苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其 组合物的医药用途和制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。
【背景技术】
[0002] 苦荬菜Zreri1S ofefliicw/aia 为菊科植物苦荬菜的全草。分布于 中国东北、华北，华东和华南等省区。苦荬菜别名：苦荬、盘儿草、鸭舌草、苦球菜、土蒲公英、 黄花菜、苦丁菜、墓头回。春季采收常，鲜用或阴干。苦荬菜为多年生草，高30-80cm。全株 无毛。茎直立，多分枝，紫红色。基生叶丛生，花期枯萎，卵形、长圆形或披针形、长圆形或披 针形，长5-lOcm，宽2-4cm，先端急尖，基部渐窄成柄，边缘波状齿裂或羽状分裂，裂片边缘 具细锯齿；茎生叶互生，舌状卵形，无柄，长4-8cm，宽l-4cm，先端急尖，基部微抱茎，耳状， 边缘具不规则锯齿。头状花序排成伞房状，具细梗；总苞长约7_，外层总苞片小，长约1_， 内层总荀片5,条状披针形；花全为舌状花，黄色，长6-9_，舌片长4-6_，先端5齿裂。瘦 果黑褐色，纺锤形，稍扁平，长l_2mm，喙长约0. 8mm，冠毛白以。花期4-6月，果期7-10月。
[0003] 苦荬菜味苦，性寒。具有清热解毒、消肿止痛的功效。主痈疖亲毒；乳痈、咽喉肿 痛、黄疸、痢疾、淋证、带下、跌打损伤等。现代药理学研宄表明，苦荬菜总生物碱皮下注射， 可抑制小鼠自发活动，并且对阈下催眠剂量的戊巴比妥钠和水合氯醛有协同催眠作用。
[0004] 本发明通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药苦荬菜提取物及其部 分化学组分，具有显著地乙酰胆碱酯酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治 疗阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。
【发明内容】
[0005] 本发明所解决的技术问题是提供一种苦荬菜提取物。
[0006] 本发明还提供了以苦荬菜提取物为主要活性成分的组合物。
[0007] 本发明同时提供了苦荬菜提取物及其组合物的制备和在制备乙酰胆碱酯酶抑制 活性药物中的应用。
[0008] 本发明是通过如下技术方案实现的： 维吾尔药苦荬菜经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2)柱分离，上样后的硅胶 柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱(二氯甲烷-甲醇，比例见表1)，各二氯甲烷-甲醇 比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性，意 外地发现先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20,体积比）洗脱，继用二氯 甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100,体积比）洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混合 溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:100,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为乙酰胆碱酯酶 抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有乙酰胆碱酯酶抑制活性的作用。优为先用 二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:20,体积比)洗脱10倍柱体积，继用二氯甲 烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100,体积比）洗脱30倍柱体积，洗液干燥后为本 发明乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物可以通过以上方法 得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见 文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二 氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0009] 具体，发现过程如下： 1、苦荬菜经水超声提取物的制备 取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物 SN0233B，留样0. 0456g，上样量0. 6344g，拌样硅胶1.0 g，空白硅胶5 g，二氯甲烷-甲醇系 统洗脱。
[0010] 2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物 SN0233B，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶1.0 g，空白硅胶5 g， 玻璃柱内径1.5 cm，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱(条件见表1)，柱体积11 mL，每个梯度洗 脱100mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱 提取物，TLC分析结果见图2,图3, TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸 乙酯：甲醇（6:1:1)，二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0011] 表 1
【主权项】
1. 一种苦荬菜提取物，其特征为苦荬菜经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:20的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比 100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，用体积比100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗 脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。
2. 如权利要求1所述苦荬菜提取物，其特征为，该提取物的提取用溶剂可以为甲醇、石 油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95% 乙醇；提取物提取用溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。
3. 如权利要求1所述苦荬菜提取物，其特征为苦荬菜经溶剂超声提取，提取液浓缩后， 用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20， 体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:100,体积比)洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇， 100:100,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。
4.如权利要求1所述的维吾尔药苦荬菜提取物，其特征为，先用体积比100:20的二氯 甲烷-甲醇混合溶剂2-50倍洗脱，继用体积比100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂2-50 倍洗脱，优选先用100:20二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用100:100二氯甲 烷-甲醇混合溶剂洗脱30倍柱体积。
5. 权利要求1所述提取物的制备方法，其特征为：苦荬菜经溶剂超声提取，提取液浓 缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:20,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:100,体积比）洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇， 100:100,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物；以上条件最优为先 用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:20,体积比)洗脱10倍柱体积，继用二氯 甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:100,体积比）洗脱30倍柱体积。
6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的提取物和药学上 可接受的载体。
7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的提取物或权利要求6 所述的药物组合物。
8. 权利要求1-5任何一项所述的苦荬菜提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求 7所述的药物制剂在制备乙酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。
9. 如权利要求8所述维吾尔药苦荬菜提取物，其特征为，所述乙酰胆碱酯酶抑制活性， 可用于治疗阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。
10. 如权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药苦荬菜提取物，其特征在于，用TLC法检 测，其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=3:1:1，显色方法： 香草醛浓硫酸显色。
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。所述的提取物通过如下方法获得：先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
【IPC分类】G01N30-90, A61K36-28, A61P25-28
【公开号】CN104857048
【申请号】CN201510058783
【发明人】热娜·卡斯木, 王金辉, 黄健, 李国玉, 王桂花, 李敏, 马庆东, 张珂
【申请人】新疆医科大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年2月4日