番泻苷b作为吲哚胺2,3-双加氧酶-1抑制剂的用图
【专利摘要】本发明通过天然产物番泻苷B或其药学上可接受的盐作为吲哚胺2,3?双加氧酶?1抑制剂（IDO1）的用途，番泻苷B对于吲哚胺2,3?双加氧酶?1的抑制作用，对IDO1在疾病发生发展中的促进作用进行阻碍和/或破坏，从而为治疗IDO1介导的疾病提供良好的前景。
【专利说明】
番泻苷B作为吲哚胺2,3-双加氧酶-1抑制剂的用途
技术领域
[00011 本发明涉及番泻苷B(senn0Side B)作为吲哚胺2,3_双加氧酶-I(IDOl)的新用途 及其在制备治疗IDOl介导的疾病中的应用。
【背景技术】
[0002] 吲哚胺2,3_双加氧酶-I [EC 1.13.11.17KID01)是一种在细胞内、单体的含血红 素蛋白质，催化1-色氨酸（Trp)分解代谢成犬尿氨酸途径的第一步。IDOl代谢产物，N-甲 酰犬尿氨酸(N-formyIkynurenine)，进一步代谢成其它生物活性分子。IDOl在多个组织有 表达，包括肺、小肠、胎盘、脾脏及中枢神经。IDOl在许多细胞类型中可由炎性细胞因子(如 干扰素 γ、大肠杆菌内毒素和肿瘤坏死因子等)刺激引起表达。IDOl也在宿主抗原提呈细 胞（APC)、单核细胞-巨噬细胞和肿瘤细胞中表达。
[0003] IDOl已作为免疫抑制和耐受性的一种重要机制，在自身免疫性疾病、移植排斥反 应中起到重要作用。IDOl通过消耗局部Trp的浓度，抑制T细胞和NK细胞的活性，诱导调节性 T细胞的形成。通过这些机制，IDO提供反馈控制的免疫反应。研究发现，如果IDO在卵巢癌、 结直肠癌及其他肿瘤细胞中高表达，则肿瘤病人预后较差，因而它可起到肿瘤治疗的预测 作用。
[0004] IDOl作为靶点也可以在多种肿瘤中起作用。例如，在卵巢癌、大肠癌和子宫内膜肿 瘤中，IDOl表达水平升高。在临床前的模型中，IDOl通过抑制抗肿瘤免疫反应促进肿瘤的生 长。在这些模型中，小分子抑制剂IDOl可以恢复肿瘤免疫排斥现象和提高常用化疗药物的 活性。这些数据支持IDOl抑制剂作为新型抗癌药物，可与现有疗法结合。除了治疗癌症， IDOl抑制剂对其他疾病，如脓毒症诱发低血压、精神分裂症、阿尔茨海默氏症和帕金森病、 白内障也起到作用。这些发现促使对IDO抑制剂药物的开发兴趣，特别是癌症免疫治疗。最 广泛研究的IDO抑制剂是1-甲基-色氨酸。最近的实验证明，1-甲基-色氨酸可与大量的临床 相关的化疗药物联合使用，起到协同作用。1-甲基-色氨酸与环磷酰胺、顺铂、阿霉素或紫杉 醇的组合可以治愈neu诱导的小鼠乳腺癌模型。
[0005] 目前，国际市场上有几类IDOl抑制剂在临床实验，如新型IDOl抑制剂INCB024360 由Incyte公司开发治疗晚期恶性肿瘤。然而，IDOl抑制剂总体上数量仍较少，并且实验室或 临床效果仍有待提尚。
【发明内容】
[0006] 本发明一方面涉及番泻苷B或其药学上可接受的盐作为一种吲哚胺2,3_双加氧 酶-1抑制剂（IDOl)的用途。
[0007] 本发明另一方面提供番泻苷B或其药学上可接受的盐在制备治疗IDOl介导的疾病 的药物中的应用。
[0008] 在一些实施方式中，所述IDOl介导的疾病是指IDOl表达上调的疾病，包括但不限 于，肿瘤、脓毒症诱发低血压、精神分裂症、阿尔茨海默氏症和帕金森病和白内障。
[0009]在一些实施方式中，所述肿瘤选自在卵巢癌、结直肠癌和子宫内膜肿瘤。在一些实 施方式中，所述疾病不包括肿瘤。
[0010] 番泻苷B的结构式如下式所示，现有文献显示其具有泻下作用（CN101455713A)， 促进肠排空运动。番泻苷B可通过本领域技术人员已知的适当方法制得，一种示例性的制备 方法参见美国专利申请公布US5574151。
[0011] 本发明预期番泻苷B的"药学上可接受的盐"也具有相同的活性。通常，该盐例如通 过将游离酸或碱形式的这些化合物与化学计算量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或 在两者的混合物中制备。通常，非水性介质如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇或乙腈是优选 的。酸加成盐的实例包括无机酸加成盐例如，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，硫酸盐，硝酸盐， 和有机酸加成盐，如例如乙酸盐，马来酸盐，富马酸盐，柠檬酸盐，草酸盐，琥珀酸盐，酒石酸 盐，苹果酸盐，扁桃酸盐和对甲苯磺酸盐。碱加成盐的实例包括无机盐如钠、钾、钙、铵、镁、 铝和锂盐；以及有机碱如乙二胺、乙醇胺、N，N-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和碱性氨基 酸盐。
[0012] 本发明证实了天然产物番泻苷B对于吲哚胺2，3_双加氧酶-1的抑制作用，对IDOl 在疾病发生发展中的促进作用进行阻碍和/或破坏，从而为治疗IDOl介导的疾病提供良好 的前景。
【具体实施方式】
[0013] 本发明现将结合以下实验进一步阐释，需要说明的是，这些实验例不应解释为对 本发明的限制。
[0014] 犬尿氨酸标准曲线绘制 1.标准培养基（20(^1〇:2(^1^的0.51磷酸钾缓冲液(？!16.5)，终浓度为5〇111]\1;2(^1^ 的0.2M抗坏血酸，终浓度为20 mM;4yL的0.5mM亚甲蓝，终浓度为10 μΜ;4μL的5mg/ml过氧 化氢酶，终浓度为l〇〇μg/ml;132 yL的dd-H2〇;20yL的犬尿氨酸溶液，终浓度分别为0，1， 5， 7.5， 10， 25， 50， 75及 100 mM。
[0015] 2.加入40yL的IM NaOH溶液后，离心培养基（ll，500rpm, 4°C, 15min)。
[0016] 3.将200yL的上清液转移至96孔微量滴定板上，测定荧光强度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0017] 蛋白质定量 通过BCA法测定蛋白质IDOl含量。在Amax 570nm处测定溶液吸收值，随后以牛血清白蛋 白标准曲线(0-2 mg/ml)检查，以获得蛋白质浓度。
[0018] 活性实验 1.标准实验培养基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸钾缓冲液(？!16.5)，终浓度为50 1111;20 yL的0.2M抗坏血酸，终浓度为20 mM;4yL的0.5mM亚甲蓝，终浓度为100 μg/ml;20yL的 2mM左旋色氨酸，终浓度为200 μΜ;112 yL的dd-H20;20yL的ID01，终浓度为0至10 μg/ml。
[0019] 2.对照：以20yL的dd-H20替代IDOl。
[0020] 3.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以将N-甲酰基犬尿氨酸水 解为犬尿氨酸。随后离心培养基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0021] 4.将200yL的上清液转移至96孔微量滴定板上，测定荧光强度(Aex 360nm，Aem 480nm)〇
[0022] 抑制试验 1.标准实验培养基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸钾缓冲液(？!16.5)，终浓度为50 1111;20 yL的0.2M抗坏血酸，终浓度为20 mM;4yL的0.5mM亚甲蓝，终浓度为10 μΜ;4μL的5mg/ml 过氧化氢酶，终浓度为l〇〇μg/ml;112 yL的dd-H2〇;10yL的4mM左旋色氨酸，终浓度为200 μ Μ; 20yL的5 μg/ml IDOl和10 μL在DMSO中的抑制剂（1-甲基-L-色氨酸)溶液，终浓度分别 为0， 0.1， 0.5和ImM。
[0023] 2.对照（i):以IOyL的Cld-H2O替代L-色氨酸。
[0024] 3.对照（ii):以30yL的Cld-H2O替代L-色氨酸和IDOl。
[0025] 4.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以将N-甲酰基犬尿氨酸水 解为犬尿氨酸。随后离心培养基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0026] 5.将200yL的上清液转移至96孔微量滴定板上，测定荧光强度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0027] 6.以公式（100-(A/Bx100 ))计算抑制率，其中A表示存在抑制剂时IDOl的活性，B 表示不存在抑制剂时IDOl的活性。结果见表1。 「00281 券1 悉祀井只的油南Il作田
【主权项】
1. 番泻苷B或其药学上可接受的盐作为吲哚胺2,3_双加氧酶-1抑制剂的用途。2. 番泻苷B或其药学上可接受的盐在制备治疗ID01介导的疾病的药物中的应用。3. 根据权利要求2所述的应用，其中所述ID01介导的疾病是指ID01表达上调的疾病。4. 根据权利要求2或3所述的应用，其中所述ID01介导的疾病选自肿瘤、脓毒症诱发低 血压、精神分裂症、阿尔茨海默氏症和帕金森病和白内障。5. 根据权利要求4所述的应用，其中所述肿瘤选自在卵巢癌、结直肠癌和子宫内膜肿 瘤。
【文档编号】A61P35/00GK106074584SQ201610410350
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月13日
【发明人】李庆, 王 忠
【申请人】中山大学