C5aR拮抗剂的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及C5aR拮抗剂的另外的治疗用途，具体而言与骨损伤和与其相关的疾 病和病症有关的用途。
[0002] 背景 C5aR是补体因子5的A片段（C5a)的受体。该受体在许多不同细胞类型（包括白细 胞）上表达。C5aR属于七次跨膜G-蛋白-偶联受体的家族，并且是C5a的高亲和力受体， 其Kd为约I nM。受体的结构符合七次跨膜受体家族，其中胞外N-末端后接着通过交替作 为胞内和胞外环的螺旋间结构域连接的7个跨膜螺旋，和以胞内C-末端结构域终止。
[0003] C5a与C5aR拮抗剂反应的抑制减少通过C5a介导的急性炎性反应，而不影响其它 补体成分。为此，先前已描述了 C5aR肽诘抗剂和抗_C5a受体抗体（Watanabe等，1995 Journal of Immunological Methods 185: 19-29; Pellas 等，1998; Konteatis 等， 1994; Kaneko 等，1995; Morgan 等，1993)。例如，WO 95/00164 描述针对 C5aR 的 N-末 端肽（残基9-29)的抗体。WO 03/062278描述与第2个胞外环反应的抗体（包括称为7F3、 6C12和12D4的克隆）。其它C5aR抗体描述于W0/022390和近来的W02012/168199。所有 数据证实，有效阻断C5a与其受体C5aR结合可体外抑制C5a刺激的嗜中性粒细胞迀移和预 防动物模型的炎症。
[0004] C5a是参与炎性疾病例如类风湿性关节炎的发病的促炎蛋白，C5a和C5aR在类 风湿性关节炎中的关联已在C5aR遗传缺陷小鼠中得到证实，所述小鼠较不易于诱发关节 炎（Ji 等（2002) Immunity 16: 157-168; Grant 等（2002) J Exp Med 196: 1161-1171 ; Lee 等，2006 (Nat Biotechnol. 2006 Oct; 24 (10) :1279-84)和 Hishimoto 等 2010，J Exp Med. 2010 Jun 7;207(6):1135-43)。此外，用小分子 C5aR 拮抗剂（一种环肽）治 疗，可在大鼠中诱发关节炎后减少炎症和肿胀（Woodruff等（2002) Arthritis Rheum 46: 2476 - 2485)〇
[0005] 类风湿性关节炎（RA)是一种关节的炎性疾病。受累的关节通常肿胀和发热，并随 时间逐渐变得更加疼痛和僵硬。随后的症状包括严重影响患者的运动性的关节破坏（包括 骨损伤），并可包括骨变形。
[0006] 尽管用于治疗这样的炎性疾病的大多数药物主要是抗炎性的，但极为重要和引人 关注的是，RA和相关疾病的治疗还积极影响关节和骨破坏。除了 RA之外，骨损伤的发生还 可与其它关节炎疾病有关，甚至与炎症疾病无关。
[0007] 成骨细胞和破骨细胞共同负责维持骨，因为破骨细胞可不断损坏骨组织而成骨细 胞刺激骨形成并因而增加骨质量和/或骨密度。因此，可影响骨体内稳态和重塑的调节的 任何化合物可能是相关的，并在影响骨的疾病或病症和特别是骨损伤包括骨质侵蚀的治疗 中具有广泛应用。
[0008] 简述 本申请的发明人已经发现，除了 C5aR拮抗剂具有可用性的适应症/症状之外，C5aR拮 抗剂还具有治疗关节破坏、骨损伤和特别是抑制骨质侵蚀的延伸的功能性。
[0009] 本发明的一个方面涉及C5aR拮抗剂用于治疗或预防骨损伤的用途，例如用于治 疗或预防骨损伤的方法的C5aR拮抗剂。骨损伤在此处被认为包括骨质侵蚀和骨密度损失。 此外，C5aR拮抗剂可进一步用于联合治疗或预防骨损伤和软骨降解。这样的治疗或预防可 用于降低骨损伤的速率和/或用于改善或增加骨矿物质密度。骨损伤至少部分地是影响关 节的炎性疾病（特别是关节炎）的症状，因此，根据本发明，C5aR拮抗剂可用于治疗或预防 患有各种形式的关节炎之一的受试者的骨损伤。
[0010] 本发明人令人惊讶地发现，使用C5aR拮抗剂的治疗作用提供快速反应，因为治疗 效果可在少数剂量后就已被观察到。在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗或预防骨损 伤的方法的C5aR拮抗剂，其中在4、3、2或1个剂量后可获得效果。
[0011] 根据本发明，拮抗剂的功能性可被认为与拮抗剂通过抑制或降低C5a与C5aR的结 合和/或通过抑制或降低C5aR介导的C5a生物学作用来诘抗C5aR的能力关联，C5aR介导 的C5a生物学作用例如：a) C5a诱导的嗜中性粒细胞活化，b) C5a诱导的细胞迀移和/或 c) C5a诱导的嗜中性粒细胞成熟。
[0012] 本发明的C5aR拮抗剂可以是适于治疗性给予的任何类型的化合物，包括抗体和 肽分子。本发明的C5aR拮抗剂可作为任选包括一种或多种药用赋形剂的药物组合物的一 部分给予。在一个方面，本发明涉及用于治疗或预防骨损伤的方法，所述方法包括给予有需 要的个体治疗有效量的本文所述的C5aR拮抗剂。
[0013] 序列表 SEQ ID NO. 1:人 C5aR MDSFNYTTPD YGHYDDKDTL DLNTPVDKTS NTLRVPDILA LVIFAVVFLV GVLGNALVVff VTAFEAKRTI NAIffFLNLAV ADFLSCLALP ILFTSIVQHH HffPFGGAACS ILPSLILLNM YASILLLATI SADRFLLVFK PIffCQNFRGA GLAffIACAVA WGLALLLTIP SFLYRVVREE YFPPKVLCGV DYSHDKRRER AVAIVRLVLG FLffPLLTLTI CYTFILLRTff SRRATRSTKT LKVVVAVVAS FFIFffLPYQV TGIMMSFLEP SSPTFLLLKK LDSLCVSFAY INCCINPIIY VVAGQGFQGR LRKSLPSLLR NVLTEESVVR ESKSFTRSTV DTMAQKTQAV 第2个环通过下划线AA 171-206表示。
[0014] SEQ ID NO. 2:小鼠 C5aR MNSSFEINYD HYGTMDPNIP ADGIHLPKRQ P⑶VAALIIY SWFLVGVPG NALWWVTAF EPDGPSNAIff FLNLAVADLL SCLAMPVLFT TVLNHNYffYF DATACIVLPS LILLNMYASI LLLATISADR FLLVFKPIffC QKVRGTGLAff MACGVAffVLA LLLTIPSFVY REAYKDFYSE HTVCGINYGG GSFPKEKAVA ILRLMVGFVL PLLTLNICYT FLLLRTffSRK ATRSTKTLKV VMAVVICFFI FffLPYQVTGV MIAffLPPSSP TLKRVEKLNS LCVSLAYINC CVNPIIYVMA GQGFHGRLLR SLPSIIRNAL SEDSVGRDSK TFTPSTDDTS PRKSQAV 第2个环通过下划线AA 167-203表示。
[0015] 附图简述 图1示出抗-C5aR mAb与嵌合人/小鼠 C5aR的结合。图指出源自人和小鼠的C5a受 体蛋白的区，小鼠序列用粗线表示和人序列用细线表示。
[0016] 图2示出作为△平均荧光强度（FI)定量的C5a_诱导的⑶Ilb表达：从获自未加 入C5a的血液的平均FI值中减去给定抗-C5aR mAb浓度的平均FI值。mAb 20/70的结果 表示为mAb浓度的函数。虚线表示IC50值，其计算为0,6 Pg/ml。
[0017] 图3示出抗_C5aR减少CIA小鼠模型的组织学评分。图示出分别用抗_C5aR、 Enbrel? (Etanerc印t)和同种型对照治疗来治疗的小鼠的组织学评分指数。对各小鼠的两 个后爪进行关节炎变化的组织病理学终点评价。与同种型对照治疗相比，用抗_C5aR治疗 显著减少组织学评分指数。
[0018] 图4示出在CIA小鼠模型中抗-C5aR抑制骨质侵蚀和软骨降解。对各小鼠的最坏 受累的后爪的HE染色切片评价骨质侵蚀和软骨降解。与用抗-TNP对照抗体治疗的小鼠相 比，用抗_C5aR治疗显著减少骨质侵蚀和软骨降解两者。
[0019] 图5示出用抗_C5aR治疗降低在单爪关节炎模型中的各种关节炎参数。从用阻断 性抗-C5aR抗体或同种型对照抗体治疗的具有DTH-关节炎的小鼠中获得数据。抗-C5aR 治疗显著减少关节炎变化，包括滑膜炎、软骨降解和骨质侵蚀。此外，治疗显著减少炎性细 胞的关节外浸润。
[0020] 图6示出在CIA小鼠模型中治疗后48小时用抗_C5aR的单剂量改善关节炎。图 6A和6B分别示出随时间的平均临床评分（土SEM)/组和AUC (个体临床评分的曲线下面 积）。黑线表示平均值。图6C示出组织学评分指数。临床和组织病理学评价均表明显著减 少疾病。
[0021] 图7示出单剂量的抗-C5aR mAb后60小时DTHA模型中疾病活动减少。7A示出 两个治疗组中关节炎诱导后经60小时测量的爪和踝肿胀的曲线下面积（AUC)。显示平均 值土 SEM，n=10。*: p 彡 0.05;林：p 彡 0.01，Student t 检验。7B 示出 0-3 刻度上的 在两个治疗组中关节炎和炎性参数的半定量组织病理学评分。用抗_C5aR治疗的小鼠显 示较低程度的滑膜炎、软骨破坏和骨质侵蚀。n=10。*: p < 0. 05; **: 0. 01; ***: p < 0.001，Student t检验，具有Welch校正。7C示出B中的个体评分的总和（关节炎总 评分）和减去额外的关节浸润的B中的个体评分的总和（关节炎评分）。最大可能评分分 别是 15 和 9。n=10。*: p < 0.05;林：p < 0.01，Student t 检验，具有 Welch 校正。
[0022] 描述 C5aR诘抗剂的用途 抑制或减少通常由配体-受体相互作用引起的生物学反应的化合物或药物被称为受 体拮抗剂。这样的受体拮抗剂会结合受体，但相互作用将没有效力。因此，拮抗剂的存在会 抑制或减少受体的配体的生物学作用。拮抗剂的作用可通过结合受体的活性位点而阻断或 干扰配体相互作用来介导。或者，拮抗剂可在也有效防止配体结合或受体信号转导的不同 位点上结合受体。
[0023] 已发现，基于来自数个特定关节炎疾病模型的结果，C5aR拮抗剂具有在治疗炎性 疾病和病症中的关联性。因此，在结合C5a时由C5a受体介导的信号转导可受到抑制或减 少，导致抑制或减少发展中的炎症过程，因此关节肿胀减轻。此外，已发现，C5a和C5aR具 有与骨体内稳态和重塑有关的功能。本申请的发明人进一步确立，C5aR拮抗剂具有对骨损 伤的有利作用。
[0024] 本发明的一个方面涉及用于治疗或预防骨损伤或用于治疗或预防骨损伤的方法 的C5aR拮抗剂。在一个类似的方面中，本发明涉及C5aR拮抗剂在制备用于治疗骨损伤的 药物中的用途。
[0025] C5aR诘抗剂影响骨损伤的发展的能力可能涉及骨质侵蚀和骨密度损失中的一项 或多项。一般而言，治疗是非常广义的术语并涵盖多个方面，包括作为对患者的益处见到的 任何作用，所述患者患有骨损伤或有发展骨损伤的风险，例如骨质侵蚀和骨密度损失中的 一项或多项。在本说明书中，当涉及观察到骨损伤的情况时使用治疗，而当涉及尚未观察到 骨损伤的情况时使用预防。注意，在本文件的实施例中，"治疗"仅是指给予化合物，而不论 该给予的任何治疗效果。
[0026] 在一个实施方案中，C5aR诘抗剂用于治疗骨损伤（骨质侵蚀和骨密度损失中的一 项或多项）和软骨破坏的方法。
[0027] 骨损伤通过可导致对关节移动性有严重影响的连续过程发生。给定患者的骨损伤 可在患者（或医师）知道他或她具有发生骨损伤风险之前已经开始。在其它情况中，C5aR 拮抗剂可用于预防有发生骨损伤的风险的患者的骨损伤。在一个实施方案中，C5aR拮抗剂 可用于预防性治疗骨损伤的方法。
[0028] 在一些实施方案中，C5aR拮抗剂用于治疗以逆转或减少骨损伤，例如使关节的骨 质再生。在进一步的实施方案中，C5aR拮抗剂用于治疗以改进骨矿物质密度。
[0029] 骨损伤可完全预防或完全治疗可能是罕见的，和C5aR拮抗剂治疗的目的可能更 经常是延缓或停止骨损伤的进展或预防骨损伤的进一步发展。
[0030] 在进一步的实施方案中，C5aR拮抗剂用于预防骨损伤、用于减少骨损伤和/或用 于抑制骨损伤。在进一步的实施方案中，C5aR拮抗剂用于延缓或停止骨损伤进展。在进一 步的实施方案中，C5aR拮抗剂用于抑制骨损伤的进展。
[0031] 在进一步的实施方案中，C5aR拮抗剂用于在哺乳动物受试者和特别是人受试者中 治疗骨损伤的方法。从上文显而易见的是，本发明涉及在人受试者中治疗骨损伤的任何方 面，例如预防、抑制、停止和逆转骨损伤。同样，本发明涉及治疗骨损伤，包括在人受试者中 骨质侵蚀和骨密度损失中的一项或多项。
[0032] 因此，本发明涉及用于治疗受试者的骨损伤的方法的C5aR拮抗剂，其中所述受试 者是有需要的个体。因此，有需要的个体是可能获益于治疗骨损伤的个体，例如患有骨损伤 或具有发展骨损伤的风险的患者，所述骨损伤同样包括骨质侵蚀和骨密度损失中的一项或 多项。
[0033] 在进一步的实施方案中，治疗的受试者可以是患有关节炎的患者。在一个实施方 案中，受试者具有骨关节炎（变性关节疾病）。在进一步的这样的实施方案中，骨关节炎 可以是由于对关节的创伤、关节感染或与年龄相关。在一个实施方案中，受试者具有类风 湿性关节炎，其还可包括具有青少年