由雷帕霉素42-酯硼酸酯制备雷帕霉素42-酯的可放大方法

专利名称：：由雷帕霉素42-酯硼酸酯制备雷帕霉素42-酯的可放大方法由雷帕霉素42-酯硼酸酯制备雷帕霉素42-酯的可放大方法本发明的背景雷帕霉素42-酯是雷帕霉素的衍生物，其是通过吸水链霉菌(streptomyceshygroscopicus)自然产生的大环三烯抗生素。基于雷帕霉素的抗肿瘤和免疫抑制效果，已经发现了雷帕霉素的一系列应用。这种用途包括预防、抑制或治疗移植物排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫疾病包括系统红斑狼疱、炎性疾病包括肺部和眼睛炎症、成人T细胞血癌/淋巴瘤、实质固态瘤、霉菌感染和高增殖的血管病症，包括血管手术之后的平滑肌细胞增殖和内膜变厚。为了治疗这些及其它病症，继续研究雷帕霉素和雷帕霉素衍生物，包括雷帕霉素42-酯例如与3-羟基-2-(羟甲基)-2-曱基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)。包括CCI-779的雷帕霉素的42-酯制备和用途，描述在US专利No.5,362,718中。CCI-779的区域选择性合成描迷在US专利No.6,277,983中。在US专利出版物No.US2005-0033046Al(还有US专利申请No.10/903,062)中，基于硼酸酯化学，描述了CCI-779的区域选择性合成。需要制备雷帕霉素42-酯的其它经济而有效的方法，包括纯化雷帕霉素42-酯的可放大(scalable)方法。本发明概述本发明提供了由雷帕霉素42-酯硼酸酯来制备和纯化雷帕霉素42-酯，包括与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)，的可方文大方法。通过雷帕霉素42-酯硼酸酯与二醇的转硼化作用(transboronation)来制备粗品雷帕霉素42-酯，是在可以获得晶体产物的溶剂系统中进行的。在一个实施方案中，通过进一步用二醇处理来纯化粗品雷帕霉素42-酯，以减少不希望有的副产物，而后重结晶。在另一个实施方案中，将通过转硼化作用(transboronation)制备的粗品雷帕霉素42-酯首先进行重结晶，而后用二醇处理雷帕霉素42-酯的浆料，提供纯化的雷帕霉素42-酯。有利的是，本发明方法避免了使用四氢呋喃(THF)作为溶剂，该四氢呋喃在制备期间不能完全除去，产生油性、粘稠的固体，使得雷帕霉素42-酯的分离很困难。本发明还克服了在雷帕霉素42-酯的纯化期间与使用二醇的丙酮溶液相关的分离问题，其中残余溶剂阻止以所需要的方式结晶、并导致尤其在规模扩大期间的稳定性和工艺问题。由下列的本发明详细说明，可以发现，与现有技术相比，本发明的其它方面和优点非常明显。本发明的详细说明本发明提供了制备雷帕霉素42-酯的可放大方法，该方法通过雷帕霉素42-酯硼酸酯与二醇反应，通过将得到的粗品雷帕霉素42-酯用二醇重结晶和成浆加以纯化，得到最后的雷帕霉素42-酯。在一个实施方案中，首先在溶剂中用二醇处理粗品雷帕霉素42-酯，形成固体雷帕霉素42-酯，而后重结晶，形成纯化的雷帕霉素42-酯。在另一个实施方案中，首先将粗品雷帕霉素42-酯重结晶，形成雷帕霉素42-酯的浆料，而后用二醇处理，形成纯化的雷帕霉素42-酯。术语"雷帕霉素42-酯"包括雷帕霉素的42-位鞋基的酯，和这些雷帕霉素42-酯的醚、酰胺、碳酸酯、氨基曱酸酯、磺酸酯、肟、腙和羟基胺，其中核上官能团例如通过还原或氧化加以修饰，雷帕霉素的代谢物例如各种去曱雷帕霉素或开环雷帕霉素(例如secorapamycin,描述在US专利No.5,252,579中)。术语雷帕霉素42-酯还包括雷帕霉素42-酯的药学可接受的盐，借助于包含酸或碱性的部分，其能够形成这种盐。本文使用的药学可接受的盐包括但不局限于盐酸，氬溴酸，氢碘酸，氪氟酸，硫酸，柠檬酸，马来酸，乙酸，乳酸，烟碱酸，琥珀酸，草酸，磷酸，丙二酸，水杨酸，苯乙酸，硬脂酸，吡啶，铵，哌。秦，二乙胺，烟酰胺，曱酸，脲，钠，钾，钓，镁，锌，锂，肉桂酸，曱基氨基，甲磺酸，苦味酸，酒石酸，三乙基氨基，二曱基氨基，和三(羟基甲基)氨基甲烷。其它药学可接受的盐对于本领域技术人员是已知的。在下面专利中描述了许多雷帕霉素42-酯烷基酯(US专利No.4,316,885);氨基烷基酉旨(US专利No.4,650,803);氟化酯(US专利No.5,100,883);酰胺酯(US专利No.5,118,677);氨基曱酸酯(US专利No.5,118,678);甲硅烷基醚(US专利No.5,120,842);氨基酯(US专利No.5,130,307);缩醛(US专利No.5,51,413);氨基二酯(US专利No.5,162,333);磺酸酯和硫酸酯(US专利No.5,177,203);酉旨(US专利No.5,221,670);烷氧基酯(US专利No.5,233,036);O-芳基、-烷基、-烯基和-炔基醚(US专利No.5,258,389);碳酸酯(US专利No.5,260,300);芳基羰基和烷氧羰基氨基曱酸酯(US专利No.5,262,423);氨基曱酸酯(US专利No.5,302,584);羟基酯(US专利No.5,362,718);位阻酯(US专利No.5,385,908);杂环酯(US专利No.5,385,909);偕-二取代的酯(US专利No.5,385,910);氨基烷酸酯(US专利No.5,389,639);磷酰基氨基甲酸酯(US专利No.5,391,730);氨基甲酸酯(US专利No.5,411,967);氨基甲酸酯(US专利No.5,434,260);脒基氨基曱酸酯(US专利No.5,463,048);氨基甲酸酯(US专利No.5,480,988);氨基曱酸酯(US专利No,5,480,989);氨基甲酸酯(US专利No.5,489,680);位阻N-氧化物酯(US专利No.5,491,231);生物素酯(US专利No.5,504,091);O-烷基醚(US专利No.5,665,772);和雷帕霉素的PEG酯(US专利No.5,780，462)。在一个实施方案中，选择与二羧酸的雷帕霉素42-酯，例如42-半琥珀酸酯、42-半戊二酸酯和42-半己二酸酯。在一个实施方案中，雷帕霉素42-酯具有下面的核结构在一个实施方案中，！^是-CK).CR7117，117其中R7、R'和lT独立地选自氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR1(),-CF3,-F,或^02111();R"是氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三苯基甲基，节基，2-7个碳原子的烷氧基甲基，氯乙基，或四氬p比喃基；1112和1113各自独立地是氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三氟甲基，或-F;、=0-6。所描述的化合物可以包含一个或多个不对称中心，并因此可以得到旋光异构体和非对映体。化合物可以包括旋光异构体和非对映体；消旋和拆分的对映体纯R和S立体异构体；R和S立体异构体的其它混合物；和其药学可接受的盐。本文使用的术语"烷基"指的是直链和支链饱和脂肪烃基团。在一个实施方案中，烷基具有1至大约8个碳原子(即d、C2、C3、C4、C5、C6、C7或Cg)。在另一个实施方案中，烷基具有1至大约6个碳原子(即d、C2、C3、C4、Cs或C6)。在进一步实施方案中，烷基具有1至大约4个碳原子(即d、C2、C3或Q)。本文使用的术语"烯基"指的是含有一个或多个碳-碳双键的直链和支链烷基。在一个实施方案中，烯基包含3至大约8个碳原子(即C3、C4、C5、C6、C7或Cs)。在另一个实施方案中，烯基具有l或2个碳-碳双键和3至大约6个碳原子(即C3、C4、Cs或C6)。本文使用的术语"炔基，，指的是含有一个或多个碳-碳三键的直链和支链烷基。在一个实施方案中，炔基具有3至大约8个碳原子(即C3、C4、C5、C6、C7或Cs)。在另一个实施方案中，炔基包含l或2个碳-碳三键和3至大约6个碳原子(即C3、C4、C5或C。。本文使用的术语"烷氧基"是指O(烷基)基团，其中连结点是通过氧原子，烷基可以如上所述被取代。在一个实施方案中，雷帕霉素42-酯是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)[US专利No.5,362,718],和42-0-(2-羟基)乙基雷帕霉素[US专利No.5,665,772]。当根据其立体化学进行图示时，CCI-779的特点在于下列结构在一个实施方案中，由雷帕霉素42-酯硼酸酯制备雷帕霉素42-酯的本发明方法，提供了至少82%、至少85%或至少89M(针对强度(strength)校正)的收率，具有至少95%或至少98°/。的强度，总杂质小于4%、小于2%或优选总杂质小于1%。如本文所使用的，如下针对强度校正这些收率收率(％)=[实际重量x强度(％)]/[理论重量x100%]。在另一个实施方案中，雷帕霉素42-酯是与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)。在一个实施方案中，总杂质包括小于0.1%的苯基硼酸，优选小于0.05%的苯基硼酸。因为本发明方法是可放大方法，其可以提供超过20kg数量的纯化的雷帕霉素42-酯(即，如上所定义的不含总杂质)。然而，没有因此限制本发明。该方法还用于获得少达20kg、lkg、200g、8g、5g的数量，或更少的数量。按照本发明，粗品雷帕霉素42-酯是由雷帕霉素42-酯硼酸酯制备的。在一个实施方案中，所使用的雷帕霉素42-酯硼酸酯具有下式其中R是-0-OO.CR7r8r9,其中R独立地选自氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR10,-CF3,-F,或-C02R。；RW是氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三苯基甲基，卡基，2-7个碳原子的烷氧基甲基，氯乙基，或四氢吡喃基；R8和R9结合在一起形成X;X是2-苯基-二氧杂硼杂环己烷(dioxoborinane);1112和1113各自独立地是氢，1-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三氟曱基，或-F;f=0-6。本文使用的2-苯基-二氧杂硼杂环己烷(dioxoborinane)可以Y壬选被1、2或3个基团取代，该基团独立地选自氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR1(),-CF3,-F，或-C02R1(}。在一个实施方案中，取代基是一、两个或三个甲基。2-苯基-二氧杂硼杂环己烷(dioxoborinane)的苯基也可以是任选取代的。术语"取代的芳基"是指被一个或多个独立选自下列的取代基取代的芳基(例如苯基)卤素，CN,OH,N02,氨基，烷基，环烷基，烯基，炔基，烷氧基，d至C3全氟烷基，C!至C3全氟烷氧基，芳氧基，烷基羰基，芳基，杂芳基。优选，取代的芳基(例如苯基)被1至大约4个取代基取代。在一个实施方案中，取代基是囟素。在另一个实施方案中，取代基是低级烷基。在一个实施方案中，2-苯基-二氧杂硼杂环己烷选自2-苯基-4,6,6-三甲基-l,3,2-二氧杂硼杂环己烷，2-苯基-l,3,2-二氧杂硼杂环己烷-5-基，2-苯基-l,3，2-二氧杂硼杂环己烷-4-基，其中苯基是如上所定义任选取代的。在进一步实施方案中，雷帕霉素42-酯硼酸酯是与3-羟基-2-(羟曱基)-2-曱基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)的硼酸酯。可以使用先前描述的方法制备雷帕霉素42-酯硼酸酯，用于本发明方法。例如，制备CCI-779硼酸酯的一种合适方法描述在US专利出版物No.US2005-0033046Al(还有US专利申请No.10/903,062)中,并在反应路线I中举例说明。反应路线1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>使用类似的技术，本领域技术人员可以容易地使用其它31-三曱基甲硅烷醚、42-酯硼酸酯来制备所需要的42-酯硼酸酯。典型地，除去31-三曱基曱硅烷醚基团。而后，可以利用丙酮浆料将得到的42-酯硼酸酯純化，如下针对CCI-779硼酸酯的举例说明。反应路线2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>根据这种信息，本领域技术人员可以容易地制备其它雷帕霉素42-酯硼酸酯。通过雷帕霉素42-酯硼酸酯中间体来制备雷帕霉素42-酯的方法，是可以从制备过程中完全不用色谱分离的路线。雷帕霉素42-酯硼酸酯是由雷帕霉素制备的，具有大约80-85%转化率；然而，通过丙酮浆料纯化之后，分离的收率显著地降低。在初步试验中，典型地分离大约1/2的转化物质。在一个实施方案中，本发明提供了用于制备雷帕霉素42-酯的分离粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯的改进方法、和纯化雷帕霉素42-酯硼酸酯的改进方法。尽管从母液中分离粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯的这种方法特别适用于结合描述在US2005/0033046(2005年2月IO日公开)中的制备方法。简要地说，这种可放大方法描述了在获得雷帕霉素42-酯硼酸酯的反应中使用有机溶剂的方法。可以选择的这种溶剂可以包括乙醚、乙腈、乙酸乙酯、THF、叔丁基甲基醚和二氯曱烷。然而，丙酮常常用于形成浓缩液。然而，在某些实施方案中，可以使用单相含水酸/有机溶剂系统进行水解。因此，将所选择的有机溶剂(例如丙酮)与稀无机酸例如硫酸、盐酸或磷酸混合。合适的稀无机酸浓度范围的实例是从大约0.1N至大约3N、大约0.2N至大约2N或大约0.5N。优选，该步骤在5至6的pH值下进行。任选地，合适緩冲液例如乙酸钠，或在石灰酸氬钠和/或醋酸的存在下，加入到混合物中以调节或保持pH值在所需要的范围。然而，可以使用制备雷帕霉素42-酯的其它方法。分离雷帕霉素42-酯硼酸酯的方法可以从制备其的母液中有效分离粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯。这种母液典型地包括雷帕霉素42-酯硼酸酯和污染物，例如一种或多种溶剂和雷帕霉素，最大的单一污染物典型地是雷帕霉素。如上所指出，本发明方法特别适合在如上所述丙酮浆料之后使用。然而，在一方面，将反应物用合适溶剂洗涤并与母液混合。任选地，母液可以从第一丙酮浆料处获得，或从第一和第二丙酮浆料的混合物中获得，或从第一、笫二和第三丙酮浆料的混合物中获得。可以进一步任选将母液与洗涤步骤产生的液体混合。典型地，可以用醚进行反应洗涤，例如可以选择乙醚、三甲醚(例如三丁基甲醚)等等。通过浓缩母液并过滤，可以从母液中分离粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯。在一个实施方案中，在过滤之前，将母液浓缩至浆料。典型地，这可以导致更高的收率，但降低了产物质量(例如大约70至80%w/w雷帕霉素42-酯硼酸酯，具有小于或大约15至20。/。w/w污染雷帕霉素)。与反应路线II的方法的母液相比较，这种浆料可以具有大约15至30%范围内的干燥损失。在另一个实施方案中，在过滤之前，将母液浓缩至浓浆料，并用醚(例如乙醚)稀释。典型地，与使用反应路线II的方法的第一或第二丙酮浆料的母液相比较，得到的浓浆料具有大约30至大约40y。范围内的干燥损失(LOD)。与使用不那么浓缩的浆料相比较，这种方法产生更高质量的产物(例如小于或大约12至15%w/w雷帕霉素)。在又一个实施方案中，将母液浓缩为泡沫(即，水分含量低于由浓缩到浓桨液产生的湿物质)，而后用醚处理。该实施方案提供了高质量产物(例如，小于大约12。/。w/w,优选小于ll。/。w/w,最优选小于10。/。w/雷帕霉素)。在另一个方面，本发明提供了由分离的粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯来純化雷帕霉素42-酯硼酸酯的方法。优选，纯化降低了分离的粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯中的污染物至少大约10倍。在一个实施方案中，将雷帕霉素42-酯硼酸酯纯化，以使其含有小于lwt%雷帕霉素，优选大约0.8wt。/。雷帕霉素或更少。在另一个实施方案中，纯化的雷帕霉素42-酯含有大约0.7wt。/。雷帕霉素或更少。在一个实施方案中，纯化包含雷帕霉素42-酯硼酸酯、雷帕霉素和其它可能污染物(例如至少一种溶剂)粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯的方法，包括将包含粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯和合适溶剂的混合物加热。典型地以超过雷帕霉素42-酯硼酸酯的数量加入溶剂(按重量计算)。例如，可以以大约二、三或四倍雷帕霉素42-酯硼酸酯重量的数量加入溶剂。典型地，将混合物加热至回流，并保持至少大约一个(l)小时。温度和保持时间的长度可以根据许多因素变化，包括例如所选择的溶剂和所需要的保持时间的长度。在一个实施方案中，所选择的溶剂是丙酮，加热温度大约是55至大约62°C。然而，可以选择其它的酮作为溶剂，例如甲基乙基酮。其它溶剂还可以包括醚(例如，醚，乙醚，三丁基曱醚(TBME)，三乙基醚，等等)、乙腈或其混合物(例如，1:1至1:2比例的丙酮/醚)。在混合和加热之后，将混合物冷却并搅拌至少大约6小时。典型地，将混合物随着时间的推移而冷却至室温。然而，通过合适方法可以更快速地冷却将混合物浓缩，形成浆料。除去至少大约三分之一至至少大约一半溶剂(例如丙酮)之后，将醚加入到混合物中，典型地以大约所除去溶剂的数量(例如大约1倍至大约1.5至大约2倍雷帕霉素42-酯硼酸酯的重量)。然而，可以加入更大或更少数量的溶剂。可使用常规方法除去溶剂，例如在用或不用加热的条件下进行真空蒸馏。在一个合乎需要的实施方案中，醚是乙醚。然而，可以容易地从本文所描述和本领域技术人员熟知的那些醚中选择出其它合适的醚。而后，将得到的浆料过滤，回收纯化的雷帕霉素42-酯硼酸酯。第一系列浓缩/浆料，结晶，过滤步骤产生提高纯度的雷帕霉素42-酯硼酸酯。然而，重复一两次分离过程(例如，蒸馏/浆料，结晶和过滤)和/或纯化过程(例如回流，浓缩，结晶和过滤)可能是需要的，以便获得具有所需要纯度的产物，例如含有小于大约1%雷帕霉素的产物。在一个实施方案中，将产物过滤至小于大约5%的干燥损失，优选，小于大约3%,或小于或大约1%，而后重复进行与溶剂混合。任选地，可以用乙酸乙酯洗涤进行第一次纯化操作的容器，并对得到的液体进行本文描述的分离和/或纯化方法。可以在本文所描述的雷帕霉素42-酯的制备中使用得到的纯化的雷帕霉素42-酯硼酸酯。雷帕霉素42-酯的制备在合适溶剂中，使用二醇，将雷帕霉素42-酯硼酸酯转变为粗品雷帕霉素42-酯，即转硼化作用。可以对于上文雷帕霉素42-酯硼酸酯式中所包括的所有雷帕霉素42-酯硼酸酯化合物实行本文所描述的转硼化作用。根据所使用的雷帕霉素42-酯硼酸酯，本领域技术人员可以容易地修饰溶剂混合物中的雷帕霉素42-酯硼酸酯的浓度、二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的比例、溶剂组成、反应温度和所需要的反应时间、或本文所描述的其它可变量。在一个实施方案中，在溶剂混合物中，可以以从大约10%至大约30%、大约15%至大约30%、大约20%至大约30%或大约25%至大约30%重量提供雷帕霉素42-酯硼酸酯。在进一步实施方案中，以大约30%重量提供雷帕霉素42-酯硼酸酯。不优选更高浓度的雷帕霉素42-酯硼酸酯，例如40%,这是因为它们可以产生可与反应器壁粘附的粘稠固体的沉淀，从而降低收率。根据溶剂组成、反应温度和所需要的反应时间，本领域技术人员能够选择优选的比例。在反应混合物中，以从大约2:1至大约10:1的二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的摩尔比提供二醇。在一个实施方案中，二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的摩尔比至少为5:1。在进一步实施方案中，二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的摩尔比大约5:1。在其它实施方案中，二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的摩尔比大约为6:1、大约7:1、大约8:1、大约9:1、大约10:1或其中的任何增量，例如5.1:1或8.5:1。通常，增加二醇数量可以促进反应完成。根据雷帕霉素42-酯硼酸酯在溶剂混合物中的浓度、溶剂组成、反应温度和所需要的反应时间，本领域技术人员能够选择优选的比例。可使用许多1,2-、1,3-、1,4-和1,5-二醇来进行该转硼化作用。优选烷基取代的二醇，例如2-甲基-2,4-戊二醇。在另一个实施方案中，可以使用二乙醇胺或固体-力口载的聚苯乙烯二乙醇胺(PS-DEAM)。还可以使用歡酸试剂例如草酸、丙二酸、酒石酸、邻苯二甲酸和水杨酸来实现转硼化作用。在一个实施方案中，溶剂混合物由醚和庚烷类的混合物组成。在进一步实施方案中，醚是乙醚。然而，没有因此限制本发明。在一个实施方案中，溶剂混合物包括醚和单独的庚烷。在其它实施方案中，溶剂混合物包括庚烷类的混合物和醚。在其它实施方案中，可以使用溶剂例如曱苯、叔丁基曱醚(TBME)、乙醚、^20、己烷类、环己烷类、二嘈、烷或包含这些溶剂的混合物来代替庚烷类。当本文指使用庚烷类时，还涵盖了使用这些溶剂或其混合物。本文使用的术语"庚烷类"包括庚烷和其异构体。该术语还包括庚烷制品，其主要由C7异构体组成，其余组分主要是Cs异构体，例如EXXSOLH印taneFluid(ExxonMobilChemical)。然而，没有因此限制本发明。用于本发明的其它庚烷制品(包括可商业购买的制品)对于本领域技术人员是已知的，并且包括在本发明中。本领域技术人员可以根据反应条件选择庚烷类。进一步的，还可以调节醚与庚烷类的比例。醚与庚烷类的比例可以在大约1:1至大约3:1的范围，或大约1:1至大约2:1(按重量计算)。尽管醚与庚烷类的增加的比例可以促进反应完成，但增加的比例例如4:1产生粘稠固体的沉淀，并因此不是优选的。在一个实施方案中，醚与庚烷类的比例大约是2:1(按重量计算)。然而，本领域技术人员能够根据二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的比例、溶剂混合物中的雷帕霉素42-酯硼酸酯的浓度、溶剂组成、反应温度和所需要的反应时间来选择优选的比例。反应可以在从大约2CTC至大约40°C、大约25。C至大约40°C、大约3(TC至大约4(TC或大约35。C至大约40。C下进行，其中升高温度通常可以促进反应完成。在一个实施方案中，温度大约为30。C至大约40°C。在进一步实施方案中，温度大约为34。C至大约35°C。然而，本领域技术人员能够根据二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的比例、溶剂混合物中的雷帕霉素42-酯硼酸酯的浓度、溶剂组成和所需要的反应时间来选择优选温度。可以利用本领域技术人员已知的常规方法来检测反应是否完成。在优选的条件下，反应可以在三至四小时内高效地完成。在反应完成之后，将产生的粗品雷帕霉素42-酯冷却至大约20至25。C,并搅拌，以免形成粘稠的或胶状的固体。在一个实施方案中，将反应混合物搅拌大约18小时。在另一个实施方案中，将反应混合物搅拌大约38小时。在降低的温度下搅拌反应混合物之后，通过加入非极性的碳基溶剂或其混合物来沉淀粗品雷帕霉素42-酯。在一个实施方案中，非极性的碳基溶剂可以是己烷、戊烷和庚烷和其混合物。在进一步实施方案中，非极性的碳基溶剂是庚烷。在一个实施方案中，非极性的碳基溶剂与醚的比例大约是3:1(按重量计算)。在一个实施方案中，将得到的沉淀粗品雷帕霉素42-酯过滤并用庚烷类洗涤。雷帕霉素42-酯的纯化沉淀之后，利用多步方法，包括重结晶和杂质例如苯基硼酸与二醇的反应，将粗品雷帕霉素42-酯纯化。这些步骤的顺序不是对于本发明的限制。换句话说，在一个实施方案中，首先用二醇处理粗品雷帕霉素42-酯，并将固体雷帕霉素42-酯重结晶。在另一个实施方案中，首先将粗品雷帕霉素42-酯重结晶，而后用二醇处理雷帕霉素42-酯的浆料。可以对于上文雷帕霉素42-酯式中所包括的所有雷帕霉素42-酯化合物实行本文所描述的提纯方法。根据所使用的雷帕霉素42-酯硼酸酉旨，本领域技术人员可以容易地修饰溶剂中的雷帕霉素42-酯的浓度、二醇与粗品雷帕霉素42-酯的比例、溶剂组成、反应温度和所需要的反应时间、或本文所描述的其它可变量。在由雷帕霉素42-酯硼酸酯进行大规模制备的粗品雷帕霉素42-酯中，例如，超过2kg，残余苯基硼酸的量在大约1.8至2.9%之间。先前所描述的重结晶纯化方法仅仅降低了大约一半的这个数量。优选，本发明的纯化方法可以将苯基硼酸的总量降低至小于0.1%，在一些实施方案中，小于0.05%。利用二醇/重结晶纯化粗品雷帕霉素42-酯在这个实施方案中，如果利用二醇处理的纯化在重结晶之前进行，首先干燥转硼化作用产生的粗品雷帕霉素42-酯浆料的剩余溶剂。在溶剂中用二醇处理粗品雷帕霉素42-酯。在一个实施方案中，溶剂是醚。在进一步实施方案中，溶剂是乙醚。在一个实施方案中，二醇是2-甲基-2,4-戊二醇。二醇与雷帕霉素42-酯的摩尔比可以在大约2:1至大约10:1的范围。在一个实施方案中，雷帕霉素42-酯与二醇的摩尔比大约为5:1。在大约20至25。C下进行反应。更高的温度，例如，34°C，不是优选的，因为它们可以引起粘稠固体的形成。可以利用本领域技术人员已知的常规方法来检测反应完成，例如苯基硼酸的消失。在优选的条件下，反应可以在大约五小时内高效地完成。在进一步实施方案中，可以重复反应，以便进一步降低苯基硼酸含量。反应完成之后，将部分纯化的雷帕霉素42-酯干燥，以得到固体雷帕霉素42-酯。将部分纯化的固体雷帕霉素42-酯溶于极性溶剂中。在一个实施方案中，溶剂是丙酮。在另一个实施方案中，溶剂是乙酸乙酯。然而，本领域技术人员可以选择其它极性溶剂，以及溶剂与粗品雷帕霉素42-酯的合适比例。在一个实施方案中，溶剂与粗品雷帕霉素42-酯的比例是从大约5:1至大约8:1(按重量计算)。在一个实施方案中，溶剂是丙酮，丙酮与粗品雷帕霉素42-酯的比例大约为5:1(按重量计算)。溶解雷帕霉素42-酯之后，将不溶性杂质滤出，并将滤液浓缩，形成泡沫。然后将泡沫溶于醚中，经过一段时间以后，纯化的雷帕霉素42-酯结晶出来。在一个实施方案中，该醚是乙醚。然而，可以使用其它醚，以便沉淀雷帕霉素42-酯。在一个实施方案中，雷帕霉素42-酯与醚的比例是从大约1:4至大约1:3。在进一步实施方案中，醚中的雷帕霉素42-酯是大约29%至大约37%,或大约29%至大约30%,按重量计算。在醚重结晶之后，可以用庚烷类进一步处理得到的雷帕霉素42-酯的醚浆料。在一个实施方案中，庚烷类与醚的比例大约是3:1,按重量计算。在另一个实施方案中，庚烷处理和通过过滤分离纯化的雷帕霉素42-酯之后，用醚和庚烷类的溶液洗涤雷帕霉素42-酯，而后干燥。在进一步实施方案中，在洗液中的醚与庚烷类的比例是1:2(按体积)。在洗涤之后，将得到的产物干燥，得到纯化的雷帕霉素42-酯。利用重结晶/二醇反应纯化粗品雷帕霉素42-酯在另一个实施方案中，首先将由转硼化作用产生的粗品雷帕霉素42-酯进行重结晶。典型地，将粗品雷帕霉素42-酯过滤并抽滤干燥。然后将粗品雷帕霉素42-酯溶于极性溶剂中，例如丙酮或乙酸乙酯，过滤出任何不溶性杂质，将滤液干燥成泡沫，并将得到的泡沫溶于极性溶剂例如醚中。经过一段时间以后出现的沉淀包括重结晶的部分纯化的雷帕霉素42-酯。将溶剂中的二醇溶液与部分纯化的雷帕霉素42-酯混合，形成浆料。在一个实施方案中，溶剂是醚。在进一步实施方案中，溶剂是乙醚。在一个实施方案中，溶剂中部分纯化的雷帕霉素42-酯大约为10%至大约30%(按重量计算)，或在溶剂中大约20%至大约30%重量。在进一步实施方案中，溶剂中部分纯化的雷帕霉素42-酯大约为30%重量。在一个实施方案中，二醇是2-曱基-2,4-戊二醇。二醇与雷帕霉素42-酯的摩尔比可以在大约2:1至大约10:1的范围。在一个实施方案中，雷帕霉素42-酯与二醇的摩尔比大约为5:1。在大约20至大约25。C下进行反应。更高的温度，例如，34°C,不是优选的，因为它们可以引起粘稠固体的形成。可以利用本领域技术人员已知的常规方法来检测反应完成，例如苯基硼酸的消失。在优选的条件下，反应可以在大约五小时内高效地完成。在进一步实施方案中，可以重复反应，以便进一步降低苯基硼酸含量。在反应完成之后，将庚烷类加入到混合物中，并利用过滤来分离得到的悬浮液，千燥，得到结晶纯化的雷帕霉素42-酯。在一个实施方案中，可以按照ProcessforthePreparationofPurifiedCrystallineCCI-779(Deshmukh,等人，US专利申请No.60/748,006,2005年12月7日提交，与美国专利商标局的优先权申请和其相应的US和国际申请的日期相同)进一步纯化按照本发明制备的CCI-779,将其说明书和权利要求引入本文中作为参考。可以按照MethodfortheMeasurementofCrystallinityofCCI-779UsingDifferentialScanningCalorimetry(Deshmukh,等人，US专利申请No.60/748,005，2005年12月7日提交，与优先权申请和其相应的US和国际申请的日期相同)来测定按照本发明制备的CCI-779的结晶度，将其说明书和权利要求引入本文中作为参考。下列实施例仅仅是说明性的，不是用来限制实施例1-6举例说明了由可放大方法的母液中分离粗品CCI-779硼酸酯的方法，例如在下面反应路线中所举例i兌明的方法。实施例1:/人母液中回收粗品CCI-779硼酸酯首先使用首批部分回收物质(源于不同工艺的反应路线1和2所举例说明的制备方法)，评价从母液中分离粗品CCI-779硼酸酯，如表1所概括的。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>*回收率=[(回收的CCI-779硼酸酯/回收的CCI-779硼酸酯+余量物质>100%]士5%如项目I所示，可以过滤浆料(从源于第二和第三丙酮浆料的母液混合物处获得)来分离粗品CCI-779硼酸酯，而后过滤。这些母液主要由溶剂、CCI-779硼酸酯和雷帕霉素组成。回收率在95±5%范围之内。分离的CCI-779硼酸酯包括大约8%雷帕霉素。由于得自于第一丙酮浆料的母液含有多得多的杂质，所以试验三种不同的方法。项目II表示浓缩母液至浓浆料、而后过滤的结果。回收率在75±5%范围之内，但过滤非常緩慢。获得含有大约18%雷帕霉素的粗品CCI-779硼酸酯。第二方法(项目III)包括首先将母液浓缩为泡沫，用乙醚处理，得到浆料，而后过滤。过滤分离粗品CCI-779硼酸酯，55±5%收率，雷帕霉素含量13%。在项目IV中，代之以将母液浓缩为浓浆料。用乙醚稀释之后，将粗品CCI-779硼酸酯过滤。回收率在35±5%范围之内，雷帕霉素含量11%。实施例2:乂人母液中回收的粗品CCI-硼酸酯的纯化表2概括了对于从母液中回收的粗品CCI-779硼酸酯的纯化研究结果。在按照反应路线1的制备方法的2次丙酮浆料之后，雷帕霉素含量从8.0降至0.93%。对于试验方法l,将母液在指定温度下加热1小时，在室温下搅拌至少6小时，然后过滤。对于试验方法2A,将母液在指定温度下加热1小时，用1小时冷却至室温，然后在室温下搅拌至少6小时。将这种过程重复2次以上，然后将得到的浆料过滤。对于试验方法2B,将用指定溶剂处理的母液在指定温度下加热1小时，用1小时冷却至室温，然后在室温下搅拌30分钟。将这种过程重复2次以上，并将得到的浆料过滤。对于试验方法3，将含有指定溶剂的母液在指定温度下加热6小时，在室温下搅拌至少6小时，然后过滤。对于试验方法4，将含有指定溶剂的母液在室温下搅拌24小时，过滤。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>通过增加回流和/或混合时间，雷帕霉素含量没有显著地降低。其它溶剂还可以用于纯化粗品CCI-779硼酸酯，但没有丙酮有效。醚可以帮助从粗品CCI-779硼酸酯中除去一些其它杂质，但不是除去雷帕霉素的有效溶剂。丙酮/醚的混合物可以降低雷帕霉素含量及其它杂质，具有合理的回收率。利用2或3个浆料，可以将在粗品CCI-779硼酸酯中的接近于8%的雷帕霉素含量减少到0.80/o或更少(规格(spedfication)-0.80/0)。实施例3:从母液中分离粗品CCI-779硼酸酯浓缩并收集母液。然后用乙酸乙酯洗涤反应器。除去溶剂之后，将从乙酸乙酯冲洗液获得的物质与浓缩母液混合。将合并的混合物进一步浓缩至浓浆料(对于分别得自于第一、第二丙酮浆一+母液的物质，LOD=32%,48%),而后用醚处理。然后过滤分离粗品CCI-779硼酸酯。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>实施例4:将得自于母液中的粗品CCI-779硼酸酯进行纯化在批料生产纯化期间，使用由第一和第二丙酮浆料产生的全部母液量设计和检^r回收CCI-779硼酸酯的方法。通过将母液浓缩至浓浆料、而后用乙醚处理来进行粗品CCI779的分离，如表4所概括。将超过2Kg的粗品CCI-779硼酸酯(雷帕霉素含量8.6%)从第一丙酮浆料(项目I)期间生成的母液中分离。从第二丙酮浆料的母液中获得大约900克粗品CCI-779硼酸酯，雷帕霉素含量低得多(3.5%,项目11)。使用改进的制备方法来纯化粗品CCI-779硼酸酯，在该方法中，首先将粗品CCI-779硼酸酯的丙酮浆料按照与制备方法相似的方法进行回流加热。冷却至室温后，将一半数量的用于浆料中的丙酮替换为乙醚。在室温下搅拌得到的浆料一段时间，过滤。如下列表所示，在两个这种浆料(项目I)之后，由第一浆料的母液得到的粗品CCI779硼酸酯，得到纯化的CCI-779硼酸酯，收率59%,雷帕霉素含量0.8%(在规格之内)。得自于第二浆料的母液的粗品CCI-779硼酸酯的回收率更高(70%,雷帕霉素％=0.7,项目II)。可以回收总共接近2千克纯化的CCI-779硼酸酯[2243/1239x722克(得自于第一浆料的ML)+622克(得自于第二浆料的ML)=1929克]。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>1.纯化方法I.将粗品CCI-779硼酸酯的丙酮浆料回流搅拌1小时，然后冷却至室温。真空除去大约一半数量的丙酮。将相同数量的乙醚加入到稀浆料中。进一步搅拌至少6小时之后，过滤收集純化的CCI-779硼酸酯。II.重复I。2.HPLC面积％。3.两次纯化的总收率。实施例5:回收的CCI-779硼酸酯转化为CCI-779使用本文所描述的方法，将回收的CCI-779硼酸酯(得自于笫一浆料的母液)进一步转变为CCI-779。如表5所示，分离的CCI-779的收率和质量可与使用其它渠道的CCI-779硼酸酯时的收率和质量相当。"总Im."是指总杂质。"LSI"是指最大量的单一杂质。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>实施例6:将得自于母液的CCI-779硼酸酯进行分离和纯化使用得自于CCI-779硼酸酯制备方法的第一丙酮浆料的浓缩母液(8.0千克)和乙酸乙酯冲洗液(5.5千克)。从乙酸乙酯冲洗液中真空除去溶剂，得到537克浓缩液。使用750毫升丙酮，将浓缩液转入12-L多颈圆底烧瓶中，圆底烧瓶配备有机械搅拌器、温度计和蒸馏器。然后将大约一半浓缩母液加入到烧瓶中。在20-25。C的温度下将其真空蒸馏(28"Hg),直到获得浓浆料为止。加入余下的浓缩母液，然后再次蒸馏至浓浆料(大约5L)。向由此获得的混合物中加入4.0千克乙醚。将得到的黄色浆料在20-25。C搅拌4小时，而后过滤，得到2243克粗品CCI-779硼酸酯，具有3.84%的LOD(75。C/30"Hg，2小时)和8.6%的雷帕霉素含量(HPLC面积％)。在配备有机械搅拌器、温度计和蒸馏装置的12L多颈圆底烧瓶中，装入1239克粗品CCI-779硼酸酯和1859克丙酮。将体积做出标记，然后加入另外的1859克丙酮。将混合物回流加热(56-59。C),并保持1小时。用2-3小时将浆料冷却至20-25°C，然后在20-25。C的釜温度下、真空(27"Hg)蒸镏至标记的体积处。加入1872克乙醚，在20-25。C搅拌至少6小时，然后过滤，得到865克粗品CCI-779硼酸酯，具有2.1%的雷帕霉素含量。在配备有机械搅拌器、温度计和蒸馏装置的另一个12L多颈圆底烧并瓦中，装入全部数量的粗品CCI-779硼酸酯和1275克丙酮。标记体积之后，加入另外的1275克丙酮。在56-59。C搅拌加热混合物1小时，用2-3小时冷却至20-25。C，然后在20-25。C的釜温度下真空(27"Hg)蒸馏至标记体积处。加入1275克乙醚，搅拌至少6小时，然后过滤。在40。C真空028"Hg)干燥5小时之后，获得727克纯化的CCI-779硼酸酯(LOD^.86),具有0.8%(HPLC面积％)的雷帕霉素含量。凡-验5将得自于制备批料的第一丙酮浆料的母液(221.3千克)在-5至25°C的釜温度下真空蒸馏(42-46torr),直到获得浓浆料为止(大约25L)。向由此获得的混合物中加入22.1千克乙醚。将得到的黄色浆料在19-25°C搅拌4小时，而后过滤，得到10.1千克粗品CCI-779硼酸酯。将湿滤饼与母液(107.4千克)(得自于制备批料的第二丙酮浆料)混合，并在-1至-9。C的釜温度下真空蒸馏(22-45torr)，直到获得浓浆料为止。向由此获得的混合物中加入32.9千克乙醚。将得到的黄色浆料在19-25。C搅拌4小时，而后过滤。使用醚(每次洗液20千克)洗涤两次之后，得到10.0千克CCI-779硼酸酯，具有0.82%的LOD(40。C/30，，Hg,2小时)。将粗品CCI-779硼酸酯(300克)和丙酮(900克)加入到烧瓶中。将混合物回流加热(55至61°C),并保持1小时。用2-3小时将混合物冷却至20-25°C,然后在不超过10-18。C的釜温度下、真空(23-26"Hg)蒸馏除去丙酮(最终体积940-960毫升)。加入乙醚(450克)，在18-25。C搅拌18小时，而后过滤，得到粗品CCI-779硼酸酯(225克，LOD=0.95%)。将过滤的粗品CCI-779硼酸酯(224克)和丙酮(676克)加入到烧瓶中。将混合物回流加热(55至61°C),并保持1小时。用2-3小时将混合物冷却至19-25°C,然后在18-20。C的釜温度下、真空(18-20"Hg)蒸馏除去丙酮(最终体积620毫升)。加入乙醚(338克)，在18-25。C搅拌18小时，而后过滤。使用醚(每次250毫升)洗涤3次之后，得到CCI-779硼酸酯，63%收率(LOD-0.57。/。，强度=85.9%,总杂质=1.8%,LSI=0.50,雷帕霉素=0.95%)。实施例7-9举例说明了由CCI-779硼酸酯制备纯化的CCI-779的本发明方法的一个实施方案，例如反应路线III所举例说明的方法。反应路线in过滤丙酮/醚重结晶2-甲基-2，4-戊二醇庚烷类CCI-779CseH87NOwMW1030.31^^^7-^^CC/-779的賴务A^2^CC/-779W斜务在配备有机械搅拌器、温度计、500毫升压力平衡加料漏斗和回流冷凝器(带有氮气头)的3L多口圆底烧瓶中，加入199克(0.178摩尔)CCI-779硼酸酯、105克2-曱基-2,4-戊二醇(0.891摩尔)的371克乙醚和185克庚烷类溶液。在氮气氛围中，伴随着搅拌，将混合物加热至33-37°C,保持12小时。HPLC显示消耗的起始CCI-779硼酸酯(<3%)和苯基硼酸(在反应混合物中)低于小于3.0%或小于1.5%的规格。用20分钟将反应混合物冷却至20-25°C,用1小时通过加料漏斗加入928克庚烷类，然后在20-25。C搅拌1小时。将得到的混合物在布氏漏斗上过滤。将过滤的固体用两份500毫升庚烷类洗涤。再次抽滤干燥，直到基本上收集不到滤液为止，分离出174克粗品0:1-779[强度=93.8%,总杂质=1.36%,雷帕霉素-0.40。/。(HPLC);醚=0.15%，庚烷类=0.26%(GC)]。B.粗品CCI-779的纯化将获得的粗品CCI-779转入2L烧瓶中，然后加入1L丙酮，获得浑浊溶液。将溶液通过带有细玻璃粉(4-5.5微米)的玻璃布氏漏斗进行澄清。然后将清滤液加入到配备有机械搅拌器、温度计和真空蒸馏装置的5L多颈烧瓶中。用400毫升丙酮洗涤2L烧瓶和布氏漏斗。将丙酮洗涤液加入到5L烧瓶中。在20-30。C减压除去丙酮之后，在20-25。C将获得的泡沫溶于420克乙醚中，形成澄清溶液。20分钟之后，固体开始沉淀。将已经通过0.45微米针筒式滤器过滤的105.3克2-甲基-2，4-戊二醇的52克乙醚溶液加入到5L烧瓶中。将混合物在20-25。C搅拌1小时。HPLC分析表明，苯基硼酸的量小于0.05%。然后通过加料漏斗、用2小时向反应混合物中加入1,272克庚烷类。在20-25。C搅拌1小时之后，将混合物在布氏漏斗上过滤。将收集的固体用3份500毫升醚/庚烷类(1/2,v/v)洗涤，保持抽滤，直到液滴停止为止。将湿滤饼在50。C、在真空烘箱中真空干燥21小时，得到156克(89%,强度校正)纯化的CCI-7"(CZ-7781-24-2)白色晶体[强度=98.4%,总杂质=0.98%,雷帕霉素=0.36%,PhB(OH)2<0.05%(HPLC);醚=0.21%,庚烷类=0.037%,2画甲基-2,4-戊二醇=0.096%,2-曱基-2,4-戊二醇硼酸酯=没有检测到(GC)]。方法编号<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>实施例8-纯化CCI-779的制备进行了一些早期的中试(pilot)研究，基本上使用实施例1所描述的方法，但改变了CCI-779硼酸酯的浓度、利用不同路线制备的CCI-779和不同的反应时间。在前述的表中，方法编号1是指27%(wt%)CCI-779硼酸酯在2/1(wt/wt)醚/庚烷类中，在34-5。C，6-12小时，然后加入庚烷类，过滤。利用丙酮/醚结晶进行纯化，而后用2-曱基-2,4-戊二醇处理。方法编号2是指17Q/。(wtQ/。)CCI-779硼酸酯，在2/1(wt/wt)醚/庚烷类中，在34-5",15-24小时，然后加入庚烷类，过滤。利用丙酮/醚结晶进行纯化，而后用2-曱基-2，4-戊二醇处理。基本上如上所述，在醚和庚烷类(2:1，Wt/Wt)的混合物中，在34°C,使用5叫.的2-曱基-2,4-戊二醇，经过6小时，由CCI-779硼酸酯制备粗品CCI-779。过滤分离粗品CCI-779。将粗品CCI-779悬浮在醚中，然后用5eq.的2-曱基-2,4-戊二醇处理，而后加入庚烷类，过滤，千燥。然后将干燥的、部分纯化的CCI-779溶于丙酮中，澄清，除去丙酮。在这之后，加入醚，使产物结晶，将庚烷类加入到醚浆料中，过滤浆料，干燥。得到的收率是73%的CCI-779,具有93.5%的强度,小于4%(即3.59%)的总杂质，和显著的0.007的PhB(OH)2。引入本文确定的所有文献作为参考。本领域技术人员将会认识到，在不背离本发明的条件下，可以对于本文所描述具体实施方案中的条件和技术进行较小改进。这种较小的改进和变化在本文所描述的本发明范围之内，正如下列权利要求所定义的那样。权利要求1.制备雷帕霉素42-酯的方法，包括下列步骤(a)将雷帕霉素42-酯硼酸酯在溶剂混合物中与二醇反应，提供粗品雷帕霉素42-酯；和(b)通过重结晶并用二醇处理来纯化粗品雷帕霉素42-酯。2.按照权利要求1的方法，其中步骤(b)包括在溶剂中用二醇处理粗品雷帕霉素42-酯，形成固体雷帕霉素42-酯，而后将固体重结晶，形成纯化的雷帕霉素42-酯。3.按照权利要求l的方法，其中步骤(b)包括将粗品雷帕霉素42-酯重结晶，形成浆料，而后用二醇处理，形成纯化的雷帕霉素42-酯。4.按照权利要求1至3的任一项的方法，其中步骤(a)中的雷帕霉素42-酯硼酸酯在所述溶剂混合物中是从大约10%至大约30%重量。5.按照权利要求4的方法，其中步骤(a)中的雷帕霉素42-酯硼酸酯在所述溶剂混合物中是大约30%重量。6.按照权利要求1至5的任一项的方法，其中在步骤(a)中的二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的摩尔比是从大约5:1至大约10:1。7.按照权利要求6的方法，其中步骤(a)中的二醇与雷帕霉素42-酯硼酸酯的摩尔比是大约5:1。8.按照权利要求1至7的任一项的方法，其中步骤(a)中的二醇是2-曱基-2,4-戊二醇。9.按照权利要求1至8的任一项的方法，其中步骤(a)中的溶剂混合物包括乙醚和庚烷。10.按照权利要求1至8的任一项的方法，其中步骤(a)中的溶剂混合物包括庚烷类的混合物和乙醚。11.按照权利要求10的方法，其中乙醚与庚烷类的比例是从大约1:1至大约2:1重量。12.按照权利要求1至11的任一项的方法，其中步骤(a)中的反应是在大约30至4(TC下进行的。13.按照权利要求12的方法，其中将(a)的粗品雷帕霉素42-酯冷却至大约20至25。C。14.按照权利要求1至13的任一项的方法，其中通过加入一种或多种非极性的碳基溶剂，将(a)的粗品雷帕霉素42-酯沉淀。15.按照权利要求14的方法，其中一种或多种非极性的碳基溶剂选自己烷、戊烷和庚烷。16.按照权利要求14或15的方法，其中溶剂是庚烷类的混合物。17.按照权利要求16的方法，其中步骤(a)的庚烷(类)与溶剂混合物的比例是大约3:1重量。18.按照权利要求1至17的任一项的方法，其中步骤(b)中的重结晶包括下列步骤(I)将粗品雷帕霉素42-酯在极性溶剂中溶解；和(II)将得到的悬浮液过滤，并浓缩粗品雷帕霉素42-酯滤液，得到泡沫。19.按照权利要求18的方法，其中极性溶剂是丙酮。20.按照权利要求18的方法，其中极性溶剂是乙酸乙酯。21.按照权利要求19的方法，其中丙酮与粗品雷帕霉素42-酯的比例是大约5:1。22.按照权利要求18至21的任一项的方法，进一步包括将步骤(II)的泡沫在醚中溶解。23.按照权利要求22的方法，其中醚是乙醚。24.按照权利要求22或23的方法，其中雷帕霉素42-酯与醚的比例是从大约1:4至大约1:3。25.按照权利要求22至24的任一项的方法，进一步包括加入庚烷类。26.按照权利要求25的方法，其中庚烷类与醚的比例是3:1重量。27.按照权利要求25或26的方法，进一步包括将形成的悬浮液过滤，用醚和一种或多种庚烷类洗涤沉淀的粗品雷帕霉素42-酯。28.按照权利要求27的方法，其中醚与庚烷类的比例是l:2体积。29.按照权利要求27或28的方法，进一步包括将分离的雷帕霉素42-酯干燥。30.按照权利要求1至29的任一项的方法，其中步骤(b)中的用二醇处理包括下列步骤(I)将粗品雷帕霉素42-酯在溶剂中混合；和(n)将粗品雷帕霉素42-酯与二醇反应。31.按照权利要求30的方法，其中步骤(I)中的溶剂是乙醚。32.按照权利要求30或31的方法，其中步骤(I)中的雷帕霉素42-酯在溶剂中是大约30%重量。33.按照权利要求30至32的任一项的方法，其中步骤(II)中的二醇是2-曱基-2，4-戊二醇。34.按照权利要求30至33的任一项的方法，其中在步骤(II)中的二醇与雷帕霉素42-酯的摩尔比是大约5:1。35.按照权利要求30至34的任一项的方法，其中步骤(II)中的反应是在20至25。C下进行的。36.按照权利要求30至35的任一项的方法，其中首先将步骤(a)的粗品雷帕霉素42-酯进行残余溶剂的干燥。37.按照权利要求1至36的任一项的方法，其中雷帕霉素42-酯硼酸酯具有下式其中R是-0-OO.CR7r8r9,其中W是氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，-(CR^R^fOR^-CF^-F,或-(2021110;R"是氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三苯基甲基，千基，2-7个碳原子的烷氧基曱基，氯乙基，或四氬p比喃基；R8和R9结合在一起形成X;X是2-苯基-二氧杂硼杂环己烷或2-(取代的)苯基-(取代的)二氧杂硼杂环己烷；R"和R"各自独立地是氢，1-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三氟曱基，或-F;f=0-6。38.按照权利要求37的方法，其中2-苯基-二氧杂硼杂环己烷选自2-苯基-4,6,6-三甲基-l,3,2-二氧杂硼杂环己烷，2-苯基-l,3,2-二氧杂硼杂环己烷-5-基，2-苯基-l,3,2-二氧杂硼杂环己烷-4-基，其中苯基可以是任选^皮取代的。39.按照权利要求37的方法，其中雷帕霉素42-酯硼酸酯是CCI-779硼酸酯。40.按照权利要求1至39的任一项的方法制备的纯化雷帕霉素42-酯。41.按照权利要求39的方法制备的、纯化的与3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)。42.具有至少96%纯度的纯化的与3-羟基-2-(羟曱基)-2-甲基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)。43.按照权利要求42的纯化的化合物，其中所述化合物含有小于1%的任何单一杂质。44.按照权利要求42或43的纯化的化合物，其中所述化合物含有小于0.05%的苯基硼酸。45.从包含雷帕霉素42-酯硼酸酯、雷帕霉素和一种或多种溶剂的母液中分离粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯的方法，包括将母液浓缩为浆料；将得到的浓缩母液过滤，分离粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯。46.按照权利要求45的方法，其中一种或多种溶剂选自丙酮、乙酸乙酯和水的一种或多种。47.按照权利要求45的方法，进一步包括下列步骤将包含丙酮的母液浓缩为泡沫，并用乙醚处理泡沫，而后过滤。48.按照权利要求45的方法，进一步包括下列步骤将第二浆料用包括丙酮的溶剂处理，浓缩混合物，形成第三浆料，而后过滤。49.按照权利要求45的方法，其中将母液浓缩为浆料，并且进一步包括将浆料用乙醚稀释的步骤，而后过滤。50.纯化粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯的方法，该粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯包含雷帕霉素42-酯硼酸酯、雷帕霉素和至少一种溶剂，所述方法包括(a)将包含粗品雷帕霉素42-酯硼酸酯和溶剂的混合物加热至少大约1小时；(b)在冷却之后，将(a)的混合物搅拌至少大约6小时；(c)将雷帕霉素42-酯硼酸酯混合物浓缩，形成浓缩浆料；(d)用合适醚处理浓缩的浆料；(e)将雷帕霉素42-酯硼酸酯纯化；(f)任选重复步骤(a)-(e)。51.按照权利要求50的方法，其中将(a)的混合物冷却至室温。52.按照权利要求50的方法，其中将步骤(a)-(e)至少重复一次。53.按照权利要求50的方法，其中将步骤(a)-(e)总共进行三次。54.按照权利要求53的方法，其中重复步骤(a)-(e)之后，回收的雷帕霉素42-酯硼酸酯含有小于1%重量的雷帕霉素。55.按照权利要求50的方法，其中浓缩的浆料(c)通过除去至少大约一半溶剂而形成。56.按照权利要求50的方法，进一步包括通过用合适醚洗涤来纯化步骤(e)中所分离的雷帕霉素42-酯硼酸酯的步骤。57.按照权利要求50的方法，其中步骤(a)中的溶剂选自丙酮、甲醇、乙腈、甲基乙基酮、TBME和醚和其混合物。58.按照权利要求50的方法，其中步骤(a)中的溶剂是丙酮。59.按照权利要求50的方法，其中加热步骤是在大约55至大约6(TC的温度范围进行的。60.按照权利要求50的方法，其中合适的醚是乙醚。61.按照权利要求50的方法，其中通过将合适醚处理之后所形成的结晶产物过滤来回收雷帕霉素42-酯硼酸酯。62.按照权利要求50的方法，其中雷帕霉素42-酯硼酸酯具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中R是-0-CK).CR7r8r9,其中R、虫立地选自氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR10,-CF3,-F,或C02R";R"是氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三苯基曱基，苄基，2-7个碳原子的烷氧基曱基，氯乙基，或四氢p比喃基；R8和R9结合在一起形成X;X是2-苯基-二氧杂硼杂环己烷；1112和R"各自独立地是氢，l-6个碳原子的烷基，2-7个碳原子的烯基，2-7个碳原子的炔基，三氟曱基，或-F;和f=0-6。63.从包含CCI-779和至少一种溶剂的母液中純化与3-羟基-2-(羟甲基)-2-曱基丙酸的雷帕霉素42-酯(CCI-779)硼酸酯的方法，所述方法包括(a)加热回流包括从母液获得的粗品CCI-779和包括丙酮的溶剂的混合物；(b)将(a)的混合物冷却至室温；(c)将冷却的混合物搅拌至少大约6小时；(d)除去至少大约一半溶剂，形成浓缩的CCI-779硼酸酯浆料；(e)用乙醚处理浓缩的浆料；(f)回收CCI-779硼酸酯；(g)重复步骤(a)-(f)至少一次。64.按照权利要求63的方法，其中真空除去溶剂。65.按照权利要求63的方法，其中通过过滤收集分离的CCI-779硼酸酯。66.按照权利要求63的方法制备的CCI-779硼酸酯，具有小于1%w/w的雷帕霉素含量。67.按照权利要求66的CCI-779硼酸酯，其中雷帕霉素含量是0.8%w/w。68.按照权利要求66的CCI-779硼酸酯，其中雷帕霉素含量是0.7%w/w。全文摘要本文提供了制备雷帕霉素42-酯的可放大方法，该方法通过雷帕霉素42-酯硼酸酯与二醇反应，利用重结晶来纯化粗品雷帕霉素42-酯，并用二醇处理。也提供了从包含丙酮和雷帕霉素污染物的母液中分离和纯化雷帕霉素42-酯硼酸酯的方法。文档编号C07D498/18GK101321770SQ200680045719公开日2008年12月10日申请日期2006年12月6日优先权日2005年12月7日发明者A·P·米绍,A·皮尔歇尔,A·萨利,C·W·库格林,C·张,J·S·法里纳申请人:惠氏公司