外泌体用于防止脑型疟疾发生的实验方法

文档序号:25993484发布日期:2021-07-23 21:06阅读:来源:国知局

技术特征:

1.外泌体用于防止脑型疟疾发生的实验方法,其特征在于:

s1、利用p.y17xnl鼠疟模型,提取外周血后超速离心法或磁珠免疫捕获法分离纯化外泌体;

s2、利用外泌体或外泌体联合cpgodn不同途径免疫正常c57bl/6j小鼠,固定时间点p.banka攻击,动态观察感染过程、神经系统症状和血脑屏障(bbb)完整性,确定外泌体的免疫效应。

2.根据权利要求1所述的外泌体用于防止脑型疟疾发生的实验方法,其特征在于:所述s1具体包括外泌体提取和外泌体鉴定;

其中,外泌体提取包括balb/c小鼠经腹腔注射1×106p.y17xnl寄生的红细胞(prbc),确定虫血症20%-30%后提取外泌体;

采用超速离心法或磁珠免疫捕获法提取p.y17xnl感染的balb/c小鼠外周血中的外泌体,测蛋白浓度后置于-80℃冰箱中备用;

所述外泌体鉴定包括采用透射电镜和wb方法对上述提取的外泌体形态结构、粒径大小和表面特异性分子的表达进行分析。

3.根据权利要求2所述的外泌体用于防止脑型疟疾发生的实验方法,其特征在于:所述s2具体包括即外泌体免疫步骤如下:

c57bl/6j小鼠尾静脉注射外泌体5μg/只,于0天和20天各免疫一次;第二次免疫后20天c57bl/6j小鼠经腹腔注射1×106p.banka寄生的红细胞prbc;

外泌体联合cpgodn免疫:c57bl/6j小鼠皮下注射外泌体10μg/只联合cpgodn10μg/只,20天后再次外泌体单独皮下注射5μg/只;第二次免疫后20天c57bl/6j小鼠经腹腔注射1×106p.banka寄生的红细胞(prbc)。


技术总结
本发明的是外泌体用于防止脑型疟疾发生的实验方法,包括利用P.y17XNL鼠疟模型,提取外周血后超速离心法或磁珠免疫捕获法分离纯化外泌体;利用外泌体或外泌体联合CpGODN免疫正常C57BL/6J小鼠,固定时间点P.bANKA攻击,动态观察感染过程、神经系统症状和血脑屏障(BBB)完整性,确定外泌体的免疫效应。通过提取异种疟原虫感染后宿主外周血中的外泌体,采用尾静脉注射单独免疫外泌体或皮下注射外泌体联合CpGODN两种方法于0天和20天分别免疫C57BL/6J小鼠两次,第二次免疫20天后1×106P.bANKA寄生的红细胞(pRBC)攻击免疫小鼠。实验结果发现,与模型组相比,免疫组小鼠虫血症明显降低,生存率高达90‑100%。神经系统症状未出现,且小鼠BBB保持完整性;证明外泌体可有效保护C57BL/6J小鼠防止脑疟的发生。

技术研发人员:陈光;杜云婷
受保护的技术使用者:台州学院
技术研发日:2021.04.14
技术公布日:2021.07.23
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