专利名称:用于治疗呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和copd的糖皮质激素与磷酸二酯酶－4抑制剂的 ...的制作方法
本发明涉及糖皮质激素，特别是氯替泼诺，和至少一种磷酸二酯酶-4抑制剂(PDE-4-抑制剂)，特别是羟基吲哚-衍生物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺在呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)的治疗中同时、顺序或分别施用的新组合。
过敏性疾病和慢性阻塞性肺病(COPD)是以特征为炎性细胞数量增加和炎症介质的释放或分泌增加的炎性过程为基础。近20年的研究已经揭示了呼吸道炎症是哮喘和COPD中呼吸机能障碍的中心环节。在鼻子和眼睛的过敏性性炎症中已观测到类似的变化。通常，粘膜被大量细胞(包括肥大细胞，嗜酸性细胞和胸腺依赖性细胞)浸润。这些细胞释放出大量介质(尤其包括白介素-4(IL-4)，GM-CSF(粒细胞/巨噬细胞集落-刺激因子)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)，其最终引起炎症以及过敏性疾病和COPD的症状。
现在，对所有过敏性疾病都采用类似的抗炎治疗方法。这些疾病的病理学已经揭示出患者粘膜中的炎性过程根本上决定着症状活动。糖皮质激素是目前最有效的用于治疗哮喘、鼻炎或结膜炎的抗炎化合物。优选使用可通过吸入、鼻内或眼内局部施用的活性成分。在可吸入的糖皮质激素成功用于治疗和预防哮喘患者的呼吸性炎症和永久性肺损伤的基础上，该治疗方法也已经被用于COPD患者，虽然尚无数据能清楚地证明这些活性成分在COPD患者中的长期效果(Whittaker AJ，Spiro SG；Curr Opin Pulm Med 2000；6104-9)。
糖皮质激素的一个最重要的抗炎特性来自对细胞因子释放的抑制。众所周知某些细胞因子例如IL-4，IL-5，GM-CSF和TNF-α涉及呼吸性炎症。糖皮质激素的功效可在某种程度上通过其对细胞因子合成和细胞因子释放的抑制作用进行解释(Marx et al.；Pulm PharmacolTher 2002；157-15)。
糖皮质激素的一个缺点来自其可能的全身性副作用诸如，例如，生长延迟或骨质疏松。降低局部施用糖皮质激素的副作用的风险的切实方法包括使用活性成份的最低有效剂量或限制活性成分的全身性利用率。通过使用所谓软类固醇(soft steroids)开创了一种新途径。与其它糖皮质激素(其中大多数仅在肝中经降解而转变为药效上无活性的代谢产物)相反，软类固醇甚至在其给药(鼻内，经眼睛或肺内)的位点上即发生部分代谢性失活。在这种局部部分代谢后，仅非常少的(或没有)药效上具有活性的物质到达全身性血液循环，因此预期在实施时不会出现类固醇-特异性副作用。该类新的活性成分的最突出的实例是氯替泼诺，其已获准用于治疗过敏性结膜炎和葡萄膜炎。
过敏性疾病和COPD的另一类治疗包括磷酸二酯酶-4抑制剂。磷酸二酯酶可导致环腺苷一磷酸(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的失活。磷酸二酯酶-4的抑制会导致细胞中cAMP的增加，然后导致实质上所有促炎症细胞或免疫细胞功能下调。疾病诸如哮喘、结膜炎、鼻炎或慢性阻塞性肺病的病理所涉及的炎性细胞优先表达磷酸二酯酶-4是令人感兴趣的。
近年来在可用于治疗过敏性疾病、哮喘或COPD的磷酸二酯酶-4抑制剂的发展中已取得了进展。例如活性成分罗氟司特、西洛司特或吡拉米司特已经显示出对细胞因子释放的体外抑制活性和在哮喘模型中的疗效(Torphy et al.；Pulm Pharmacol Ther 1999；12131-5；Poppe et al.；Allergy 2000；55(Suppl 63)270；Giembycz MA；Expert Opin Investig Drugs 2001；101361-79；Ezeamuzie CI；EurJ Pharmacol 2001；41711-8)。DE 19 818 964，DE 19 917 504和US 6,251,923所公开的一类新的经取代的羟基吲哚，及DE 10 053 275和PCT/EP 01/12376所公开的新的7-氮杂吲哚是特别令人感兴趣的。
目前令人惊讶地发现糖皮质激素和至少一种磷酸二酯酶-4抑制剂的新组合在治疗呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和/或慢性阻塞性肺病中是有益的。磷酸二酯酶-4抑制剂，特别是羟基吲哚衍生物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(可经口服、鼻内或吸入施用)，与局部的糖皮质激素，特别是氯替泼诺的添加治疗能显著地提高疗效，且能显著性地发生较少的副作用。
本发明的目的在于改善呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和慢性阻塞性肺病的治疗，及其预防。存在于组合中的磷酸二酯酶-4抑制剂和糖皮质激素能成功地控制病理状态下的炎症。此外，磷酸二酯酶-4抑制剂添加治疗能导致糖皮质激素的较少使用，由此降低副作用的危险。
因此，本发明涉及包含固定或自由组合的糖皮质激素与至少一种磷酸二酯酶-4抑制剂的组合物，和其用于制备药剂的用途。本发明还涉及用于治疗呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和/或慢性阻塞性肺病的药剂，其包括固定或自由组合的作为活性成分的糖皮质激素和至少一种磷酸二酯酶-4抑制剂，及其制备方法。
为了本发明的目的，可以使用所有糖皮质激素。优选使用所谓的软类固醇。根据本发明使用的糖皮质激素可以引用的实例是倍氯米松(9-氯-11β，17，21-三羟基-16β-甲基-1，4-孕二烯-3，20-二酮)，特别是倍氯美松双丙酸酯，环索奈德(16α，17-亚丁二氧基-11β，21-二羟基-1，4-孕二烯-3，20-二酮)，环索奈德(参见，例如WO 98/52542及其中引用的文件)，氟替卡松(S-(氟甲基)6α，9-二氟-11β-硫代羧酸酯)，特别是丙酸氟替卡松，莫米松(9，21-二氟-11β，17-二羟基-16α-甲基-1，4-孕二烯-3，20-二酮)，特别是莫米松糠酸酯，和氯替泼诺，特别是氯替泼诺碳酸乙酯(氯甲基17α-[(乙氧羰基)氧]-11β-羟基-3-氧代androsta-1，4-二烯-17β-羧酸酯)。
在本发明优选实施方案中，氯替泼诺和其药学上可接受的酯，特别是氯替泼诺碳酸乙酯，被用作软类固醇。例如德国专利DE 3 126 732(相应美国专利4,996,335和相应日本专利JP-89011037)中已描述了氯替泼诺和氯替泼诺碳酸乙酯的制剂。
例如德国专利DE 3 786 174(相应专利EP 0 334 853和相应美国专利4,710,495)中描述了适于本发明的其它软类固醇。
为了本发明的目的，可以使用所有磷酸二酯酶-4抑制剂。它们包括(特别是但非局限于)DE 19 818 964，DE 19 917 504和US 6,251,923所描述的经取代的羟基吲哚衍生物，和DE 10 053 275和PCT/EP01/12376所描述的新的7-氮杂吲哚衍生物。根据本发明使用的磷酸二酯酶-4抑制剂的实例是咯利普兰((R)-4-[3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯基]-2-吡咯烷酮)，罗氟司特(Byk-Gulden)，吡拉米司特(Rhone-Poulenc Rorer)，西洛司特(GlaxoSmithKline)和羟基吲哚衍生物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-(1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基)-2-氧代乙酰胺。特别优选的是经取代的羟基吲哚衍生物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(下文称为“DFHO”)，其已被公开于例如DE 19 818 964中。本领域技术人员众所周知的是，磷酸二酯酶-4抑制剂还能以药学上可接受的盐而被应用。
本发明的糖皮质激素(特别是软类固醇)与至少一种磷酸二酯酶-4抑制剂的组合可以是预防性地和在出现症状后施用。其还可用于延缓或防止疾病的进展。
在优选的实施方案中，采用的是活性成分氯替泼诺碳酸乙酯与N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(DFHO)的组合。
下面对实施方案的描述意在具体解释而非限制本发明。
抑制LPS-刺激的单核细胞释放GM-CSF将EDTA化的人全血与Hanks′缓冲液按1∶1的比例混合。用最多40ml的血Hanks′混合液，小心地覆盖Histopaque 1077溶液(15ml)，然后于室温离心(2000rpm)30分钟。吸取白细胞富集带，用Hanks′缓冲液洗涤两次然后转至包含Glutamax I(Gibco BRL，Eggenstein)的RPMI 1640培养基。经由与细胞培养瓶超过2小时的附着而移除所述单核细胞。然后用培养基充分洗涤细胞以除去非附着细胞。将所得单核细胞用包含10％热灭活的胎牛血清(FCS)和100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基在CO2培养箱中培养(5％CO2，96％相对湿度，37℃)。
将初级单核细胞以5×105细胞/孔接种在24-孔板中。用所述试样预孵育细胞30分钟。然后加入LPS，然后持续孵育24小时。抽取上清液，通过ELISA进行检测。
通过用OptEIATM人GM-CSF ELISA试验(Pharmingen，San Diego)测定细胞培养上清液中分泌的人GM-CSF的量。其在微量滴定板中实施。将抗-人单克隆抗体作为抗体与滴定板4℃过夜结合。在该包被和三次洗涤后，通过测定稀释溶液TM(含有10％FCS的PBS，pH 7.0)(Pharmingen，San Diego)的方法于室温1小时饱和非特异性结合。随后与试样和标准物(重组人GM-CSF)于4℃孵育过夜。试样可不经稀释而制备或以1∶50的稀释度(根据操作步骤自含有500pg/ml人GM-CSF的储备液开始的标准稀释度)制备。经由生物素化单克隆抗-人GM-CSF抗体和抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶试剂于室温1小时来检测结合的人GM-CSF。所有步骤后，都用PBS/0.05％Tween 20洗涤5或7次。酶活性通过采用底物溶液TM(四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢，Pharmingen，San Diego)作为底物于室温30分钟进行测定。用1M磷酸终止酶-底物反应，检测450nm消光度。
结果首先，分别对N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(DFHO)和氯替泼诺建立剂量-活性曲线。从这些曲线中，分别计算出当DFHO为3.2μM氯替泼诺为53.7nM，从人单核细胞释放的GM-CSF的IC50。在进一步的试验中，在存在低于IC50浓度的各其它物质的情况下确定DFHO和氯替泼诺的IC50值。在这些情况下，加入5nM DFHO，会使氯替泼诺的IC50从53.7nM降至13.4nM。反之，加入10nM氯替泼诺会使DFHO的IC50从3.2μM降至0.06μM。
氯替泼诺对于从LPS-刺激的单核细胞中TNF和GM-CSF的释放的所观测到的IC50值与现有技术中对其它细胞系统所描述的IC50值相符。这意味着所使用的细胞系统是有效和适宜的，而为了采用该系统的试验的目的而需要的研究所得到的结论是可靠的。DFHO的IC50值与现有专利文件中所描述的那些值相符。
当给予5nM DFHO时，氯替泼诺对TNF释放的IC50的降低为65％而对GM-CSF释放的降低则为75％。5nM DFHO的浓度远低于该物质的IC50(分别为5.7μM和3.2μM)，因此当单独给予5nM DFHO时未检测到效果。
反之，当同时给予10nM氯替泼诺时，DFHO对TNF释放的IC50的降低为99％而对GM-CSF释放的降低则为98％。10nM氯替泼诺浓度远低于该物质的IC50(分别为85.5nM和53.7nM)，因此当单独给予10nM氯替泼诺时未检测到效果。
此处本领域技术人员无法预测到的惊人发现是通过同时施用氯替泼诺和DFHO对抑制TNF和GM-CSF释放产生了超加性效果。
下述剂型特别适于施用本发明的活性成分的组合。
由此，存在于组合中的活性成分可以例如作为两种口服剂，或一种活性成分为口服剂形式而另一种为局部形式(鼻内，吸入)而分开施用。
在本发明的一个实施方案中，磷酸二酯酶-4抑制剂可经口服施用。此时采用惯用的药物剂型，例如片剂、糖浆剂、胶囊、缓释剂(持续释放剂)、锭剂或泡腾颗粒剂。
固体药物剂型例如片剂可包括惰性成分和载体诸如，例如，碳酸钙、磷酸钙、磷酸钠、乳糖、淀粉、甘露醇、藻酸盐、明胶、瓜尔胶、硬脂酸镁或硬脂酸铝、甲基纤维素、滑石、胶体硅、硅油、高分子量脂肪酸(例如硬脂酸)、琼脂或植物性或动物性脂或油、固体高分子聚合物(例如聚乙二醇)；适于口服施用的制剂可(适当情况下)包括调味剂或增甜剂。胶囊形式中的组合物可通过一般惯用方法，例如通过使用前述载体在硬明胶胶囊壳中制备。对于软明胶胶囊形式中的组合物，可以使用通常用于制备分散液或悬液的药学载体，诸如，例如，可掺入软明胶胶囊壳中的水性树胶、纤维素、硅酸盐或油。糖浆剂一般由化合物或其盐在液体载体诸如，例如，乙醇、花生油、橄榄油、甘油或水中的悬液或溶液组成，可以存在调味剂和着色剂。
通过局部施用本发明的活性成分的组合能在即使较低的剂量下获得治疗上有效的浓度。由此原因，出于本发明的目的，优选局部用剂型(包括特别是鼻内和吸入剂型)。
鼻内制剂可用水溶液或油溶液、悬液或乳液进行施用。对于通过吸入来施用活性成分，其可采用以干粉或气雾剂呈递的悬液、溶液或乳液的形式施用，其可以使用所有惯用喷射剂。
在本发明的优选实施方案中，磷酸二酯酶-4抑制剂组合物的形式是鼻腔喷雾剂或计量气雾剂或用于吸入的计量干粉。糖皮质激素组合物也优选局部用制剂，而对于软类固醇氯替泼诺，鼻腔喷雾剂、计量气雾剂或用于吸入的计量干粉的配制方式也是优选的。
根据本发明应用的软类固醇氯替泼诺碳酸乙酯优选在水中与诸如防腐剂、稳定剂、张度剂、稠化剂、悬液稳定剂、调整pH的辅料、缓冲系统和湿润剂的其它成分一起被配制为悬液。关于适宜辅料的进一步描述可以参考例如DE 19 947 234。
本发明的药物制剂可(除糖皮质激素和至少一种磷酸二酯酶-4抑制剂活性成分外)进一步包括诸如惯用防腐剂、稳定剂、稠化剂、调味剂等成分。
示例性实施方案氯替泼诺碳酸乙酯(1％)鼻腔喷雾悬液
制备将45kg纯水加至具有均质化装置的适宜搅拌容器中，然后将其中的微晶纤维素RC 591以高速均质化。然后经搅拌将物质聚山梨酯80，山梨醇溶液，依地酸钠和苯扎氯铵一起溶解。
随后将活性成分氯替泼诺碳酸乙酯高速均质化直至制成均匀悬液。然后用纯水补至终体积然后进一步均质化。随后将悬液排气以便除去产生的气泡。然后将所得悬液装入瓶子中，随后为瓶子装备适宜的鼻腔喷雾泵。
在有益的实施方案中，该组合的活性组分的形式为固定组合，由此简化患者使用。在此情况下，可同时、顺次或分开地以自由或固定的组合施用活性成分。其可均为单剂型和作为两个分开的剂型(可相同或不同)。递送可同时、同时或分开进行，分开进行是指短和长的间隔诸如，例如，傍晚施用氯替泼诺和早晨施用磷酸二酯酶-4抑制剂，或反之亦然。
活性成分可每日一次至六次进行施用。活性成分优选每日一至两次进行施用，特别优选每日两次。一种或多种磷酸二酯酶-4抑制剂的剂量约为0.1～20mg/日·成人，优选0.2～5mg。糖皮质激素的剂量可以在许可的剂量范围内，即0.1～1.6mg/日，优选0.2～0.8mg/日。实际的剂量要依赖于患者的一般状况(年龄、体重等)和疾病的严重程度。
权利要求
1.组合物，其固定或自由组合地包含氯替泼诺或其药学上可接受的酯和N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(DFHO)或其药学上可接受的盐。
2.用于治疗呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和/或慢性阻塞性肺病的药剂，其固定或自由组合地包含作为活性成分的氯替泼诺或其药学上可接受的酯和用作磷酸二酯酶-4抑制剂的羟基吲哚衍生物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(DFHO)或其药学上可接受的盐，其中适当地联用惯用的赋形剂或载体。
3.如权利要求
2的药剂，其特征在于经口服施用。
4.如权利要求
2的药剂，其特征在于经局部施用。
5.如权利要求
4的药剂，其特征在于其可彼此同时、顺次或分开地，鼻内或经吸入施用。
6.如权利要求
4或5的药剂，其特征在于其是可吸入的液体或固体制剂。
7.如权利要求
2的药剂，其特征在于一种活性成分经口服施用而至少一种活性成分经局部施用。
8.如权利要求
2的药剂，其特征在于磷酸二酯酶-4抑制剂可经口服施用。
9.制备用于治疗和预防呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和/或慢性阻塞性肺病的药剂的方法，所述药剂包括作为活性成分的氯替泼诺或其药学上可接受的酯和N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(DFHO)或其药学上可接受的盐，所述方法的特征在于将氯替泼诺或其药学上可接受的酯和N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(DFHO)或其药学上可接受的盐各自或一起混合，其中视需要地包括惯用的赋形剂或载体，并将以这种方式获得的混合物转化为适用的剂型。
10.氯替泼诺碳酸乙酯和作为磷酸二酯酶-4抑制剂的羟基吲哚衍生物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(DFHO)的固定或自由组合的用途，其用于制备用于治疗和预防呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和/或慢性阻塞性肺病的药剂。
专利摘要
本发明涉及糖皮质激素，特别是氯替泼诺，和至少一种磷酸二酯酶-4抑制剂(PDE-4-抑制剂)，特别是羟基吲哚-衍生物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺在呼吸性疾病、过敏性疾病、哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)的治疗中同时、顺次或分开施用的新组合。
文档编号A61K31/4439GKCN1308038SQ03819057
公开日2007年4月4日 申请日期2003年8月4日
发明者M·洛克, R·赫曼 申请人:Meda制药有限及两合公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan