拮抗性抗il-7受体抗体及方法

专利名称：拮抗性抗il-7受体抗体及方法
拮抗性抗IL-7受体抗体及方法发明领域
本发明涉及抗体，如全长抗体或其抗原结合部分，其拮抗白细胞介素-7受体 (IL-7R)的活性，包括其与IL-7相互作用。本发明进一步涉及包含IL-7R拮抗剂如拮抗性 IL-7R抗体的组合物，及涉及使用IL-7R拮抗剂作为药物的方法。所述IL-7R拮抗剂可用于预防和/或治疗2型糖尿病、移植物抗宿主疾病(GVHD)及自身免疫疾病，包括I型糖尿病、 多发性硬化、类风湿性关节炎及狼疮。
发明背景
IL-7R复合物是异源二聚体受体，由IL-7Ra链(IL_7Ra)和共有Y链U c) 组成(Mazzucchelli et al. , Nat Rev Immunol.，2007，7:144 - 54)。IL-7R 由白细胞介素-7(IL-7)结合，这是T和B淋巴细胞的发育和稳态维持所必需的细胞因子(Fry et al.，J Immunol. , 2005, 174:6571 - 6)。IL-7与IL-7R的结合激活调节淋巴细胞存活、葡萄糖摄取、 增殖和分化的多个途径。
IL-7R在树突细胞和单核细胞上均表达，且似乎在多个造血谱系中起作用 (Reche PA, et al. , J Immunol. , 2001, 167:336 - 43) 在树突细胞中，IL-7R 起免疫调节作用，而淋巴细胞需要IL-7R信号传导用于存活、增殖和分化。Jak-Stat和PI3K Akt 途径均通过 IL-7 与 IL-7R 的结合而被激活(Jian et al. , Cytokine Growth Factor Rev.，2005，16:513-533)。这些途径包括信号串扰、共有相互作用结构域、反馈环、整合的基因调节、多聚化及配体竞争。IL-7信号传导的一些靶，包括Bcl2和Pyk2，有助于细胞存活。 其它靶，如PI3激酶、src家族激酶(Ick和fyn)以及STAT5，有助于细胞增殖。转录因子 STAT5有助于B和T细胞中多个不同下游基因的激活以及通过改变染色质结构而可有助于 VDJ重组。由IL-7诱导的细胞存活和细胞增殖信号组合诱导正常T细胞发育。关于复杂的IL-7信号传导网络及其与免疫系统细胞中其它信号传导级联的相互作用的详细描述还未充分阐明。
从本领域及在本发明之前可获得的信息中，仍不明了在血液循环中导入拮抗性 IL-7R抗体以选择性拮抗IL-7R是否能有效治疗2型糖尿病、I型糖尿病、GVHD、狼疮和类风湿性关节炎，以及如果如此，IL-7R抗体的什么性质是这种体内有效性所需的。
发明概述
本发明提供了与IL-7R选择性相互作用及抑制其功能的拮抗性抗体。本发明首次证实某些拮抗性IL-7R抗体在体内有效治疗I型糖尿病、2型糖尿病、类风湿性关节炎、GVHD 和狼疮。
在一些实施方案中，提供了与IL-7R选择性相互作用及抑制其功能的拮抗性抗体。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合IL-7R并且包含与选自C1GM、C2M 3、P3A9、 P4B3、P2D2、P2Ell、HAL403a和HAL403b的单克隆抗体竞争结合IL-7R的抗原结合区。在一些实施方案中，所述抗体包含具有SEQ ID NO: 42或SEQ ID NO: 43所示氨基酸序列的多肽。 在其它实施方案中，所述抗体特异性结合IL-7R及识别与由选自C1GM、C2M3、P3A9、P4B3、 P2D2、P2E11、HAL403a和HAL403b的单克隆抗体识别的IL-7R表位重叠的表位。在一些实施方案中，所述抗体结合包含白细胞介素_7受体a (IL-7Ra)的残基I82、K84、K100、T105 和Υ192的表位。在一些实施方案中，所述表位进一步包含选自人类IL-7R a的残基D190、 H191和K194的一或多个额外残基。
在一些实施方案中，所述IL-7R是人类IL-7R。
在一些实施方案中，所述抗体特异性结合白细胞介素-7受体a (IL-7Ra)并且包含具有氨基酸序列X1X2VMH的重链可变区(VH)互补决定区I (⑶Rl)，其中X1是D或N，X2是 S 或 Y(SEQ ID NO:50);具有氨基酸序列 X1X2X3X4X5Gx6X7TyyADSVKG 的 VH CDR2，其中乂1是1^ 或A，X2是V或I，X3是G或S，X4是W或G，X5是D或S，X6是F、G或S，X7是F、A或S (SEQ ID N0:51);以及具有氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8的VH CDR3，其中X1是Q或D，X2是G或I， X3 是 D 或 S，X4 是 Y 或 G，X5 是 M、V 或 G，X6 是 G 或 F，X7 是 N、D 或 M，X8 是 N、Y 或 D (SEQ ID NO: 52);具有氨基酸序列TXiSSGX2IX3SSYVQ的轻链可变区(VL) CDRl，其中X1是R或G，X2是 S或R，&是0或A(SEQ ID NO: 53);具有氨基酸序列EDX1QRPS的VL CDR2，其中乂1是0或 N (SEQ ID NO: 54);以及具有氨基酸序列 X1X2YX3X4X5X6LX7 的 VL CDR3，其中 X1 是 Q 或 M，X2 是 S 或 Q，乂3是0 或 A，乂4是？或 S，乂5是!1或 S，X6 是H 或 S，乂7是￥ 或 W(SEQ ID NO:55), 其中所述抗体在STAT5激活测定中阻断STAT5磷酸化。在一些实施方案中，VH⑶R2与VH CDR3之间的构架区包含氨基酸序列丙氨酸-精氨酸，其中精氨酸与VH CDR3的第一个氨基酸残基相邻。在一些实施方案中，VH⑶R2与VH⑶R3之间的构架区包含氨基酸序列半胱氨酸-丙氨酸-精氨酸，其中所述精氨酸与VH CDR3的第一个氨基酸残基相邻。
在一些实施方案中，所述抗体包含具有氨基酸序列X1X2VMH(SEQ ID NO:50)的重链 CDR接触区(contact代81011)1，其中乂1是0或1\是3或￥;具有氨基酸序列GWDGFF (SEQ ID NO: 57)的重链CDR接触区2 ;以及具有氨基酸序列ARX1X2X3X4 (SEQ ID NO: 58)的重链CDR 接触区3 ;具有氨基酸序列SGSIDSSY(SEQ ID NO: 59)的轻链CDR接触区I ;具有氨基酸序列 EDDQRPSGV(SEQ ID NO:60)的轻链CDR接触区2 ;以及具有氨基酸序列FHHL(SEQ ID N0:61) 的轻链CDR接触区3，其中所述抗体在STAT5激活测定中阻断STAT5磷酸化。
在一些实施方案中，所述抗体特异性结合IL-7RCI，并且包含具有氨基酸序列 DSVMH(SEQ ID NO: 19)、GFTFDDS (SEQ ID NO:46)或 GFTFDDSVMH(SEQ ID NO:47)的重链可变区(VH)互补决定区1(CDR1)，具有氨基酸序列LVGWDGFFTYYADSVKG(SEQ ID NO:23)或 GffDGFF(SEQ ID NO:48)的 VH CDR2，以及具有氨基酸序列 Q⑶YMGNN(SEQ ID NO:49)的 VH ⑶R3，或者其具有⑶R1、⑶R2和/或⑶R3中一或多个保守氨基酸取代的变体。
在一些实施方案中，所述抗体包含具有氨基酸序列TRSSGSIDSSYVQ(SEQ ID NO:29)的轻链可变区(VL)CDRl，具有氨基酸序列EDDQRPS(SEQ ID N0:31)的VL CDR2，和/ 或具有氨基酸序列QSYDFHHLV (SEQ ID NO: 36)的VL CDR3，或者其在CDR1、CDR2和/或CDR3 中具有一或多个保守氨基酸取代的变体。在一些实施方案中，所述抗体进一步包含具有SEQ ID NO: 19、46或47所示氨基酸序列的VH CDR1，具有SEQ ID NO:23或48所示氨基酸序列的VH CDR2，以及具有SEQ ID NO: 49所示氨基酸序列的VH CDR3，或者其在CDR1、CDR2和/ 或CDR3中具有一或多个保守氨基酸取代的变体。
在一些实施方案中，所述抗体特异性结合IL-7Ra，并且包含具有SEQ ID NO: 19, 46或47所示氨基酸序列的重链可变区(VH)互补决定区I (⑶Rl)，具有SEQ ID N0:23或 48所示氨基酸序列的VH CDR2，及具有SEQ ID NO:49所示氨基酸氨基酸序列的VH CDR3，具有SEQ ID N0:29所示氨基酸序列的轻链可变区(VL)⑶R1，具有SEQ ID N0:31所示氨基酸序列的VL⑶R2，及具有SEQ ID NO:36所示氨基酸序列的VL⑶R3。在一些实施方案中，所述 VH 区包含氨基酸序列 EVQLVESGGGLVKPGGSLRL SCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWVSLVGffDGFFTYYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYMGNNWGQGTLVTVSS (SEQ IDNO:40)以及所述 VL 区包含氨基酸序列 NFMLTQPHSVSESP GKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDFHHLVFGGGTKLTVL(SEQ IDN0:41)。在一些实施方案中，所述抗体包含具有氨基酸序列NFMLTQPH SVSESPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDDQRPSGV PDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDFHHLVFGGGTKLTVL QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO :43)的轻链以及具有氨基酸序列EVQLVESGGGLVKP GGSLRLSCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWVSLVGWDGFFTYYA DSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYMGNNWG QGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSff NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEffESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:42)的重链，有或没有SEQ ID NO:42的C末端赖氨酸。在一些实施方案中，所述抗体可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含恒定区。在一些实施方案中，所述抗体是人IgGl或IgG2Aa亚类。在一些实施方案中，所述抗体包含糖基化恒定区。在一些实施方案中，所述抗体包含与人Fe y受体具有増加的结合亲和性的恒定区。在一些实施方案 中，提供了包含与IL-7R选择性相互作用并抑制其功能的抗体的药物组合物。在一些实施方案中，提供了重组产生与IL-7R选择性相互作用并抑制其功能的抗体的细胞系。在一些实施方案中，提供了编码与IL-7R选择性相互作用并抑制其功能的抗体的核酸。在一些实施方案中，提供了降低个体中血糖水平的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而降低血糖水平。在一些实施方案中，提供了改善个体中葡萄糖耐受的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而改善葡萄糖耐受。在一些实施方案中，提供了预防或者治疗个体I型糖尿病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而预防或治疗I型糖尿病的一或多个症状。在一些实施方案中，提供了预防或治疗个体2型糖尿病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的IL-7R拮抗剂，从而预防或治疗2型糖尿病的一或多个症状。在一些实施方案中，所述IL-7R拮抗剂是拮抗性IL-7R抗体。
在一些实施方案中，提供了预防或治疗个体类风湿性关节炎的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而预防或治疗类风湿性关节炎的一或多个症状。
在一些实施方案中，提供了预防或治疗个体移植物抗宿主疾病(GVHD)的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而预防或治疗GVHD的一或多个症状。
在一些实施方案中，所述GVHD是慢性GVHD或急性GVHD。
在一些实施方案中，提供了预防或治疗个体狼疮的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而预防或治疗狼疮的一或多个症状。
在一些实施方案中，所述狼疮是皮肤红斑狼疮、系统性红斑狼疮、药物诱导的红斑狼疮或新生儿狼疮。
在一些实施方案中，提供了预防或治疗个体多发性硬化的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给需要这种治疗的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而预防或治疗多发性硬化的一或多个症状及降低和/或耗竭个体中幼稚( naive)和/或激活的T 细胞群。在一些实施方案中，个体中降低的或耗竭的T细胞群包含ThI和/或Th17细胞。 在一些实施方案中，施用拮抗性IL-7R抗体不导致个体中Th17细胞群扩增。
在一些实施方案中，所述抗体可以经肠胃外施用。在一些实施方案中，所述个体是人。
附图简述


图1示出拮抗性IL-7R单克隆抗体P2D2、P2E11和HAL403a对于人外周血单个核细胞(PBMC)中IL-7介导的STAT5磷酸化的剂量依赖性作用。χ-轴表示表达磷酸-STAT5 (p-STAT)的CD4+细胞的百分比。
图2示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠中糖尿病发生的作用。
图3示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于NOD小鼠中(A)血糖水平(mg/dL) 和⑶体重(g)的作用。
图4示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于NOD小鼠中(A)幼稚⑶8+T细胞群和(B)记忆CD8+T细胞群的作用。对于χ-轴，总CD8+T细胞群设为100%。
图5示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于NOD小鼠中幼稚⑶4+T细胞群的作用。对于χ-轴，总⑶4+T细胞群设为100%。
图6示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28B6和28G9对于EAE动物的临床严重性的作用。EAE的临床严重性每天用0-5点得分系统评估。0，正常；1，松弛的尾部；2，部分后肢瘫痪；3，全部后肢瘫痪；4，四肢瘫痪；5，濒死状态或死亡。
图7示出拮抗性IL-7R 单克隆抗体28G9对于EAE动物的临床严重性的剂量依赖性作用。
图8示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于EAE动物的临床严重性的作用。
图9示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9在具有建立的EAE的动物中的作用。图10示出低剂量拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9在具有建立的EAE的动物中的作用。图11示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9和28B6对于来自EAE动物的骨髄(BM)、脾、血液和淋巴结(LN)的(A)CD4T细胞和(B)CD8T细胞群的作用。对于x_轴，总淋巴细胞群设为100%。图12A-C示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于来自EAE动物的骨髄、脾、血液和淋巴结的(A)幼稚T细胞群、⑶记忆T细胞群和(C)激活的T细胞群的作用。对于X-轴，CD8+T细胞群设为100%。图13示出拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于来自EAE动物的骨髄、脾、血液和淋巴结的Teff细胞群(左图)和Treg细胞群(右图)的作用。对于X-轴，CD4+T细胞群设为100%o 表示与对照相比P〈0. 05。图14示出在高脂肪饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠中拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于血液葡萄糖水平(mg/dL)的作用。图15示出在高脂肪饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠中拮抗性IL-7R单克隆抗体28G9对于葡萄糖不耐受的作用。

详细描述本发明掲示了拮抗IL-7R功能、包括其与IL-7相互作用的抗体。本发明提供了产生拮抗性IL-7R抗体的方法、包含这些抗体的组合物以及使用这些抗体作为药物的方法。IL-7R拮抗剂如拮抗性IL-7R抗体可用于预防和/或治疗2型糖尿病、GVHD和自身免疫疾病，包括多发性硬化(MS)、类风湿性关节炎、I型糖尿病和狼疮。一般技术除非特别指出，实施本发明使用常规分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学技术，这些技术在本领域技术人员技术范围内。这些技术在文献中充分 1墙明，5ロ Molecular Cloning:A Laboratory Manual, second edition (Sambrooket al. , 1989)Cold Spring Harbor Press;01igonucIeotide Synthesi s(M.J.Gait,ed. ,1984) ；Methods in Molecular Biology, Humana Press;Cell Biology:ALaboratory Notebook (J. E. Cellis, ed.，1998) Academic Press;Animal Cell Culture(R.1. Freshney, ed. , 1987) !Introduction to Cell and Tissue Culture(J. P. Mather andP. E. Roberts, 1998)Plenum Press;Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds. , 1993-1998)J. Wiley and Sons;Methods inEnzymology(Academic Press,Inc. ) ；Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weirand C. C. Blackwell, eds. ) ；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Millerand M. P. Calos, eds. , 1987) ；Current Protocols in Molecular Biology(F. M. Ausubel etal. , eds. , 1987) ；PCR:The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al. , eds. , 1994)；Current Protocols in Immunology(J. E. Coligan et al. , eds. , 1991) ；Short Protocolsin Molecular Biology(ffiley and Sons, 1999) ;Immunobiology (C.A. Janeway andP.Travers, 1997) ；Antibodies (P.Finch, 1997) ；Antibodies: a practical approach(D.Catty. , ed. , IRL Press, 1988-1989) ；Monoclonal antibodies: a practical approach(P.Shepherd and C. Dean,eds. , Oxford University Press, 2000) ；Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999) ；The Antibodies(M. Zanetti and J. D.Capra,eds. , Harwood Academic Publishers,1995)。
定义
“抗体”是能通过至少一个位于免疫球蛋白可变区内的抗原识别位点特异性结合靶如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等的免疫球蛋白分子。如本文所用，该术语不仅涵盖了完整多克隆抗体或单克隆抗体，而且也包含其片段(如Fab、Fab’、F (ab’)2、Fv)、单链 (ScFv)和结构域抗体(包括例如shark和camelid抗体)，以及包含抗体的融合蛋白，及包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它修饰构型。抗体包括任何类别的抗体，如 IgG, IgA或IgM(或者其亚类)，以及所述抗体不需要是任何特定类别。根据抗体重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可被分为不同类别。有五种主要类别的免疫球蛋白IgA、IgD、 IgE、IgG和IgM，其中一些可被进一步分为亚类(同种型)，如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和IgA2。相应于不同类别免疫球蛋白的重链恒定区分别被称作alpha、delta、epsilon、 gamma和mu。不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构型为本领域熟知。
如本文所用，“单克隆抗体”是指得自一群基本均质抗体的抗体，即包含该群的各个抗体除了以微量存在的可能天然发生的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与典型包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。修饰语“单克隆” 是指所述抗体得自基本均质抗体群的特征，不是指需要通过任何特殊方法产生抗体。例如，用于本发明的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法制备，所述杂交瘤方法由Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495首次描述；或者可以通过重组DNA方法制备，如美国专利4，816，567所述。单克隆抗体也可以从使用如McCafferty et al. , 1990, Nature 348:552-554所述技术产生的噬菌体文库分离。
如本文所用，“人源化抗体”是指非人(如鼠)抗体形式，其是嵌合的免疫球蛋白、 免疫球蛋白链或者其片段(如Fv、Fab、Fab’、F(ab' )2或抗体的其它抗原结合子序列)， 其含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。优选地，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体互补决定区(CDR)的残基由来自具有希望的特异性、亲和性和容量 (capacity)的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或兔的⑶R的残基置换。在一些情况中， 人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基由相应非人物种残基置换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体及在输入的CDR或构架序列中均未发现的残基，但是包含其以进一步精制和优化抗体性能。通常，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个及典型两个可变结构域，其中所有或基本上所有相应于非人免疫球蛋白的那些区域的CDR区以及所有或基本上所有FR 区是人免疫球蛋白共有序列的那些区域。人源化抗体优选也包含至少一部分免疫球蛋白典型为人免疫球蛋白的恒定区或结构域(Fe)。优选的是具有如WO 99/58572所述修饰的Fe 区的抗体。其它形式的人源化抗体具有一或多个⑶R(⑶R LlXDR L2、⑶R L3、⑶R HlXDR H2或CDR H3)，其相对于原始抗体被改变，其也被称作“衍生自”原始抗体的一或多个CDR的一或多个CDR。
如本文所用，“人抗体”是指具有相应于由人产生的抗体和/或使用本领域技术人员已知的或者本文掲示的任何产生人抗体的技术产生的抗体的氨基酸序列的抗体。人抗体的定义包括包含至少ー个人重链多肽或者至少ー个人轻链多肽的抗体。ー个这样的实例是包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。人抗体可以使用本领域已知的各种技术产生。在一个实施方案中，人抗体选自曬菌体文库，其中所述曬菌体文库表达人抗体(Vaughan etal.，1996，Nature Biotechnology,14:309-314; Sheets et al.，1998，Proc. Natl. Acad.Sc1. (USA)95:6157-6162 ；Hoogenboom and Winter,1991，J. Mol. Biol.，227:381 ;Marks etal.，1991，J. Mol. Biol.，222:581)。人抗体也可以通过对动物进行免疫而产生，所述动物中已经转基因导入人免疫球蛋白基因座替代内源基因座，例如其中内源免疫球蛋白基因已经部分或完全被失活的小鼠。这种方法在美国专利5，545，807,5, 545，806,5, 569，825、5,625, 126、5，633，425和5，661，016中描述。或者，人抗体可以通过使人B淋巴细胞永生化而制备，所述B淋巴细胞产生针对靶抗原的抗体(如B淋巴细胞可以回收自个体或者可已经在体外免疫)。见 Cole et al. Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, AlanR. Liss, p. 77, 1985 ；Boerner et al. , 1991, J.1mmunol. , 147 (I) :86-95 ；and U. S. PatentNo. 5，750，373 所述。如本文所用，术语“IL-7R”是指任何形式的IL-7R及其变体，其保留至少一部分IL-7R活性。除非不同地指出，如特别提及人类IL-7R，否则IL-7R包括所有哺乳动物物种如人、狗、猫、马和牛的天然序列IL-7R。如本文所用，“IL-7R拮抗剂”是指抗体或分子，其能抑制IL-7R生物学活性和/或由IL-7R信号传导介导的下游途径，包括与IL-7结合、STAT5磷酸化、Src激酶、PI3激酶和Pyk2、以及Bcl2蛋白质的上调。举例的IL-7R拮抗剂包括但不限于拮抗性IL-7R抗体、IL-7R siRNA、IL-7R shRNA 和 IL-7R 反义寡核苷酸。拮抗性IL-7R抗体涵盖这样的抗体，其阻断、拮抗、阻抑或降低(至任何程度，包括显著程度地)IL-7R生物学活性， 包括由IL-7R信号传导介导的下游途径，如与IL-7相互作用和/或激发对IL-7的细胞应答。对于本发明，显然术语“拮抗性IL-7R抗体”(与“ IL-7R拮抗性抗体”、“拮抗性抗-1L-7R抗体”或者“抗-1L-7R拮抗性抗体”可互換使用)涵盖所有先前鉴别的术语、称谓和功能状态及特性，从而IL-7R自身、IL-7R生物学活性(包括但不限干与IL-7相互作用，其介导STAT5磷酸化任何方面的能力、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)-Akt途径激活、p27Kipl下调、Bcl-2上调、Rb超磷酸化及CXCR4上调)或者生物学活性的结果，均基本上在任何有意义的程度被消除、降低或中和。在一些实施方案中，拮抗性IL-7R抗体结合IL-7R及防止与IL-7相互作用。拮抗性IL-7R抗体的实例在本文提供。如本文所用，“完全拮抗剂”是这样的拮抗剂，其在有效浓度基本上完全阻断IL-7R的可测量的作用。部分拮抗剂是指这样的拮抗剂，其能部分阻断可测量的作用，但是甚至在最高浓度时也不是完全拮抗剂。基本上完全是指至少大约80%、优选至少大约90%、更优选至少大约95%及最优选地至少大约98%的可测量的作用被阻断。术语“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互換使用，是指任何长度的氨基酸链，优选相对短的链(例如10-100个氨基酸)。所述链可以是线性的或者分支的，其可包含修饰的氨基酸，和/或可以由非氨基酸中断。该术语还涵盖已经天然和/或通过干预而修饰的氨基酸链；所述修饰例如ニ硫键形成、糖基化、脂质化、こ酰化、磷酸化或者任何其它操纵或修饰，如与标记成分缀合。该定义还包括如含有一或多个氨基酸类似物(包括如非天然氨基酸等)以及本领域已知其它修饰的多肽。应理解所述多肽可以作为单链或缔合 (associated)链存在。
如本领域已知，“多核苷酸”或“核酸”在本文可互换使用，是指任何长度的核苷酸链，及包括DNA和RNA。所述核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物，或者通过DNA或RNA聚合酶可以掺入链中的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸及其类似物。如果存在，对核苷酸结构的修饰可以在链装配之前或之后实施。核苷酸的序列可以由非核苷酸成分中断。多核苷酸在磷酸化之后可以进一步修饰，如通过与标记成分缀合。其它类型修饰包括如“caps”，用类似物取代一或多个天然发生的核苷酸，核苷酸间修饰如具有无电荷键(如甲基膦酸酯、磷酸三酯、磷酸酰胺酯(phosphoamidates)、氨基甲酸酯等)及具有电荷键(如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些，含有悬垂(pendant)部分的那些，如蛋白质(如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、 聚-L-赖氨酸等)，具有嵌入剂(如吖啶、补骨脂素等)的那些，含有螯合剂(如金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些，含有烷化剂的那些，具有修饰键的那些(如α端基异构体核酸等)以及未修饰形式的多核苷酸。此外，所述糖中通常存在的任何羟基基团可以例如由膦酸基团、磷酸基团置换，由标准保护基团保护，或者激活以制备对另外核苷酸的另外连接，或者可以与固体支持物缀合。5’和3’末端OH可以被磷酸化或者用胺或1-20个碳原子的有机帽化基团部分取代。其它羟基也可以被衍生为标准保护基团。多核苷酸也可含有本领域通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2’ -O-甲基_、2’ -O-烯丙基、 2’_氟代_或2’-叠氮-核糖，碳环糖类似物，α -或β -端基异构体糖,差向异构体糖如阿拉伯糖、木糖或来苏糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚酮糖，无环类似物及脱碱基核苷类似物如甲基核苷。一或多个磷酸二酯键可以由其它连接基团置换。这些其它连接基团包括但不限于这样的实施方案，其中磷酸酯由P (O) S (硫代酯)、P (S) S ( 二硫代酯)、(O) NR2 (酰胺)、P (O) R、P (O) OR’、C0或CH2 (formacetal)置换，其中每个R或R’单独地是H或者取代或未取代的烷基(1-20C)，任选含有醚(-0-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或araldyl。不是所有核苷酸中的键均需要是相同的。前文描述适用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
抗体的“ 可变区”是单独或者组合指抗体轻链的可变区或者抗体重链的可变区。 如本领域已知，每个重链和轻链可变区均由四个构架区(FR)组成，这四个构架区通过三个也称作超变区的互补决定区(CDR)连接。每个链中的CDR通过FR紧密固定在一起，与其它链的CDR —起使得形成抗体的抗原结合位点。确定CDR有至少两种技术(I)基于跨物种序列可变性的方法(即 Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed. , 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD))；及(2) 基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(Al-lazikani et al.，1997，J. Molec. Biol. 273:927-948)。如本文所用，⑶R可以是指通过任一方法或者通过组合这两种方法定义的CDR。
如本领域已知，抗体的“恒定区”是单独或组合指抗体轻链的恒定区或者抗体重链的恒定区。
如本文所用，当通过本文实施例2所述方法测量的平衡解离常数等于或低于 20nM、优选低于大约6nM、更优选低于大约InM、最优选低于大约0. 2nM时，抗体与IL-7R“相互作用”。
与抗体或多肽“优先结合”或者“特异性结合”(在本文可互換使用)的表位是本领域熟知的术语，确定这种特异性或优先结合的方法也为本领域熟知。如果一分子与特定细胞或物质比与另外的细胞或物质以更频繁、更快速、更长的持续时间和/或更大的亲和性反应或缔合，则称该分子呈现出“特异性结合”或“优先结合”。如果抗体与靶的结合比与其它物质结合具有更大亲和性、亲合力、更易于结合和/或具有更长持续时间，则该抗体与靶“特异性结合”或“优先结合”。例如，特异性或优先结合IL-7R表位的抗体是与结合其它IL-7R表位或非-1L-7R表位相比以更大亲和性、亲合力、更易于结合和/或具有更长持续时间结合这个表位的抗体。也应理解通过阅读这个定义，如特异性或优先结合第一个靶的抗体(或者部分或表位)可以或者不可以特异性或优先结合第二个靶。如此，“特异性结合”或“优先结合”不必须需要(尽管其可包括)排它性结合。通常但非必需地，提及结合意味着优先结合。如本文所用，“基本上纯的”是指材料是至少50%纯(即没有污染物)、更优选至少90%纯、更优选至少95%纯、更优选至少98%纯及最优选至少99%纯。“宿主细胞”包括可以是或已经是载体的受体的个体细胞或细胞培养物以掺入多核苷酸插入体。宿主细胞包括単一宿主细胞的后代，所述后代与原始亲代细胞由于天然、偶然或有意突变所致而非必须是完全相同(在形态学或基因组DNA互补方面)。宿主细胞包括在体内用本发明的多核苷酸 转染的细胞。如本领域已知，术语“Fe区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区域。“Fe区”可以是天然序列Fe区或者变体Fe区。尽管免疫球蛋白重链的Fe区的边界可以变化，但是人IgG重链Fe区通常被定义为是从在位置Cys226或者从Pro230的氨基酸残基至其羧基末端的一段序列。Fe区中残基的编号是如Kabat所述EU指数的编号。Kabat et al. , Sequencesof Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, Nationa丄Institutes of Health, Bethesda, Md. , 1991。免疫球蛋白的Fe区通常包含两个恒定区,CH2和 CH3。如本领域所用，“Fe受体”和“FcR”描述了结合抗体Fe区的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体的那些(Y受体)，包括Fe Y R1、FcyRII和Fe YRIII亚类受体，包括这些受体的等位基因变体和可变剪接形式。FcyRII受体包括Fe Y RIIA(激活受体)和Fe Y RIIB (抑制受体)，其具有相似的氨基酸序列，主要在其胞质结构域中不同。FcR 在 Ravetch and Kinet, 1991, Ann. Rev.1mmunol. , 9:457-92 ；Capel et al.，1994，Immunomethods, 4:25-34 ;以及 de Haas et al. , 1995, J. Lab. Clin.Med.，126:330-41中综述。“FcR”也包括新生儿受体FcRn，其与母体IgG转移至胎儿相关(Guyer et al. , 1976, J. Tmmuno1. ,117:587 ;和 Kim et al. , 1994, J. Tmmuno1. , 24:249)。如本文所用，关于抗体所用术语“竞争”是指第一抗体或者其抗原结合部分与第二抗体或者其抗原结合部分的结合以极其相似的方式结合表位，由此在存在第二抗体的条件下与不存在第二抗体的条件相比，第一抗体与其关联(cognate)表位结合的结果可检测地降低。或者，其中第二抗体与其表位的结合在存在第一抗体的条件下也可检测地降低，可以但不必须是这种情況。也就是说，第一抗体可抑制第二抗体与其表位的结合，而无需第二抗体抑制第一抗体与其各自表位的结合。然而，在每种抗体可检测地抑制其它抗体与其关联表位或配体结合的情况中，无论是相同、更大或更低程度，也称这些抗体彼此“交叉竞争”与其各自表位的结合。竞争和交叉竞争抗体均包含在本发明中。无论这种竞争或交叉竞争发生的机制如何(如位阻、构象改变或者结合共有表位或其一部分)，技术人员基于本文提供的教导意识到这种竞争和/或交叉竞争抗体涵盖在本发明中且可用于本发明的方法中。
“功能性Fe区”具有天然序列Fe区的至少一种效应物功能。举例的“效应物功能” 包括Clq结合，补体依赖性细胞毒性，Fe受体结合，抗体-依赖性细胞介导的细胞毒性，吞噬作用，细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调等。这种效应物功能通常需要Fe区组合结合结构域(例如抗体可变结构域)并且可以使用本领域已知的评估这种抗体效应物功能的各种测定评估。
“天然序列Fe区”包含与天然发现的Fe区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。“变体Fe区”包含由于至少一个氨基酸修饰而与天然序列Fe区不同的氨基酸序列，但仍保留天然序列Fe区的至少一种效应物功能。在一些实施方案中，变体Fe区与天然序列Fe区相比或者与亲代多肽的Fe区相比具有至少一个氨基酸取代，例如在天然序列Fe区或者亲代多肽Fe区中大约I至大约10个氨基酸取代，以及优选大约I至大约5个氨基酸取代。本文所述变体Fe区与天然序列Fe区和/或与亲代多肽Fe区优选具有至少大约80%序列相同性，最优选与其具有至少大约90%序列相同性，更优选具有至少大约95%、至少大约96%、至少大约97%、至少大约98%、至少大约99%序列相同性。
如本文所用，“治疗”是为获得有益或希望的临床结果的方法。对于本发明，有益或希望的临床结果包括但不限于如下一或多个结果增强葡萄糖清除、降低血糖水平、改善葡萄糖耐受、降低得自I型或2型糖尿病的高血糖水平的发生率，降低类风湿性关节炎的一或多个症状的发生率或改善症状，降低GVHD的一或多个症状的发生率或改善症状，降低狼疮的一或多个症状的发生率或改善症状，以及降低多发性硬化的一或多个症状的发生率或改善症状。
“降低发生率”是指任何降低严重性(可包括减少通常用于这个疾病的其它药物 (如暴露于其它药物)的需要和/或量和/或治疗。如本领域技术人员所理解，个体在其对治疗的应答方面可不同，正如此，如“降低发生率的方法”反映出基于合理预期施用IL-7R 拮抗剂，这种施用可能有希望在特定个体中导致这种发生率降低。
“改善”是指与未施用IL-7 R拮抗剂相比减轻或改良一或多个症状。“改善”也包括缩短或减少症状的持续时间。
如本文所用，药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是足以实现任一或多个有益或希望结果的量。对于预防性应用而言，有益或希望结果包括消除或降低疾病危险、减轻疾病严重性或者延迟疾病发作，包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状，在疾病发展期间存在的其并发症和中间病理学表型。对于治疗性应用，有益或希望结果包括这样的临床结果，如降低血糖水平，降低I型糖尿病、2型糖尿病、类风湿性关节炎、 GVHD、狼疮或多发性硬化的发生率及改善其一或多个症状，降低治疗所述疾病必须的其它药物的剂量，增强另一药物的作用，和/或延迟患者疾病的进展。有效剂量可以施用一次或多次。对于本发明，药物、化合物或药物组合物的有效剂量是足以实现直接或间接预防或治疗性处理的量。在临床中已知，药物、化合物或药物组合物的有效剂量可以联合或不联合另一药物、化合物或药物组合物实现。因此，在施用一或多种治疗剂的情况中可考虑“有效剂量”，单一治疗剂如果联合一或多种其它治疗剂可被认为以有效量给予，可以实现或实现希望的結果。“个体”或“对象”是哺乳动物，更优选是人。哺乳动物也包括但不限于农场动物、体育动物、宠物、灵长类动物、马、狗、猫、小鼠和大鼠。如本文所用，“载体”是指ー种构建体，其能在宿主细胞中输送及优选表达ー或多个感兴趣的基因或序列。举例的载体包括但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂缔合的DNA或RNA表达载体、在脂质体中包囊化的DNA或RNA表达载体，以及某些真核细胞，如生产者细胞。如本文所用，“表达控制序列”是指指导核酸转录的核酸序列。表达控制序列可以是启动子，如组成型或可诱导启动子，或者增强子。表达控制序列与被转录的核酸序列可操纵地连接。如本文所用，“药物可接受的载体”或“药物可接受的赋形剂”包括任何材料，当其与活性成分组合时，使得该成分保留生物学活性且其与对象的免疫系统不反应。实例包括但不限于任何标准药物学载体，如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳状液如油/水乳状液及各种类型的湿润剂。对于气雾剂或肠胃外施用，优选的稀释剂是磷酸盐缓冲盐水(PBS)或常规(0.9%)盐水。包含这种载体的组合物通过熟知的常规方法配制(见例如 Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 18tn edition, A. Gennaro, ed. , MackPublishing Co. , Easton, PA, 1990 ;和Remington, The Science and Practice of Pharmacy20th Ed. Mack Publishing, 2000)。如本文所用，术语“k。/是指抗体与抗原结合的速率常数。特别地，使用Fab抗体片段(即ー价)和IL-7R測量速率常数(km和kj及平衡解离常数。如本文所用，术语“kf”是指抗体从抗体/抗原复合物解离的速率常数。如本文所用，术语“Kd”是指抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。在本文关于数值或參数所用词“大约”包括(及描述)针对上述数值或參数本身的实施方案。例如，“大约X”的描述包括“X”的描述。数字范围包括限定范围的数字。应理解本文实施方案用语言“包含”描述时，也提供了使用“由…组成”和/或“基本由…组成”描述的其它类似实施方案。当本发明的方面或实施方案以马库什组或其它可选分组方式描述时，本发明不仅涵盖作为整体列出的整个组，还涵盖各个组中的每个成员和主要组的所有可能的亚组，以及缺少ー或多个组成员的主要组。本发明还包括在请求保护的发明中明确排除一或多个任何组成员。除非特别指出，本文所用所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常理解的相同含义。在有冲突的情况中，本发明说明书包括定义起决定作用。在本说明书和权利要求书中，单词“包含”应理解为包含所述整数或整数组，但是不排除任何其它整数或整数组。除非特别指出，単数术语应包括复数，复数术语应包括単数形式。举例的方法和材料在本文描述，但是在实施或检测本发明中也可以使用与本文所述方法和材料相似或等价的方法和材料。所述材料、方法和实施例只是举例说明而无限制
ム1g、。
_9] 预防或治疗2型糖尿病、GVHD和自身免疫疾病的方法 一方面，本发明提供了治疗与预防个体2型糖尿病的方法，包括给该个体施用有效量的IL-7R拮抗剂，如拮抗性IL-7R抗体。另一方面，本发明提供了治疗或预防个体自身免疫疾病如I型糖尿病、类风湿性关节炎、狼疮或多发性硬化的方法，所述方法包括给个体施用有效量的IL-7R拮抗剂。另一方面，本发明提供了治疗或预防个体GVHD的方法，包括给该个体施用有效量的IL-7R拮抗剂。
在一些实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地获得降低的血糖水平和改善的葡萄糖耐受。在其它实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地保持血糖在希望的水平。
在一些实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地获得降低的类风湿性关节炎的发生率及改善其一或多个症状，例如但不限于关节僵硬、关节肿胀、关节痛及关节发红和发热。
在一些实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地获得降低的狼疮发生率和/ 或改善其一或多个症状，包括例如但不限于疲劳、发热、体重减轻、体重增加、关节痛、关节僵硬、关节肿胀、面颊皮疹、皮肤损害、口疮、鼻溃疡、脱发、Raynaud氏现象、呼吸浅短、胸痛、 眼干、瘀伤(bruising)、焦虑、抑郁和记忆力丧失。
在一些实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地获得降低的多发性硬化发生率和/或改善其一或多个症状，包括例如但不限于肢体瘫痪、震颤、行走困难、吞咽困难、失明、视力模糊及肌肉无力。
在一些实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地获得降低的GVHD发生率和/ 或改善其一或多个症状，包括例如但不限于腹痛、腹部痉挛、发热、黄疸、皮疹、呕吐、体重减轻、眼干、口干、脱发、肝炎、肺部疾病以及消化道疾病。
在一些实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地获得降低的急性GVHD的发生率和/或改善其一或多个症状，包括例如但不限于肺炎、肠道炎症、腹泻、腹痛、腹部痉挛、 发热、黄疸、恶心、呕吐、肝损害、皮疹、皮肤损害、粘膜损害、粘膜脱落、胃肠道损害、体重减轻、斑丘疹、胆红素水平升高、发病率和死亡率增加。
在一些实施方案中，治疗性施用IL-7R拮抗剂有利地获得降低的慢性GVHD的发生率和/或改善其一或多个症状，包括例如但不限于眼干、口干、脱发、肝炎、肺部疾病、消化道疾病、皮疫、口腔溃瘍、口腔粘膜萎缩(oralatrophy)、指甲营养不良(onchodystrophy)、 干燥综合征、硬化症、扁平苔藓样损害(lichen-palnus-like lesions)、皮肤异色病、食管蹼、筋膜炎和闭塞性细支气管炎，及肝、皮肤和粘膜、结缔组织、外分泌腺和/或胃肠道损害。
需要更低血糖水平的糖尿病个体可以用IL-7R拮抗剂例如拮抗性IL-7R抗体治疗。使用本领域熟知的糖尿病临床标准和预后指征选择适于抗体治疗的个体。通过已知预后指征评估为处于发生糖尿病危险中的个体也允许施用IL-7R拮抗剂，所述指征如如家族史、空腹血糖水平或者降低的葡萄糖耐受性。本领域技术人员意识到或已知怎样诊断具有糖尿病或者失调的葡萄糖吸收的个体，根据疾病的程度或严重性可适当确定何时施用所述抗体及也可以选择最希望的施用模式。
患有类风湿性关节炎的个体可以用IL-7R拮抗剂如拮抗性IL-7R抗体治疗。使用本领域熟知的类风湿性关节炎的临床标准和预后指征选择适于 IL-7R拮抗剂治疗的个体。类风湿性关节炎的诊断和评估在本领域中是熟知的。严重性的评估可以基于本领域已知的测量进行，如类风湿性关节炎严重性评分(RASS)。Bardwell et al. , Rheumatology,2002,41:38-45。在一些实施方案中，改善、控制类风湿性关节炎的发生或进展、降低类风湿性关节炎的发生率和/或延迟类风湿性关节炎症状的发生或进展通过RASS測量。患有狼疮的个体可以用IL-7R拮抗剂如拮抗性IL-7R抗体治疗。使用本领域熟知的狼疮临床标准和预后指征选择适于IL-7R拮抗剂治疗的个体。本领域技术人员意识到或已知怎样诊断具有狼疮的个体，及根据疾病的程度或严重性可适当确定何时施用IL-7R拮抗剂及也可以选择最希望的施用模式。患有多发性硬化的个体可以用IL-7R拮抗剂如拮抗性IL-7R抗体治疗。使用本领域熟知的多发性硬化的临床标准和预后指征选择适于IL-7R拮抗剂治疗的个体。通过已知预后指征评估的处于发生多发性硬化危险中的个体也被允许施用IL-7R拮抗剂，所述指征如家族史或症状史。本领域技术人员意识到或已知怎样诊断具有多发性硬化的个体及根据疾病的程度或严重性适当确定何时施用IL-7R拮抗剂及也可以选择最希望的施用模式。患有GVHD的个体可以用IL-7R拮抗剂如拮抗性IL-7R抗体治疗。使用本领域熟知的GVHD临床标准和预后指征选择适于IL-7R拮抗剂治疗的个体。GVHD的诊断或评估在本领域已经充分确定。GVHD的检测通常依赖于症状，但是可包括胃肠道内窥镜检查，有或无活组织检查、肝功能检测(AST、ALP及胆红素水平升高)、肝组织活检、肺部X-射线检查和/或皮肤活组织检查。足以确定慢性GVHD诊断的特征包括例如但不限于硬化症、扁平苔藓样损害、皮肤异色病、食管蹼、筋膜炎和闭塞性细支气管炎(见如Leet andFlowers, Hematology, January 2008 ;2008:134-141)。急性肝 GVHD 可以通过例如急性患者中胆红素水平測量。急性 皮肤GVHD可导致弥散性斑丘疹。GVHD严重性的评估可以基于本领域已知的测量进行。在一些实施方案中，GVHD和/或GVHD症状的改善、控制、发生率降低或者疾病发生或进展延迟通过整体级别(皮朕-肝-肠道)測量，每个器官评分从低值I分逐步至高值4分。在一些实施方案中，GVHD和/或GVHD症状的改善、控制、发生率降低或者发生和进展延迟是通过检测体重測量的。关于本文所述的所有方法，提及IL-7R拮抗剂时也包括包含一或多种其它物质的组合物。这些组合物可进ー步包含合适的赋形剂，如本领域熟知的药物可接受的赋形剂，包括缓冲液。本发明可単独使用或者组合其它常规治疗方法。所述IL-7R拮抗剂可以通过任何合适途径施用给个体。这些对于本领域技术人员是明显的，本文描述的实例不是意图限制，只是举例说明可利用的技木。因此，在一些实施方案中，根据已知方法如静脉内施用例如静脉推注或在一段时间内持续输注、通过肌肉、腹膜内、脑脊髓内、经皮、皮下、关节内、舌下、滑膜内、通过吹入、鞘内、ロ服、吸入或者局部途径施用给个体IL-7R拮抗剂。施用可以是全身性的，如静脉内施用，或者局部的。可商购的液体配制物的喷雾器，包括喷气式喷雾器和超声喷雾器可用于施用。液体配制物可以直接喷雾，冻干粉末可以在重建后喷雾。或者，IL-7R拮抗剂可以使用碳氟化合物配制物和计量吸入器气雾化，或者作为冻干和研磨的粉末吸入。在一个实施方案中，通过位点特异性或靶向局部输送技术施用IL-7R拮抗剂。举例的位点特异性或靶向局部输送技术包括IL-7R拮抗剂的各种可植入贮库来源或者局部输送导管，如注入导管、留置导管或针导管，合成的移植物，动脉外膜包膜(adventitialwrap),分流器(shunt)和支架或者其它可植入装置,位点特异性载体,直接注射或直接应用。见例如PCT出版物WO 00/53211和美国专利5，981，568。
IL-7R拮抗剂的各种配制物均可用于施用。在一些实施方案中，IL-7R拮抗剂可以纯形式施用。在一些实施方案中，IL-7R拮抗剂与药物可接受的赋形剂可以组合在各种配制物中。药物可接受的赋形剂为本领域已知，是便于施用药理学有效物质的相对惰性的物质。例如，赋形剂可以提供形式或一致性，或者作为稀释剂。合适的赋形剂包括但不限于稳定剂、湿润剂和乳化剂，改变渗透性的盐，包囊化剂，缓冲剂，及透皮增强剂。赋形剂以及肠胃外和非肠胃外药物输送配制物在Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000 中阐述。
在一些实施方案中，这些物质配制成通过注射施用(如腹膜内、静脉内、皮下、肌肉注射等)。因此，这些物质可以组合药物可接受的载体如盐水、Ringer’ s溶液、葡萄糖溶液等。特殊的给药方案，即剂量、时机和重复将依赖于特定个体及个体的医疗史。
IL-7R拮抗剂可以使用任何合适方法施用，包括通过注射(如腹膜内、静脉内、皮下、肌肉等)。IL-7R抗体也可以通过吸入施用，如本文所述。通常，对于施用IL-7R抗体， 初始候选剂量可以是大约2mg/kg。对于本发明，典型每日剂量的范围根据上述因素可以在从大约 3 μ g/kg 至 30 μ g/kg 至 300 μ g/kg 至 3mg/kg,至 30mg/kg,至 lOOmg/kg 或更多。例如，可以使用大约lmg/kg、大约2. 5mg/kg、大约5mg/kg、大约10mg/kg及大约25mg/kg的剂量。对于在几天或更长时间内的重复施用，根据具体情况持续治疗直至出现希望的症状抑制或者直至达到足够的治疗水平，例如降低血糖水平。举例的剂量方案包括施用初始剂量为大约2mg/kg,随后每周一次维持剂量为大约lmg/kg的IL-7R抗体,或者随后是每隔一周一次维持剂量为大约lmg/kg。然而，根据医生希望达到的药动学衰变模式也可以使用其它剂量方案。例如，在一些实施方案中，考虑一周1-4次给药。在其它实施方案中，考虑一月一次或每隔一个月一次或每三个月一次给药。这种治疗的进展通过常规技术和测定简便地监测。给药方案(包括使用的IL-7R拮抗剂)可以随时间变化。
对于本发明，IL-7R拮抗剂的合适剂量依赖于应用的IL-7R拮抗剂(或者其组合物)，治疗的症状的类型和严重性，无论施用所述物质是预防性目的或是治疗性目的，前期治疗，患者的临床病史及对所述物质的反应，患者对于施用的物质的清除率，以及临床医生的决定。典型地，医生将施用IL-7R拮抗剂直至达到实现希望的结果的剂量。剂量和/或频率在治疗过程中可以改变。经验性判断如半衰期通常有助于确定剂量。例如，与人免疫系统相容的抗体如人源化抗体或完全人抗体可用于延长抗体的半衰期及防止抗体被宿主免疫系统攻击。在治疗过程中可以确定并调整施用频率，通常但非必须基于治疗和/或症状的抑制和/或改善和/或延迟，如高血糖水平、关节痛等。或者，拮抗性IL-7R抗体的持续连续释放配制物可以是合适的。实现持续释放的各种配制物和装置为本领域已知。
在一个实施方案中，在已经给予一或多次IL-7R拮抗剂的个体中，IL-7R拮抗剂的剂量可以根据经验确定。给予个体逐渐增加剂量的IL-7R拮抗剂。为了 评估功效，可以遵照疾病指征。
根据本发明的方法施用IL-7R拮抗剂可以根据例如受体生理学状况及技术人员已知的其它因素持续或间断施用，无论施用目的是治疗性的或是预防性的。IL-7R拮抗剂的施用在预选的时期可以基本是连续的或者可以是一系列间隔剂量。
在一些实施方案中，可以存在一种以上IL-7R拮抗剂。可以存在至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种不同的或者更多的IL-7R拮抗剂。通常，这些IL-7R拮抗剂可具有彼此无不利影响的互补活性。例如，可以使用一或多种如下IL-7R拮抗剂拮抗性IL-7R抗体，针对IL-7R的反义分子(包括针对编码IL-7R的核酸的反义分子)，IL-7R抑制性化合物，及IL-7R结构类似物。IL-7R拮抗剂也可与其它物质联合使用以增强和/或互补所述物质的效力。本发明使用的IL-7R拮抗剂的治疗配制物通过以冻干配制物或水溶液形式将具有希望纯度的抗体与任选的药物可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合而制备以贮存(Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000)。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度对于受体是无毒性的，可包含缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐及其它有机酸；盐如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基ニ甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚、丁基或苯甲基醇；烷基对羟基苯甲酸酷，如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯；儿茶酚；间苯ニ酚；环己醇；3_戊醇；及m-甲酚)；低分子量(少于大约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物如聚こ烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或者赖氨酸；单糖，ニ糖，及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA ;糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐平衡离子如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂如TWEEN 、PLUR0NICS 或聚こニ醇(PEG)。含有IL-7R拮抗剂的脂质体通过本领域已知方法制备，如Epstein, etal. , Proc. Natl. Acad. Sc1. USA 82:3688, 1985 ；Hwang, et al. , Proc. Natl Acad. Sc1. USA77:4030, 1980 ;及美国专利4，485，045和4，544，545所述。具有增加的循环时间的脂质体在美国专利5，013，556中掲示。特别有益的脂质体可以通过逆相蒸发法产生，使用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG-衍生的磷脂酰こ醇胺(PEG-PE)的脂质组合物进行。通过指定孔径的滤膜滤出脂质体以产生具有希望直径的脂质体。活性成分也可以包载在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊中，例如分别为羟甲基纤维素或明胶-微囊及聚(甲基甲基丙烯酸酷)微囊，在胶状药物输送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳状液、纳米颗粒及纳米胶囊)或在巨乳状液中。这些技术在Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000 中描述。可以制备持续释放制备物。持续释放制备物的合适实例包括含有所述抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质是有形颗粒形式，如薄膜或微囊。举例的持续释放基质包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟こ基-甲基丙烯酸酷)，或者聚(こ烯醇))，聚交酯(美国专利3，773,919)，L-谷氨酸与7-こ基-L-谷氨酸的共聚物，不可降解的こ烯-こ酸こ烯酯共聚物,可降解的乳酸-こ醇酸共聚物如LUPRON DEPOT (由乳酸-こ醇酸共聚物及醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)组成的可注射微球体)，こ酸异丁酸鹿糖以及聚-D-(-)-3-羟丁酸。用于体内施用的配制物必须是无菌的。这可易于通过例如灭菌过滤膜过滤而实现。治疗性IL-7R拮抗剂组合物通常被置于具有无菌入口的容器中，例如具有可通过皮下注射针穿透的塞子的静脉内溶液袋或小瓶。本发明的组合物可以是单位剂量形式， 如片剂、药丸、胶囊、粉末、颗粒、溶液或悬浮液，或者栓剂，以通过口服、肠胃外或直肠施用，或者通过吸入或吹入施用。
对于制备固体组合物如片剂，将主要的活性成分与药物载体混合，例如常规的成片剂成分如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶，及其它药物稀释剂，如水，以形成含有本发明化合物或其无毒性药物可接受的盐的均质混合物的固体预配制组合物。当提及这些预配制组合物是均质时，意味着活性成分在组合物中是均匀分散的，以便所述组合物可易于再分为等效单位剂量形式，如片剂、药丸和胶囊。这种固体预配制组合物然后被再分为上述类型单位剂量形式，含有O.1至大约500mg本发明的活性成分。新组合物的片剂或药丸可以包被或另外化合以提供赋予作用时间延长优势的剂型。例如，上述片剂或药丸可包含内部剂量和外部剂量成分，后者是前者的包膜形式。这两种成分可以由肠衣分隔，上述肠衣抵抗在胃中崩解及允许内部成分完整通过进入十二指肠或者延迟释放。许多材料可用于这种肠衣或包膜，这种材料包括许多高分子酸及高分子酸与这种材料如紫胶、十六烷醇和醋酸纤维素的混合物。
合适的表面活性剂特别包括非离子物质，如聚氧乙烯山梨聚糖(例如Tween 20、 40、60、80或85)及其它山梨聚糖(例如Span 20、40、60、80或85)。具有表面活性剂的组合物便利地包含O. 05-5%的表面活性剂，及可以在O. 1-2. 5%之间。应意识到可以加入其它成分，例如甘露醇或其它药物可接受的载体(如果需要的话)。
合适的乳状液可以使用可商购的脂肪乳状液制备，如Intralipid 、Liposyn 、 Infonutrol >Lipofundin 和Lipiphysan 。活性成分可以溶解在预混合的乳状液组合物中，或者其可以溶解在油中(例如大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)及与磷脂混合时形成乳状液(例如蛋黄磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水。应意识到可以加入其它成分，例如甘油或葡萄糖，以调节所述乳状液的张力。合适的乳状液典型含有直至20% 的油，例如5-20%。所述脂肪乳状液可包含O. 1-1. Oym的脂肪滴，特别是O. 1-0. 5 μ m，及 pH 范围在 5. 5-8.0。
所述乳状液组合物可以是通过混合IL-7R拮抗剂与Intralipid 或其成分(大豆油、蛋黄磷脂、甘油和水)而制备的那些。
吸入或吹入组合物包括在药物可接受的水相或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可含有上述合适的药物可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述组合物通过口腔或鼻呼吸途径施用以发挥局部或全身作用。在优选无菌药物可接受的溶剂中的组合物可以通过使用气体雾化。雾化的溶液可以从雾化装置中直接吸入或者雾化装置可以附面罩、帷幕(tent)或间歇性正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可以优选以适当方式经口腔或鼻从输送该配制物的装置施用。
IL-7R 拮抗剂
本发明的方法使用IL-7R拮抗剂，其是指阻断、抑制或降低(包括显著降低)IL_7R 生物学活性(包括通过IL-7R信号传导介导的下游途径，如激发对于IL-7R的细胞应答)的任何蛋白质、肽或核酸分子。举例的IL-7R拮抗剂包括但不限于拮抗性IL-7R抗体、IL-7R siRNA, IL-7R shRNA 及 IL-7R 反义寡核苷酸。
IL-7R拮抗剂应呈现出任一或多种如下特征(a)结合IL_7R ； (b)阻断IL-7R与 IL-7相互作用；(c)阻断或降低IL-7-介导的STAT5磷酸化；(d)降低体内血糖水平；(e)增加体内葡萄糖耐受；(f)降低实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疾病严重性；(g)阻断或降低PI3K磷酸化；(h)阻断或降低AKT磷酸化 '及(i)阻断IL-7R与其它还未鉴别的因子的相互作用。在一些实施方案中，所述IL-7R拮抗剂是拮抗性IL-7R抗体。对于本发明，拮抗性IL-7R抗体优选与IL-7Ra以抑制IL-7R信号传导功能及IL-7相互作用的方式反应。在一些实施方案中，所述拮抗性IL-7R抗体特异性识别灵长类IL-7R。在一些实施方案中，所述拮抗性IL-7R抗体结合灵长类和啮齿类IL-7R。可用于本发明的抗体可包含单克隆抗体，多克隆抗体，抗体片段(如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fc等)，嵌合抗体,双特异性抗体,异源缀合物(heteroconjugate)抗体,单链抗体(ScFv)，其突变体，包含抗体一部分(如结构域抗体)的融合蛋白，人源化抗体，及包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它修饰的构型，包括抗体的糖基化变体，抗体的氨基酸序列变体，及共价修饰的抗体。所述抗体可以是鼠、大鼠、人或任何其它来源(包括嵌合或人源化抗体)。在一些实施方案中，拮抗性IL-7R抗体是单克隆抗体。所述拮抗性IL-7R抗体也可以是人源化的。在其它实施方案中，所述抗体是人抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含修饰的恒定区，例如但不限于激发免疫应答的潜カ增加的恒定区。例如，所述恒定区可以被修饰为对Fe Y受体如Fe YRI或Fe Y RIIA具有増加的亲和性。在一些实施方案中，所述抗体包含修饰的恒定区，如是免疫学惰性的、即激发免疫应答潜力下降的恒定区。在一些实`施方案中，所述恒定区如Eur.J.1mmunol.，1999，29:2613-2624 ；PCT 申请号 PCT/GB99/01441 ;和/或 UK 专利申请号9809951. 8所述被修饰的恒定区。Fe可以是人IgGl、人IgG2或人IgG4。Fe可以是含有A330P331突变为S330S331(IgG2Aa)的人IgG2，其中氨基酸残基參考野生型IgG2序列编号。Eur. J.1mmunol.，1999,29:2613-2624。在一些实施方案中，所述抗体包含具有如下突变的 IgG4 的恒定区(Armour et al. , 2003, Molecular Immunology 40585-593)E233F234L235突变为P233V234A235 (IgG4 A c)，其中编号參考野生型IgG4。在另ー实施方案中，Fe 是人 IgG4E233F234L235 突变为 P233V234A235，具有 G236 缺失(IgG4Ab)。在另一实施方案中，Fe是任何人IgG4Fc (IgG4、IgG4 A b或IgG4 A c)，含有铰链稳定突变S228突变为 P228 (Aalberse et al. , 2002, Immunology 105,9-19)。在另一实施方案中，Fe 可以是无糖基化Fe。在一些实施方案中，所述恒定区是通过突变寡糖附着残基(如Asn297)和/或是恒定区中糖基化识别序列一部分的侧翼残基而无糖基化的。在一些实施方案中，所述恒定区对于N连接的糖基化而是经酶学无糖基化的。所述恒定区可以是对于N连接的糖基化经酶学无糖基化或者通过在糖基化缺陷型宿主细胞中表达而无糖基化的。拮抗性IL-7R抗体与IL-7R(如人IL-7R)的结合亲和性(Kd)可以是大约0. 002至大约200nM。在一些实施方案中，所述结合亲和性是大约200nM、大约IOOnM、大约50nM、大约10nM、大约InM、大约500pM、大约100pM、大约60pM、大约50pM、大约20pM、大约15pM、大约10pM、大约5pM或大约2pM的任一。在一些实施方案中，所述结合亲和性低于大约250nM、大约200nM、大约100nM、大约50nM、大约10nM、大约InM、大约500pM、大约100pM、大约50pM、大约20pM、大约10pM、大约5pM或大约2pM任一。
确定抗体与IL-7R的结合亲和性的一种方式是通过测量所述抗体的单功能Fab片段的结合亲和性。为获得单功能Fab片段，可以将抗体(例如IgG)用木瓜蛋白酶裂解或者重组表达。抗体的IL-7R Fab片段的亲和性可以使用HBS-EP运行缓冲液(O. OlM HEPES, pH 7. 4,0. 15NaCl, 3mM EDTA, O. 005%v/v Surfactant P20)通过表面等离子体共振技术石角定(Biacore 3000 表面等离子体共振(SPR)系统，Biacore , INC, Piscataway NJ),该系统装备了预先固定的链霉抗生物素蛋白传感器芯片(SA)。生物素化的人IL-7R(或任何其它IL-7R)可以在HBS-EP缓冲液中稀释至浓度低于O. 5 μ g/mL,使用可变接触时间注射至各个芯片通道，以获得两个抗原密度范围，即对于详细的动力学研究为50-200应答单位 (RU)，或者对于筛选测定的800-1，000RU。再生研究示出在25%v/v乙醇中的25mM NaOH有效除去结合的Fab，而超过200次注射仍保持芯片上IL-7R的活性。典型地，将系列稀释 (跨越O.1-1Ox估计的Kd浓度)的纯化的Fab样品以100 μ L/分钟注射I分钟，使解离时间直至2小时。Fab蛋白质的浓度通过ELISA和/或SDS-PAGE电泳确定，使用已知浓度 (通过氨基酸分析确定)的Fab作为标准。动力学结合速率(km)和解离速率通过使用BIAevaluation程序将数据全局拟合进1:1Langmuir结合模型(Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). MethodsEnzymology 6.99-110)而同时获得。平衡解离常数(Kd)值以kf/U计算。这个方案适用于确定抗体与任何IL-7R的结合亲和性，所述 IL-7R包括人IL-7R、另一哺乳动物的IL_7R(如小鼠IL-7R、大鼠IL-7R、灵长类IL-7R)以及不同形式的IL-7R。抗体的结合亲和性通常在25° C测量，但是也可以在37° C测量。
拮抗性IL-7R抗体可以通过本领域任何已知方法产生，包括如实施例1提供的方法。对于产生杂交瘤细胞系，免疫宿主动物的途径和方案通常与经确定的和常规的抗体刺激和产生技术一致，如本文进一步描述。产生人和小鼠抗体的一般技术为本领域已知和/ 或在本文描述。
预期可以操纵任何哺乳动物对象包括人或来自其的抗体产生细胞作为产生哺乳动物包括人杂交瘤细胞系的基础。典型地，用一定量的免疫原包括本文所述的免疫原经腹膜内、肌肉、口服、皮下、足酿(intraplantar)和/或皮内接种所述宿主动物。
使用常规体细胞杂交技术(Kohler,B. and Milstein, C.，1975，Nature256:495-49 7)或者如Buck, D.W.，et al.，In Vitro, 18:377-381, 1982所述修改的技术可以从淋巴细胞和永生化骨髓瘤细胞制备杂交瘤。可利用的骨髓瘤 细胞系包括但不限于X63-Ag8. 653和得自 Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, Calif.，USA 的那些细胞系可用于杂交。通常，所述技术包括融合骨髓瘤细胞和淋巴样细胞，使用促融剂如聚乙二醇或者通过本领域技术人员熟知的电学方式进行。在融合之后，从融合培养基中分离细胞，在选择性生长培养基如次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸苷(HAT)培养基中生长，以消除未杂交的亲代细胞。本文描述的任何培养基，补加或不补加血清，可用于培养分泌单克隆抗体的杂交瘤。作为另一种细胞融合技术，EBV永生化B细胞可用于产生本发明的IL-7R单克隆抗体。如果需要，扩增及亚克隆所述杂交瘤，通过常规免疫测定方法测定上清的抗免疫原活性(如放射性免疫测定，酶免疫测定或者荧光免疫测定)。
可用作抗体来源的杂交瘤包含亲代杂交瘤的所有衍生物、后代细胞，其产生特异于IL-7R或其一部分的单克隆抗体。
产生这种抗体的杂交瘤可以在体外或体内通过使用已知方法生长。单克隆抗体可以分离自培养基或者体液，通过常规免疫球蛋白纯化程序进行，如硫酸铵沉淀、凝胶电泳、透析、层析及超滤，如果需要的话。如果存在不需要的活性，则可以除去，例如通过将制备物通过由附着于固相的免疫原制成的吸附剂及从免疫原中洗脱或释放希望的抗体。用人IL-7Ra或含有与蛋白质缀合的靶氨基酸序列的片段免疫宿主动物可产生一群抗体(如单克隆抗体)，所述蛋白质在被免疫的物种中是免疫原性的，如匙孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白，或大豆胰蛋白酶抑制剂，使用双功能或衍生化试剂，例如马来酰亚胺苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酷(通过半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊ニ醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N=C=NR,其中R和R1是不同的烷基基团。 如果需要，可以对感兴趣的拮抗性IL-7R抗体(单克隆或多克隆抗体)测序，然后可以将多核苷酸序列克隆进载体中以表达或増殖。编码感兴趣抗体的序列可以在宿主细胞中在载体中維持，然后可以将宿主细胞扩增及冷冻以备进ー步使用。可以通过本领域已知方式从B细胞中克隆抗体基因而在细胞培养物中产生重组单克隆抗体。见例如Tiller etal.，2008，J.1mmunol. Methods 329，112 ;美国专利 7，314，622。或者，多核苷酸序列可用于遗传操纵以“人源化”抗体或改善抗体的亲和性或其它特性。例如，恒定区可以工程化为更类似人恒定区，以避免所述抗体用于在人体临床试验和治疗中的免疫应答。可期望对抗体序列进行遗传操纵以获得对于IL-7R的更高亲和性及在抑制IL-7R中的更高效力。本领域技术人员显然已知可以对拮抗性IL-7R抗体进行ー或多个多核苷酸改变并仍保留其与IL-7R的结合能力。有四个常规步骤人源化单克隆抗体。这些是(I)确定起始抗体轻链和重链可变结构域的核苷酸和推定的氨基酸序列，(2)设计人源化抗体，即决定在人源化过程中使用哪个抗体构架区，(3)实际的人源化方法/技术，及(4)人源化抗体的转染和表达。见例如美国专利 4，816，567,5, 807，715,5, 866，692,6, 331，415,5, 530，101,5, 693，761,5, 693，762、5，585，089 和 6，180，370。本领域已经描述了许多包含衍生自非人免疫球蛋白的抗原结合位点的“人源化”抗体分子，包括具有与人恒定区融合的啮齿类或修饰的啮齿类V区及其相关CDR的嵌合抗体。见例如 Winter et al. Nature 349:293-299，1991、Lobuglio et al. Proc.Nat.Acad. Sc1. USA 86:4220-4224，1989、Shaw et al. J Immunol. 138:4534-4538，1987以及Brown et al. Cancer Res. 47:3577-3583，1987。其它參考文献描述了移植进人支持构架区(FR)中的啮齿类CDR，之后与合适的人抗体恒定区融合。见例如Riechmann etal. Nature 332:323-327，1988、Verhoeyen et al. Science 239:1534-1536，1988 及 Joneset al.Nature321:522-525, 1986。另ー參考文献描述了由重组工程化的啮齿类构架区支持的啮齿类⑶R。见例如欧洲专利出版物0519596。这些“人源化”分子被设计为使得对于啮齿类动物抗人抗体分子的不希望的免疫应答(其限制这些部分在人体受体中治疗性应用的持续时间和效力)最小化。例如，抗体恒定区可以被工程化，由此其是免疫学惰性的(如不激发补体裂解)。见例如PCT出版物PCT/GB99/01441、英国专利申请9809951. 8。也可以使用的其它人源化抗体的方法由Daugherty et al. , Nucl. Acids Res. 19:247ト2476，1991及美国专利 6，180，377,6, 054，297,5, 997，867,5, 866，692,6, 210，671 和 6，350，861 以及 PCT出版物WO 01/27160描述。显然尽管上文所述是关于人源化抗体，但是所述一般原理可适用于定制抗体用于例如狗、猫、灵长类动物、马和牛。进一步地，本文所述人源化抗体的一或多个方面可以组合，如CDR移植、构架突变和CDR突变。
或者，完全人抗体可以通过使用可商购的小鼠获得，所述小鼠已经工程化为表达特异性人免疫球蛋白。设计为产生更希望的(如完全人抗体)或更强力的免疫应答的转基因动物也可以用于产生人源化或人抗体。举例的这种技术是来自AbgeniX，Inc. (Fremont, CA)的 Xenomouse 及来自 Medarex, Inc. (Princeton, NJ)的 I luMAb-1Vlouse 和 TC Mouse 。
或者，可以使用本领域已知的任何方法重组产生及表达抗体。或者，抗体可以通过噬菌体展示技术重组产生。见例如美国专利5，565，332,5, 580，717,5, 733，743和 6，265，150 ;以及 Winter et al.，Annu. Rev.1mmunol. 12:433-455，1994。或者，卩遼菌体展示技术(McCafferty et al. , Nature 348:552-553，1990)可用于在体外从未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)结构域基因所有组分中产生人抗体和抗体片段。根据这种技术，抗体V结构域基因被符合读框地克隆进丝状噬菌体如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因中，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。由于丝状颗粒含有噬菌体基因组的单链DNA拷贝，因此基于抗体的功能性质进行的选择也导致编码呈现这些性质的抗体的基因的选择。因此，噬菌体模拟B细胞的一些性质。噬菌体展示可以许多形式进行，参见如 Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J. , Current Opinion in Structural Biology 3:564-571,1993。一些V基因节段的来源可用于噬菌体展示。Clackson et al. , Nature 352:624-628，1991从衍生自免疫的小鼠的脾的V基因的一个小随机组合文库中分离了抗噁唑酮抗体的多样性阵列。使用基本如Mark et al.，J. Mol. Biol. 222:581-597，1991 或Griffith et al. , EMBO J. 12:725-734，1993所述技术，可以构建来自未免疫的人供体的V基因的所有组分并且可以分离针对多样性抗原阵列(包括自身抗原)的抗体。在天然免疫应答中，抗体基因高速积累突变(体细胞超变)。一些导入的改变将赋予较高的亲和性，展示高亲和性表面免疫球蛋白的B细胞在随后的抗原攻击期间优先复制并分化。这种天然过程可以通过应用已知为“链改组”的技术模拟(Marks et al. , Bio/ Technol. 10:779-783, 1992)。在这种方法中，通过噬菌体展示获得的“原始”人抗体的亲和性可以通过用得自未免疫的供体的V结构域基因的天然发生的变体(所有组分)相继置换重链和轻链V区基因而改善。这种技术使得可以产生亲和性在pM-nM范围内的抗体和抗体片段。产生非常大的噬菌体抗体所有组分的策略(也称作“所有文库的根源(the mother of all libraries)”)已经由 Waterhouse et al. , Nucl. Acids Res. 21:2265-2266，1993 描述。基因改组也可以用于从啮齿类动物抗体中衍生人抗体，其中所述人抗体与起始啮齿类动物抗体具有相似亲和性和特异性。根据这种方法，也称作“表位印记(imprinting) ”， 通过噬菌体展示技术获得的啮齿类动物抗体的重链或轻链V结构域基因由人V结构域基因的所有组分置换，产生啮齿类-人嵌合物。基于抗原的选择导致能恢复功能性 抗原结合位点的人可变区的分离，即表位控制(印记)配偶体的选择。当重复进行该方法以置换剩余的啮齿类动物V结构域时，获得人抗体(见PCT出版物W093/06213)。与通过⑶R移植人源化啮齿类动物抗体的传统方法不同，这种技术提供了完全人抗体，其不具有啮齿类动物源的构架或⑶R残基。
抗体可以重组产生，通过首先从宿主动物分离抗体及产生抗体的细胞，获得基因序列及使用该基因序列在宿主细胞(如CHO细胞)中重组表达抗体而产生。可以使用的另一方法是在植物(如烟草)或转基因乳中表达抗体序列。在植物或乳中重组表达抗体的方法已经在本领域揭不。见例如 Peeters, et al. Vaccine 19:2756, 2001 ；Lonberg, N.and D. Huszar Int. Rev.1mmunol 13:65，1995 以及 Pollock, et al. , J Tmmuno I Methods231:147，1999。产生抗体衍生物如人源化单链等的方法为本领域已知。免疫測定和流式细胞计量分选技术如荧光激活细胞分选技术(FACS)也可用于分离特异于IL-7R的抗体。所述抗体可以结合许多不同载体。载体可以是活性和/或惰性的。举例的熟知载体包括聚丙烯、聚苯こ烯、聚こ烯、葡聚糖、尼龙、淀粉酶、玻璃、天然和修饰的纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁。对于本发明，载体的性质可以是可溶的或不溶的。本领域技术人员已知其它合适的载体用于结合抗体，或者使用常规实验能确定合适的载体。在一些实施方案中，所述载体包含靶向心肌的部分。编码单克隆抗体的DNA使用常规方法可易于分离及测序(如通过使用能特异性结合编码单克隆抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞可作为这种DNA的优选来源。一旦分离，所述DNA可以置于表达载体中(如在PCT出版物WO 87/04462中掲示的表达载体)，然后转染进宿主细胞如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，或者不另外产生免疫球蛋白的骨髄瘤细胞，以获得在重组宿主细胞中合成单克隆抗体。见例如PCT出版物WO 87/04462所述。所述DNA也可以被修饰，例如通过用人重链和轻链恒定区编码序列代替同源鼠序列(Morrison et al. , Proc. Nat. Acad.Sc1. 81:6851, 1984)，或者通过共价结合免疫球蛋白编码序列与非免疫球蛋白多肽的所有或部分编码序列。以这种方式，制备具有本文IL-7R单克隆抗体结合特异性的“嵌合”或“杂种”抗体。拮抗性IL-7R抗体可以使用本领域已知的方法鉴别或鉴定，从而检测和/或測量IL-7R生物学活性的降低、改善或中和。在一些实施方案中，拮抗性IL-7R抗体通过将候选物质与IL-7R保温及监 测结合和/或随之IL-7R生物学活性的降低或中和而鉴别。所述结合測定可以用纯化的IL-7R多肽进行，或者用天然表达或被转染表达IL-7R多肽的细胞进行。在一个实施方案中，所述结合測定是竞争性结合測定，其中评估候选抗体与已知IL-7R拮抗剂竞争结合IL-7R的能力。该测定可以各种形式进行，包括ELISA形式。在其它实施方案中，拮抗性IL-7R抗体通过将候选物质与IL-7R保温并监测结合及随之的STAT5磷酸化抑制而鉴别。在初始鉴别后，可以通过已知检测靶向生物学活性的生物测定进一步证实和细化候选拮抗性IL-7R抗体的活性。或者，生物測定可用于直接筛选候选物。一些鉴别和鉴定拮抗性IL-7R抗体的方法在实施例中详细描述。拮抗性IL-7R抗体可以使用本领域熟知的方法鉴定。例如，ー种方法是鉴别其结合的表位或者“表位作图”。本领域已知许多对蛋白质上表位的位置进行作图和鉴定的方法，包括分辨抗体-抗原复合物的晶体结构，竞争性測定，基因片段表达测定以及基于合成的妝的测定，例如在 Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999 中果 11 章描述。在另ー实例中，表位作图可用于确定拮抗性IL-7R抗体结合的序列。表位作图可商购自各个来源，例如 Pepscan Systems (Edelhertweg 15, 8219PH Lelystad, The Netherlands)。所述表位可以是线性表位，即包含于一单段氨基酸序列中，或者是构象表位，其通过可非必须包含于一单段序列中的氨基酸的三维相互作用形成。可以分离或合成(如重组)不同长度 (如长度为至少4-6个氨基酸)的肽并用于使用拮抗性IL-7R抗体的结合测定中。在另一实例中，拮抗性IL-7R抗体结合的表位可以在系统筛选中确定，通过使用衍生自IL-7R序列的重叠肽及确定拮抗性IL-7R抗体的结合而进行。根据基因片段表达测定，编码IL-7R的开放读框被随机片段化或者通过特异性遗传构建片段化并确定表达的IL-7R片段与检测抗体的反应性。所述基因片段可例如通过PCR产生，然后在存在放射性氨基酸的条件下在体外转录及翻译为蛋白质。然后通过免疫沉淀和凝胶电泳确定抗体与放射性标记的IL-7R 片段的结合。一些表位也可以通过使用在噬菌体颗粒表面上展示的随机肽序列的大文库鉴别(噬菌体文库)。或者，可以检测一限定的重叠肽片段文库在简便结合测定中与测试抗体的结合。在另一实例中，可以进行抗原结合结构域的诱变，结构域交换(swapping)实验及丙氨酸扫描诱变以鉴别用于表位结合需要的、足够的和/或必需的残基。例如，可以使用突变IL-7R进行结构域交换实验，其中IL-7R多肽的各种片段已经用来自另一物种的 IL-7R序列置换(交换)，或者使用密切相关的但是抗原性不同的蛋白质(如前蛋白转变酶 (proprotein convertase)家族的另一成员进行。通过评估抗体与突变IL-7R的结合,可以评估特定IL-7R片段对于抗体结合的重要性。
可用于鉴定拮抗性IL-7R抗体的另一方法是使用竞争测定，该测定使用已知结合相同抗原即IL-7R上的各个片段的其它抗体，以确定所述拮抗性IL-7R抗体是否与其它抗体结合相同的表位。竞争测定为本领域技术人员熟知。
表达载体可用于指导拮抗性IL-7R抗体的表达。本领域技术人员熟知施用表达载体以获得外源蛋白在体内的表达。见例如美国专利6，436，908,6, 413，942和6，376，471所述。表达载体的施用包括局部或全身施用，包括注射、口服施用、基因枪或经导管施用，以及体表(topical)施用。在另一实施方案中，所述表达载体是直接施用交感干或神经节，或者施用给冠状动脉、心房、心室或心包。
也可以使用靶向输送含有表达载体或次基因组多核苷酸的治疗组合物。受体介导的 DNA 输送技术在例如 Findeis et al. , Trends Biotechnol.，1993，11:202、Chiou et al. , Gene Therapeutics:Methods And Applications Of Direct Gene Transfer, J. A. Wolff, ed. , 1994, Wu et al. , J. Biol. Chem. , 1988, 263:621, Wu et al. , J. Biol. Chem.，1994，269:542、Zenke et al. , Proc. Natl. Acad. Sc1. USA, 1990, 87: 3655> Wu et al., J. Biol. Chem. , 1991,266:338中描述。含有多核苷酸的治疗组合物在基因治疗方案中局部施用的范围是大约IOOng至大约200mg的DNA。在基因治疗方案期间也可以使用大约 500ng至大约50mg、大约Iyg至大约2mg、大约5 μ g至大约500 μ g及大约20 μ g至大约 100 μ g的DNA的浓度范围。所述治疗性多核苷酸和多肽可以使用基因输送载体输送。所述基因输送载体可以是病毒或非病毒来源的 (见Jolly, Cancer Gene Therapy, 1994, 1:51； Kimura, Human Gene Therapy,1994, 5:845 ；Connelly, Human Gene Therapy,1995, 1:185 ； 及Kaplitt, Nature Genetics, 1994,6:148)。这种编码序列的表达可以使用内源哺乳动物或异源启动子诱导。所述编码序列的表达可以是组成型或受调节的。
输送希望的多核苷酸及在希望的细胞中表达的基于病毒的载体为本领域熟知。举例的基于病毒的载体包括但不限于重组逆转录病毒(见例如PCT出版物WO 90/07936 ；WO 94/03622 ；W0 93/25698 ；W0 93/25234 ；W093/11230 ；W0 93/10218 ；W0 91/02805 ；美国专利 5，219，740 和 4，777，127 ；GB 专利 2，200，651 ;及 EP 专利 0 345 242);基于 a 病毒的载体(如 Sindbis 病毒载体，Semliki 森林病毒(ATCC VR-67 ；ATCC VR-1247)，RossRiver 病毒(ATCC VR-373 ；ATCC VR-1246)及 Venezuelan 马脑炎病毒(ATCCVR-923 ;ATCCVR-1250 ；ATCC VR 1249 ；ATCC VR-532));以及腺伴随病毒(AAV)载体(见例如PCT出版物WO 94/12649, WO 93/03769 ；W093/19191 ；W0 94/28938 ；W0 95/11984 和 WO 95/00655)。也可以施用如在Curiel，Hum. Gene Ther.，1992,3:147中描述的与灭活的腺病毒相连的DNA。也可以应用非病毒输送载体和方法，包括但不限干与灭活的腺病毒连接或不连接的聚阳离子浓缩的DNA(见例如Curiel, Hum. Gene Ther. , 1992, 3:147);配体连接的DNA(见例如Wu，J. Biol. Chem.，1989，264:16985);真核细胞输送载体细胞(见例如美国专利 5, 814, 482 ；PCT 出版物 WO 95/07994 ；W0 96/17072 ；W0 95/30763 及 TO 97/42338)以及与细胞膜的核酸电荷中和或融合。也可以使用裸DNA。举例的裸DNA导入方法在PCT出版物WO 90/11092及美国专利5，580，859中描述。可作为基因输送载体的脂质体在美国专利 5，422，120、PCT 出版物 WO 95/13796、WO 94/23697、W091/14445 和 EP 0524968 中描述。另外的方法在Philip, Mol. Cell Biol. , 1994, 14:2411 及 Woffendin, Proc. Natl. Acad.Sc1.，1994,91:1581 中描述。在一些实施方案中，本发明涵盖了包括本文所述或通过本发明方法产生及具有本文所述特性的抗体的组合物、包括药物组合物。如本文所用，组合物包含拮抗IL-7R与IL-7相互作用的一或多种抗体，和/或包含编码ー或多种这些抗体的序列的一或多种多核苷酸。这些组合物可进ー步包含合适的赋形剂，如本领域熟知的药物可接受的赋形剂，包括缓冲剂。本发明的拮抗性IL-7R抗体的特征在 于任意(一或多个)如下特征(a)结合IL-7R ； (b)阻断IL-7R与IL-7相互作用；(c)阻断或降低IL-1-介导的STAT5磷酸化；(d)降低体内血糖水平；(e)改善体内葡萄糖耐受性；及(f)降低EAE疾病严重性。优选地，拮抗性IL-7R抗体具有两或更多个这些特征。更优选地，所述抗体具有三或更多个所述特征。更优选地，所述抗体具有四或更多个所述特征。更优选地，所述抗体具有五或更多个所述特征。最优选地，所述抗体具有所有这六个特征。因此，本发明提供了如下任一物质或者包含如下任一物质的组合物(包括药物组合物)(a)具有如下的部分轻链序列的抗体NFMLTQPHSVSGSPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGNSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLVTEDEADYYCQSYDSSHLVFGGGTKLTVLC(SEQ ID NO:1),NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTGSSGRIASSYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYASSSLWVFGGGTQLTVLS(SEQ ID NO:3)，NFMLTQPHSVSGSPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGNSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLVTEDEADYYCMQYDSSHLVFGGGTKLTVLC(SEQ ID NO:5)，NFMLTQPHSVSGSPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGNSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLVTEDEADYYCQSYDFHHLVFGGGTKLTVLC(SEQ ID NO:7)，NFMLTQPHSVSGSPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGNSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLVTEDEADYYCQSYDFHHLVFGGGTKLTVLC(SEQ ID NO:9)，
NFMLTQPHSVSGSPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGNSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDS SSNSASLTISGLVTEDEADYYCMQYDFHHLVFGGGTKLTVLC(SEQ ID NO:11)，
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGSSPTTVIYE DDQRPSGVPDRFSGSID SSSNSASLTISGLKTEDEADYYCMQYDFHHLVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO:44)，或
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIDSSYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDS SSNSASLT ISGLKTEDEADYYCQSYDFHHLVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 41);及(b)具有如下的部分重链序列的抗体QVNLRESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWLSLVGWDGSATYYADSV KGRFTISRDNTKNLLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYVFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:2),
QVTLKESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFT ISRDNSKNTVYLQMNSLRDEDTAVYYCARDISGGGMDVffGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:4)，
QVNLRESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWLSLVGWDGFFTYYADSVKGRFT ISRDNTKNLLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYVFNNWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:6)，
QVNLRESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWLSLVGWDGFFTYYADSVKGRFT ISRDNTKNLLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYMGDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8)，
QVNLRESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWLSLVGWDGFFTYYADSVKGRFT ISRDNTKNLLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYMGNNWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:10)，
QVNLRESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWLSLVGWDGFFTYYADSVKGRFT ISRDNTKNLLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYMGNNWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 12)，或者
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFDDSVMHWVRQAPGKGLEWVSLVGWDGFFTYYADSVKGRFT ISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGDYMGNNWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:40)。
表I
mAb轻链重 链P3A9NFMLTQPHSVSGSPGKTVTISCTRS SGSIDSSYVOWYOORPGNSPTTVIYQVNLRESGGGLVKPG G S L RLSC AASGFTFD DSVMHWVROAPGKGLEWLSLVGWDGSAT
权利要求
1.分离的白细胞介素_7受体(IL-7R)抗体，其特异性结合IL-7R并且包含与单克隆抗体交叉竞争结合IL-7R的抗原结合区，所述单克隆抗体选自P3A9、P4B3、P2D2、P2E11、 HAL403a、HAL403b、ClGM 和 C2M3。
2.权利要求1的抗体，其中所述抗体结合包含人白细胞介素_7受体a(IL-7Ra )的 182、K84、K100、T105 和 Y192 残基的表位。
3.权利要求2的抗体，其中所述表位进一步包含选自人IL-7Ra的D190、H191和K194 残基的一或多个额外的残基。
4.特异性结合白细胞介素_7受体a(IL-7Ra )的分离的抗体，其中所述抗体包含重链可变区(VH)互补决定区I (CDR1)、VH CDR2和VH CDR3、轻链可变区(VL)CDR1、VL CDR2 和VL CDR3，所述VH CDRl具有氨基酸序列X1X2VMH,其中X1是0或N，X2是S或Y (SEQ ID NO: 50);所述 VH CDR2 具有氨基酸序列 X1X2X3X4X5Gx6X7TyyADSVKG,其中 X1 是 L 或 A，X2 是 V 或 1，乂3是6 或 534是1 或635是0 或 S，X6是F、G或S，X7是F、A或S(SEQ ID NO:51)； 所述VH CDR3具有氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8，其中乂1是0或0，&是6或1，&是0或5，父4 是 Y 或G，乂5是] 、￥ 或G，乂6是6 或F，乂7是队0 或 M，X8是N、Y或D(SEQ ID NO: 52);所述 VL CDRl具有氨基酸序列TxiSsgx2Ix3SSYVQ,其中X1是R或G，X2是S或R，X3是D或A (SEQID NO: 53);所述VL CDR2具有氨基酸序列EDX1QRPS,其中乂1是0或N(SEQ ID NO:54);所述VL ⑶R3具有氨基酸序列X1X2YX3X4X5X6LX7，其中X1是Q或M，X2是S或Q，X3是D或A，X4是F或 3，父5是11或5，乂6是!1或5，\是￥或W(SEQ ID NO:55)，其中所述抗体在STAT5激活测定中阻断STAT5磷酸化。
5.特异性结合白细胞介素_7受体a(IL-7Ra )的分离的抗体，其中所述抗体包含具有氨基酸序列 DSVMH(SEQ ID NO: 19)、GFTFDDS (SEQ ID NO:46)或 GFTFDDSVMH(SEQ ID NO:47)的重链可变区(VH) 互补决定区1(CDR1)，具有氨基酸序列LVGWDGFFTYYADSVKG(SEQ ID NO: 23)或GWDGFF(SEQ ID NO: 48)的 VH CDR2，具有氨基酸序列 Q⑶YMGNN(SEQ ID NO: 49) 的VH CDR3，具有氨基酸序列TRSSGSIDSSYVQ(SEQ ID NO:29)的轻链可变区(VL)CDRl，具有氨基酸序列EDDQRPS(SEQ ID NO:31)的VL CDR2以及具有氨基酸序列QSYDFHHLV(SEQ ID NO:36)的 VLCDR3。
6.权利要求5的抗体，其中所述VH区包含SEQID NO:40所示氨基酸序列，并且VL区包含SEQ ID N0:41所示氨基酸序列。
7.权利要求6的抗体，其中所述抗体包含具有SEQID NO: 43所示氨基酸序列的轻链以及具有SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的重链，有或没有SEQ ID NO:42的C-末端赖氨酸。
8.权利要求1-6任一项的抗体，其中所述抗体进一步包含恒定区。
9.权利要求8的抗体，其中所述抗体是人IgGl或IgG2Aa亚类。
10.包含权利要求1-9任一项的抗体的药物组合物。
11.重组产生权利要求1-9任一项的抗体的细胞系。
12.编码权利要求1-9任一项的抗体的核酸。
13.一种治疗和/或预防个体自身免疫疾病的方法，所述方法包括给患有或处于自身免疫疾病危险中的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而改善和/或预防自身免疫疾病的一或多个症状，其中所述自身免疫疾病选自I型糖尿病、类风湿性关节炎、狼疮及多发性硬化。
14.权利要求13的方法，其中施用拮抗性IL-7R抗体导致与施用之前相比所述个体中幼稚和激活的T细胞群减少。
15.权利要求14的方法，其中所述个体中减少的T细胞群包含ThI和/或Th17细胞。
16.一种治疗和/或预防个体中2型糖尿病的方法，所述方法包括给患有或处于2型糖尿病危险中的个体施用治疗有效量的IL-7R拮抗剂，从而改善和/或预防2型糖尿病的一或多个症状。
17.权利要求16的方法，其中所述IL-7R拮抗剂是拮抗性IL-7R抗体。
18.一种治疗和/或预防个体中移植物抗宿主疾病(GVHD)的方法，包括给患有GVHD的个体施用治疗有效量的拮抗性IL-7R抗体，从而改善GVHD的一或多个症状。
19.权利要求13-15、17或18任一项的方法，其中所述抗体是权利要求1_9任一项的抗体。
全文摘要
本发明提供了结合白细胞介素-7受体(IL-7R)的拮抗性抗体。本发明进一步提供了获得这种抗体及抗体编码核酸的方法。本发明进一步涉及使用这些抗体及其抗原结合部分治疗和/或预防2型糖尿病和免疫疾病的治疗方法，所述免疫疾病包括1型糖尿病、多发性硬化、类风湿性关节炎、移植物抗宿主疾病及狼疮。
文档编号C07K16/28GK103038254SQ201180011149
公开日2013年4月10日 申请日期2011年2月24日 优先权日2010年2月24日
发明者林家扬, 李丽芬, W·翟 申请人:瑞纳神经科学公司