专利名称：葡糖苷酶抑制剂在粘液粘稠病治疗中的应用的制作方法
技术领域：
本发明的主题为葡糖苷酶抑制剂在制备用于治疗囊性纤维化的药物中的应用。
囊性纤维化(CF)是在欧洲和北美人群中最广泛的致命性常染色体隐性遗传病。CF基因(基因座7q31)编码称作CFTR(囊性纤维化跨膜传导调节蛋白)的跨膜蛋白(Tsui等1985；Riordan等1989)。CF基因突变导致水和电解质通过各种器官，诸如肺、汗腺、肠和外分泌胰腺的细胞膜的转运异常。尽管CFTR蛋白存在1000种以上的突变，但是最常见的突变(70％的患者)在于508位上的NBF1结构域中的苯丙氨酸缺失(delF508)。CF患者死亡率的主要原因与这种缺失相关并且导致感染或因粘液粘性增加导致的肺动脉瓣关闭不全。这种粘性导致呼吸道阻塞并且增加机会致病菌感染的风险。此外，在消化系统且特别是胰腺系统中还注意到了恶化(患有胰腺机能不全的患者)。CFTR蛋白为1480个氨基酸的糖蛋白，它属于ABC膜转运蛋白超家族。CFTR为位于健康个体内肺上皮细胞顶端原生质膜中的氯通道。CFTR负责水和电解质的跨上皮运输并且在健康个体中使肺气道水化。在CF患者中，该蛋白质在原生质膜中不存在，这是因保留在内质网(ER)中的该蛋白质不正确寻址(addressing)所致。肺气道的水化在这种情况中不再是功能性的。delF508缺失干扰了NBF1结构域折叠并且防止蛋白质的完全成熟，由此，该蛋白质在其生物合成过程中极早地被降解。但是，如果delF508蛋白达到膜，那么它可作为氯离子通道起作用。治疗这种疾病的关键之一由此在于重新使delF508寻址到细胞膜。一旦在膜处，delF508转运活性就可以受到内源性或外源性激动剂刺激。
如下实现CFTR蛋白寻址机制。CFTR蛋白在其新合成后在ER腔中被发现，其中它通过糖基转移酶进行各种糖基化。发现该蛋白质特别带有3个N-连接的葡萄糖和1个N-连接的甘露糖。葡萄糖中的两个被葡糖苷酶I和II除去。钙联接蛋白或钙网蛋白，即依赖性钙陪伴分子识别单葡糖基化蛋白并且通过N-连接的葡萄糖结合后者。这些陪伴分子防止存在于ER中的不同CFTR蛋白发生聚集并且允许结合其它陪伴分子，诸如ERp57。由此形成的CFTR/钙联接蛋白/ERp57复合物使得CFTR折叠。然后葡糖苷酶II除去剩余的葡萄糖，由此使CFTR从陪伴分子中释放。如果折叠不正确，那么葡糖基-转移酶将葡萄糖添加到CFTR上，后者可以再次进行一个或多个循环，直到它折叠良好。如果折叠仍然不正确，那么甘露糖苷酶除去N-连接的甘露糖，该蛋白质然后通过易位子通道复合物转运入胞质溶胶，在那里它被降解(Ellgard&Helenius，2003)。对80％的CFTR-WT和99％的delF508-CFTR观察到了这种现象。一旦在胞质溶胶中，那么该蛋白质就会得到不同的陪伴分子，诸如Hsp70、Hsp90或Hdj-2辅助。这些陪伴分子使得泛素结合CFTR。这样标记的CFTR被属于ATP-依赖性的26S蛋白酶体复合物识别和降解(Gelman等2002)。如果内质网控制机制认为CFTR折叠正确，那么该蛋白质可以达到高尔基体。它得到通过甘露糖结合CFTR的“cargo”蛋白ERGIC-53(属于凝集素族)辅助。ERGIC通过因子COP I形成的小囊泡发生通过(Ellgard&Helenius，2003)。看起来如果该蛋白质折叠极差，那么它对高尔基体的内切糖苷酶H敏感(Cheng等1990)且然后返回到内质网中，它在那里被降解。另一方面，耐内切糖苷酶H的正确折叠的蛋白得到因子VIP 36(ERGIC-53同系物)辅助并且被输送至顶膜(Fiedler&Simons，1995)。
另一方面，尽管已经观察到葡糖苷酶抑制剂澳粟精胺(castanospermine)对肺上皮细胞表面上存在的delF508更新具有作用(Wei等1996)，但是从未描述该化合物不仅能够恢复delF508的膜寻址，而且能够使delF508作为离子转运蛋白起作用。因此，该文章的作者没有就该化合物在治疗囊性纤维化范围中的可能应用提出假设。
本发明人已经精确地研究了这些葡糖苷酶抑制剂，以便确定它们是否能够确保delF508的正确和特异性寻址(addressing)，而又不会影响其离子转运活性或细胞存活力。
N-丁基-脱氧野尻霉素(NB-DNJ)为内质网的葡糖苷酶I和II抑制剂，最初它被研发作为用于人的抗病毒分子。这些酶的抑制改变了HIV病毒(人免疫缺陷病毒)的被膜的糖蛋白的折叠且结果是发现病毒周期被阻断(Platt等2001)。已经对患有获得性免疫缺陷综合征的患者评价了使用NB-DNJ的疗法这种分子得到充分耐受并且甚至在高浓度(2mM)下对培养物中的组织也没有细胞毒性。此外，这些临床试验揭示NB-DNJ还对葡萄糖基转移酶具有抑制作用。这就是为何在治疗戈谢病中研究也称作OGT 918的该分子的原因(Dwek等2000，Cox等2000)。这种遗传疾病是因溶酶体酶β-葡糖脑苷脂酶缺乏导致的，这引起葡糖脑苷脂(酶底物)积累。葡糖脑苷脂生物合成中涉及的NB-DNJ(一种葡萄糖基转移酶抑制剂)由此阻止了其合成和蓄积(Dwek等2000，Cox等2000)。在2002年，NB-DNJ作为治疗戈谢病的药物以名称Zavesca获得了市场授权。
本发明人证明的如下事实产生了本发明，即NB-DNJ和其它一般性的糖苷酶抑制剂能够恢复delF508的膜寻址，而不会改变其它氯离子通道并且使delF508作为转运蛋白起作用。
本发明的一个主题在于葡糖苷酶抑制化合物在制备用于治疗囊性纤维化的药物中的应用。
所谓“葡糖苷酶抑制剂”这一表达方式指的是任意葡糖苷酶I和/或II抑制剂，这些葡糖苷酶的抑制能够按照尤其是Platt等1994所述的方法测定。
更具体的说，本发明的一个主题在于上述葡糖苷酶抑制化合物的应用，所述的化合物选自能够恢复delF508膜寻址而不会改变其它氯离子通道并且允许delF508作为离子转运蛋白起作用的那些化合物，特别是在下述对delF508缺失纯合型人肺上皮CF15细胞进行的实验的框架内显示上述性质的化合物。
更具体的说，本发明的一个主题在于选自如下通式(I)的化合物的葡糖苷酶抑制化合物的上述应用
其中-R1表示CH3，或CH2OH基团；-R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基；-或R1和R2与上述通式(I)的氮和(a)位上的碳一起形成如下式的基团 更具体的说，本发明涉及如下式(I)的化合物的上述应用 DNJ(脱氧野尻霉素)DFJ(deoxyfuconojirimycin) DMJ(脱氧甘露糖型野尻霉素(deoxymannojirimycin)) DGJ NB-DNJ(N-丁基-脱氧野尻霉素)(脱氧半乳糖型野尻霉素(deoxygalactonojirimycin))
NB-DGJ 澳粟精胺(N-丁基-脱氧半乳糖型野尻霉素(deoxygalactonojirimycin))更具体的说，本发明涉及选自如下通式(II)的化合物的葡糖苷酶抑制剂的上述应用 其中R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基。
更具体的说，本发明涉及选自如下通式(IIa)的化合物的如上所述葡糖苷酶抑制剂的上述应用 其中R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基。
本发明的主题还在于权利要求1-4之一的葡糖苷酶抑制剂的上述应用，所述的葡糖苷酶抑制剂选自下列通式(II.1)或(II.2)的化合物
其中R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基。
更具体的说，本发明涉及如下所示R2表示H或N-丁基的如上所述通式(II.1)或(II.2)化合物的上述应用 DNJ(脱氧野尻霉素) DMJ(脱氧甘露糖型野尻霉素) NB-DNJ(N-丁基-脱氧野尻霉素) NB-DMJ(N-丁基-脱氧甘露糖型野尻霉素)优选本发明范围内使用的化合物为NB-DNJ和NB-DMJ。
另外优选本发明范围内使用的化合物为NB-DNJ。
本发明的主题还在于上述定义的葡糖苷酶抑制化合物在制备药物中的上述应用，所述的药物可以通过口服(糖浆剂、混悬液、明胶胶囊、片剂、粉剂或颗粒)、直肠(栓剂)、鼻部途经(通过吸入的气溶胶或滴剂)给药，特别是分一次或多次剂量以约1mg-2g/天的活性组分的比例对成年人给药或以1mg-1g/天的比例对儿童和婴儿给药。
本发明还涉及上述定义的葡糖苷酶抑制化合物与CFTR通道活化化合物组合的上述应用。
更具体的说，本发明的主题由此在于上述定义的葡糖苷酶抑制化合物与CFTR通道活化化合物组合的上述应用，所述的CFTR通道活化化合物选自-下式的染料木黄酮(genistein) -或如下的式(II)的苯并[c]喹嗪类(benzo[c]quinoliziniums)衍生物 其中-R1和R2表示氢原子或与C1和C2一起形成具有6个碳原子的芳族环；-R5表示氢原子或具有1-10个碳原子的直链或取代烷基，特别是丁基，或通式COOR′的酯，其中R′表示具有1-10个碳原子的直链或取代烷基，特别是乙基；-Y表示-OH、-SH、-NH2或-NHCOCH3基团；-R7、R8、R9和R10表示氢原子或R7、R8、R9或R10中至少一个表示卤原子，特别是氯、溴或氟原子；-X表示阴离子形式的卤原子，特别是溴Br-或氯Cl-原子或阴离子形式的原子群。
更具体的说，本发明的主题在于上述定义的葡糖苷酶抑制化合物与式(II)的苯并[c]喹嗪类衍生物组合的上述应用，所述的式(II)的苯并[c]喹嗪类衍生物选自下列化合物化合物13(MPB-01) 化合物11(MPB-26) 化合物14(MPB-02) 化合物15(MPB-03) 化合物16化合物17
化合物22 化合物23 化合物24 化合物12(MPB-05) 化合物18(MPB-06) 化合物19(MPB-07)化合物20(MPB-08)
化合物21(MPB-27) 化合物25(MPB-30) 化合物26(MPB-29) 化合物27(MPB-32) 化合物MPB-91
化合物MPB 73 化合物MPB 75 化合物MPB 86化合物MPB 77 化合物MPB 87化合物MPB 88 化合物MPB 102化合物MPB 103
本发明的主题还在于包括至少一种葡糖苷酶抑制化合物，特别是如上所述的式(I)或(II)的化合物和至少一种如上所述的CFTR通道活化化合物的产品，它们作为组合产品同时或分开或在一定时间内分散用于囊性纤维化治疗中。
本发明进一步通过下列详细描述来举例说明，后面用实验证明MB-DNJ对delF508的正确和特异性寻址的作用，然而，MB-DNJ对其离子转移活性或细胞存活力没有影响。
I)材料和方法M1.细胞培养物CHO-WT细胞CHO(中国仓鼠卵巢)细胞为用野生型CFTR基因(CFTR-WT)转染的成纤维细胞。这些细胞由此超表达CFTR蛋白。
培养基MEMα培养基(GIBCO)+7％胎牛血清+0.5％青霉素/链霉素+100μM甲氨蝶呤(Amethopterin，Sigma)CF15细胞CF15细胞为表达ΔF508-CFTR基因的来源于鼻的人上皮细胞。
培养基DMEM培养基+HAM F12+10％FCS+0.6％青霉素/链霉素+生长因子(胰岛素5μg/ml、转铁蛋白5μg/ml、肾上腺素5.5μM、腺嘌呤0.18mM、EGF 10ng/ml、T3 2nM、氢化可的松1.1μM)Calu-3细胞Calu-3细胞为表达野生型CFTR基因的来源于肺的人上皮细胞。
培养基含有glutamax+7％胎牛血清+1％青霉素/链霉素的DMEM培养基/F12M2.免疫标记免疫标记使得借助于抗-CFTR初级抗体(Ab)，然后借助于用Cy3荧光团标记的抗初级抗体的二次抗体使CFTR蛋白的细胞寻址显现成为可能。预先将细胞接种在合适的培养基中的片层上。用TBS(NaCl157mM，Tris碱20μM，pH 7.4)进行3次洗涤，每次5分钟。然后通过在20分钟内添加TBS-低聚甲醛(3％)固定细胞。在用3TBS洗涤3次(5分钟)后，将细胞与0.1％TBS-triton一起保温(10分钟)，使得细胞膜上形成孔，然后再次用TBS进行3次洗涤，此后将细胞与0.5％TBS-BSA-0.05％皂苷共同保温1小时。然后将细胞与CFTR抗-C末端初级抗体(2μg/ml)一起保温1小时。用TBS-BSA-皂苷进行3次洗涤，每次5分钟，此后与GAM-cy3二次抗体(1/400)一起保温1小时。在两次用TBS洗涤5-分钟后，通过与Topro3(1/1000)一起保温5分钟标记核。最后，在用TBS进行最后3次5-分钟的洗涤后可以将所述片层固定在载玻片上。用聚焦显微镜(Bio-Rad)，借助于在合适波长处使用激光激发观察载玻片。为了区分Cy3与Topro3标记，Topro3的荧光颜色已经改变成蓝色(核的颜色)。
M3.放射性示踪物流出使用放射性碘化物流出技术对细胞中氯离子转运进行测定(Becq等1999；Dormer等2001)。将示踪物(125I)掺入胞内介质中。然后在加入不同的药物活性剂后计数离开细胞的放射性示踪物的量。将碘化物用作氯离子转运的示踪物。已经证实可以将两种放射性示踪物125I和36Cl看作用于测定氯离子通道活性的等效物(Venglarick等1990)。125I还具有比35Cl短的寿命的优点(各自的半衰期30天和300,000年)。将细胞在24-孔板内的合适的培养基中培养。用流出培养基(NaCl136.6mM，KCl5.4mM，KH2PO40.3mM，NaH2PO40.3mM，NaHCO34.2mM，CaCl21.3mM，MgCl20.5mM，MgSO40.4mM，HEPES10mM，D-葡萄糖5.6mM)进行2次冲洗，以便消除按照反常方式释放放射性的死亡细胞。然后将细胞和500μl装载物(1μCi/ml的125INa)一起保温，就CHO-WT而言为30分钟，或就CF15和Calu-3而言为1小时。碘化物在细胞膜的两侧处于平衡状态。由机器人(MultiPROBE，Packard)操纵下列步骤用流出培养基冲洗上清以便消除胞外放射性。每分钟将上清收集到溶血管内并且用等体积(500μl)培养基取代。对前3分钟内所取的样品不经添加药物，它们能够获得稳定的基线，表征I-离子被动排出。在测试分子的存在下获得随后7份样品。在实验结束时，通过添加500μl NaOH(0.1N)/0.1％SDS(30分钟)裂解细胞，由此，可以测定保留在细胞内部的放射性。使用γ计数器(CobraII，Packard)以每分钟的计数(cpm)对溶血管内存在的放射性进行计数。将以cpm计的结果按照下列公式表示为放射性碘化物的排出速度形式(R)R(分钟-1)＝[ln(125It1)-ln(125It2)]/(t1-t2)，其中125I t1t1时的cpm；125I t2t2时的cpm。将该碘化物流量表示为曲线形式。为了对因给予测试分子导致的碘化物排出，计算能够清除基线流量的下列相对流量相对速度(分钟-1)＝R峰值-R基线值。最终，将这些结果标准化，以便能够将不同药物的作用彼此进行比较。将结果表示为平均值+/-SEM的形式。使用斯氏统计学检验以便比较药物与对照品的作用(将相当于P＜0.01的值看作统计学上显著的)。
M4.细胞毒性试验MTT毒性试验为基于线粒体脱氢酶将MTT(黄色四氮唑盐)代谢成甲(紫色)的能力的比色试验。然后可以通过分光光度法测定与转化的染料成比例的吸光度。将细胞在有待测活性剂存在的96-孔平板中保温2小时。进行3种对照100％活细胞不使用活性剂的细胞；0％活细胞保持接触空气的细胞；空白不含细胞的培养基。用不含酚红的RPMI培养基冲洗细胞，使得培养基的颜色不会干扰吸光度测定。然后将它们与100μl补充了MTT(0.5mg/ml)的RPMI溶液一起保温4小时。然后除去培养基，添加100μl的DMSO使得能够增溶转化的染料(甲)。在570nm(紫色)；630nm(背景噪声)处通过分光光度法测定吸光度。为了消除背景技噪声，进行下列计算ODreal＝OD570nm-OD630nm。然后将结果相对于对照组(100％和0％活细胞)标准化并且以平均值+/-SEM的形式表示。
II)结果R1.NB-DNJ对CF15细胞中delF508寻址的作用在实验室中通过合并药理学、细胞成像、生物化学和电生理学试验手段在delF508缺失纯合型人上皮CF15细胞上对delF508-CFTR蛋白的寻址进行研究。存在能够干扰CFTR寻址中涉及的某些因素的不同分子。作为葡糖苷酶I和II抑制剂并且被测试的N-丁基-脱氧野尻霉素(NB-DNJ)就是这种情况。
对每次实验而言，添加混合物(毛喉素(Forskolin)10μM、染料木黄酮30μM)在CFTR在膜上时使CFTR活化。因此，如果delF508寻址已经得到恢复，那么可以观察到碘化物流出。将以直方图形式表示的结果已相对于参比处理(用250μM MPB-91将细胞处理2小时以上)标准化，将参比处理视为存在100％CFTR活性。我们证实在37℃下用葡糖苷酶抑制剂N-丁基脱氧野尻霉素(NB-DNJ)(如下所示的结构)将CF15细胞处理2小时恢复了delF508蛋白的寻址并且使得后者起离子转运蛋白的作用(附图1)。
在不处理细胞的情况中，delF508蛋白为非膜的并且不存在所述混合物(毛喉素10μM、染料木黄酮30μM)刺激的碘化物流出。测定NB-DNJ的EC50(产生50％的最大有效性的分子浓度)为123微摩尔(附图2)。通过细胞成像，我们确定用NB-DNJ处理后delF508蛋白位于质膜部分内。
R2.NB-DNJ对Calu-3细胞中CFTR活性的作用为了证实NB-DNJ对delF508寻址的作用是特异性的和不会改变其它氯离子通道，将NB-DNJ作为潜在激活物对Calu-3细胞测试。在Calu-3细胞上碘化物流出中获得了附图3中所示的结果。我们的对照品为毛喉素(5μM，n＝8)和MPB-91(250μM，n＝8)。NB-DNJ(n＝8)既不是这些细胞的野生型CFTR的激活物，也不是其它阴离子转运的激活物，因为在使用或不使用NB-DNJ(基线)的作用之间没有显著差异。
R3.NB-DNJ对Calu-3细胞中CFTR寻址的作用为了证实NB-DNJ对delF508寻址的作用的特异性，将NB-DNJ作为Calu-3细胞上野生型CFTR寻址的调节剂测试。在用NB-DNJ(500μM)处理2小时的Calu-3细胞上碘化物流出中获得了附图4中所示的结果。在附图4中，基线相当于未处理且未用MPB-91刺激的细胞。没有刺激碘化物流出。第二个对照组相当于未经处理，但使用250μMMPB-91刺激的细胞。在这种情况中，CFTR被活化并且测定了碘化物流出。第三个对照组相当于用MPB-91在37℃下处理2小时，然后用250μM MPB-91刺激的细胞。在该实验条件下的CFTR活性与两种其它实验情况相比没有显著性差异。最后，当在37℃下用500μM NB-DNJ将Calu-3细胞处理2小时并且用250μM MPB-91刺激时，CFTR的活性水平未受影响。这些结果证实NB-DNJ不会影响野生型CFTR寻址途径或其它氯离子通道，也不会改变人非-CF肺上皮细胞中的CFTR活性。
R4.不同抑制剂的寻址途径的细胞毒性为了测试NB-DNJ的细胞毒性，将CHO-WT细胞与不同浓度的抑制剂一起保温2小时，此后使用MTT进行细胞存活力试验。附图5表示了结果的概括。结果证实细胞对所有浓度的NB-DNJ均能保持存活。该分子由此表现出无细胞毒性。
R5.NB-DNJ类似物对CF15细胞中delF508寻址的作用我们比较了N-丁基-脱氧野尻霉素家族(NB-DNJ或nB-DNJ)的不同化合物的作用。这些产品如附图6中所示。对每一实验而言，添加混合物(毛喉素10μM、染料木黄酮30μM)在CFTR位于膜上时使得CFTR活化。附图7中所示的结果表明在37℃下用100μM of DNJ、nB-DMJ或DMJ将CF15细胞处理2小时恢复了delF508蛋白的寻址并且使得后者作为离子转运蛋白起作用(附图7)。相反，化合物DGJ、nB-DGJ、DFJ和nB-DFJ对delF508的寻址没有显著作用(附图7)。对每一化合物(DNJ、DMJ和nB-DMJ)而言，经测定EC50(产生50％的最大有效性的分子浓度)分别为＞250μM，134μM和113μM。
III)结论流出试验揭示出导致delF508在内质网中蓄积的NB-DNJ允许了该蛋白的重新膜寻址并且由此代表了将delF508在人肺上皮细胞中重新寻址的重要药理学手段。NB-DNJ使得delF508特异性膜寻址，而不会影响该蛋白的离子转运活性，并且对其它氯离子通道没有影响，对细胞存活力也没有影响。
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附图1NB-DNJ对delF508寻址的作用用NB-DNJ(500μM)将CF15细胞预处理2小时。将MPB-91(250μM)的作用看作在本试验中代表100％。在用fsk 10μM+Gst 30μM刺激后的碘化物流出中测定CFTR活性(对每种条件而言，n＝8)。Ns非显著性差异。***显著性差异P＜0.001附图2表示NB-DNJ对delF508寻址的作用的示意图用不同浓度的NB-DNJ将CF15细胞预处理2小时。在用fsk 10μM+Gst 30μM刺激后的碘化物流出中测定CFTR活性(对每种浓度而言，n＝4)。
附图3NB-DNJ对Calu-3细胞的阴离子转运的作用在用毛喉素(fsk)5μM、MPB-91 250μM、NB-DNJ 500μM刺激后的碘化物流出中测定CFTR活性(对每种条件而言，n＝8)。应注意fsk和化合物MPB-91活化了该细胞中的碘化物流出，但NB-DNJ没有导致这种活化，NB-DNJ没有作用。Ns无显著性差异。***显著性差异P＜0.001附图4使用NB-DNJ处理Calu-3细胞的作用在37°下将Calu-3细胞与500μM NB-DNJ、与MPB-91 250μM一起预保温2小时。未处理的细胞未处理。基线表示细胞既未处理，也未刺激。在用MPB-91 250μM刺激后在碘化物流出中测定CFTR活性(对每种条件而言，n＝8)。应注意用NB-DNJ处理不具有任何作用，因为对流出的刺激水平对三种条件而言是相同的。Ns无显著性差异。
附图5NB-DNJ对CHO细胞的细胞毒性作用应注意在5和50μM下未测定到细胞毒性。看起来在500μM下具有低毒性。将细胞处理2小时。Ns无显著性差异。***显著性差异P＜0.001
附图6N-丁基-脱氧野尻霉素(NB-DNJ或nB-DNJ)和不同NB-DNJ家族化合物的结构附图7NB-DNJ和NB-DNJ类似物对CF15细胞中delF508寻址的作用
权利要求
1.葡糖苷酶抑制剂在制备旨在用于治疗囊性纤维化的药物中的应用。
2.权利要求1的葡糖苷酶抑制剂在制备旨在用于治疗囊性纤维化的药物中的应用，所述的葡糖苷酶抑制剂选自下列通式(I)的化合物 其中-R1表示CH3或CH2OH基团；-R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基；-或R1和R2与上述通式(I)的氮和(a)位上的碳一起形成下式的基团
3.权利要求1或2的葡糖苷酶抑制剂的应用，所述的葡糖苷酶抑制剂选自下列通式(II)的化合物 其中R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基。
4.权利要求1-3之一的葡糖苷酶抑制剂的应用，所述的葡糖苷酶抑制剂选自下列通式(IIa)的化合物 其中R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基。
5.权利要求1-4之一的葡糖苷酶抑制剂的应用，所述的葡糖苷酶抑制剂选自下列通式(II.1)或(II.2)的化合物 其中R2表示H或具有1-5个碳原子的烷基。
6.权利要求1-5之一的其中R2表示H或N-丁基的如下通式(II.1)或(II.2)化合物的应用 DNJ(脱氧野尻霉素) DMJ(脱氧甘露糖型野尻霉素) NB-DNJ(N-丁基-脱氧野尻霉素) NB-DMJ(N-丁基-脱氧甘露糖型野尻霉素)。
7.权利要求1-6之一的化合物NB-DNJ或NB-DMJ的应用。
8.权利要求1-7之一的化合物NB-DNJ的应用。
9.权利要求1-8之一中定义的化合物在制备药物中的应用，所述的药物可以通过口服(糖浆剂、混悬液、明胶胶囊、片剂、粉剂或颗粒)、直肠(栓剂)或鼻部途经(通过吸入的气溶胶或滴剂)给药，特别是分一次或多次剂量以约1mg-2g/天的活性组分的比例对成年人给药或以1mg-1g/天的比例对儿童和婴儿给药。
10.权利要求1-8之一中定义的化合物与CFTR通道活化化合物组合的应用。
11.权利要求10的权利要求1-8之一中定义的化合物与下列化合物组合的应用-如下式的染料木黄酮 -或如下式(II)的苯并[c]喹嗪类的衍生物 其中-R1和R2表示氢原子或与C1和C2一起形成具有6个碳原子的芳族环；-R5表示氢原子或具有1-10个碳原子的直链或取代的烷基，特别是丁基，或通式COOR′的酯，其中R′表示具有1-10个碳原子的直链或取代的烷基，特别是乙基；-Y表示-OH、-SH、-NH2或-NHCOCH3基团；-R7、R8、R9和R10表示氢原子或R7、R8、R9或R10中至少一个表示卤原子，特别是氯、溴或氟原子；-X表示阴离子形式的卤原子，特别是溴Br-或氯Cl-原子或阴离子形式的原子群。
12.权利要求10或11的权利要求1-8之一中定义的化合物与式(II)的苯并[c]喹嗪类的衍生物的组合的应用，所述的苯并[c]喹嗪类的衍生物选自下列化合物化合物13(MPB-01) 化合物11(MPB-26) 化合物14(MPB-02) 化合物15(MPB-03) 化合物16 化合物17 化合物22化合物23 化合物24 化合物12(MPB-05) 化合物18(MPB-06) 化合物19(MPB-07) 化合物20(MPB-08) 化合物21(MPB-27) 化合物25(MPB-30) 化合物26(MPB-29) 化合物27(MPB-32) 化合物MPB-91 化合物MPB 73 化合物MPB 75 化合物MPB 86 化合物MPB 77 化合物MPB 87 化合物MPB 88 化合物MPB 102 化合物MPB 103
13.包括至少一种权利要求1-8之一中定义的式(I)化合物和至少一种如权利要求10-12之一中定义的CFTR通道活化化合物的产品，作为在囊性纤维化治疗中同时或分开使用或分散在一段时间内使用的组合产品。
全文摘要
本发明涉及选自通式(I)的化合物的葡糖苷酶抑制剂在制备用于治疗粘液粘稠病(mucovisidosis)的药物中的应用，其中R
文档编号A61K31/4375GK1897933SQ200480038221
公开日2007年1月17日 申请日期2004年11月5日 优先权日2003年11月7日
发明者F·贝克, C·诺雷兹 申请人:国家科研中心, 普瓦捷大学