一种从藤茶中制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法
【专利说明】
[0001 ] 技术领域:
本发明涉及多酚聚合物的提取方法，特别是一种从藤茶中制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法。
[0002]【背景技术】:
糖尿病是一种以代谢紊乱为特征的疾病，其不能有效地将血液中的葡萄糖运输至细胞。它主要包括先天性的1型糖尿病和后天的2型，1型糖尿病在儿童时期就可以被诊断，其体内不分泌胰岛素，2型糖尿病是胰岛素抵抗引起的，主要发现于成人，糖尿病病人中90%以上属于这种类型。哺乳动物的α-糖苷酶位于小肠绒毛细胞的表面，是一种碳水化合物消化吸收的关键酶，其主要作用是将寡糖或二糖水解为单糖供人体吸收。因此，α-糖苷酶抑制剂能够延缓饮食中碳水化合物的分解产物寡糖或二糖水解为葡萄糖，从而减少人体对葡萄糖的摄入，进而达到抑制餐后血糖升高的效果。目前，α-糖苷酶抑制剂主要通过微生物发酵或人工合成获得，如阿卡波糖(acarbose)和米格列醇(miglitol)已作为糖尿病患者的临床用药。但这些药物都明显存在肠胃胀气、腹泻、腹部不适等副作用。随着“绿色药物”概念的兴起，从天然材料中获得有效、安全的糖苷酶抑制剂已成为功能性食品和医药开发的热点。
[0003]藤茶，学名为显齿蛇葡萄，为葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质落叶藤本植物，属于典型的类茶植物，俗称山甜茶、白茶、甘露茶、白毛猴、白茶等，主要分布于我国湖南、湖北、云南、贵州、广东、广西、福建等地。该植物多生长在海拔400到1300m的山地，集中或散生在阳坡或阴地混杂林中或山地沟边。自古以来，壮族和瑶族人民将其幼嫩茎叶制成保健茶，用于治疗感冒发烧，咽喉肿痛等疾病，夏天泡茶数日不馊，有“神茶”之称，颇受消费者喜爱。根据民间长期饮用实践和现代科学研究证实，其具有清热润肺、平肝益血、消炎解毒、降压减脂、消除疲劳等功效，尤其对因烟酒过度、油腻过多、肝火过旺引起的身体不适如咽喉炎、消化功能障碍等症，具有独特功效。此外，对于其抑菌、抗氧化效果均有报道。二氢杨梅素在藤茶中的含量可高达40%，其被认为是藤茶中的主要活性成分。而本申请人发现含有65% 二氢杨梅素的藤茶水提物抑制葡糖糖苷酶的活性远高于二氢杨梅素单体，表明藤茶中还含有其它抑制α_葡糖糖苷酶活性更高的物质。
[0004]
【发明内容】
:
本发明的目的是提供一种工艺简单、实用性强的从藤茶中制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法。
[0005]本发明的技术方案是，一种从藤茶中制备具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:(1)藤茶水提物制备，将藤茶置于沸水中，浸泡一段时间，纱布过滤，将滤液冷冻干燥，得藤茶水提物；(2)柱层析分离:将步骤(1)所得藤茶提取物用50%的甲醇水溶液溶解，将其导入层析柱，先用一定浓度的甲醇水溶液冲去杂质，然后用一定浓度的丙酮水溶液洗脱，并收集洗脱液；(3)膜透析，将步骤(2)所得洗脱溶液真空旋转蒸发去除丙酮，将所得水溶液放入透析袋中，用水透析一定时间，收集袋内的样液，冷冻干燥，得多酚聚合物。步骤(1)藤茶和沸水的重量和体积比为1:10至1:50，浸泡时间不低于0.5 h。步骤
(2)中层析柱的填料为SephadexLH-20，冲洗杂质溶液的甲醇浓度不低于50%(v/v)，冲洗液用量不低于5个柱体积。洗脱液的丙酮浓度不低于60%(v/v)，洗脱液用量2-4个柱体积。步骤
(3)中透析袋的截留分子量为1000，透析时间不低于24h，中间换水不少于3次。
[0006]本发明的有益效果是:
(1)藤茶是我国民间长期饮用的保健茶，从其水提物中制得的多酚聚合物不仅安全性高，且具有突出的α-葡萄糖苷酶抑制效果，可用于新型的针对糖尿病人的功能性食品和医药产品开发，本发明扩大了藤茶的应用范围。
[0007](2)本发明的生产工艺简单，并且提取和纯化步骤中所用的有机溶剂均能有效回收，节约了生产成本，因此本发明具有广阔的市场前景。
[0008]
【附图说明】:
图1为藤茶水提物、二氢杨梅素和多酚聚合物的紫外光谱；
图2为藤茶水提物、二氢杨梅素和多酚聚合的红外光谱；
图3为多酚聚合物的1H-NMR图谱；
图4为多酚聚合物的13C-NMR图谱；
图5为藤茶水提物、二氢杨梅素和多酚聚合物抑制α_葡萄糖苷酶的效果图谱。
[0009]【具体实施方式】:
实施例1，
称取40 g藤茶，加入2000 mL沸水，浸泡0.5 h，冷冻干燥，得藤茶提取物15.12 g，将藤茶提取物溶解于100 mL 50 %甲醇水溶液中(v/v)中，上填装有Sephadex LH-20的层析柱(柱体积约为100 mL)，先用1000 mL的50 %的甲醇水溶液(v/v)冲去杂质，然后用300 mL的70 %丙酮水溶液(v/v)洗脱，将所得洗脱液放入截留分子量为1000的透析袋中，用纯水透析24h，中间换水3次，最后收集袋内的样液，冷冻干燥，得多酸聚合物503 mg ο
[0010]实施例2，
称取40g藤茶，加入1600ml沸水，浸泡1 h，冷冻干燥，得藤茶提取物14.75g。将藤茶提取物溶解于100 mL 50 %甲醇水溶液中(v/v)中，上填装有Sephadex LH-20的层析柱(柱体积约为100 mL)，先用500 mL70 %甲醇水溶液(v/v)冲去杂质，然后用400 mL80 %丙酮水溶液(v/V)洗脱，将所得水溶液放入截留分子量为1000的透析袋中，用纯水透析48 h，中间换水6次。最后收集袋内的样液，冷冻干燥，得多酸聚合物485 mg。
[0011]实施例3，
称取40 g藤茶，加入1200 mL沸水，浸泡0.5 h，冷冻干燥，得藤茶提取物12.14g。将藤茶提取物溶解于100 mL 50 %甲醇水溶液中(v/v)中，上填充有Sephadex LH-20的层析柱(柱体积约为100 mL)，先用500 mL 60 %甲醇水溶液(v/v)冲去杂质，然后用300 mL 90 %丙酮水溶液(v/V)洗脱，将所得水溶液放入截留分子量为1000透析袋中，用纯水透析48 h，中间换水3次，最后收集袋内的样液，冷冻干燥，得多酸聚合物465 mg ο
[0012]上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。
【主权项】
1.一种从藤茶中制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:(1)藤茶水提物制备，将藤茶置于沸水中，浸泡一段时间，纱布过滤，将滤液冷冻干燥，得藤茶水提物；(2)柱层析分离:将步骤(1)所得藤茶提取物用50%的甲醇水溶液溶解，将其导入层析柱，先用一定浓度的甲醇水溶液冲去杂质，然后用一定浓度的丙酮水溶液洗脱，并收集洗脱液；(3)膜透析，将步骤(2)所得洗脱溶液真空旋转蒸发去除丙酮，将所得水溶液放入透析袋中，用水透析一定时间，收集袋内的样液，冷冻干燥，得多酚聚合物。2.如权利要求1所述的一种从藤茶中制备具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:步骤(1)藤茶和沸水的重量和体积比为1:10至1:50，浸泡时间不低于0.5ho3.如权利要求1所述的一种从藤茶中制备具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:步骤(2)中层析柱的填料为Sephadex LH-20，冲洗杂质溶液的甲醇浓度不低于50%( v/v)，冲洗液用量不低于5个柱体积，洗脱液的丙酮浓度不低于60%( v/v)，洗脱液用量2-4个柱体积。4.如权利要求1所述的一种从藤茶中制备具有α_葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，其特征在于:步骤(3)中透析袋的截留分子量为1000，透析时间不低于24 h，中间换水不少于3次。
【专利摘要】一种从藤茶中制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，本发明的技术方案要点是：一种从藤茶中制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多酚聚合物的方法，(1)藤茶水提物制备，将藤茶置于沸水中，浸泡一段时间，纱布过滤，将滤液冷冻干燥，得藤茶水提物；(2)柱层析分离：将步骤(1)所得藤茶提取物用50%的甲醇水溶液溶解，使用上层析柱，先用一定浓度的甲醇水溶液冲去杂质，然后用一定浓度的丙酮水溶液洗脱，并收集洗脱液；(3)膜透析，将步骤(2)所得洗脱溶液真空旋转蒸发去除丙酮，将所得水溶液放入透析袋中，用水透析一定时间，收集袋内的样液，冷冻干燥，得多酚聚合物。本发明的生产工艺简单，成本较低。
【IPC分类】A61K36/87
【公开号】CN105456549
【申请号】CN201510921525
【发明人】刘本国, 陈玉珍, 耿升, 刘长忠, 马汉军
【申请人】河南科技学院
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年12月14日