莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。本发明提取物通过如下方法获得：莳萝子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100：2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比为100：3的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，用100：3的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即得该提取物；或先用体积比为100：12的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比为100：17的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，用100：17的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即得该提取物。
【专利说明】
莳萝子乙酿胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医 药用途和制备方法
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其 组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。
【背景技术】
[0002] 莳萝子为伞形科（Umbelliferae)植物莳萝（AweiA·发raKeoJeft? L.)的干燥成 熟果实。干燥果实多数裂成分果，呈扁平广椭圆形，长3~4毫米，宽2~3毫米，厚约1毫 米。外表棕色，背面有3条不甚明显的肋线，两侧肋线延伸作翅状，少数未分离的双悬果基 部有残存果柄。气微香。产江苏、安徽等地。化学成分主要为葛缕酮、柠檬烯、莳萝油脑、佛 手柑内酯、伞形花内酯金合欢醚即7-羟基香豆精金合欢醇醚、蜡、γ-谷留醇等。有抗菌、 镇咳、平喘、祛风、利尿利胆等作用。
[0003] 本发明通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药莳萝子提取物，具有显 著地乙酰胆碱酯酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病（AD) 等方面的医药用途。
【发明内容】
[0004] 本发明所解决的技术问题是提供一种莳萝子提取物。
[0005] 本发明还提供了以莳萝子提取物为主要活性成分的组合物。
[0006] 本发明同时提供了莳萝子提取物及其组合物的制备和在制备乙酰胆碱酯酶抑制 活性药物中的应用。
[0007] 本发明是通过如下技术方案实现的： 维吾尔药莳萝子经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（Si02)柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱(石油醚-丙酮，比例见表1 )，各石油醚-丙酮比例混 合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发 现先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积比)洗脱，继用石油醚-丙酮混合 溶剂(石油醚-丙酮，100:3，体积比)洗脱，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3， 体积比)洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。而其他比例的洗脱部位，没有乙酰 胆碱酯酶抑制活性的作用。最优为先用100 :2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱10倍柱体积， 继用100 :3的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱20倍柱体积的洗脱液干燥后即为乙酰胆碱酯酶 抑制活性的提取物。乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得到富集，从而与 其他杂质类成分分离开。该莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层 谱色谱（TLC)分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯： 丙酮（6:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色； 或维吾尔药莳萝子经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（Si02)柱分离，上样后的硅 胶柱，用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱(石油醚-丙酮，比例见表1 )，各石油醚-丙酮比例 混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性，意外地 发现先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比）洗脱，继用石油醚-丙酮 混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:17,体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。而其他比例的洗脱部位， 没有乙酰胆碱酯酶抑制活性的作用。或最优为先用100 ;12的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱 25倍柱体积，继用100 :17的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱35倍柱体积的洗脱液即为本发明 乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得 到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文 献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图2, TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油 醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0008] 具体，发现过程如下： 1、莳萝子经甲醇超声提取物的制备 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物 SN0096A，样品0. 6927 g，留样0. 0353g，上样量0. 6574g，拌样硅胶0. 7 g，空白硅胶5 g，石 油醚-丙酮系统洗脱。
[0009] 2、石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物 SN0096A，样品0. 6927 g，留样0. 0353g，上样量0. 6574g，拌样硅胶0. 7 g，空白硅胶5 g， 玻璃柱内径1. 5 cm，石油醚-丙酮系统洗脱(条件见表1)，柱体积12. 5 mL，每个梯度洗脱 100mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：丙酮梯度洗脱提取 物，TLC分析结果见图3, TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮 =6:1:1，显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0010] 表 1
3、抑制乙酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果 1) 实验条件 a、 材料：DMSO(二甲基亚砜）（科密欧公司）；KH2P04、K2HP0 4 ·3Η20(广东汕头市西陇化 工厂）；AchE酶（美国Sigma公司）；PNPG(美国Sigma公司） b、 实验仪器：多功能酶标仪 Bio-Rad Model 680 型（Bio-Rad Laboratories Inc.) 2) 实验方法和过程 样品处理：将1 mg待测样品溶于20 二甲基亚砜（DMSO)作为母液，取1 母液 加入249儿蒸馏水配成200々g.mL1的溶液。
[0011] 乙酰胆碱酯酶抑制活性测定方法： 在96孔酶标板上测定样品的AchE抑制活性。具体操作如下：在96孔酶标板中依次加 入 20 μ L PB (100mM，pH 8. 0)，25 μ L AChE (0· 033 U/mL，pH 8. 0 PB 溶解稀释），25 μ L 样品溶液（40 μ g .mL_ 3。冰浴 5min 后，加 15 μ L ATCI(0. 6mM)及 15 μ L DTNB( 1. 5mM)。 37°C孵育60min后，用酶标仪在412 nm下测定其吸光度值。根据下式计算抑制率： 酶活性抑制率％ = [A空白-(A样品-A背景）]/ A空白X 100 式中Aae :不加样品反应后的吸收值； :加入样品反应后的吸收值； :只加样品的吸收值。
[0012] 1)实验结果 表2
结果发现： 本发明较优方案为：维吾尔药莳萝子经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积比)洗脱，继用 石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱，用石油醚-丙酮混合溶剂(石 油醚-丙酮，100:3,体积比)洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性 提取物。该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1 ; 或维吾尔药莳萝子经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比）洗脱，继用石油醚-丙酮 混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:17,体积比)洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。该 乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图2。
[0013] 4、乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究 1)提取溶剂的种类研究 分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机 溶剂提取，并测试提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性，实验结果如下： 表3
研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0014] 2)提取溶剂的用量研究 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比)有机溶剂提取，并测试提取物的乙酰 胆碱酯酶抑制活性，结果如下： 表4
活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。
[0015] 3 )干燥方法的研究 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抑 制乙酰胆碱酯酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、 冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物进行 干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0016] 表 5
优选地，莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的制备方法为： 莳萝子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油 醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用石油醚-丙酮 混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比)洗脱2-50倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石 油醚-丙酮，100:3,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。以上条件 最优为先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用 石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱20倍柱体积。其中，具体试验 条件如下： 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。提取物提取用溶剂用量为药材重量的2-50 倍(重量/体积比)。
[0017] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0018] 或莳萝子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用 石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用石油 醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比)洗脱2-50倍柱体积，用石油醚-丙酮混 合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取 物。以上条件最优为先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比）洗脱25 倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱35倍柱体积。 其中，具体试验条件如下： 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。提取物提取用溶剂用量为药材重量的2-50 倍(重量/体积比)。
[0019] 提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥 法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0020] 5.莳萝子抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物(用体积比为100:3或100 :17的石油 醚-丙酮混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物）的医药用途研究 按优化的莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物，经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为ICM=23. 2 μ g/mL。
[0021] 由于乙酰胆碱酯酶抑制剂具有治疗阿尔茨海默病等方面的医药用途。因此，我们 发现的莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。
[0022] 6、莳萝子抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物的组合物及其制备方法研究 1)固体分散体 处方 莳萝子提取物 20 g Vc 1 g 聚乙烯吡咯烷酮 79 g 固体分散l〇〇g 制备方法： 称取莳萝子提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放 入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至莳萝子提取物和载体完全溶解， 充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得莳萝子有效提取 物PVP包合物。
[0023] 2)环糊精包合物 处方： 莳萝子提取物 20 g Vc 1 g β -环糊精 79 g 包合物lOOg 制备方法： 将β-环糊精与1-5倍水研匀，加莳萝子有效提取物（水难溶性的应先溶于少量有 机溶剂中）继续充分研磨至成糊状物，低温干燥即得环糊精包合物。
[0024] 3)分散片处方： 莳萝子提取物 1〇〇 十^烷基硫酸纳 1 Vc 1 预胶化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交联聚维酮 10 微晶纤维素 9 微分硅胶 0. 3 滑石粉 1 100片 制备方法： 1. 莳萝子有效提取物分散体的制备，精密称取莳萝子提取物、Vc，加入处方量的十二烷 基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C 的温度下蒸干，粉碎，过100目筛； 2. 将第一步中的莳萝子有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉， 用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置 15min后，60°C烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀 后，压片即得。
[0025] 7、莳萝子抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物的检测方法研究 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性 提取物的特征。见图1和图2 具体条件均为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，显色方法：香 草醛-硫酸显色。
[0026]
【附图说明】： 图1莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的TLC色谱图； 图2莳萝子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的TLC色谱图； 图3莳萝子溶剂提取物的TLC色谱图。
[0027]
【具体实施方式】： 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0028] 实施例1 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积 比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=79.0 yg/mL〇
[0029] 实施例2 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积 比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=83.0 yg/mL〇
[0030] 实施例3 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积 比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性 为 IC50=77.0 yg/mL〇
[0031] 实施例4: 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积 比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=76.0 yg/mL〇
[0032] 实施例5 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积 比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=74.0 yg/mL〇
[0033] 实施例6 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积 比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=67.0 yg/mL〇
[0034] 实施例7 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取15 min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石 油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:3,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙 酰胆碱酯酶抑制活性为ICM=83. 0 μ g/mL。
[0035] 实施例8 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取15 min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积比）洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石 油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:3,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙 酰胆碱酯酶抑制活性为IC M=62. 0 μ g/mL。
[0036] 实施例9 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90 :10)超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮 混合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积比)洗脱10倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石 油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱20倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:3,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙 酰胆碱酯酶抑制活性为IC M=70. 0 μ g/mL。
[0037] 实施例10 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体 积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱 的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=73.0 yg/mL〇
[0038] 实施例11 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体 积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱的 洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性 为 IC50=77.0 yg/mL〇
[0039] 实施例12 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体 积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱的 洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活 性为 IC5Q=70. 0 yg/mL。
[0040] 实施例13 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体 积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱的 洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性 为 IC50=73. 0 μ g/mL〇
[0041] 实施例14: 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体 积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱的 洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性 为 IC5Q=68. 0 μ g/mL。
[0042] 实施例15 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体 积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱的 洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性 为 IC5Q=58. 0 μ g/mL。
[0043] 实施例16 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取15 min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石 油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:17,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其 乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC 5Q=76. 0 μ g/mL。
[0044] 实施例17 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取15 min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮混 合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石 油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:17,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其 乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC M=51. 0 μ g/mL。
[0045] 实施例18 : 取维吾尔药莳萝子20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90 :10)超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5 cm内径小柱)，先用石油醚-丙酮 混合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂 (石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱35倍柱体积，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙 酮，100:17,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC5Q=66. 0 μ g/mL。
[0046] 实施例19:固体分散体 称取莳萝子提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放 入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至莳萝子提取物和载体完全溶解， 充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得莳萝子有效提取 物PVP包合物。
[0047] 实施例20 :环糊精包合物 将β-环糊精与1-5倍水研匀，加莳萝子有效提取物（水难溶性的应先溶于少量有 机溶剂中）继续充分研磨至成糊状物，低温干燥即得环糊精包合物。
[0048] 实施例21 :分散片 1. 莳萝子有效提取物分散体的制备，精密称取莳萝子提取物、Vc，加入处方量的十二烷 基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C 的温度下蒸干，粉碎，过100目筛； 2. 将第一步中的莳萝子有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉， 用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置 15min后，60°C烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀 后，压片即得。
【主权项】
1. 一种莳萝子提取物，其特征为莳萝子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100 :2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比为 100 :3的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，用100 :3的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱的洗脱液经 回收溶剂，干燥，即为该提取物； 或先用体积比为100 :12的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比为100 :17的石油 醚-丙酮混合溶剂洗脱，用100 :17的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干 燥，即为该提取物。2. 如权利要求1所述莳萝子提取物，其特征为，提取所用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、 丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优为甲醇或95%乙醇。3. 如权利要求1所述莳萝子提取物，其特征为莳萝子经溶剂超声提取，提取液浓缩后， 用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:2,体积 比)洗脱，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比)洗脱，用石油醚-丙酮 混合溶剂(石油醚-丙酮，100:3,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取 物；或先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮，100:12,体积比)洗脱，继用石油醚-丙酮 混合溶剂(石油醚-丙酮，100:17,体积比）洗脱，用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮， 100:17,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。4. 如权利要求1-3所述维的维吾尔药莳萝子提取物，其特征为，洗脱液的用量为2-50 倍柱体积。5. 如权利要求1-3所述提取物的制备方法，其特征为：最优为先用100 :2的石油醚-丙 酮混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用100 :3的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱20倍柱体积；或最 优为先用100 ; 12的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱25倍柱体积，继用100 :17的石油醚-丙酮 混合溶剂洗脱35倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药莳萝子 提取物和药学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的莳萝子提取物或权 利要求6所述的药物组合物。8. 如权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述的制剂为固体分散体、环糊精包合 物、分散片。9. 权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的 药物制剂在制备乙酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。10. 如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的乙酰胆碱酯酶抑制活性，可用于治 疗阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。11. 如权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药莳萝子提取物，其特征在于，用TLC法检 测，其色谱条件均为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，显色方法： 香草醛浓硫酸显色。
【文档编号】A61P25/28GK106031735SQ201510109413
【公开日】2016年10月19日
【申请日】2015年3月12日
【发明人】王金辉, 田丽萍, 李国玉, 王航宇, 黄健, 罗丽, 孙富周
【申请人】石河子大学