专利名称：使用baff拮抗剂的治疗方法
技术领域：
本发明一般涉及用于治疗免疫学和相关病症的治疗方法。更具体地说，本发明涉及利用BAFF(属于TNF家族的B细胞活化因子)(B cell activatingfactor belonging to the TNF family)拮抗剂治疗自身免疫病症的方法。
背景技术：
B细胞在获得性免疫中起着重要作用。这些细胞具有针对外来抗原(Ag)启动快速和直接的抗体(Ab)应答的独特能力，并发挥抗原呈递细胞的作用。为了维持B细胞内环境稳定和自我耐受状态，必须产生可能成熟和迁移到外周器官的B细胞前体的连续库，以及维持阴性选择过程以消除自体反应的B细胞。B细胞发育过程中的失调可导致B细胞发育的阻断和免疫缺陷，或相反地，导致自我反应性B细胞的逃逸和扩展，从而引起自身免疫。
高亲合力、体细胞高突变的自身抗体的生成是自身免疫病症的标志之一。自身抗体可导致严重的组织损伤(例如，在狼疮肾炎中)或血液成分的损失(例如，在免疫性血小板减少紫癜中)。自身免疫病症的流行治疗策略使用长期使用后具有有害副作用的全身免疫抑制剂。
最近发现的B细胞存活和成熟因子BAFF(亦称TALL-1、THANK、BLyS、zTNF4和TNFSF13B)为开发用于自体反应B细胞功能的目标介入策略提供了极难得的机会。自从其最初被描述为B细胞生长因子，BAFF在获得性免疫中作用被迅速阐明。BAFF(登记号AAD25356)在例如，Schneider et al(1999)J.Exp.Med.，1891697-1710；PCT公开WO99/12964和美国专利申请号09/911,777中有描述。研究已经表明比正常水平高的BAFF可促进自身免疫疾病，例如全身性红斑狼疮(SLE)和风湿性关节炎的发病。关于综述参见例如，Mackay et al.(2002)Nature ReviewsImmunology，2465-475；Kalled et al.(2003)Expert Opin.Ther.Targets，7(1)115-23.。
BAFF涉及B细胞的共刺激(Moore et al.(1999)Science，285260-263；Schneider et al.(1999)J.Exp.Med.，1891747-1756；Mukhopadhyay et al.(1999)J.Biol.Chem.，27415978-15981)；B细胞增殖增加(Moore et al.(1999)Science，285260-263)；和通常情况下被去除(deleted)的B细胞的存活增加(Khare et al.(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.，973370-3375；Gross et al.(2000)Nature，404995-999；Mackay et al.(1999)J.Exp.Med.，1901697-1710)。已经鉴定了BAFF的三个同族受体(1)B细胞成熟抗原(B cell maturationantigen)(BCMA；登记号S43486；Gross et al.(2000)Nature，404995-999；PCT公开WO01/12812；美国专利中请号10/077,137)；跨膜活化剂和亲环蛋白配体相互作用物(transmembrane activator and cyclophilin ligandinteractor)(TACI；登记号AAP57629；Gross et al.，上文)；以及最近地，BAFFR(亦称BR3；登记号AF373846；Thompson et al.(2001)Science，2932108-2111)。BAFFR是三个受体中唯一一个特异于BAFF的(Thompson etal.，上文)。BCMA和TACI不仅结合BAFF而且也结合另一个TNF家族配体，APRIL(Yu et al.(2000)Nat.Immunol.，1252-256；Wu et al.(2000)J.Biol.Chem.，27535478-35485；Rennert et al.(2000)J.Exp.Med.，1921677-1684；PCT公开WO01/24811；美国专利申请号10/115,192)。
虽然BAFF已经被明确地鉴定为B细胞存活和成熟所需要的因子，相比之下对APRIL在B细胞内环境稳定中的作用还了解得较少。最初发现APRIL刺激肿瘤细胞的体外和体内生长(Hahne et al.(1998)J.Exp.Med.，1881185-1190)。最近的报道证明APRIL也可作为初始(primary)B和T细胞体外的共刺激物起作用并且体外刺激外周血液B细胞的IgM产生(Yuet al.(2000)Nat.Immunol.，1252-256；Marsters et al.(2000)Curr.Biol.，1O785-788)。APRIL的体内给药，类似于BAFF，由于B细胞群的扩展导致脾肿大以及活化T细胞的百分比增加(Yu et al.(2000)Nat.Immunol.，1252-256)，表明APRIL可能涉及淋巴的内环境稳定。根据利用APRIL-转基因小鼠产生的数据，APRIL看来似乎在T细胞-非依赖类型2(TI-2)体液应答中起作用(Stein et al.(2002)J.Clin.Invest.，109(12)1587-1598)。进一步的，利用A/WySnJ小鼠产生的数据证明APRIL对B细胞的发育和功能不是必需的(Thompson et al.，上文)。
已经通过将其细胞外结构域融合至免疫球蛋白的Fc部分来制备可溶形式的BAFF受体。用这种可溶形式的TACI或BCMA(TACI-Fc或BCMA-Fc)处理正常小鼠导致B细胞数目减少和缺乏体液应答(Shu et a1.(1999)J.Leukoc.Biol.，65680-683；Yan et al.(2000)Nat.Immunol.，137-41；Xia et al.(2000)J.Exp.Med.，192137-143；Wang et al.(2001)Nat.Immunol.，2632-637；Yu et al.(2000)Nat.immune).，1252-256)。例如，在涉及B和T细胞成分的自身免疫病风湿性关节炎的小鼠模型中，TACI-Fc实质上抑制炎症和减慢疾病发展(Wang et al.(2001)Nat.Immunol.，2(7)632-637)。这些作用被认为归因于BAFF多价螯合，因为BAFF缺陷型小鼠具有类似于TACI-Fc-或BCMA-Fc-处理小鼠(几乎完全丧失成熟B细胞和严重损害体液应答)的表型(Schiemann et al.(2001)Science，2932111-2114；Gross et al.(2001)Immunity，15289-302)。尽管用TACI-Ig处理NZBWF1五周导致在处理后12周SLE症状减轻，但没有观察到自身抗体减少，表明更长的疗程可能是必需的(Gross et al.(2000)Nature，404(6781)995-999)。
最近，已经开发了BAFF-特异的试剂(包括BAFFR-Fc和BAFF抗体)，用于治疗自身免疫及其他病症(参见例如，美国专利申请号09/911,777；10/380,703；10/045,574；和60/458,707)；Kalled et al.(2003)Expert Opin.Ther.Targets，7(1)115-23)。一旦BAFF特异试剂的给药停止并且该试剂从血流中消除，预计在大约8周内出现B细胞回复至处理前水平，包括致病B细胞的恢复(参见例如，Porpiglia et al.(2003)Clin.Immunol.，10790-97；Berardi et al.(1997)Blood，893554-3564；Hiramatsu et al.(2003)Blood，102873-880)。结果，为维持治疗效果，可能需要每隔不到8周频繁给药。
因此，仍然需要新的治疗策略来治疗免疫和相关病症。
发明概述本发明起因于以下认识可通过治疗有效量的BAFF拮抗剂的短期给药，并其后直到下一轮给药前在延长的时间内暂时中止该拮抗剂给药实现免疫学病症的有效治疗。
本发明部分地基于如下惊人的发现，即对患有轻度至中度SLE的肾病SNF1小鼠的短期4周给药BAFFR-Fc导致长期的临床益处(至少6个月)。虽然B细胞恢复在BAFFR-Fc给药后发生，新出现的B细胞实质上是不致病的。本发明进一步基于以下的发现和验证，即SNF1小鼠中短期BAFFR-Fc给药的临床作用与相同模型中对TACI-Fc给药所观察到的临床作用相比为更有效和持久。
本发明提供用于治疗哺乳动物中免疫学和相关病症，特别是自身免疫病症的方法，并且包括(但不限于)用于抑制自身抗体产生，和/或抑制哺乳动物中致病B细胞群产生的方法。本发明进一步提供用于治疗肾纤维化和/或改善肾功能，例如加压过滤、选择性重吸收、管状分泌和体循环血压调节的方法。本发明又进一步提供用于减少心脏炎症的方法。也提供用于本发明方法的给药方法和组合物。
在某些实施方案中，治疗患有免疫学病症的患者的方法，包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF(属于TNF家族的B细胞活化因子)拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；其中N是8、9、10、11或12。
在一些实施方案中，该BAFF拮抗剂是可溶的BAFF受体(例如，BAFFR，BCMA或TACI)、抗-BAFF抗体、或抗-BAFF受体抗体。在某些实施方案中，该BAFF拮抗剂是BAFF-特异的，例如可溶的BAFFR。
本发明的附加方面将在下文的说明书中部分地阐述，而部分将从本说明书中得以了解，或从本发明的实施中学习到。
序列的简要说明SEQ ID NO1是人BAFFR的氨基酸序列(GenBankTM登入号AF373846)。这个序列在序列表中注明的特殊特征残基1没有或任何氨基酸；残基2甲硫氨酸、没有或任何氨基酸；残基21缬氨酸(野生型)、天门冬酰胺或另一个氨基酸；残基28赖氨酸(野生型)、脯氨酸或另一个氨基酸；残基47没有、任何氨基酸或丙氨酸。
SEQ ID NO3是人BAFFR-Fc融合蛋白质的氨基酸序列，其包括信号序列(第1-22位氨基酸)和人IgG1Fc部分(第95-321位氨基酸)。这个序列在序列表中注明的特殊特征残基41缬氨酸(野生型)、天门冬酰胺或另一个氨基酸；残基48赖氨酸(野生型)、脯氨酸或另一个氨基酸；残基67没有、任何氨基酸或丙氨酸。
SEQ ID NO2是鼠BAFFR的氨基酸序列(GenBankTM登入号Q96RJ3)。
SEQ ID NO4是鼠BAFFR-Fc融合蛋白质的氨基酸序列，其包括信号序列(第1-22位氨基酸)和鼠IgG1 Fc部分(第88-316位氨基酸)。
SEQ ID NO5是来源于BAFFR的BAFF结合肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO6是在美国专利申请号60/458,707中描述的ΔBAFFR中最小缺失的氨基酸序列。
附图的简要说明
图1A-1D证明短期BAFFR-Fc治疗抑制SNF1小鼠肾中的肾淋巴细胞渗透(50×放大)，该效应通过利用针对B细胞的生物素-抗-B220mAb和针对T细胞的抗-CD3对石蜡包埋的肾切片进行免疫组织化学来评估。图1A和1B分别显示来自9和50周龄的未处理小鼠的典型肾切片。两组小鼠分别被施用200μg鼠BAFFR-Fc或200μg mIgG1，从23周龄开始每周两次，连续进行四周，并且分别在50或51周龄处死。图1C和1D分别显示来自BAFFR-Fc-和mIgG1-处理小鼠的代表性的肾切片。
图2A-2D证明短期BAFFR-Fc治疗抑制SNF1小鼠中的淋巴结病(50×放大)，该效应通过利用针对B细胞的生物素-抗-B220mAb和针对T细胞的抗-CD3对石蜡包埋的肠系膜淋巴结(MLN)切片进行免疫组织化学来评估。图2A和2B分别显示来自9和50周龄的未处理小鼠的典型的MLN切片。两组小鼠分别被施用200μg鼠BAFFR-Fc或200μg mIgG1，从23周龄开始每周两次，连续进行四周，分别在50或51周龄处死。图2C和2D分别显示来自BAFFR-Fc-和mIgG1-处理小鼠的代表性的MLN切片。
发明详述为了本发明可被更容易地理解，首先定义某些术语。整个详细说明中都给出额外的定义。
术语″抗体″如在此使用的，是指免疫球蛋白或其部分，并且包括包含抗原结合位点的任何多肽，无论该抗原结合位点的来源、产生方法及其他特征为何。该术语包括但不限于多克隆、单克隆、单特异性的、多特异性的、非特异的、人源化的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂种的、突变的和CDR-接枝的抗体。术语″抗原结合结构域″是指包括特异结合或互补于部分或全部抗原的抗体分子部分。当抗原很大时，抗体可能只结合该抗原的特定部分。″表位″或″抗原决定簇″是负责与抗体的抗原结合结构域的特异相互作用的抗原分子部分。抗原-结合结构域可通过一个或多个抗体可变域(例如，由VH结构域组成的所谓的Fd抗体片段)提供。抗原-结合结构域包括抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。术语″抗BAFF抗体″和″针对BAFF的抗体″是指特异结合BAFF的至少一个表位的任何抗体。
术语″BAFF″是指其特征在于在免疫细胞中表达并且其作用为B细胞存活因子的B细胞-活化因子。在Mackay et al.(2002)Nature ReviewsImmunology 2465-475和Gavin et al.(2003)J.Biol.Chem.，278(40)38220-8中提供了BAFF特征的概要。
如在此使用的，″BAFF拮抗剂″泛指直接下调BAFF的生物活性的任何化合物。一种分子通过与BAFF、BAFF基因、BAFF转录本或BAFF受体相互作用而″直接下调″BAFF的生物活性。BAFF拮抗剂可例如结合和中和BAFF的活性；降低BAFF表达水平；影响BAFF的稳定性；影响膜结合形式的BAFF蛋白水解裂解成为可溶形式；干扰BAFF与一个或多个受体的结合；或它可妨碍BAFF受体的胞内信号传输。BAFF拮抗剂可以是蛋白质的(例如，抗体、受体融合蛋白质、肽)或非蛋白质的分子(例如，小的有机分子(≤500Da))。用于评估BAFF拮抗剂的中和生物活性的方法是本领域已知的。
术语″BAFFR″除非另有说明，是指除了能够结合BAFF的BCMA或TACI外，包括BAFF的野生型或突变受体的至少一部分的蛋白质。已经确定人BAFFR的BAFF-结合结构域包含SEQ ID NO1的第27至32位氨基酸。在PCT公开WO02/24909和美国专利申请号10/380,703和60/458,707中进一步定义了BAFFR，并且特异地包括但不限于，人BAFFR(SEQ IDNO1；登记号AAD25356；SEQ ID NO1的第47位氨基酸在一些同工型中不存在)和鼠BAFFR(SEQ ID NO3；登记号Q96RJ3)。″BAFFR″也指天然存在的变体，例如，在相当于SEQ ID NO2的第67位氨基酸的SEQ IDNO1的第47位氨基酸包含丙氨酸的拼接变体，以及BAFFR的功能突变形式，例如至少在SEQ ID NO1的第21和28位氨基酸具有突变的人BAFFR(例如，V21N和L28P)。术语″BAFFR-Fc″和″BAFFR-Ig″是指包括BAFFR和抗体恒定区序列，例如Fc部分的融合蛋白质。
术语″BAFF特异的拮抗剂″是指(1)有能力例如通过竞争性阻断一个或多个BAFF受体而抵消BAFF的体内或体外作用，和(2)在生理状况下优选与BAFF而不是与TNF家族的其他配体，例如APRIL形成相对稳定的复合物的化合物。一般地，当针对BAFF的亲合常数Ka高于106M-1，优选高于108M-1，而对另一TNF家族配体的亲合力低于106M-1，优选低于105M-1时，认为该结合是特异的。熟练的技术人员将认识到在一定条件下低亲合力(affinity)而高亲和力(avidity)结合也可能是特异的，即使相互作用的Ka可能是相对低的。在一些实施方案中，BAFF特异拮抗剂针对BAFF的至少一个同工型的亲和常数Ka优选大于106M-1、107M-1、108M-1、109M-1、1010M-1、1011M-1或1012M-1。
短语″基本上相同的″是指相关的氨基酸序列与给定序列是至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的。举例来说，这种序列可能是衍生自各种物种的变体，或它们可能通过截短、缺失、氨基酸取代作用或添加而来源于给定的序列。两个氨基酸序列之间的同一性百分比可通过标准排列算法，例如在Altschul et al.(1990)J.Mol.Biol.，215403-410中描述的Basic Local Alignment Tool(BLAST)、Needleman et al.(1970)J.Mol.Biol.，48444-453的算法，或Meyers et al.(1988)Comput.Appl.Biosci.，411-17的算法来确定。这种算法被并入BLASTN、BLASTP和″BLAST 2 Sequences″程序(参见www.ncbi.nim.nih.gov/BLAST)。当利用这种程序时，可使用缺省参数。例如，对于核苷酸序列，对″BLAST 2Sequences″可使用下列设置程序BLASTN，相配积分2，错配罚分-2，开放缺口和延伸缺口罚分分别为5和2，缺口x_落差50，预期值10，字长11，过滤ON。对于氨基酸序列，对″BLAST 2 Sequences″可使用下列设置程序BLASTP，矩阵BLOSUM62，开放缺口和延伸缺口罚分分别为11和1，缺口x_落差50，预期值10，字长3，过滤ON。
术语″免疫学病症″是指其中免疫应答是异常的病症和状况。该异常的应答可起因于(a)免疫细胞例如T或B细胞的异常增殖、成熟、存活、分化、或功能。免疫学病症的实例包括但不限于，风湿性关节炎(RA)、哮喘、牛皮癣、多发性硬化(MS)、炎症性肠病(IBD)、Crohn′s病、全身性红斑狼疮(SLE)、I型糖尿病、Wegener′s肉芽肿病、移植排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、高增殖免疫病症、自身免疫疾病、B细胞肿瘤、免疫调节、抗体介导的病变(例如，ITCP、重症肌无力等)和Sjogren′s综合症。可利用本发明的组合物和方法治疗的病症包括但不限于在PCT公开WO02/24909和美国专利申请号09/911,777；10/380,703；10/045,574和60/458,707中描述的病症。
术语″治疗的″及其同源物，如在此使用的，是指病症临床表现的改善，或所需要的生物结果的产生。合乎需要结果的实例包括B细胞增生减少；自身抗体滴定度减少；致病B细胞群减少；心脏炎症减轻；肾功能(例如，加压过滤、选择性重吸收、管状分泌和体循环血压调节)改善、肾纤维化的缓慢发展、肾淋巴细胞渗透减少；淋巴结病减少等。可利用本领域已知的和/或如在此所描述的方法测定结果。
术语″致病的B细胞″是指生产导致疾病病理的自身抗体的B细胞。
本发明部分地基于惊人的发现，即对患有轻度至中度全身性红斑狼疮(SLE)的肾病SNF1小鼠的短期4周给药BAFFR-Fc导致长期临床益处(至少6个月)。由于SNF1小鼠中BAFFR-Fc的循环半衰期短(3.7天)，一旦停止BAFFR-Fc给药并且BAFFR-Fc在血流中消除，预计在大约8周内发生B细胞回复(reconstitution)。在产生本发明的实验中，在BAFFR-Fc给药后发生B细胞恢复。然而，发现新出现的B细胞实质上是不致病的。本发明进一步基于以下的发现和验证，即SNF1小鼠中短期BAFFR-Fc给药的临床作用与相同模型中TACI-Fc相比是显著更有效和持久的。
在下文详细描述了本发明的方法、其中使用的组合物及本发明的其他方面。
方法本发明提供治疗方法，其涉及短期BAFF拮抗剂给药过程，然后是在下一轮给药前的延长的非治疗期。
在一个方面，本发明提供用于治疗患有免疫学或相关病症的患者的治疗方法。该方法包括
(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF(属于TNF家族的B细胞活化因子)拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；其中N是8、9、10、11或12。
在进一步的实施方案中，步骤(a)的给药包括间隔1、2、3、4、5、6或7周。在步骤(a)中，该BAFF拮抗剂可例如一周给药2、3、4、5、6或7次、每周给药、双周给药、每3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周给药。在步骤(a)的给药期间，连续给药之间的间隔以及剂量可有变化。例如，在步骤(a)的给药期间，该BAFF拮抗剂可在第一周给药两次，取消暂停(with-draw)三周，再给药一次，再暂停5周，然后每日给药持续一周。在各种实施方案中，在步骤(b)中暂时中止给药8、9、10、11、12、18、24、30、36、42、48周或更长时间，所述更长时间可能限于50、80、110、140、180、210、260或300周。
在一个方面，本发明提供用于治疗哺乳动物中的免疫学和相关病症，特别是自身免疫病症的方法，并且包括(但不限于)用于降低自身抗体滴定度(例如，抗核抗体，例如抗-ssDNA、抗-Sm、抗-RNP和抗-Ro)的方法。
在另一个方面，本发明进一步提供用于治疗肾纤维化和/或改善肾功能，例如加压过滤、选择性重吸收、管状分泌和体循环血压调节的方法。在另一方面，本发明又进一步提供用于减少心脏炎症的方法。
本发明进一步提供减少患有免疫病症的患者中致病B细胞群的方法。在某些实施方案中，B细胞的致病群由IgM-IgD+的B细胞组成。可利用例如，针对通常使用的B细胞标记的抗体，例如CD45的B220同工型(Kincadeet al.(1981)J.Immunol.，1272262-2268)、或CD19(参见例如，Krop et al.(1996)Eur.J.Immunol.，26238-242)和相应的同种型抗免疫球蛋白抗体，利用本领域已知的方法和/或在实施例中描述的方法来确定B细胞群。
可以医学上可接受的任何方式施用本发明的组合物。″给药″不限于任何特别的输送系统，并且可包括而并不限于，肠胃外的(包括皮下的、静脉内的、髓内的、关节内的、肌内的或腹腔内注射)直肠的、局部的、经皮的或口腔的(例如，以胶囊剂、悬浮液或片剂)。可以单剂量或重复给药，以及以各种生理学可接受的盐形式中任何一种，和/或与作为药物组合物一部分的可接受的药物载体和/或添加剂(早先有描述)一起对个体进行给药。生理学可接受的盐形式和标准的药物配制技术以及赋形剂是本领域技术人员已知的(参见例如，Physicians′Desk Reference(PDR)2003，57th ed.，MedicalEconomics Company，2002；and RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，eds.Gennado et al.，20th ed，Lippincott，Williams & Wilkins，2000)。
拮抗剂对个体的给药也可伴随有基因治疗的手段，其中将编码拮抗剂的核酸序列体内施用于患者或体外施用于随后被导入患者的细胞，并且通过由核酸序列编码的产物表达来生产该拮抗剂(例如，反义RNA，可溶的BAFF受体)。
在某些实施方案中，将要利用本发明方法治疗的患者患有轻度、中度或严重的疾病。在各种实施方案中，患者是患有免疫学病症和/或患肾功能不全风险增加的患者。该治疗可特别地用于患有每24小时时间段内蛋白尿超过1、1.2、1.5、1.7、2.0g，和/或血清肌酸酐水平为1.0、1.5、2.0、2.5mg/dl或更高的患者。其他指标包括低于97、90、80、70、60(男)和88、80、70、60(女)ml/分钟的肌酐清除率水平，20、25、30mg/dl或更高的血尿素，和/或通过肾成像(例如，MRI、超声)或肾活体检查指明的指标。其他的指标还包括血清中超常滴定度的抗核抗体(例如，抗-ssDNA、抗-Sm、抗-RNP和抗-Ro)或超过700、1000、1250、1500、2000个细胞/μl的超常的外周血液B细胞(例如，CD19+)计数。可利用本领域已知的方法，如在实施例，或Jacobs et al.(eds.)(2002)Laboratory test handbookConcise with diseaseindex(2nd ed.)Husson，OH，Lexi-Comp中所描述的方法来预先形成用于评估这些参数的测试。
本发明的方法也可用来治疗患有免疫学病症的患者，其中存在免疫细胞，例如B或T细胞的异常增殖、成熟、存活、分化或功能。本发明的方法可用于治疗前-B或B细胞白血病，例如浆细胞性白血病、慢性或急性淋巴细胞性白血病、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞骨髓瘤、内皮性骨髓瘤和巨细胞性骨髓瘤)，和淋巴瘤(例如，非-Hodgkin′s淋巴瘤)，Burkitt′s淋巴瘤、非Burkitt′s淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴母细胞性白血病、大细胞淋巴瘤(例如，成免疫细胞的淋巴瘤)，边缘区淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、其他的B细胞淋巴瘤、与疾病例如膜性肾病相关的肾小球肾炎，IgA肾病(Berger′s病)、IgM肾病、Goodpasture′s病、感染后的肾小球肾炎、血管系膜增殖的(mesangioproliferative)、慢性淋巴细胞性白血病和最小变化的肾病综合症、继发性肾小球肾炎、血管炎、肾盂肾炎、肾钙质沉着、肾石病、慢性或急性间质性肾炎、高血压或大血管疾病(包括肾动脉狭窄或闭塞和胆固醇栓塞或肾栓塞)、肾或泌尿系的肿瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、轻链神经病、淀粉样变性、哮喘及其他慢性的气道疾病，例如支气管炎和肺气肿、胰岛素依赖型糖尿病和Crohn′s病。本发明的方法还可用于抑制或中和效应物T细胞应答和用于治疗需要免疫抑制的状况，例如移植物抗宿主疾病和移植排斥、慢性炎症疾病，特别是减轻关节疼痛、肿胀、贫血症和脓毒性休克。
在本发明的方法中，该拮抗剂作为唯一活性化合物或与其他的化合物或组合物结合给药。除非另有陈述，拮抗剂的给药剂量是大约1μg/kg和250mg/kg，这取决于症状的严重度和疾病的进展。最通常地，抗体或免疫球蛋白融合蛋白质在门诊患者环境中通过每周施用大约0.1-10mg/kg剂量的缓慢静脉内(IV)输注进行给药。进行治疗的临床医师选择合适治疗有效剂量的拮抗剂，并且其范围大约为1μg/kg至100mg/kg、1μg/kg至50mg/kg、1μg/kg至20mg/kg、1μg/kg至10mg/kg、1μg/kg至1mg/kg、10μg/kg至1mg/kg、10μg/kg至100μg/kg、100μg至1mg/kg、或500μg/kg至5mg/kg。备选地，可使用在实施例中标明的特定剂量或在Physicians′Desk Reference(PDR)2003，57th ed.，Medical Economics Company，2002中用于相似药物的特定剂量。
组合物用于本发明的方法的BAFF拮抗剂，包括(但不限于)针对BAFF的抗体、针对至少一种BAFF受体的一个或多个同工型的抗体、和可溶形式的BAFF受体。
BAFF受体包括BAFFR、BCMA和TACI。在一些实施方案中，该BAFF拮抗剂是BAFF特异的(例如，BAFFR)，而在某些其他的实施方案中，该BAFF拮抗剂也可结合除了BAFF之外的TNF家族配体(例如，也结合APRIL的BCMA和TACI)。在一些实施方案中，该BAFF拮抗剂是阻断BAFF与其受体结合的抗体。先前已经描述了针对BAFF和BAFF受体的抗体。生产这种抗体在本领域技术人员内是已知的(参见，例如，Antibody Engineering，ed.Borrebaeck，2nd ed.，Oxford University Press，1995)。用于本发明的方法的抗体实例包括在PCT公开WO99/12964和美国专利申请号09/911,777)中描述的以及抗-BAFF抗体LymphoStat-BTM(Human Genome Sciences，Rockville，MD)。在进一步的实施方案中，本发明的抗体除结合BAFF或BAFFR之外，可特异结合实质上分别与BAFF或BAFFR相同的另一个蛋白质。在进一步的实施方案中，抗体针对BCMA和/或TACI。也试图用于人类的是来源于任何脊椎动物物种的非人类抗体的人源化形式和衍生物。
用于本发明方法的抗体的其他实例包括通过保藏为ATCC No.PTA-3689的杂交瘤克隆#2.1，或通过保藏为ATCC No.PTA-3688的杂交瘤克隆#9.1产生的小鼠单克隆抗体，或其人源化嵌合的、或完全的人类衍生物。
可溶形式的BAFF受体融合蛋白质可包括BAFFR的BAFF-结合结构域、BCMA和/或TACI。BAFF-结合结构域位于细胞外结构域(ECD)内，即该蛋白质的一部分通常存在于表达该蛋白质的细胞的外部。在一些实施方案中，可溶的BAFFR是具有序列CHWDLLRHWVC(SEQ ID NO5)的二硫键连接的肽(Kayagaki et al.(2002)Immunity，10515-524)或包括这个序列的多肽。在其他的实施方案中，可溶的BAFFR是包括SEQ ID NO1的第27至32或18至43位的氨基酸的多肽。
在某些实施方案中，可溶形式的BAFF受体包括与免疫球蛋白中的恒定区融合的BAFF受体的BAFF结合结构域，即BAFFR-Fc。在一些实施方案中，BAFFR-Ig包括与IgG的Fc部分融合的SEQ ID NO1的第3至73位残基。在说明性的实施方案中，BAFFR-Fc包括SEQ ID NO2(人)或SEQ ID NO4(鼠)。在一些实施方案中，BAFFR是从SEQ ID NO1的第51位氨基酸开始具有C-末端缺失的人BAFFR，其导致改变的O-连接的糖基化作用模式(例如，在美国专利申请号60/458,707中描述的ΔBAFFR)。在一些实施方案中，可溶的BAFFR包括至少缺乏SEQ ID NO6的序列(相当于SEQ ID NO1的第51-57位氨基酸)的ΔBAFFR。
BAFFR的BAFF-结合结构域包括SEQ ID NO1的氨基酸(aa)8至氨基酸50、氨基酸13至氨基酸50、或氨基酸13至氨基酸43、或氨基酸18至氨基酸43。在某些实施方案中，BAFF-结合结构域与SEQ ID NO1的氨基酸2至氨基酸63或SEQ ID NO3的氨基酸2至氨基酸62相同或实质上相同，包括已经截短或突变的序列，只要这种序列保持结合BAFF的能力。在说明性的实施方案中，BAFFR是如SEQ ID NO3的氨基酸2至氨基酸66所示的鼠序列。在其他的实施方案中，BAFFR包括SEQ ID NO1的至少20、25、30、35、40、45或50个连续氨基酸。
在某些实施方案中，免疫球蛋白的恒定区包括CH1、CH2或CH3恒定区中的任何一个，或全部Fc部分(其包括CH2或CH3)，有或没有铰链区。在更多的实施方案中，第二个氨基酸序列来源于IgG的Fc部分。在相关的实施方案中，Fc部分来源于IgG1、IgG4或另一个IgG同种型。在说明性的实施方案中，免疫球蛋白的紧缩区域包括SEQ ID NO3的氨基酸95至氨基酸321、或SEQ ID NO4的氨基酸88至氨基酸316的序列。第二个氨基酸序列可包括人IgG1的Fc部分，其中该Fc被修饰以最小化效应物功能。这种修饰包括改变可改变效应物功能，例如Fc受体结合(Lund et al.(1991)J.Immun.，1472657-2662和Morgan et al.(1995)Immunology，86319-324)的特定氨基酸残基，或改变该恒定区所来源的种类。免疫球蛋白可在重链的CH2区域具有突变，以减少效应物功能，即Fc受体结合和补体激活。例如，免疫球蛋白可具有如在U.S.专利号5,624,821和5,648,260中所描述的突变。例如在IgG1或IgG2重链中，可在相当于IgG1或IgG2全长序列中的第234和237位氨基酸的氨基酸残基产生这种突变。抗体和免疫球蛋白-受体融合蛋白质也可具有稳定免疫球蛋白的两个重链之间的二硫键的突变，例如，如在Angal et al.(1993)Mol.Immunol.，30105-108中公开的在IgG4的铰链区中的突变。
在某些实施方案中，BAFF-结合结构域在C-末端或N-末端，有或没有接头序列地与免疫球蛋白恒定区的C-末端或N-末端融合。接头的准确长度和序列及其相对于连接的序列的方向可能有不同。该接头可例如包括一个或多个Gly-Ser。该接头可以是2、10、20、30或更多个氨基酸长，并且根据所需要的性质，例如溶解性、长度和位阻分离、免疫原性等进行选择。本领域的普通技术人员将理解任何蛋白质的序列中的某些氨基酸可被其他的氨基酸取代而不会不利地影响该蛋白质的活性。因此可预期可在本发明的BAFF受体的氨基酸序列、或其DNA编码序列中产生各种变化，因此它们的生物活性或利用度没有可察觉的损失。
BAFF受体衍生物和类似物的用途也在本发明的范围内。该衍生物或类似物应是功能上活化的，即能够显示一种或多种与野生型BAFFR的配体结合结构域相关的活性。可通过本领域已知的和/或实施例中所描述的方法生产和测试保持这种结合性能、或抑制BAFF生物活性的衍生物或类似物。生产这种衍生物和类似物的方法包括重组和合成方法(参见例如，Maniatis(1990)Molecular Cloning，A Laboratory Manual，2nd ed.，Cold Spring HarborLaboratory，Cold Spring Harbor，NY，and Bodansky et al.(1995)The Practice ofPeptide Synthesis，2nd ed.，Spring Verlag，Berlin，Germany)。
下列实施例提供本发明的例证性的实施方案。虽然在小鼠中进行该代表性的方法，熟练的技术人员将认识到其能够在人受试个体临床可行的参数内成功地进行。熟练的技术人员将认识到可进行许多的改变和变化而不改变本发明的精神或范围。这种改变和变化包括在本发明的范围内。这些实施例不以任何方式限制本发明。
实施例下文描述了代表性步骤中所使用的材料和方法和在随后的实施例描述的实验。
小鼠如先前在例如，Gavalchin et al.(1987)J.Immunol.，138138-148；Datta etal.1989 Clin.Immunol.Immunopathol.，51141-56中所描述的繁殖和供养雌性(SWR×NZB)F1(SNF1)小鼠。
蛋白质试剂通过连接包含来自鼠Ig-k基因的信号序列的Not1+Aat2片段、包含编码鼠BAFFR(登记号AF373847)的氨基酸2至氨基酸66序列的Aat2+Sal1片段和包含编码鼠IgG1(Kabat系统编号)的氨基酸226至氨基酸478序列的Sal+Not1片段进入pCEP4(Invitrogen，Carlsbad，CA)改进型(没有EBNA-1基因)的Not1位点，构建包含鼠BAFFR-muIgG1(BAFFR-Fc)的表达载体，称为CH269。根据制造商的方案(Invitrogen)，利用LipofectamineTM将该载体转染进入包含EBNA-1基因的293细胞。该转染维持在补充有10％胎牛血清(FCS)、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和250μg/mlG418的Dulbecco′s modified Eagle′s培养基(DMEM)中。每4-7天收获培养基，持续几个星期。用三体积的高盐和高pH缓冲液(1.5M甘氨酸pH8.9，3M NaCl)稀释该条件培养基以增加mBAFFR-mIgG对蛋白质A的亲合力。通过亲和色谱法(蛋白质A)然后是空间排阻层析纯化BAFFR-Fc蛋白质。以类似的方式纯化由MOPC21杂交瘤产生的小鼠IgG1(mIgG1)并用作阴性对照。
处理方案将已证实患有肾炎(30-100mg/dL的蛋白尿)的20只23周龄的雌性SNF1小鼠分成10只小鼠/组的两个群体。一个群体接受200μg的小鼠BAFFR-Fc，而另一个接受200μg的mIgG1，每周2次，持续4周，此后监测疾病的进展。对濒死小鼠实施无痛死亡，并在处死前收集组织和血样用于分析。也定期通过眶后静脉窦收集血液以获得用于自身抗体测定的血清。研究结束时，将肾、心脏和肠系膜淋巴结(MLN)置于10％的中性缓冲盐水中，并包埋入石蜡块用于组织学分析。收集脾脏用于流式细胞光度术。
流式细胞光度术通过机械破碎脾细胞制备单细胞悬浮液。在氯化铵溶液中裂解红血球，然后洗涤细胞3次，滤过100-微米过滤器，并利用血细胞计数器计数。如Thompson et al.(2001)Science，2932108-2111中所描述的用荧光染料-共轭的抗-B220mAb染色脾细胞以检测B淋巴细胞。
组织学利用针对B细胞的大鼠抗-B220mAb和针对T细胞的大鼠抗-CD3mAb，然后是生物素酰化的兔抗-大鼠和抗生物素蛋白-生物素-HRP溶液，并利用底物DAB(Vector Laboratories，Burlingame，CA)显象来评估石蜡-包埋的肠系膜淋巴结(MLN)和肾切片的淋巴细胞渗透。通过用Mason′s三色染色和生物素-标记的抗-α平滑肌肌动蛋白，然后与抗生蛋白链菌素-HRP孵育并用DAB底物显象来评估肾纤维化。用Mayer′s苏木精复染载玻片。通过检查H & E-染色的心脏组织来评估心脏炎症。
肾和心脏疾病的评估用AlbustixTM(Bayer Corp.，Research Triangle Park，NC)每周监测各个小鼠的尿以测量蛋白尿。H & E-染色的肾切片用于组织学检查并为以下现象评分肾小球细胞过多、肿大、逐渐增大、血管系膜变厚、袢、纤维蛋白样坏死和玻璃状；间质硬化、浸润和血管炎；以及小管血管炎、萎缩和脱落。检查心脏组织的血管和心脏炎症以及心脏空泡化。根据被检查结构的涉及百分比给出0-4+的等级，其中0＝没有，而4+是100％涉及。
ELISA如Kalled et al.(1998)J.Immunol.，1602158-2165中所描述的进行用于检测血清抗-ssDNA抗体的ELISA分析。
实施例1短期的BAFFR-Fc给药增加存活率如表1所示，当与mIgG对照处理的小鼠相比时，短程的BAFFR-Fc治疗显著增加存活率。在49周龄，所有BAFFR-Fc-处理的小鼠仍活着，而只有30％的对照小鼠仍活着。
表1
实施例2短期的BAFFR-Fc给药减轻肾炎的进展通过定期的蛋白尿测定评估肾的功能。如表2所示，当与mIgG-处理的对照小鼠相比时，BAFFR-Fc-处理的小鼠中发展至严重肾炎(蛋白尿≥300mg/dL)的疾病进展显著降低。49周龄时，所有的对照小鼠都发展为严重的肾炎，而BAFFR-Fc-处理的动物在那个周龄时没有严重的肾炎。在分开的实验中，用人IgG或用人TACI-Fc(结合BAFF和APRIL的受体-Fc融合蛋白质)以200μg每周两次处理SNF1小鼠，持续四周。虽然TACI-Fc给药最初稍微减少了严重肾炎的发生，最后所有的TACI-Fc-处理的小鼠与对照类似地发展为严重的肾炎(表2)。
表2
通过组织学方法进一步评估肾病。通过结合在材料和方法中描述的个体疾病参数的评分来对H & E染色的肾切片的肾病积分。如表3所示，当与mIgG-处理的或未处理的对照相比时，BAFFR-Fc-处理的小鼠具有显著减少的累积疾病评分，并且BAFFR-Fc-处理的小鼠的评分接近于疾病发病前的年轻SNF1小鼠的评分。
表3
1n表明用于分析的小鼠的数目。
在SLE-肾炎中，肾的纤维化经常发生并且可通过由成纤维细胞和血管系膜细胞分泌的细胞外基质(ECM)蛋白质，α-平滑肌肌动蛋白(ASMA)和胶原介导。与未处理的和mIgG-处理的SNF1小鼠相比，在用BAFFR-Fc处理的小鼠中ECM产生显著(p＜0.05，Student′s t检验)减少，正如在肾中通过ASMA(表4)和胶原(表5)沉积减少所观察到的。年轻的9周龄SNF1小鼠被用作疾病前对照。
表4
1每个小鼠检查70-111个肾小球。
表5
1每个小鼠检查70-111个肾小球。
健康的肾不带有淋巴簇。然而，这个SLE-肾炎模型以及人疾病中的伴发疾病是白细胞，包括B和T细胞渗透入肾，而形成囊泡样的结构。因此，检查肾切片中T和B细胞渗透的存在。在未处理的(图1B)和mIgG-处理的(图1D)小鼠中，全部肾中都观察到模拟次级淋巴组织的白髓面积的大面积T和B细胞渗透。相比之下，在接受短期BAFFR-Fc处理的小鼠肾中(图1C)，B细胞，以及T细胞的渗透显著减少(图1)。在健康的、9周龄(疾病前)SNF1小鼠中极少或没有观察到B或T细胞(图1A)。
实施例3短期的BAFFR-Fc给药抑制心脏炎症检查心脏的H & E-染色石蜡切片的血管和心脏炎症以及心脏空泡化。如表6所示，接受BAFFR-Fc的SNF1小鼠当与mIgG和未处理的对照小鼠相比时，具有总体显著减少的心脏评分。
表6
1n表明用于分析的小鼠的数目。
实施例4短期的BAFFR-Fc给药防止B细胞增生基于在正常BALB/c小鼠中用100μgBAFFR-Fc每周一次连续4周进行的BAFF阻断研究，已知外周B细胞数目在BAFFR-Fc的最后剂量后大约9周内完全恢复(数据未显示)。最后剂量的BAFFR-Fc或mIgG以后26-28周测定SNF1小鼠中脾脏B细胞的数目。如表7所示，接受短期BAFFR-Fc处理的SNF1小鼠比未处理的或mIgG-处理的对照小鼠其脾脏B细胞数目显著减少(p＜0.05，Student′s t检验)。随着时间，对照小鼠发展出严重的脾脏B细胞增生。相比之下，BAFFR-Fc-处理的小鼠显示长期益处，其中在该研究结束时，脾脏B细胞计数在前疾病、9周龄SNF1小鼠、和已经开始经历B细胞扩展的20周龄SNF1小鼠的计数之间。
表7
此外，MLN中B和T细胞结构的免疫组织化学分析证明未处理的(图2B)和mIgG-处理的(图2D)小鼠具有大范围的B细胞扩展，导致淋巴结病。相比之下，BAFFR-Fc-处理的小鼠(图2C)不显示B细胞增生并且看来类似于疾病发病前的年轻SNF1小鼠(图2A)。
实施例5短期的BAFFR-Fc给药抑制自身抗体产生的增加利用ELISA形式分析从SNF1小鼠定期获得的血清的循环抗-ssDNA抗体。当检验抗-ssDNA水平随时间从处理开始至37周龄的变化时，在mIgG-处理的小鼠中存在抗-ssDNA的显著变化(增加)(p＜0.05，利用Student-Newman-Keuls方法)，然而，在接受BAFFR-Fc的小鼠中自身抗体水平没有显著的变化(表8)。这表明用BAFFR-Fc阻断BAFF抑制自身抗体产生，其可导致BAFFR-Fc-处理的小鼠中病变减少。值得注意地，与对照相比较，已经施用最后剂量的BAFFR-Fc后10周(37周龄)自身抗体水平保持减小。
表8
1值反映几何平均数。
实施例6短期的BAFFR-Fc给药减少IgM-IgD+B细胞的百分比在研究结束时，根据B220+B细胞染色，BAFFR-Fc-处理的和mIgG-处理的小鼠在血液中具有相似频率的总B细胞。然而，当检验特异的B细胞子集时，BAFFR-Fc-处理的小鼠显示IgM-IgD+B细胞百分数有统计上显著的减少(p＜0.01，Student′s t检验)(表9)。外周B细胞的广泛回复，以及IgM-IgD+B细胞选择性的、明显的减少和BAFFR-Fc-处理小鼠中的长期效力表明BAFFR-Fc导致这些据推测是致病性的B细胞的长期减少。
表9
1在分析时小鼠是49-51周龄。
可参照本说明书内引用的参考文献的教导最透彻地理解本说明书。本说明书内的实施方案提供了本发明实施方案的例证说明，并且将不会被视为限制本发明的范围。熟练的技术人员可容易地认识到许多其他的实施方案也被本发明包括在内。在本公开内容中引用的所有出版物和专利和序列全部并入作为参考。对于并入作为参考的材料与本说明书抵触或不一致的时候，本说明书将优于任何这种材料。在此任何参考文献的引用不是承认这种参考文献是相对于本发明的现有技术。
下列应用除非另有陈述指用于本说明书，包括权利要求书的表示成分、细胞培养物、处理条件等的数量的所有数字将被理解为可在一切情况下通过术语″大约″修饰；一系列要素前的术语″至少″将被理解为是指该系列中的每个要素。本领域的技术人员将认识到，或能够仅仅利用常规实验确定，在此所描述的本发明的具体实施方案的许多等价物。这种等价物将通过下列权利要求被包括在内。
序列表<110>比奥根艾迪克MA公司(Biogen Idec MA Inc.)<120>使用BAFF拮抗剂的治疗方法<130>08201.0042-00304<150>60/512,880<151>2003-10-20<160>6<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>186<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>没有或任何氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>甲硫氨酸、没有或任何氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(21)..(21)<223>缬氨酸(野生型)、天门冬酰胺或另一个氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>赖氨酸(野生型)、脯氨酸或另一个氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(47)..(47)<223>没有、任何氨基酸或丙氨酸<400>1Xaa Xaa Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg Asp Ala Pro Ala1 5 10 15Pro Thr Pro Cys Xaa Pro Ala Glu Cys Phe Asp Xaa Leu Val Arg His20 25 30Cys Val Ala Cys Gly Leu Leu Arg Thr Pro Arg Pro Lys Pro Xaa Ala35 40 45Gly Ala Ser Ser Pro Ala Pro Arg Thr Ala Leu Gln Pro Gln Glu Ser50 55 60Val Gly Ala Gly Ala Gly Glu Ala Ala Leu Pro Leu Pro Gly Leu Leu65 70 75 80Phe Gly Ala Pro Ala Leu Leu Gly Leu Ala Leu Val Leu Ala Leu Val85 90 95Leu Val Gly Leu Val Ser Trp Arg Arg Arg Gln Arg Arg Leu Arg Gly100 105 110Ala Ser Ser Ala Glu Ala Pro Asp Gly Asp Lys Asp Ala Pro Glu Pro115 120 125Leu Asp Lys Val Ile Ile Leu Ser Pro Gly Ile Ser Asp Ala Thr Ala130 135 140Pro Ala Trp Pro Pro Pro Gly Glu Asp Pro GIy Thr Thr Pro Pro Gly145 150 155 160His Ser Val Pro Val Pro Ala Thr Glu Leu Gly Ser Thr Glu Leu Val165 170 175Thr Thr Lys Thr Ala Gly Pro Glu Gln Gln180 185<210>2
<211>321<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(41)..(41)<223>缬氨酸(野生型)、天门冬酰胺或另一个氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(48)..(48)<223>赖氨酸(野生型)、脯氨酸或另一个氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(67)..(67)<223>没有、任何氨基酸或丙氨酸<400>2Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro1 5 10 15Gly Ser Thr Gly Asp Val Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg20 25 30Asp Ala Pro Ala Pro Thr Pro Cys Xaa Pro Ala Glu Cys Phe Asp Xaa35 40 45Leu Val Arg His Cys Val Ala Cys Gly Leu Leu Arg Thr Pro Arg Pro50 55 60Lys Pro Xaa Ala Gly Ala Ser Ser Pro Ala Pro Arg Thr Ala Leu Gln65 70 75 80Pro Gln Glu Ser Val Gly Ala Gly Ala Gly Glu Ala Ala Val Asp Lys85 90 95Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro100 105 110
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser115 120 125Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp130 135 140Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn145 150 155 160Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val165 170 175Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu180 185 190Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys195 200 205Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr210 215 220Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr225 230 235 240Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu245 250 255Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu260 265 270Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys275 280 285Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu290 295 300Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly305 310 315 320Lys<210>3<211>175
<212>PRT<213>鼠<400>3Met Gly Ala Arg Arg Leu Arg Val Arg Ser Gln Arg Ser Arg Asp Ser1 5 10 15Ser Val Pro Thr Gln Cys Asn Gln Thr Glu Cys Phe Asp Pro Leu Val20 25 30Arg Asn Cys Val Ser Cys Glu Leu Phe His Thr Pro Asp Thr Gly His35 40 45Thr Ser Ser Leu Glu Pro Gly Thr Ala Leu Gln Pro Gln Glu Gly Ser50 55 60Ala Leu Arg Pro Asp Val Ala Leu Leu Val Gly Ala Pro Ala Leu Leu65 70 75 80Gly Leu Ile Leu Ala Leu Thr Leu Val Gly Leu Val Ser Leu Val Ser85 90 95Trp Arg Trp Arg Gln Gln Leu Arg Thr Ala Ser Pro Asp Thr Ser Glul00 105 110Gly Val Gln Gln Glu Ser Leu Glu Asn Val Phe Val Pro Ser Ser Glu115 120 125Thr Pro His Ala Ser Ala Pro Thr Trp Pro Pro Leu Lys Glu Asp Ala130 135 140Asp Ser Ala Leu Pro Arg His Ser Val Pro Val Pro Ala Thr Glu Leu145 150 155 160Gly Ser Thr Glu Leu Val Thr Thr Lys Thr Ala Gly Pro Glu Gln165 170 175<210>4<211>316<212>PRT<213>鼠<400>4
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro1 5 10 15Gly Ser Thr Gly Asp Val Gly Ala Arg Arg Leu Arg Val Arg Ser Gln20 25 30Arg Ser Arg Asp Ser Ser Val Pro Thr Gln Cys Asn Gln rhr Glu Cys35 40 45Phe Asp Pro Leu Val Arg Asn Cys Val Ser Cys Glu Leu Phe His Thr50 55 60Pro Asp Thr Gly His Thr Ser Ser Leu Glu Pro Gly Thr Ala Leu Gln65 70 75 80Pro Gln Glu Gly Ser Ala Leu Val Asp Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys85 90 95Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe100 105 110Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val115 120 125Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe130 135 140Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro145 150 155 160Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro165 170 175Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val180 185 190Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys rhr Ile Ser Lys Thr195 200 205Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys210 215 220Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp225 230 235 240
Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro245 250 255Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser260 265 270Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ash Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala275 280 285Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His290 295 300His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys305 310 315<210>5<211>11<212>PRT<213>人工的<220>
<223>Peptide<400>5Cys His Trp Asp Leu Leu Arg His Trp Val Cys1 5 10<210>6<211>7<212>PRT<213>人<400>6Ser Ser Pro Ala Pro Arg Thr1 权利要求
1.一种治疗患有免疫学病症的患者的方法，包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF(属于TNF家族的B细胞活化因子)拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；其中N是8、9、10、11或12。
2.权利要求1的方法，其中步骤(a)的给药包括间隔1、2、3、4、5、6或7周。
3.权利要求1的方法，其中该BAFF拮抗剂在步骤(a)中一周给药2、3、4、5、6或7次。
4.权利要求1的方法，其中该给药在步骤(b)中中止12、18、24、30、36、42、48周或更长时间。
5.权利要求1的方法，其中在治疗开始时该患者具有下列中的一个或多个(i)每24小时周期1g或更高的蛋白尿；(ii)大约1mg/dl或更高的血清肌酸酐水平；(iii)97ml/分钟或更低的肌酸酐清除率水平；(iv)20mg/dl或更高的血尿素；(v)血清中异常滴定度的自身抗体；以及(vi)700个细胞/μl的外周血液B细胞计数。
6.权利要求5的方法，其中该患者是人。
7.权利要求1的方法，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够抑制自身抗体滴定度。
8.权利要求1的方法，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少B细胞增生。
9.权利要求1的方法，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少心脏炎症。
10.权利要求1的方法，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够改善肾的功能。
11.权利要求10的方法，其中肾的功能是加压过滤、选择性重吸收、管状分泌和体循环血压调节中的一项或多项。
12.权利要求1的方法，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少肾纤维化的发展。
13.权利要求1的方法，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少肾中淋巴细胞的渗透。
14.权利要求1的方法，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少淋巴结病。
15.权利要求1的方法，其中该免疫学病症是自身免疫病症。
16.权利要求15的方法，其中该自身免疫病症是全身性红斑狼疮。
17.权利要求1-16中任何一项的方法，其中该药物是LymphoStat-BTM。
18.权利要求1-16中任何一项的方法，其中该BAFF拮抗剂是BAFF-特异的。
19.权利要求18的方法，其中该BAFF拮抗剂选自可溶的BAFF受体、抗-BAFF抗体和抗-BAFFR抗体。
20.权利要求19的方法，其中该BAFF受体选自BAFFR、BCMA(B细胞成熟抗原)和TACI(跨膜活化剂和亲环蛋白配体相互作用物)。
21.权利要求20的方法，其中该可溶的BAFFR包括SEQ ID NO5的肽。
22.权利要求19的方法，其中该可溶的BAFF受体包括BAFFR的BAFF结合结构域。
23.权利要求20的方法，其中该可溶的BAFFR是人类的。
24.权利要求20的方法，其中该可溶的BAFFR缺乏SEQ ID NO6的序列。
25.权利要求22的方法，其中该BAFFR的BAFF结合结构域具有如下列所示的氨基酸序列(a)SEQ ID NO1的第27位氨基酸至第32位氨基酸；(b)SEQ ID NO1的第18位氨基酸至第43位氨基酸；(c)SEQ ID NO1的第13位氨基酸至第50位氨基酸；(d)SEQ ID NO1的第3位氨基酸至第73位氨基酸；或(e)SEQ ID NO3的第2位氨基酸至第62位氨基酸。
26.权利要求22的方法，其中该BAFFR的BAFF结合结构域与免疫球蛋白的恒定区融合。
27.权利要求26的方法，其中该免疫球蛋白是IgG1或IgG4。
28.权利要求26的方法，其中该免疫球蛋白的恒定区包括Fc部分。
29.权利要求28的方法，其中该BAFFR-Fc包括(a)如SEQ ID NO2所示的氨基酸序列或(b)如SEQ ID NO4所示的氨基酸序列。
30.一种治疗患有自身免疫病症的患者的方法，包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF特异的拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；由此治疗该自身免疫病症，并且其中N是8、9、10、11或12。
31.一种减少患者中自身抗体滴定度的方法，包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF-特异的拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；由此减少自身抗体滴定度，并且其中N是8、9、10、11或12。
32.一种抑制患者中致病B细胞生成的方法，包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF特异的拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；由此抑制致病的B细胞的生成，并且其中N是8、9、10、11或12。
33.权利要求32的方法，其中致病的B细胞是IgM-IgD+。
34.权利要求30-33中任何一项的方法，其中该BAFF特异的拮抗剂是BAFFR的可溶形式。
35.权利要求30-33中任何一项的方法，其中该BAFF特异的拮抗剂是抗-BAFF-抗体。
36.BAFF拮抗剂在制备用于治疗免疫病症的药物中的用途，其中该治疗方案包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF(属于TNF家族的B细胞活化因子)拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；其中N是8、9、10、11或12。
37.权利要求36的用途，其中步骤(a)的给药包括间隔1、2、3、4、5、6或7周。
38.权利要求36的用途，其中该BAFF拮抗剂在步骤(a)中一周给药2、3、4、5、6或7次。
39.权利要求36的用途，其中该给药在步骤(b)中中止12、18、24、30、36、42、48周或更长时间。
40.权利要求36的用途，其中在治疗开始时该患者具有下列中的一个或多个(i)每24小时周期1g或更高的蛋白尿；(ii)大约1mg/dl或更高的血清肌酸酐水平；(iii)97ml/分钟或更低的肌酸酐清除率水平；(iv)20mg/dl或更高的血尿素；(v)血清中异常滴定度的自身抗体；以及(vi)700个细胞/μl的外周血液B细胞计数。
41.权利要求40的用途，其中该患者是人。
42.权利要求36的用途，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够抑制自身抗体滴定度。
43.权利要求36的用途，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少B细胞增生。
44.权利要求36的用途，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少心脏炎症。
45.权利要求36的用途，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够改善肾的功能。
46.权利要求45的用途，其中肾的功能是加压过滤、选择性重吸收、管状分泌和体循环血压调节中的一项或多项。
47.权利要求36的用途，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少肾纤维化的发展。
48.权利要求36的用途，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少肾中淋巴细胞的渗透。
49.权利要求36的用途，其中BAFF拮抗剂的治疗有效量足够减少淋巴结病。
50.权利要求36的用途，其中该免疫学病症是自身免疫病症。
51.权利要求50的用途，其中该免疫学病症是全身性红斑狼疮。
52.权利要求36-51中任何一项的用途，其中该药物是LymphoStat-BTM。
53.权利要求36-51中任何一项的用途，其中该BAFF拮抗剂是BAFF-特异的。
54.权利要求53的用途，其中该BAFF拮抗剂选自可溶的BAFF受体、抗-BAFF抗体和抗-BAFFR抗体。
55.权利要求54的用途，其中该可溶的BAFF受体选自BAFFR、BCMA(B细胞成熟抗原)和TACI(跨膜活化剂和亲环蛋白配体相互作用物)。
56.权利要求55的用途，其中该BAFFR包括SEQ ID NO5的肽。
57.权利要求54的用途，其中该可溶的BAFF受体包括BAFFR的BAFF结合结构域。
58.权利要求55的用途，其中该BAFFR是人类的。
59.权利要求55的用途，其中该BAFFR缺乏SEQ ID NO6的序列。
60.权利要求57的用途，其中该BAFFR的BAFF结合结构域具有如下列所示的氨基酸序列(a)SEQ ID NO1的第27位氨基酸至第32位氨基酸；(b)SEQ ID NO1的第18位氨基酸至第43位氨基酸；(c)SEQ ID NO1的第13位氨基酸至第50位氨基酸；(d)SEQ ID NO1的第3位氨基酸至第73位氨基酸；或(e)SEQ ID NO3的第2位氨基酸至第62位氨基酸。
61.权利要求57的用途，其中该BAFFR的BAFF结合结构域与免疫球蛋白的恒定区融合。
62.权利要求61的用途，其中该免疫球蛋白是IgG1或IgG4。
63.权利要求61的用途，其中该免疫球蛋白的恒定区包括Fc部分。
64.权利要求63的用途，其中该BAFFR-Fc包括(a)如SEQ ID NO2所示的氨基酸序列或(b)如SEQ ID NO4所示的氨基酸序列。
65.BAFF-特异的拮抗剂在制备用于治疗自身免疫病症的药物中的用途，其中该治疗方案包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF特异的拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；由此治疗自身免疫病症，并且其中N是8、9、10、11或12。
66.BAFF特异的拮抗剂在制备用于减少自身抗体滴定度的药物中的用途，其中该治疗方案包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF特异的拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；由此减少自身抗体滴定度，并且其中N是8、9、10、11或12。
67.BAFF-特异的拮抗剂在制备用于抑制致病B细胞生成的药物中的用途，其中该治疗包括(a)至少一次或以一个或更多个不到N周的间隔给予患者治疗有效量的BAFF特异的拮抗剂；(b)暂时中止步骤(a)的给药N周或更长时间；以及(c)重复步骤(a)和(b)至少一次；其中N是8、9、10、11或12。
68.权利要求67的用途，其中致病的B细胞是IgM-IgD+。
69.权利要求65-68中任何一项的用途，其中该BAFF特异的拮抗剂是可溶形式的BAFFR。
70.权利要求65-68中任何一项的用途，其中该BAFF特异的拮抗剂是抗-BAFF-抗体。
全文摘要
描述了用于治疗免疫学和相关病症的BAFF拮抗剂给药的治疗方法。该方法涉及短期的BAFF拮抗剂给药过程，然后是在下轮给药前的延长的非治疗时期。
文档编号A61P37/00GK1897966SQ200480038227
公开日2007年1月17日 申请日期2004年10月20日 优先权日2003年10月20日
发明者苏珊·卡莱德, 桑巴西瓦·拉奥 申请人:比奥根艾迪克Ma公司