝、胃和肠问题。另外或可选地，急性gvhd也可以被表征为5个临床等级0、i、ii、iii和iv。通常，0级在皮肤、肝、肠或功能性损伤方面基本上无症状。i级被认为是轻度的，具有1至2期的皮肤。ii级被认为是中度的，其特征为具有1至3期的皮肤、1期的肝和肠以及1期的功能性损伤。iii级被认为是重度的，其特征为2至3期的皮肤、2
‑
3期的肝和肠以及2期的功能性损伤。iv级被认为是危及生命的，其特征为2至4期的皮肤、2至4期的肝和肠以及3期的功能性损伤。示例性的详细分期和分级被进一步描述在实施例部分中。
40.慢性gvhd可以在移植后的前100天之后发生。不希望受到特定理论束缚，据认为慢性gvhd可能由植入的组织和/或细胞产生的t
‑
细胞引起。与急性gvhd中相同的器官和系统可以受到攻击，并且另外，慢性gvhd可能与结缔组织损伤有关。患有慢性gvhd的患者可能经历皮肤问题，这可能包括干燥的瘙痒性皮疹、皮肤颜色的改变以及皮肤拉紧或紧绷。也可能发生部分脱发或过早变白。与急性gvhd的患者相似，慢性gvhd的患者可能表现出作为涉及肝脏的体征的黄疸。慢性gvhd还可以攻击体内分泌粘液、唾液或其他润滑剂的腺体。患有慢性gvhd的患者可能由于泪腺受损而经历眼中的干燥或刺痛。口腔中分泌唾液的腺体也可能受到慢性gvhd的影响，并在较少的情况下润滑食管的腺体也受到影响，导致吞咽和进食困难。患有慢性gvhd的患者在使用牙膏或吃酸性食物时可能经历口腔中的灼热感。慢性gvhd可以攻击润滑胃壁和肠道的腺体，干扰人体正常吸收营养的能力。症状可以包括烧心、胃痛和/或体重减轻。有时，患有慢性gvhd的患者可能经历“挛缩”，即肌腱收紧，这使得伸展或收缩手臂和腿变得困难。慢性gvhd也可以影响肺部，引起喘息、支气管炎和/或肺炎。
41.gvhd的发生率可以随着供体和接受者的hla抗原之间的错配程度的提高、供体年龄的增加和患者年龄的增加而提高。然而，所述疾病可能未得到充分诊断和报告。
42.如上所述，gvhd可以在接受者接受同种异体细胞、组织或器官(例如脐带血、骨髓、成体干细胞、胚胎干细胞、血液制品和/或实体器官)的移植后发生。
43.吸附剂和吸附剂制剂
44.术语“吸附剂”是指通常可以通过其表面与待吸附物质之间的物理化学结合来吸附所述物质的任何化合物或材料。吸附剂可以是特异性或非特异性的。用于本发明的优选吸附剂是药用级吸附剂，最好适合于在人类或动物中用于制药或兽医应用。
45.适合用于本发明的吸附剂的实例包括但不限于活性炭(也被称为活性碳)；粘土，包括膨润土、高岭土、蒙脱土、硅镁土、多水高岭土、锂皂土等；二氧化硅，包括胶体二氧化硅(例如as
‑
40)、中孔二氧化硅(mcm41)、煅制二氧化硅、沸石等；滑石；消胆胺等；聚苯乙烯磺酸盐等；单磺化和多磺化树脂；以及其他树脂，例如用于细菌学检验的树脂例如树脂。
46.优选的吸附剂是药用级活性炭(例如来自于chemviron、cabot、norit、jacobi carbons、merck millipore、sigma aldrich、desotec或其他来源)。在特定实施方式中，所述吸附剂是活性炭，更特别是具有高于600m2/g、特别是高于800m2/g、特别是高于1000m2/g、
特别是高于1200m2/g、特别是高于1400m2/g、特别是高于1600m2/g、甚至更特别是高于1800m2/g的比表面积的活性炭。所述活性炭可以是植物、矿物或合成来源的，它的表面任选地通过物理或化学处理而改性。在特定实施方式中，所述活性炭是植物来源的。在特定实施方式中，所述活性炭源自于泥炭。在特定实施方式中，所述活性炭源自于椰子壳。在特定实施方式中，所述活性炭源自于混合在一起的不同来源例如泥炭和椰子壳。在特定实施方式中，所述活性炭的特征在于优选地高于100、甚至更特别地高于200、甚至更特别地高于300、甚至更特别地高于400、甚至更特别地高于500、甚至更特别地高于600的欧洲糖蜜值(应该注意的是，所述欧洲糖蜜值与北美糖蜜值反相关)。在特定实施方式中，所述活性炭具有高于10g/100g、甚至更特别地高于20g/100g、甚至更特别地高于30g/100g、甚至更特别地高于40g/100g、甚至更特别地高于50g/100g、甚至更特别地高于60g/100g的安替比林值(按照欧洲药典(eu pharmacopeia)测量)。在特定实施方式中，所述活性炭的特征在于具有0.05至0.8之间、甚至更特别地0.1至0.6之间、甚至更特别地0.15至0.5之间、甚至更特别地0.2至0.4之间的密度。
47.在本发明的方法中使用的吸附剂的量可以随着待处理的宿主/材料和所述吸附剂的总容量、吸附力和选择性而变。通常，吸附剂的量是足以防止物质例如抗生素对肠道微生物菌群的被称为“生态失调”或肠道微生物菌群破坏的有害影响的量。具体来说，吸附剂的量是足以阻止或延迟急性和/或慢性gvhd的发作或降低急性和/或慢性gvhd的严重性的量。
48.所述用于本发明的吸附剂可以配制成组合物例如药物组合物，所述组合物可以包含可药用赋形剂、载体和/或添加剂。此类组合物包括用于口服递送、直肠递送、局部施用、粘膜施用、吸入等的制剂。在特定实施方式中，所述吸附剂被配制成适合于给药到人类或动物的药物组合物。更优选地，所述吸附剂被配制成适合于在肠中或与肠道细菌接触时，特别是在胃肠道中、更特别是在肠的下部即末端回肠、盲肠和/或结肠中释放出所述吸附剂的口服制剂。
49.短语“可药用”在本文中用于指称那些在健全的医学判断范围内适合与人类和动物的组织相接触使用而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。适合于吸附剂的肠道递送的制剂的实例已描述在wo2006/122835和wo2007/132022中。在另一个实施方式中，所述吸附剂被配制在核心中。优选地，吸附剂的量在所述核心的总重量的约60％至约100％之间，更优选地约70％至约98％之间，更优选地约75％至约95％之间，更优选地约80％至约90％之间。在优选实施方式中，所述吸附剂用卡拉胶配制，优选地配制成球丸的形式，正如在wo2011/104275中提出的。这种制剂可以形成核心。这种核心可以用包衣层覆盖，使得所述吸附剂在肠的下部中，即在末端回肠、盲肠和/或结肠中释放。或者，可以将多个核心包含或包埋在适合于在肠的下部中，即在末端回肠、盲肠和/或结肠中释放其内含物的剂量单元形式中，例如其外壳适合于在肠的下部中释放出内含物的胶囊。在另一个实施方式中，所述球丸可以被包含在胶囊中，所述胶囊本身被包含在包衣胶囊中。在另一个实施方式中，所述球丸可以被包含或包埋在多单元粒子系统中。
50.卡拉胶是从红色海藻提取的一类天然存在的直链硫酸化多糖。卡拉胶是由重复的硫酸化和非硫酸化的半乳糖和3,6
‑
脱水半乳糖(3,6
‑
ag)单元构成的高分子量多糖。所述单元通过交替的α1
‑
3和β1
‑
4糖苷键相连。三种基本类型的卡拉胶是可商购的，即κ、ι和λ
‑
卡拉
胶，它们的区别在于半乳糖单元上的硫酸酯基团的数目和位置。用于本发明的卡拉胶可以选自κ、ι和λ
‑
卡拉胶及其混合物。在这个实施方式的一种情况下，所述吸附剂与κ
‑
卡拉胶混合。在特定实施方式中，所述混合物包含活性炭和κ
‑
卡拉胶。优选地，卡拉胶的量在所述吸附剂和卡拉胶的总重量的约5％至约25％之间，更优选地约10％至约20％之间。在其他特定实施方式中，所述混合物中吸附剂(特别是活性炭)的量在所述吸附剂和卡拉胶的总重量的约95％至约75％之间，更优选地约90％至约80％之间。根据本发明的特定实施方式，卡拉胶的量为所述吸附剂和卡拉胶的总重量的约15％。例如，所述混合物可以含有85％的吸附剂和15％的卡拉胶。
51.根据本发明的特定实施方式，提供了具有上文指明的重量比的活性炭和卡拉胶、特别是κ
‑
卡拉胶的混合物。
52.所述核心(或球丸)可以通过专业技术人员已知的任何适合的手段来生产。具体来说，对成粒技术进行改变以适应于生产所述核心。例如，所述核心可以如下获得：将所述吸附剂与卡拉胶以上文指明的比率混合，添加溶剂例如水以进行湿法成粒，然后挤出，任选地然后用滚刀进行滚圆或成球或进行一锅法成球。任何剩余的水可以例如通过使用常规技术干燥得到的球丸来去除。
53.在一个实施方式中，所述核心或球丸具有50μm至6000μm、特别是100μm至5000μm、特别是150μm至4000μm、特别是250至3000μm、特别是250至1000μm、特别是300至3000μm(例如500至3000μm)、特别是300至1000μm、特别是500至1000μm、特别是500至700μm范围内的平均粒径。
54.所述核心组合物还可以包含常规赋形剂例如抗粘附剂、粘合剂、填充剂、稀释剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、防腐剂、吸附剂和/或甜味剂。此类赋形剂的量可以变化，但通常在所述球丸重量的0.1至50％的范围内。
55.正如上文讨论的，本发明的优选制剂包含含有吸附剂并可能增补有卡拉胶的核心，所述核心被包衣层覆盖，使得所述吸附剂在肠的下部中，即在末端回肠、盲肠和/或结肠中释放。
56.就此而言，在优选实施方式中，所述吸附剂被用作包含下述组分的制剂：
57.‑
含有所述吸附剂的核心，和
58.‑
外部包衣层，所述外部包衣层围绕所述核心形成，使得所述吸附剂在肠的下部中从所述制剂释放。
59.在优选实施方式中，所述吸附剂被用作包含下述组分的制剂：
60.‑
含有所述吸附剂和卡拉胶的核心，和
61.‑
外部包衣层，所述外部包衣层围绕所述核心形成，使得所述吸附剂在肠的下部中从所述制剂释放。
62.适合的包衣的实例包括ph依赖性肠溶聚合物、偶氮类聚合物、二硫化物聚合物和多糖特别是直链淀粉、果胶(例如用二价阳离子偶联的果胶例如果胶钙或果胶锌)、硫酸软骨素和瓜尔胶。代表性的ph依赖性肠溶聚合物包括偏苯三酸乙酸纤维素(cat)、邻苯二甲酸乙酸纤维素(cap)、丙烯酸类聚合物、甲基丙烯酸类聚合物、基于丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的阴离子共聚物、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(hpmcp)、琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(hpmcas)、甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物、摩尔比为1：1的甲基丙烯酸和
100、eudragit rs po、eudragit rs 30d、eudragit rs 12.5和eudragit ne 30d、eudragit he 40d中的一者或多者。在另一个变化形式中，所述第一层还包含水溶性材料，其中所述第一层还可以包含含有羟丙基甲基纤维素(hpmc)的水溶性材料。在某些实施方式中，所述水溶性材料可以与所述不可溶的半透性材料混合，和/或可以包含以重量计0.1至30％的量的所述不可溶的半透性材料，例如以重量计2至25％的量的所述不可溶的半透性材料。在另一个特定变化形式中，所述第一层允许分子通过所述半透膜朝向核心逐渐扩散，与所述活性碳发生接触。在又一个变化形式中，所述第二层包含在ph 5至ph 7下溶解的材料。在某些变化形式中，所述第二层是肠溶层，包含在ph 1至4.9下基本上保持完整但在ph 5至7下快速分解的材料。在一个变化形式中，所述第二层包含ph敏感性聚合物。代表性的第二层包括选自下述的层：琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素，偏苯三酸乙酸纤维素(cat)，邻苯二甲酸乙酸纤维素(cap)，基于丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的阴离子共聚物，邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(hp cp)，琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(hpmcas)，甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物，甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的共聚物(1:1摩尔比)，甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的共聚物(1:2摩尔比)，聚乙烯乙酸邻苯二甲酸酯(pvap)和虫胶树脂。在这个实施方式的另一个特定变化形式中，所述活性碳是唯一的活性药物成分。在又一个变化形式中，所述组合物包含：
74.(a)包含活性碳的核心；
75.(b)围绕所述核心的第一层，所述第一层包含采取乙基纤维素形式的不可溶的半透性材料，并任选地还包含含有羟丙基甲基纤维素(hpmc)的水溶性材料；和
76.(c)第二层，其包含琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(hpmcas)。
77.在另一个变化形式中，所述吸附剂是配制在组合物中的活性碳，所述组合物包含：
78.(a)核心，其是活性碳；
79.(b)围绕所述核心的第一层，所述第一层包含不溶于水的半透性材料，并且还包含含有以所述不可溶的半透性材料的重量计2
‑
25％的量的羟丙基甲基纤维素的水溶性材料；和
80.(c)围绕所述第一层的第二层，其在ph 5至7下溶解。
81.抗生素
82.术语“抗生素”是指具有对抗细菌的活性的任何化合物。多亏本发明，可以被消除或失活的抗生素包括但不限于：
83.‑
β
‑
内酰胺类，包括：
84.‑
青霉素类(例如青霉素g、青霉素v、氨苄青霉素、阿莫西林、巴氨西林、羧苄青霉素、卡茚西林、替卡西林、阿洛西林、美洛西林、哌拉西林等)，
85.‑
耐青霉素酶的青霉素类(例如甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、萘夫西林等)，
86.‑
头孢菌素类，例如：第一代头孢菌素类(例如头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢拉定、头孢噻吩、头孢匹林、头孢唑啉等)；第二代头孢菌素类(例如头孢克洛、头孢孟多、头孢尼西、头孢西丁、头孢替坦、头孢呋辛、头孢呋辛酯、头孢美唑、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢雷特等)；第三代头孢菌素类(例如头孢吡肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢唑肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢克肟、头孢泊肟、头孢布烯等)；第四代头孢菌素类(例如头孢克定、头孢吡肟、头孢唑兰、
头孢匹罗、头孢喹诺等)；第五代和其他代头孢菌素类(例如头孢吡普、头孢洛林、头孢唑烷等)，
87.‑
碳青霉烯类(例如亚胺培南、美罗培南、厄他培南、多尼培南等)，
88.‑
单环内酰胺类(例如氨曲南等)，
89.‑
喹诺酮类(例如萘啶酮酸)和氟喹诺酮类(例如西诺沙星、环丙沙星、莫西沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、加替沙星、吉米沙星、诺氟沙星等)，
90.‑
磺胺类(例如磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺乙酰胺、磺胺对甲氧嘧啶等)，
91.‑
氨基糖苷类(例如链霉素、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、奈替米星、卡那霉素、新霉素b、c和e、壮观霉素、嘌呤霉素、庆大霉素等)，
92.‑
四环素类(例如四环素、金霉素、土霉素、美他环素、多西环素、米诺环素、替加环素、艾拉环素等)，
93.‑
大环内酯类(例如红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、非达霉素、泰利霉素、交沙霉素、竹桃霉素、螺旋霉素、泰乐菌素、罗红霉素、喹红霉素、索利霉素等)，
94.‑
糖肽类(例如万古霉素、奥利万星、替拉万星、替考拉宁、达巴万星、雷莫拉宁等)，
95.‑
噁唑烷酮类(例如利奈唑胺、泼斯唑来、特地唑胺、雷得唑来、环丝氨酸等)，
96.‑
氯霉素类(例如氯霉素、甲砜霉素等)，
97.‑
林可酰胺类(例如克林霉素、林可霉素等)，
98.‑
链阳菌素类(例如普那霉素、奎奴普丁/达福普丁、维吉霉素等)，
99.‑
多粘菌素类(例如多粘菌素a、b、c、d、e1(粘杆菌素a)或e2、粘杆菌素b或c等)，
100.‑
二氨基嘧啶类(例如，通常与磺胺甲噁唑联合使用的甲氧苄啶，吡嗪酰胺等)，
101.‑
砜类(例如氨苯砜、阿地砜钠等)，
102.‑
对氨基苯甲酸，
103.‑
杆菌肽，
104.‑
异烟肼，
105.‑
利福平类(例如利福平、利福布丁、利福喷丁、利福拉齐、rimamixin等)，
106.‑
乙胺丁醇，
107.‑
乙硫异烟胺，
108.‑
卷曲霉素，
109.‑
氯法齐明，和
110.‑
任何其他抗细菌剂。
111.术语“抗生素”也覆盖抗生素的组合。
112.抗生素失活酶和酶制剂
113.在某些实施方式中，本发明使用抗生素失活酶。在本发明的情形中，“抗生素失活酶”是能够将抗生素水解或失活，从而使所述抗生素无生物学活性的酶。例如，与没有抗生素失活酶的情况下获得的抗生素的最低抑制浓度(mic)相比，抗生素失活酶可以实质性提高抗生素的mic。根据本发明，如果对某种浓度的给定抗生素敏感的细菌在用所述失活酶处理后的所述浓度的抗生素存在下的生长与在不存在所述抗生素的情况下的生长相一致，则抗生素失活是完全的。全失活的另一个定义是在用所述失活酶处理后，抗生素对敏感细菌
的mic提高至少2个数量级的情况。
114.根据本发明所述使用的抗生素失活酶可以是天然的、化学修饰的、遗传工程改造的或合成的。
115.抗生素失活酶还包括亲代抗生素失活酶的功能性变体，例如β
‑
内酰胺酶、红霉素酯酶和酮还原酶的功能性变体。在本发明的情形中，酶的“功能性变体”是源自于亲代酶的酶，其具有相同类型的催化活性(例如，β
‑
内酰胺酶变体是具有β
‑
内酰胺酶活性的酶)，但具有不同的氨基酸序列。这种功能性变体可能与所述亲本酶具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、至少99.9％的一致性。这种功能性变体也可能对给定抗生素，例如在β
‑
内酰胺酶的情况下对给定的β
‑
内酰胺类抗生素具有相对于所述亲代抗生素失活酶的比活性来说至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、220％、240％、260％、280％、300％、350％、400％、500％、600％、700％、800％或甚至至少1600％的比活性。
116.可用于本发明的实践的代表性抗生素失活酶包括但不限于使β
‑
内酰胺类抗生素失活的酶(例如β
‑
内酰胺酶)、使氟喹诺酮失活的酶(例如氨基糖苷n
‑
乙酰转移酶)、使大环内酯失活的酶(例如红霉素酯酶或红霉素磷酸转移酶)、使四环素失活的酶(例如nadph依赖性四环素氧化还原酶)或使林可酰胺失活的酶(例如林可霉素核苷酸转移酶)。
117.β
‑
内酰胺酶是具有β
‑
内酰胺酶活性的酶(ec 3.5.2.6)，即催化在诸如β
‑
内酰胺类抗生素(例如青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、培南砜类)的化合物中存在的β
‑
内酰胺环的酰胺键的不可逆水解，以产生没有其抗细菌活性的水解分子的酶。这类酶对于本领域技术人员来说是公知的(wang等，1999,curr opin chem biol.3(5),614
‑
22；fr
è
re,j.m.1995,mol microbiol.16(3):385
‑
95)。
118.在特定实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是丝氨酸β
‑
内酰胺酶或锌依赖性β
‑
内酰胺酶、也被称为金属β
‑
内酰胺酶。在另一个实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶选自a类、b类、c类和d类β
‑
内酰胺酶。在其他特定实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶选自第1组、第2组、第3组和第4组β
‑
内酰胺酶(bush等，antimicrob.agents chemother,39:1211)。在某些实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是由来自于地衣芽孢杆菌(bacillus lichenoformis)749/c的β
‑
内酰胺酶的衍生物组成的p1a、p3a或p4a及其衍生物或来自于蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)的金属β
‑
内酰胺酶的p2a及其衍生物中的一者或多者。此外，所述β
‑
内酰胺酶可以是广谱β
‑
内酰胺酶(esbl)，其任选地选自tem、shv、ctx
‑
m、oxa、per、veb、ges和ibcβ
‑
内酰胺酶。此外，所述β
‑
内酰胺酶可以是抑制剂抗性的β
‑
内酰胺酶，其任选地选自ampc型β
‑
内酰胺酶、碳青霉烯酶例如但不限于imp型碳青霉烯酶(金属β
‑
内酰胺酶)、vim(维罗纳整合子编码的金属β
‑
内酰胺酶)碳青霉烯酶、oxa(苯唑西林酶)组的β
‑
内酰胺酶、kpc(肺炎克雷伯氏菌(k.pneumonia)碳青霉烯酶)、cmy(c类)、sme、imi、nmc和ccra以及ndm(新德里金属β
‑
内酰胺酶例如ndm
‑
1)β
‑
内酰胺酶。
119.在某些实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是vim(维罗纳整合子编码的金属β
‑
内酰胺酶)。说明性的vim酶包括但不限于vim
‑
1、vim
‑
2、vim
‑
3、vim
‑
4和vim
‑
19。另外的vim酶描述在例如queenan等，(2007)clin.microbiol.rev.20(3):440
‑
458中。在其他特定实施方式
中，所述β
‑
内酰胺酶是vim
‑
2或其变体。此类β
‑
内酰胺酶公开在pct/ep2017/053985、pct/ep2017/053986和ep17198414中。在特定情况下，本发明涉及使用pct/ep2017/053985、pct/ep2017/053986和ep17198414中公开的任何特定实施方式，包括其中公开的任何特定变体vim
‑
2。在特定实施方式中，所述抗生素失活酶是例如在seq id no：1中所表示的vim
‑
2。在另一个特定实施方式中，所述抗生素失活酶是具有如seq id no：2至46中所示的氨基酸序列的vim
‑
2功能性变体。在特定实施方式中，所述vim
‑
2功能性变体具有包含seq id no：29、seq id no：31、seq id no：34或seq id no：36或由其构成的序列。
120.在另一个实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是来自于地衣芽孢杆菌(bacillus lichenoformis)749/c的β
‑
内酰胺酶或其变体，例如p1a、p3a(也被称为“ribaxamase”)或p4a。p1a具有seq id no：47中示出的序列。
121.在某些实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是正如在例如wo2007147945中所述的来自于蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)的金属β
‑
内酰胺酶(也被称为p2a)或其功能性变体。在特定实施方式中，所述p2a酶具有seq id no：48中示出的序列。所述p2a酶的功能性变体可以与seq id no：48中示出的序列具有至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的一致性。
122.在某些实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是正如在例如wo2011148041中所述的p3a或其功能性变体。在特定实施方式中，所述p3a酶具有seq id no：49(所述酶的成熟形式)或seq id no：50(所述酶的包括31个氨基酸长的信号肽的形式)中示出的序列。所述p3a酶的功能性变体可以与seq id no：49或seq id no：50中示出的序列具有至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的一致性。在特定实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶包含与seq id no：49具有至少80％序列一致性的氨基酸序列，并且特征在于它在对应于根据ambler分类的第276位的位置处具有天冬氨酸(d)之外的亲水性氨基酸残基，并且所述亲水性氨基酸选自精氨酸(r)、组氨酸(h)、赖氨酸(k)、天冬酰胺(n)、谷氨酰胺(q)、丝氨酸(s)和苏氨酸(t)。在其他特定实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶包含与seq id no：49具有至少80％序列一致性的氨基酸序列，并且特征在于它在对应于根据ambler分类的第276位的位置处具有天冬酰胺(n)。在又一个实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶具有seq id no：49中示出的氨基酸序列，其中在对应于根据ambler分类的第276位的位置处的氨基酸残基是天冬酰胺(n)。
123.在另一个实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是正如在例如wo2015/161243中所述的p4a或其功能性变体。在特定实施方式中，所述p4a酶具有seq id no：79或seq id no：80的序列。所述p4a酶的功能性变体可以与seq id no：79或seq id no：80中示出的序列具有至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的一致性。
124.在某些实施方式中，所述β
‑
内酰胺酶是肺炎克雷伯氏菌(klebsiella pneumoniae)碳青霉烯酶(kpc)。说明性的kpc包括但不限于kpc
‑
1/2(seq id no：51)、kpc
‑
3(seq id no：52)、kpc
‑
4(seq id no：53)、kpc
‑
5(seq id no：54)、kpc
‑
6(seq id no：55)、kpc
‑
7(seq id no：56)、kpc
‑
8(seq id no：57)、kpc
‑
9(seq id no：58)、kpc
‑
10(seq id no：59)、kpc
‑
11(seq id no：60)、kpc
‑
12(seq id no：61)、kpc
‑
13(seq id no：62)、kpc
‑
14(seq id no：63)、kpc
‑
15(seq id no：64)和kpc
‑
17(seq id no：65)。在一个实施方式中，所述β
‑
fonticola)的sfc
‑
1酶或来自于肺炎克雷伯氏菌(klebsiella pneumoniae)的shv
‑
38酶，正如在例如walther
‑
rasmussen等，(2007)journal of antimicrobial chemotherapy,60:470
‑
482中所述。
135.在另一个实施方式中，所述抗生素失活酶是红霉素酯酶。红霉素酯酶(ec编号3.1.1)是指催化红霉素以及其他大环内酯类抗生素的失活的一类酶。这些酶水解大环内酯类例如红霉素和竹桃霉素的内酯环，正如在barthelemy等，1984,j.antibiot.37,1692
‑
1696中所解释的。已知的红霉素酯酶是细菌起源的。它们由例如大肠埃希氏杆菌(escherichia coli)、halobacterium salinarum、gramella forsetii、反硝化无色杆菌(achromobacter denitrificans)或红球菌属(rhodococcus sp.)产生。在特定实施方式中，所述红霉素酯酶是通常由对红霉素具有高度抗性的肠杆菌科的成员产生的酶之一，正如在arthur等，1987,antimicrob.agents chemother.31(3),404
‑
409中所述。两种来自于大肠杆菌的红霉素酯酶已被记录在参考名erea和ereb下，在本发明中设想了这两者的使用。在本发明的特定实施方式中，所述红霉素酯酶是来自于大肠杆菌的ereb红霉素酯酶(参见arthur等，1986,nucleic acids res 14(12),4987
‑
4999)。
136.在另一个实施方式中，所述抗生素失活酶是酮还原酶。酮还原酶(kred)或羰基还原酶类(ec 1.1.1.184)酶可用于从相应的前手性酮底物合成光学活性的醇类。kred通常将酮底物转变成相应的醇产物，但是也可以催化逆反应，将醇底物氧化成相应的酮/醛产物。
137.在另一个实施方式中，所述抗生素失活酶是杂合蛋白分子。代表性的杂合蛋白分子是在美国专利申请20170354706中公开的那些。此类杂合蛋白分子可以包含键合在一起的两种酶，能够使至少一种抗生素失活。在特定实施方式中，这些酶被合并成单个单链蛋白。这两种酶可以均来自于相同类别，或各自来自于不同类别。例如，所述两种酶可以是β
‑
内酰胺酶，或在β
‑
内酰胺酶、使氨基糖苷失活的酶、使氟喹诺酮失活的酶、使林可酰胺失活的酶、使大环内酯失活的酶或使四环素失活的酶的类别中选择。在特定实施方式中，所述杂合蛋白分子中的每种酶使不同抗生素失活。在另一个实施方式中，所述杂合蛋白分子包含能够使属于相同类别的抗生素失活的两种酶。在特定实施方式中，所述杂合蛋白中的至少一种组分酶的序列与seq id no：81至seq id no：87具有至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或至少99.9％的序列同源性。在其他特定实施方式中，所述杂合蛋白中的至少一种组分酶的序列具有由seq id no：81、seq id no：82、seq id no：83、seq id no：84、seq id no：85、seq id no：86或seq id no：87构成的序列。在其他特定实施方式中，所述杂合蛋白分子具有包含选自seq id no：88至90的序列或由其构成的氨基酸序列。
138.在另一个实施方式中，所述酶不论是生物还是合成生产的，均可以被进一步酶法和/或化学修饰，以便增强其活性、稳定性、溶解性或任何其他有益特征。这种修饰的一个实例是将聚乙二醇连接到表面氨基或peg化。
139.在特定实施方式中，所述抗生素失活酶被配制成适合于在肠的所需部分中释放出所述酶的制剂。在特定实施方式中，所述肠的所需部分是肠的下部，例如回肠、盲肠或结肠。在另一个特定实施方式中，所述肠的所需部分是肠的上部，例如十二指肠或空肠。在特定实施方式中，所述制剂包含用肠溶包衣(例如用在高于或等于7.0的ph下溶解的肠溶包衣)包
被的酶的球丸。在另一个特定实施方式中，所述制剂包含在肠溶包衣胶囊(例如具有在高于或等于5.5的ph或高于或等于7.0的ph下溶解的肠溶包衣)内的肠溶包衣的酶球丸(例如具有在高于或等于5.5的ph或高于或等于7.0的ph下溶解的肠溶包衣)。在另一个特定实施方式中，所述制剂包含在未包衣的胶囊中的肠溶包衣的球丸。所述制剂的选择可以取决于所述抗生素向所述对象的给药途径。例如，在所述抗生素肠胃外给药的情况下，可以考虑在肠的上部或下部释放所述抗生素失活酶的制剂。在所述抗生素口服给药的情况下，所述酶制剂优选地在肠的下部中，在所述抗生素被所述酶的失活不再能够干扰所述抗生素在小肠中的所需吸收的位置处释放出所述酶，以便从所述抗生素的正面效应获益。
140.使用方法
141.本发明涉及在使用适合于使引起生态失调的药剂失活的物质的基础上，用于治疗或预防或延迟gvhd或降低gvhd的严重性的组合物和方法。
142.具体来说，本发明可用于在接受同种异体造血干细胞移植的患者中防止微生物菌群的破坏以及预防或延迟gvhd的发生或降低gvhd的严重性。
143.在某些情况下，根据本发明所述的物质用于给药、将给药或已给药可能扰乱所述对象的肠道微生物菌群的药剂的对象中。多亏了本发明，可以阻止此类药剂的有害影响。因此，本发明涉及一种减轻药剂对作为或可以作为免疫活性移植的接受者的对象的肠道微生物菌群可能具有的有害效应的方法，所述方法包括向所述对象给药有效量的根据本发明所述的适合于使引起生态失调的药剂失活的物质。
144.所述引起生态失调的药剂可以是被给药以治疗所述对象中的病理状况的药剂。事实上，某些药剂可以被给药以便治疗疾病，但当它们到达肠的下部时可能对肠道微生物菌群具有有害影响。所述对象仍将接受所述药剂以从它的所需效应获益，但在另一方面，应该提供避免其次级效应的解决方案。说明性的具有这种行为的药剂包括抗生素。正如上文提供的，抗生素可以被给药到对象以便治疗细菌感染。然而，由于抗生素在设计上能够影响细菌生长或存活，因此当它们到达肠的下部时它们威胁肠道微生物菌群平衡，并且可能引起生态失调。其他说明性的可能引起生态失调的药剂包括但不限于：
145.‑
化学治疗剂，例如紫杉烷(例如多西他赛、紫杉醇)、蒽环霉素类(例如多柔比星)、拓扑异构酶抑制剂(例如依托泊苷)、抗代谢物(例如甲氨蝶呤、阿糖胞苷、5
‑
氟尿嘧啶、吉西他滨)、烷化剂(例如美法仑)、激酶抑制剂(例如埃罗替尼)，
146.‑
抗真菌剂，例如伏立康唑、两性霉素b脂质体、泊沙康唑，
147.‑
抗病毒剂，例如阿昔洛韦、美替沙腙，
148.‑
抗炎药剂，例如阿司匹林、布洛芬。
149.因此，在本发明的另一方面，根据本发明所述的物质被给药到患有癌症并正用、将用或已用引起生态失调的药物物质例如抗生素治疗的对象。
150.所述吸附剂或抗生素失活酶(如果适合的话，由于所述引起生态失调的药物物质是抗生素)甚至可以在移植之前很久就给药到所述对象。例如，所述对象可能已被选择为移植接受者，但所述治疗不能在几天、几周、几个月或几年前开始。在这种情况下，如果所述对象在这些事件之间患有需要使用引起生态失调的药剂例如抗生素治疗的疾病，则通过给药本文中所提供的吸附剂或抗生素失活酶以防止肠道微生物菌群生态失调，将是有利的。同样地，所述吸附剂或抗生素失活酶甚至可以在移植日后很长时间给药到所述对象。具体来
说，所述对象的移植物被所述宿主排斥可能不幸地发生。在这种情况下，在对象接受引起生态失调的药物物质例如抗生素时停止吸附剂或抗生素失活酶的系统性给药可能严重损害将来移植的效能。
151.在特定实施方式中，所述吸附剂或抗生素失活酶与引起生态失调的药剂例如抗生素几乎同时给药到所述对象。“几乎同时”意味着所述吸附剂或抗生素失活酶在所述引起生态失调的药剂特别是抗生素给药之前不久、给药的同时和/或给药之后不久，优选地在其给药之前不久给药。在特定实施方式中，所述吸附剂或抗生素失活酶在所述引起生态失调的药剂特别是抗生素被给药之前或之后不到30分钟内给药，优选地在所述引起生态失调的药剂特别是抗生素被给药之前或之后不到20分钟、不到19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2分钟或不到1分钟之内给药。在其他特定实施方式中，所述吸附剂或抗生素失活酶每天给药至少一次，特别是每天至少两次，更特别是每天三次或每天四次。在其他特定实施方式中，所述吸附剂或抗生素失活酶在使用所述引起生态失调的药剂、特别是使用抗生素的整个治疗过程中给药。在这个实施方式的变化形式中，所述吸附剂或抗生素失活酶可以比所述引起生态失调的药剂、特别是比抗生素给药更长的时间，以便确保消除任何残留的引起生态失调的药剂，特别是任何残留的抗生素。例如，在中断所述引起生态失调的药剂的给药后、特别是抗生素的给药后至少一天例如两天，仍然可以给药所述吸附剂或抗生素失活酶。
152.在特定实施方式中，本发明涉及一种吸附剂或抗生素失活酶，其与抗生素相组合、特别是几乎同时地用于需要移植的对象。根据这个实施方式，所述吸附剂或抗生素失活酶阻止所述抗生素对所述对象的肠道微生物菌群可能具有的不良作用，并因此可以治疗或预防gvhd。
153.在特定实施方式中，本发明可以适合地用于具有gvhd风险的患者，例如服用抗生素等待hsct程序的患者，以防止gvhd发生，或者如果尽管开始了本发明的治疗但仍发生一次发作的话，降低gvhd发作的严重性。
154.具体来说，本发明可用于等待hsct程序或在hsct程序过程中在接受抗生素时的患者，特别是在中性粒细胞减少阶段中的患者。本发明也可用于在中性粒细胞减少阶段之前在接受抗生素时的这些患者，以便维持最适的微生物菌群平衡。本发明也可用于被诊断为患有血液或骨髓的癌症的患者在他们接受抗生素时，以便将微生物菌群维持在可能的最佳状态下可能的最长时间，并且在hsct程序被视为对治愈所述患者来说必需的情况下改善所述hsct的结果。
155.本发明也可用于已接受hsct程序的患者在他们接受抗生素时，以便防止gvhd综合征的发生，或如果所述患者已患有急性或慢性gvhd的话避免所述疾病的恶化。
156.在特定实施方式中，本发明可用于每次所述对象服用抗生素时。本发明也可用在所述对象已接受粪便微生物移植或使用益生菌的治疗以恢复其微生物菌群多样性并处于gvhd风险下之后。
157.在特定实施方式中，所述对象用免疫抑制剂例如甲氨蝶呤、他克莫司、依维莫司、西罗莫司、吗替霉酚酸酯或环孢菌素a给药。在另一个特定实施方式中，所述对象用抗炎药物例如皮质类固醇给药。
158.在其他特定实施方式中，所述对象具有发热。具体来说，所述将要从所述对象的肠
道消除的抗生素是由于所述发热而处方的。
159.在其他特定实施方式中，本发明的活性化合物用于在已接受、接受或将接受同种异体移植的对象中防止微生物菌群改变的方法中。
160.本发明还可以用于具有gvhd的高风险的对象，例如在新的抗生素治愈、新的住院治疗或新的免疫抑制治愈之前的几年中具有以前的gvhd发作的对象。
161.因此，本发明还涉及一种包含吸附剂和引起生态失调的药剂例如抗生素的药剂盒，或涉及一种包含抗生素失活酶和抗生素的药剂盒。所述药剂盒可用于治疗或预防可以使用所述引起生态失调的药剂例如抗生素治疗或预防的病理状况。在所述药剂盒的特定实施方式中，所述引起生态失调的药剂是抗生素。所述药剂盒还可以包含执行本发明的旨在治疗或预防gvhd的方法的说明书。所述药剂盒的组分可以同时、分开地或顺序给药。正如上文中提供的，所述吸附剂或抗生素失活酶具体来说可以在所述引起生态失调的药剂例如抗生素给药之前、期间或之后给药，特别是在之前不久或之后不久、更特别是在之前不久给药。
162.本发明的其他方面和优点将在下面的说明性实验部分中公开。
实施例
163.实施例1：
164.为了评估小鼠在hsct后的临床状态并值得注意地检测gvhd病例，可以使用评分系统来监测多种临床症状。所述评分将体重，腹泻、脱水、脱毛的存在和移动的能力考虑在内。对于每种判据，评分被定义在0、1或2之间。通过将每种判据的评分相加获得总评分。健康小鼠具有低的总评分，而不健康的小鼠具有高的总评分并且在一种或多种判据中具有高评分。
165.如果没有体重减轻或体重减轻低于10％，则这种判据的评分为0。如果体重减轻在10至20％之间，则评分为1。如果体重减轻高于20％，则评分为2。
166.如果小鼠不表现出腹泻，则评分为0。如果观察到轻微腹泻，则评分为1。如果腹泻严重，则评分为2。
167.对于脱水来说，如果没有观察到脱水的迹象则评分为0，如果存在轻微脱水则为1，并且如果脱水严重则为2。
168.如果不存在脱毛，则评分为0。如果存在轻度脱毛，则评分为1。如果脱毛严重，则评分为2。
169.如果小鼠表现出正常的探索性移动，则评分为0。如果小鼠的移动有限，则评分为1。如果小鼠几乎不动，则评分为2。
170.如果需要，可以向所述评分添加其他判据，例如眼、耳、背、皮毛的临床观察或其他临床相关结果。
171.实施例2：
172.为了评估抗生素使用对hsct后gvhd的发生的影响，将雌性balb/c小鼠在第0天用γ
‑
射线源(8gy)辐照，并在第+1天用来自于c57bi/6小鼠的5x106个脾细胞和1x107个骨髓(bm)细胞的混合物静脉内注射。小鼠从第
‑
7天到第+20天通过皮下给药提供抗生素或安慰剂。在实验期间，每天记录存活率、体重和如实施例1中所定义的临床评分，直至第+30天。高
的临床评分与gvhd并发症相关。在第+30天，与不接受抗生素的小鼠相比，在接受抗生素的小鼠中观察到更高的疾病评分。
173.实施例3：
174.为了评估与抗生素一起给药的吸附剂对hsct后gvhd的发生的影响，使用与实施例2中相同的流程，并且对于用抗生素治疗的每个组来说，增添从第
‑
7天到第+25天每天两次通过口饲管另外地接受吸附剂的另一个组。在第+30天，与接受抗生素而没有吸附剂的小鼠相比，在接受所述吸附剂的小鼠中观察到更低的疾病评分。
175.实施例4：
176.为了评估与抗生素一起给药的抗生素失活酶对hsct后gvhd的发生的影响，使用β
‑
内酰胺类抗生素执行与实施例2中相同的流程。引入了另外的组，其中动物从第
‑
7天到第+25天还每天两次给药通过口饲管提供的β
‑
内酰胺酶。在第+30天，与接受抗生素而没有β
‑
内酰胺酶的小鼠相比，在接受所述β
‑
内酰胺酶的小鼠中观察到更低的疾病评分。
177.实施例5：
178.为了调查吸附剂对急性移植物抗宿主疾病的预防或减弱的影响，我们进行了下述实验。
179.在第0天对30只小鼠(129，雌性)进行致死剂量辐照，并移植5百万个c57bl/6t
‑
细胞剥离的骨髓细胞以及1百万个c57bl/6脾脏t细胞。
180.然后将所述小鼠分成3组。在a组中，它们不接受进一步治疗。在b组中，在第10天开始亚胺培南治疗。它由每周3次通过皮下途径给药亚胺培南(100mg/kg)组成。在第21天停止亚胺培南治疗。在c组中，进行与b组中相同的亚胺培南治疗。另外，c组小鼠从第9天到第22天每天接受与它们的采取水凝胶形式的食物混合的活性炭(14.4mg/g)。
181.从第1天到第21天，每天监测所述小鼠的临床状态。在这种造血干细胞移植的背景中，已知小鼠具有发生致死性急性移植物抗宿主疾病的高倾向性。
182.在第21天时每个组中的存活率百分数呈现在下表中：
183.组在第21天的存活率a(骨髓+t细胞移植)70％b(骨髓+t细胞移植+亚胺培南)60％c(骨髓+t细胞移植+亚胺培南+活性炭)90％
184.正如在本发明中呈现的，观察到向小鼠治疗方案添加抗生素引起gvhd病症的加强和更高的死亡率。令人吃惊的是，添加活性炭这种能够捕获小鼠肠道微生物菌群中的亚胺培南的吸附剂，能够逆转所述抗生素的有害效应，并且通过甚至进一步降低由移植物抗宿主疾病造成的死亡率，甚至能够改善小鼠的结果。