组合物具有由于 DPPIV抑制导致的抑制血液葡萄糖水平增加的效果。
[0114] (实施例4)
[0115] (肽组合物活性的测量）
[0116] 为了检查原材料，向各个用于水解的秋鲑的鱼白（鲑鱼鱼白），鱼精蛋白，源自鲑 鱼皮的胶原蛋白（鲑鱼皮胶原蛋白），和Humboldt鱿鱼的鱼白（鱿鱼鱼白）加入HC1，并且 通过使用氨基酸分析仪JLC-500/V2(由JEOL Ltd.制造）测量氨基酸组成（mol% )。测量 结果显不在表2中。
[0117] [表 2]
[0118] 表 2
[0121] 分别使用秋鲑的鱼白，鱿鱼鱼白和源自鲑鱼皮的胶原蛋白肽作为用于水解的材 料，并且分别与以下水解酶组合，以与实施例1中相同的方式获得源自相应材料的肽组合 物（粉末）。
[0122] -水解酶A
[0123] Aroase AP-10 (金属蛋白酶）：秋鲑鱼白，鱿鱼鱼白
[0124] -水解酶B
[0125] Alcalase 2. 4L FG(丝氨酸蛋白酶）：秋鲑鱼白，鱿鱼鱼白
[0126] -水解酶C
[0127] 蛋白酶P" Amano" 3SD(丝氨酸蛋白酶）：秋鲑鱼白
[0128] -水解酶D
[0129] Papain(半胱氨酸蛋白酶）：鲑鱼皮
[0130] 将因此获得的各个肽组合物以3mg/mL的浓度溶解在蒸馏水中，将所得物进行 0. 45 μπι膜过滤处理，并且以与实施例2中相同的方式进行DPPIV抑制活性测试。结果显示 在表3中。
[0131] [表 3]
[0132] 表 3
[0135] (实施例5)
[0136] (活性肽的浓缩方法）
[0137] 将IOOmg的源自实施例4中获得的各个材料的各个肽组合物样品分别溶解于蒸馏 水，将得到的溶液应用于用蒸馏水平衡的S印-Pak (注册商标）柱（C18 6cc :由Waters制 造）。然后将柱用蒸馏水洗涤，并且用水分乙醇洗脱吸附的级分。将因此获得的各个洗脱物 用蒸发仪干燥，获得浓缩的肽组合物级分。因此获得的洗脱物级分可以直接用作DPPIV抑 制性活性肽组合物。
[0138] (实施例6)
[0139] (寻找活性肽）
[0140] 分离包含在实施例5中获得的源自鲑鱼鱼白的肽组合物的浓缩的级分中的各个 强DPPIV抑制性肽。
[0141] 首先，根据图3所述方法，将各个肽级分从作为实施例1中所述的源自鲑鱼鱼白 的水解产物的肽组合物分离。通过使用LC-MS (LCMS-IT-T0F，由Shimadzu Corporation制 造），将因此分离的各个肽级分在下文所述用于进行质谱（MS)分析的条件下分析。通过肽 合成仪（Syrol，由Biotage AB制造）合成具有通过MS分析推测的结构的候选肽。通过使 用LC-MS比较它们确定各个肽结构。
[0142] (通过 LCMS-IT-T0F 确定结构）
[0143] <用于HPLC分析的条件>
[0144] -HPLC 系统：由 Shimadzu Corporation 制造的 Prominence 系列（系统控制器： CBM-20A，自动上样器：SIL-20A，溶剂输送栗：LC-20AB Binary栗，柱式加热炉：CT0-20A， PDA检测器：SPD-M20A (测量波长：190至700nm))
[0145] -柱：Xterra MS C183. 5 μ m，2. IxlOOmm (由 Waters 制造）
[0146] -柱温：40 °C
[0147] -流动相 A :H20(含有 0· 1 体积％的 TFA，由 Kanto Chemical Co.，Inc.制造，用于 LC-MS)
[0148] -流动相 B :甲醇（由 Kanto Chemical Co.，Inc.制造，用于 LC-MS)
[0149] -梯度：在0至15分钟的时期内保持的3体积％的溶液B，15至45分钟的时期内 3体积％的溶液B至60体积％的溶液B的线性梯度，和45至50分钟的时期内保持的60体 积％的溶液B。
[0150] -分析时间：50min
[0151] -流速：0· lmL/min
[0152] -注射量：lyL
[0153] < IT-TOF MS 的检测条件>
[0154] -系统：由 Shimadzu Corporation 制造的 LCMS-IT-TOF (电离模式：ESI+，雾化气 体流速：1. 5L/min，外施电压：1. 7kV，CDL温度：200°C，BH温度：200°C，测量范围MS :m/z 100-1500, MS/MS :50-1000)
[0155] (实施例7)
[0156] (鉴定的肽的活性测量）
[0157] 合成实施例6的LC-MS分析鉴定的各个肽并且溶解在蒸馏水中，以与实施例2相 同的方式发现DPPIV抑制活性。首先，将各个肽溶液系列稀释，获得各个水平的抑制活性， 并且基于抑制活性（％)和样品浓度的对数（LoglO)的相关表达回溯计算各个样品的50% 抑制浓度（IC50值）。合成的肽中的DPPIV抑制剂活性的比较结果显示在表4中。在因此 确定的18种肽中，10种肽具有100 μ M以下的IC50值，并且具有极高的DPPIV抑制活性。
[0158] [表 4]
[0159] 表 4
[0162] (实施例8)
[0163] (活性肽含量的测量）
[0164] 将获自实施例4中的各个材料的肽组合物的各个浓缩的级分以2mg/mL的浓度溶 解于蒸馏水，并且将得到的溶液进行〇. 45 μ m膜过滤处理，以用于测量活性肽的含量。基于 作为从来自作为原材料的秋鲑鱼白生产DNA过程中DNA提取和分离得到的残留物的副产 物制备类似的肽组合物，并且测量其中活性肽的含量。在上文所述的鉴定的肽中，使用JMS LCmate (由JEOL Ltd.制造）在下述条件A下将IP，VPI，VPL，IPI，LPL，LPI和IPL定量确 定。在上文所述的这样确定的肽中，在下述条件B下将FPVG，LPVL，VPFP和LPF定量确定。 因此获得的定量确定结果和上述实施例中鉴定的各个肽的DPPIV抑制活性的IC50值（μ M) 用于根据以下等式计算活性贡献比例：
[0165] 贡献比例=(每g的肽组合物的确定的肽的含量八确定的肽的IC50值（μ Μ) X 确定的肽的分子量/1000))八1〇〇〇/肽组合物的IC50值（μ g/mL)) XlOO
[0166] (定量分析确定的肽的条件A)
[0167] <用于HPLC分析的条件>
[0168] -HPLC 系统：Alliance Waters 2695 (由 Waters 制造）
[0169] -柱：Discovery (注册商标）HS F5, 5 μ m，2. 1x250mm(由 SUPELCO，Inc.制造）
[0170] -流动相A:H20(含有(λ 1体积％的甲酸和0.01体积由Kanto Chemical Co.，Inc.制造，用于 LC-MS)
[0171] -流动相 B :甲醇（由 Kanto Chemical Co.，Inc.制造，用于 LC-MS)
[0172] -梯度：在0至30分钟的时期内40体积％的溶液B至80体积％的溶液B的线性 梯度，和在30至35分钟的时期内保持的80体积％的溶液B
[0173] -分析时间：35min
[0174] -流速：0· 2mL/min
[0175] -注射量：5yL
[0176] <用于MS的检测条件>
[0177] -系统：JMS-LCmate (由 JEOL Ltd.制造）
[0178] -电离模式：ESI+，SIM 测量离子：m/z :229. 2, 328. 2, 342. 2
[0179] (用于确定的肽的定量分析的条件B)
[0180] <用于HPLC分析的条件>
[0181] -HPLC 系统：Alliance Waters 2695 (由 Waters 制造）
[0182] -柱：XTerra (注册商标）Phenyl 3. 5 μ m，4. 6x100mm 柱（由 Waters 制造）
[0183] -流动相A:H20(含有(λ 1体积％的甲酸和0.01体积由Kanto Chemical Co.，Inc.制造，用于 LC-MS)
[0184] -流动相 B :甲醇（由 Kanto Chemical Co.，Inc.制造，用于 LC-MS)
[0185] -梯度：在0至4分钟的时期内保持40体积％的溶液B，在4至24分钟的时期内 40体积％的溶液B至60体积％的溶液B的线性梯度，和在24至29分钟的时期内保持60 体积％的溶液B
[0186] -分析时间：29min
[0187] -流速：0. 2mL/min
[0188] -注射量：5yL
[0189] <用于MS的检测条件>
[0190] -系统：JMS-LCmate (由 JEOL Ltd.制造）
[0191] -电离模式：ESI+，SIM 测量离子：m/z :376. 2,419. 2,441. 3,459. 3
[0192] 定量分析测试的结果[各个肽组合物（Ig)中的活性肽含量（mg/g)]在表5中显 示。关于具有低DPPIV抑制活性的源自鲑鱼皮的胶原蛋白肽，未检测确定的肽。另一方面， 在发现具有DPPIV抑制活性的源自鱿鱼鱼白的肽组合物，检测到前述活性肽，并且其表明， 这些活性肽为这些肽组合物的DPPIV