二肽基肽酶-iv(dppiv)抑制性肽化合物，包含所述肽化合物的组合物，及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及具有二肽基肽酶-IV(DPPIV)抑制活性的肽及其盐（作为肽化合物）， 和包含其的组合物。所述组合物包含一种或多种在源自水产品如鱼和贝类的鱼白的蛋白源 的水解产物中发现的具有DPPIV抑制活性的肽化合物作为活性成分。
【背景技术】
[0002] 糖尿病包括一组具有基于不足的胰岛素作用的慢性高血糖的基本症状的代谢疾 病。为了治疗进行的血糖控制，作为用于不仅抑制糖尿病的发病，而其抑制并发症如视网膜 病，肾病，神经病，心肌梗死和脑梗死的发病和进展；和用于改善患者的生命质量（QOL)和 预期寿命的方法，是非常有意义的。在日本，95%以上的糖尿病患者被认为是2型糖尿病 (非胰岛素依赖性糖尿病）患者。近年来，二肽基肽酶-IV(DPPIV)抑制剂已经被批准作为 2型糖尿病的新型治疗剂，并且引起注意，因为其引起小的有害反应如低血糖并且可以以优 异的机制进行血糖控制。DPPIV将肠促胰岛素（incretin)(胃抑制性多肽：GIP，胰高血糖 素样肽-I :GLP-1)(其是通过作用在胰腺β细胞上刺激胰岛素分泌的胃肠激素）转变为 其失活形式。因此，当DPPIV被抑制时，肠促胰岛素的作用可以被保留以促进胰岛素分泌。 DPPIV是丝氨酸蛋白酶中的一种，并且是识别和切割距肽的N末端的第二位点处的脯氨酸 (Pro)或丙氨酸（Ala)的酶。已经报道，DPPIV强烈作用在具有距N末端第二个残基处的脯 氨酸和丙氨酸，并且进一步具有赖氨酸（Lys)和精氨酸（Arg)作为N末端残基的肽上（非 专利文献1)。
[0003] 已经报道了由蛋白水解产物导致的对血液葡萄糖水平的增加的抑制性作用。作为 该作用的机制，已经报道了促进胰岛素分泌的作用（专利文献1)，葡萄糖吸收抑制活性（专 利文献2)，和胰高血糖素样肽-I(GLP-I)分泌的促进（专利文献3)。在一些报道中，确认 由紫菜的酶分解的产物（专利文献4)和通过分解蜂王浆获得的肽（专利文献5)导致对血 液葡萄糖水平增加的抑制作用。还有一些报道，其中未标明机制。从作为起始材料的水产 品的鱼白获得的广物，已知从鱼白提取的鱼精蛋白具有淀粉酶抑制活性（非专利文献2)和 促进GLP-I分泌的作用（非专利文献3)。
[0004] 已经报道很多通过化学合成获得的化合物具有DPPIV抑制活性（专利文献6)，但 考虑到安全性问题和有害反应，应该小心使用这样的化学合成的产品。作为源自天然产物 的DPPIV抑制剂，已经知道那些，如源自奶酪的水溶性级分的肽（专利文献7)，源自牛乳蛋 白的肽（专利文献8)，小豆（azuki bean)或菜豆（kidney bean)的酶分解产物（专利文献 9)，源自明胶的肽（专利文献10)，和源自从鲑鱼皮提取的明胶的酶分解产物的肽（非专利 文献4)，等。
[0005] 与其卵相比，水产品的鱼白具有更低的使用价值，并且尚未有效使用。其使用限于 肥料或饲料。甚至源自鲑鱼的鱼白（其相对良好地被使用），用作鱼精蛋白或核酸的起始材 料，每年鱼白以10, 〇〇〇吨或更多的量被作为工业废料处理。
[0006] 参考文献列表
[0007] 专利文献
[0008] 专利文献 I :JP4864064B
[0009] 专利文献 2 :JP2009-235064A
[0010] 专利文献 3 :JP418〇64 5B
[0011] 专利文献 4 JP3585778B
[0012] 专利文献 5 JP369I685B
[0013] 专利文献 6 :JP4 357293B
[0014] 专利文献 7 :JP4915833B
[0015] 专利文献 8 :JP 5〇68l74B
[0016] 专利文献 9 :TO2011/016220
[0017] 专利文献 10 :JP5176964B
[0018] 专利文献 11 :US2005/0053606A
[0019] 非专利文献
[0020] 非专利文献 I :Plant Physiol.，第 122 卷，425-432
[0021] 非专利文献 2 :Proc. Soc. Exp. Biol. Med.，第 109 卷，556-558
[0022] 非专利文献 3 〖Proceedings of the 64th Annual Meeting of the Japan Society of Nutrition and Food Science，第 188 页
[0023] 非专利文献 4 :J. Agric. Food Chem.，第 60 卷，973-978
[0024] 非专利文献 5 :Protein Expression and Purification，第 1 卷，127-133
[0025] 发明概述
[0026] 本发明要解决的技术问题
[0027] 本发明的目标是使用有长时间食用经验并且具有高安全性的水产品的鱼白作为 原材料，通过简单方法，提供能够促进糖尿病患者或具有糖尿病风险的患者中病理的发病 或进展的预防的具有DPPIV抑制活性的肽化合物或包含所述肽化合物的组合物。本发明的 另一目标是使用有长时间食用经验并且具有高安全性的水产品的鱼白作为原材料，通过简 单方法，提供具有对血液葡萄糖水平的增加的抑制作用的用于食品和饮料的DPPIV抑制性 活性成分，所述食品和饮料如功能性食品，保健功能食品，用于特定膳食用途的食品，营养 补品，健康辅助食品和补品。
[0028] 解决所述问题的方式
[0029] 本发明人已经对具有DPPIV抑制活性的源自天然的材料进行了认真研究，并且 因此，本发明人已经发现，来自鱼白或水产品的鱼白或加工的鱼白的蛋白源的水解产物具 有DPPIV抑制活性。随后，本发明人已经确定了包含在所述水解产物中的结构和/或具有 DPPIV抑制活性的新型肽，并随后完成了本发明。
[0030] 根据本发明的用于抑制DPPIV的组合物的第一实施方案，特征在于包含通过水解 源自水产品的鱼白的蛋白源获得的具有DPPIV抑制活性的肽化合物。
[0031] 根据本发明的用于抑制DPPIV的组合物的第二实施方案，特征在于包含 选自 Phe-Pro-Val-Gly 或其盐，Ile-Pro-Leu 或其盐，Leu-Pro-Val-Leu 或其盐，和 Val-Pro-Phe-Pro或其盐的至少一种作为DPPIV抑制成分。
[0032] 这种用于抑制DPPIV的组合物或肽化合物可以用于制备用于抑制DPPIV的药物， 食品和饮料，如功能性食品，保健功能食品，用于特定膳食用途的食品，营养补品，健康辅助 食品和补品等，宠物食品等。
[0033] 根据本发明的肽化合物是选自Phe-Pro-Val-Gly及其盐；Ile-Pro-Leu及其盐； Leu-Pro-Val-Leu及其盐的至少一种。这些肽化合物中的一种可以单独使用或以这些中的 两种以上的混合物的形式使用，用于所需用途。
[0034] 一种制备根据本发明的具有DPPIV抑制活性的水解产物的方法，所述方法包括水 解源自水产品的鱼白的蛋白源以获得具有DPPIV抑制活性的水解产物的步骤。
[0035] -种制备根据本发明的具有DPPIV抑制活性的肽化合物的方法，所述方法包括水 解源自水产品的鱼白的蛋白源以获得包含具有DPPIV抑制活性的肽化合物的水解产物的 步骤；和从水解产物分离具有DPPIV抑制活性的肽化合物的步骤。
[0036] 尚未公开在来自作为原材料的鱼白的加工的产物中确认DPPIV抑制的报道。在根 据本发明确定的肽中，Phe-Pro-Val-Gly，Ile-Pro-Leu和Leu-Pro-Val-Leu的结构和活性 尚未被报道。尽管已知Val-Pro-Phe-Pro抑制涉及癌细胞生长的泛上皮膜粘蛋白（MUCl) 的作用（专利文献11)，其DPPIV抑制活性未知。
[0037] 作为由源自鱼白的材料提供的对血液葡萄糖水平增加的抑制作用，从鱼白提取的 鱼精蛋白的淀粉酶抑制活性是已知的（非专利文献2)。然而，当将具有Phe-Pro-Val-Gly， Ile-Pro-Leu，Leu-Pro-Val-Leu 或 Val-Pro-Phe-Pro 的氨基酸序列的本发明的 DPPIV 抑制 性肽与鱼精蛋白的氨基酸序列相比较时，显然，本发明的DPPIV抑制性肽不源自鱼精蛋白 (非专利文献5)。
[0038] 此外，报道了，当源自水产品的蛋白水解产物用作原材料时，源自从鲑鱼皮提取的 明胶的酶分解产物的肽具有DPPIV抑制活性（非专利文献4)。然而，鱼白和皮胶原蛋白在 氨基酸组成上大不相同。因此，显然，对于从它们水解获得的组合物的DPPIV抑制活性，各 不相同的肽组是其活性中心。
[0039] 从皮提取胶原蛋白的过程和将皮中包含的混有脂或来自其他组织的杂质去除的 复杂过程是获得皮胶原蛋白的水解产物所必需的。因为皮和鱼白明显是不同的部分，在鱼 白中不含有皮胶原蛋白。因为鱼白具有与其他部分明显不同的形状，认为分选各个鱼白作 为原材料可以容易进行。因为鱼白具有小的脂含量，认为鱼白适于作为原材料。核酸通过 水解鱼白等被释放并且其极好的味道变得明显。因此，认为鱼白可广泛应用于食品领域。
[0040] 发明效果
[0041] 具有DPPIV抑制活性的肽化合物和包含根据本发明的肽化合物的组合物具有高 安全性，因为其原材料是水产品的鱼白，其已经被食用了很久。因此，它们可以被广泛用于 药物，食品和饮料，（如功能性食品，保健功能食品，用于特定膳食用途的食品，营养补品，健 康辅助食品和补品），宠物食品，等。
[0042] 此外，水产品的鱼白可以用作原材料以获得具有DPPIV抑制活性的肽化合物和包 含根据本发明的肽化合物的组合物。
[0043] 尤其是，优选使用鲑鱼鱼白，因为
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