广枣α-糖苷酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种广枣α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100：12的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比为100：14石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用100：14石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即得该提取物；或先用乙酸乙酯洗脱，继用甲醇洗脱，用甲醇洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即得该提取物。
【专利说明】
广枣α-糖苷酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用 途和制备方法
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种广枣α -糖苷酶抑制活性提取物及其组合 物的制备方法以及它在降血糖、减肥、降血脂、治疗糖尿病等方面的医药用途。
【背景技术】
[0002] 本品为漆树科植物南酸率，学名 (Roxb. ) Burtt et Hill的干燥成熟果实。主要分布于我国南部名地。南酸枣果实含有丰富的营养成分，在产 地都有生食其果的习惯，是食品生产的好原料，干果实入药名为广枣，为维吾尔习用药材。 南酸枣鲜果实可用于食滞腹痛；果核用于烧烫伤；树皮入药有解毒收敛、止血止痛之效，外 用治大面积水火烧烫伤。
[0003] 广枣性平，味甘、酸，具有养心，安神，抗心肌缺血，保护心功能等作用，可用于气滞 血瘀，胸痹作痛，心悸气短，心神不安等症状。现在药理学研究证明广枣具有诱导白血病细 胞系K562和K562/A02细胞凋亡的功效。
[0004] 本发明通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药广枣提取物及其部分 化学组分，具有显著地α -糖苷酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于降血糖、 减肥、降血脂、糖尿病等方面。
【发明内容】
[0005] 本发明所解决的技术问题是提供一种广枣提取物。
[0006] 本发明还提供了以广枣提取物为主要活性成分的组合物。
[0007] 本发明同时提供了广枣提取物及其组合物的制备和在制备α -糖苷酶抑制活性 药物中的应用。
[0008] 本发明是通过如下技术方案实现的： 维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（Si02)柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱(石油醚-乙酸乙酯，比例见表1 )，各石油醚-乙 酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其α -糖苷酶抑制活 性，意外地发现先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:12,体积比）洗 脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱得到的石油 醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比)洗脱液经回收有机溶剂，干燥， 即为α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有α-糖苷酶抑制活性的作 用。最优为先用100 :12的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用100 :14的石 油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱20倍柱体积的洗脱液干燥即为本发明α -糖苷酶抑制活性 的提取物。α -糖苷酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类 成分分离开。该广枣α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分 析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)显 色方法：香草醛-硫酸显色； 或维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（Si02)柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱(石油醚-乙酸乙酯，比例见表1 )，各石油醚-乙 酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其α -糖苷酶抑制活 性，意外地发现先用乙酸乙酯洗脱，继用甲醇洗脱得到的甲醇洗脱液经回收有机溶剂，干 燥，即为α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有α-糖苷酶抑制活性的 作用。最优为先用乙酸乙酯洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱20倍柱体积，甲醇洗脱液干燥 后即为本发明α-糖苷酶抑制活性的提取物。α-糖苷酶抑制活性的提取物，可以通过以上 方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该广枣α-糖苷酶抑制活性提取物从未见 文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图2, TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石 油醚：乙酸乙酯：丙酮（1:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0009] 具体，发现过程如下： 1、广枣经甲醇超声提取物的制备 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物 3勵217六，样品0.1163 8，留样0.00648，上样量0.10998，拌样硅胶0.8 8，空白硅胶5 8，石 油醚-乙酸乙酯系统洗脱。
[0010] 2、石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药广枣20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0217A 116. 3mg，留样6. 4mg，剩余109. 9 mg。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌 样硅胶500mg，空白硅胶5g，玻璃柱内径1. 6cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗脱(条件见表 1)，柱体积12. 5ml，每个梯度洗脱100ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂， 即得，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图3,图4, TLC分析条件：GF254硅 胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)，石油醚：乙酸乙酯：丙酮（1:1:1)，显色 方法：香草醛-硫酸显色。
3、抑制α-糖苷酶活性筛选方法和结果
1) 实验条件 a、 材料：DMSO(二甲基亚砜）（科密欧公司）；ΚΗ2Ρ04、Κ2ΗΡ0 4 ·3Η20(广东汕头市西陇化 工厂）；a -glucosidase 酶（美国 Sigma 公司）；PNPG(美国 Sigma 公司） b、 实验仪器：多功能酶标仪 Bio-Rad Model 680 型（Bio-Rad Laboratories Inc.) 2) 实验方法和过程 样品处理：将lmg待测样品溶于20 μ L二甲基亚砜（DMSO)作为母液，取1 μ L母液加入 99 μ L缓冲盐配成500 μ g · mL 1的样品溶液。
[0012] 在96孔板中依次加入σ-glucosidase酶PBS溶液20 使其终浓度为0. 07 u/ mL，样品浓度为500々g.mL1的PBS溶液10儿。冰浴5分钟，加入底物PBS溶液20 使其终浓度为2. 5 mmol/1，用浓度为0. 1 M、pH 6. 84的PBS溶液补足体积为100 #L。加 过样的96孔板在37 °C水浴30分钟。于405 nm处测定反应物的吸光度，并以阿卡波糖作 为阳性对照。样品抑制σ-glucosidase酶活性比率用加样品较空白对照的6?喧的比值来 表示。样品抑制百分率按以下公式计算： 酶活性抑制率％ = [A空白-(A样品-A背景）]/ A空白X 100 式中Aae :不加样品反应后的吸收值； :加入样品反应后的吸收值； :只加样品的吸收值。
[0013] 3)实验结果 表2
结果发现： 本发明较优方案为：维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上 样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:12,体积比）洗 脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱，用石油 醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶 剂，干燥，即为该提取物，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物。该α-糖苷酶抑制活性提取 物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。
[0014] 或维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，先用乙酸乙酯洗脱，继用甲醇洗脱，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该 提取物，即为该α-糖苷酶抑制活性提取物。该α-糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报 道，其TLC分析表征如图2。
[0015] 4、α -糖苷酶抑制活性有效提取物的提取方法研究 1)提取溶剂的种类研究 分别用甲醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等 有机溶剂提取，并测试提取物的α-糖苷酶抑制活性，实验结果如下： 表3
研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇 水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0016] 2)提取溶剂的用量研究 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物的 α -糖苷酶抑制活性，结果如下： 表4
活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
[0017] 3 )干燥方法的研究 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的 抑制α -糖苷酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、 冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对α -糖苷酶抑制活性提取物进行干 燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0018] 表 5
因此，广枣α-糖苷酶抑制活性提取物的制备方法为： 维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用 石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:12,体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体 积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱2-50 倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱 液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。以上条件最优为先用石油醚：乙酸乙酯混合 溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:12,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶 剂(石油醚：乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱20倍柱体积； 或维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先 用乙酸乙酯洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用甲醇洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用甲醇洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。以上条件最优为先用乙酸乙酯混合溶剂洗 脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱20倍柱体积。其中， 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合 溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药 材重量的2-50倍(重量/体积比)。
[0019] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0020] 5.广枣抑制α -糖苷酶活性提取物(体积比为100:14的石油醚-乙酸乙酯混合 溶剂洗脱得到的洗脱液或纯甲醇得到的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为α-糖苷酶抑 制活性提取物。）的医药用途研究 按优化的广枣α-糖苷酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物，经测试，其 α -糖苷酶抑制活性为ICM=65. 0 μ g/mL。
[0021] 由于α_糖苷酶抑制剂具有降血糖、减肥、降血脂、糖尿病等方面的医药用途。因 此，我们发现的广枣α-糖苷酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。
[0022] 6、广枣抑制α -糖苷酶活性提取物的组合物及其制备方法研究 1)固体分散体 处方 广枣提取物 20 g Vc 1 g 聚乙烯吡咯烷酮 79 g 固体分散l〇〇g 制备方法： 称取广枣提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入 烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至广枣提取物和载体完全溶解，充分 混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得广枣有效提取物PVP包 合物。
[0023] 2)环糊精包合物 处方： 广枣提取物 20 g Vc 1 g β -环糊精 79 g 包合物lOOg 制备方法： 将β-环糊精与1-5倍水研匀，加广枣有效提取物（水难溶性的应先溶于少量有机 溶剂中）继续充分研磨至成糊状物，低温干燥即得环糊精包合物。
[0024] 3)分散片处方：
预胶化淀粉 10 可溶性淀粉 1〇〇 交联聚维酮 10 微晶纤维素 9 微分硅胶 0. 3 滑石粉 1 100片 制备方法： 1. 广枣有效提取物分散体的制备，精密称取广枣提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫 酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温 度下蒸干，粉碎，过100目筛； 2. 将第一步中的广枣有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用 适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后，60°C烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压 片即得。
[0025] 7、广枣抑制α -糖苷酶活性提取物的检测方法研究 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示广枣α -糖苷酶抑制活性提取 物的特征。见图1，图2。
[0026] 具体条件为（图1) :GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：乙酸乙酯（3:1:1) 显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0027] 具体条件为（图2) :GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：乙酸乙酯（1:1:1) 显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0028]
【附图说明】： 图1广枣α -糖苷酶抑制活性提取物的TLC色谱图； 图2广枣α -糖苷酶抑制活性提取物的TLC色谱图； 图3广枣溶剂提取物的TLC色谱图； 图4广枣溶剂提取物的TLC色谱图。
【具体实施方式】
[0029] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0030] 实施例1 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1. 6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,体积比)洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,体积比)洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。收率0. 01%。 经测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=70. 0 μ g/mL。
[0031] 实施例2: 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1. 6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,体积比)洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测 试，其α -糖苷酶抑制活性为IC5Q=74. 0 μ g/mL。
[0032] 实施例3 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1. 6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙 酯，100:12，体积比)洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙 酸乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。 经测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=70. 0 μ g/mL。
[0033] 实施例4: 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1. 6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,体积比)洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测 试，其α -糖苷酶抑制活性为IC5Q=72. 0 μ g/mL。
[0034] 实施例5 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1. 6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,体积比)洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测 试，其α -糖苷酶抑制活性为IC5Q=68. 0 μ g/mL。
[0035] 实施例6 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1. 6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙 酯，100:12，体积比)洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙 酸乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经 测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=58. Ο μ g/mL。
[0036] 实施例7 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取15 min，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混 合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:12,体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙 酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸 乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干 燥，即为该活性提取物。经测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=73. Ο μ g/mL。
[0037] 实施例8 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取15 min，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混 合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:12,体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙酸乙 酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙酸 乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干 燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC 5(]=46.0 yg/mL。
[0038] 实施例9 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90 :10)超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用石油醚-乙酸 乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:12，体积比)洗脱，洗脱10倍柱体积，继用石油醚-乙 酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比)洗脱，洗脱20倍柱体积，用石油醚-乙 酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻 干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC 5(]=60.0 yg/mL。
[0039] 实施例10 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱， 洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。即 为该活性提取物。经测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=74. Ο μ g/mL。
[0040] 实施例11 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱， 洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经 测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=77. Ο μ g/mL。
[0041] 实施例12: 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗 脱，洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取 物。经测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=72. Ο μ g/mL。
[0042] 实施例13 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱， 洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经 测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=70. 0 μ g/mL。
[0043] 实施例14: 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱， 洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经 测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=73. 0 μ g/mL。
[0044] 实施例15 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱10倍柱体积，继用甲醇 洗脱，洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取 物。经测试，其α -糖苷酶抑制活性为ICM=64. 0 μ g/mL。
[0045] 实施例16 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取15 min，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱 10倍柱体积，继用甲醇洗脱，洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻 干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC 5(]=76.0 yg/mL。
[0046] 实施例17 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取15 min，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗脱，洗脱 10倍柱体积，继用甲醇洗脱，洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻 干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC 5(]=61.0 yg/mL。
[0047] 实施例18 : 取维吾尔药广枣20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90 :10)超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6 cm内径小柱)，先用乙酸乙酯洗 脱，洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱，洗脱20倍柱体积，用甲醇洗脱的洗脱液经回收有机溶 剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其α-糖苷酶抑制活性为IC 5(]=68.0 yg/mL。
[0048] 实施例19:固体分散体 称取广枣提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入 烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至广枣提取物和载体完全溶解，充分 混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得广枣有效提取物PVP包 合物。
[0049] 实施例20 :环糊精包合物 将β-环糊精与1-5倍水研匀，加广枣有效提取物（水难溶性的应先溶于少量有机 溶剂中）继续充分研磨至成糊状物，低温干燥即得环糊精包合物。
[0050] 实施例21 :分散片 1.广枣有效提取物分散体的制备，精密称取广枣提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫 酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温 度下蒸干，粉碎，过100目筛； 2.将第一步中的广枣有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用 适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后，60°C烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片 即得。
【主权项】
1. 一种广枣提取物，其特征为广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上 样后的硅胶柱，先用体积比为100 :12的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比为 100 :14石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用100 :14石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗 脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物； 或先用乙酸乙酯洗脱，继用甲醇洗脱，用甲醇洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该 提取物。2. 如权利要求1所述广枣提取物，其特征为，提取所用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、乙 酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优为甲醇或95%乙醇。3. 如权利要求1所述广枣提取物，其特征为广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅 胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:12， 体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱， 用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚-乙酸乙酯，100:14,体积比)洗脱的洗脱液经回收有 机溶剂，干燥，即为该提取物；或先用乙酸乙酯洗脱，洗脱，继用甲醇洗脱，甲醇溶剂洗脱的 洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。4. 如权利要求1-3所述维的维吾尔药广枣提取物，其特征为，洗脱液的用量为2-50倍 柱体积。5. 如权利要求1_3所述提取物的制备方法，其特征为：最优为先用100 :12的石油 醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用100 :14的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱 20倍柱体积；或最优为先用乙酸乙酯洗脱10倍柱体积，继用甲醇洗脱20倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药广枣提 取物和药学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的广枣提取物或权利 要求6所述的药物组合物。8. 如权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述的制剂为固体分散体、环糊精包合 物、分散片。9. 权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的 药物制剂在制备α-糖苷酶抑制活性药物中的应用。10. 如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的α-糖苷酶抑制活性，可用于治疗 阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。11. 如权利要求1-5中任一种广枣提取物，其特征在于，用TLC法检测，其色谱条件为： GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1，显色方法：香草醛浓硫酸显色。
【文档编号】A61P25/28GK106031734SQ201510109415
【公开日】2016年10月19日
【申请日】2015年3月12日
【发明人】王金辉, 李国玉, 王航宇, 黄健, 刘晓雪, 柳欢, 原朋彩
【申请人】石河子大学