专利名称：复方α干扰素含片及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药生物工程技术领域，尤其是复方α干扰素含片及其制备方法。
作为干扰素之一的α干扰素是一组天然存在的蛋白质，具有抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节作用等广泛的生物学活性。α干扰素的广谱抗病毒作用不是直接杀伤病毒，而是诱导宿主细胞产生多种酶来干扰从病毒吸附到成熟病毒释放整个病毒复制过程的各个环节。另外α干扰素还能通过增强NK细胞、巨噬细胞、CTL细胞的活性来杀伤被病毒感染的靶细胞。α干扰素还具有免疫调节作用可诱导MHCⅠ类分子的表达，增强NK细胞和CTL细胞的活性。此外，α干扰素还具有明显的抗肿瘤作用，其机制有3个方面，①直接抑制肿瘤细胞的生长增殖，其机制可能与下调c-myc、c-fos等原癌基因转录水平，下调生长因子受体表达，使细胞停留在G0/G1期有关，②增强机体抗肿瘤免疫应答，包括免疫活性细胞识别肿瘤、被激活增殖和发生应答全过程，③改变宿主和肿瘤间的相互关系，如抑制肿瘤血管生长，分解肿瘤细胞代谢必要的色氨酸等。
白细胞介素2(IL-2)作为一种具有广泛的免疫调节作用，尤其是特异性细胞免疫作用的细胞因子。人白细胞介素2能显著地增强T细胞、B细胞、巨噬细胞、NK细胞的免疫功能，提高人体对病毒、细菌、真菌、原虫等感染的免疫应答，诱导、NK、LAK细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)增殖，并使其杀伤活性增强，进而清除体内肿瘤细胞和病毒感染细胞等。还可以增加抗体和干扰素等细胞因子的分泌，在机体的免疫应答中具有非常重要的作用，是一种免疫增强剂。此外，白细胞介素2还与其他多种细胞因子之间有协同增强免疫功能的作用。利用其免疫增强功能和与其他多种细胞因子之间有协同增强免疫功能的作用治疗肿瘤和病毒，例如肾细癌、白血病、肿瘤肝转移、乙肝病毒和HIV病毒等都获得了良好的效果。近来的研究还发现，IL-2经PEG化后，其血清半衰期延长了20倍，抗肿瘤作用大大提高。
但是，临床上一般传统应用干扰素或白细胞介素2的施药手段是通过肌肉注射和静脉注射两种方式，虽然大剂量肌肉或静脉注射的疗效是肯定的，但存在以下几个主要缺点一是不方便，增加病人痛苦，病人往往不能坚持治疗；二是副作用较大，如神经系统毒性，抑制造血功能以及过敏反应等，当注射剂量达到300万至500百万国际单位时，严重的不良反应也随之产生，因为人体对注射干扰素和白细胞介素2的耐受性低，所以很多患者因大剂量注射产生了严重的不良反应，而被迫停止使用注射型的干扰素或白细胞介素2。而且，注射型干扰素或白细胞介素2价格昂贵，应用一个疗程三到六个月，仅药品一项的药费就高达上万元，就中国现有经济水平来看，个人实在难以承担如此高额的治疗支出，严重的不良反应和沉重的治疗费用，导致许多患者中途放弃治疗，贻误病情。
鉴于上述缺点，人们开始尝试其他低剂量长期给药途径，如鼻腔、舌下、肺吸入等。现经研究证明，低剂量的α干扰素可通过口服途径给药而进入淋巴系统，直接激活人免疫系统，发生系列免疫调节作用，并使之达到顶点，该过程的最终的结果是抑制病毒复制及进而消除病毒。例如，1987年，《柳叶刀》报道了口服干扰素对艾滋病症状的控制和缓解作用；Bocci V.《临床药代动力学》(Clin Pharmacokinet.)1991；21(6):411-417、Paulesu L.等，《世界药学杂志》(Int J Pharm.)1988；46:199-202报道了经口使用低剂量天然α干扰素对乙型肝炎具有明显疗效；澳大利亚用Namawa细胞经仙台病毒诱导制备天然α干扰素含片，有十几种亚型，以淋巴瘤细胞为来源；以及涉及口服干扰素的中国专利申请95111433.6和95101216.9，其中均涉及以α干扰素为主要成份之一的干扰素含片及制备方法。
低剂量口服干扰素(α干扰素含片)虽然对乙肝、丙肝具有一定的治疗效果，但是其作用有一定的限制，对乙肝、丙肝的有效率只有30-50％。目前，国外尚无白细胞介素2口服应用的报道，因为白细胞介素2虽然可以通过口腔粘膜吸收并增强机体的免疫应答，但是在单用时对抗肿瘤效果并没有显著的改善。
因此，人们需要新的干扰素口服剂型，在保留剂量低、病人耐受性高、服药方便、价格低廉等优点的同时，进一步提高其治疗效率。
因此，本发明的目的就在于提供一种新的复方α干扰素含片，满足人们长期以来的这一需要。具体地说，它充分利用了有效成份各自的药理活性和协同作用，显著提高了抗病毒、抗肿瘤的效率。而且，进一步加强了剂量低、疗效好、病人耐受性高、服药方便、价格低廉等优点。
本发明的目的还在于提供制备所述复方α干扰素含片的方法。使得α干扰素素和白细胞介素2在制备过程中失活少，并且在进入口腔后能够缓慢释放。
为了达到以上目的，本发明提供了一种复方α干扰素含片，其中包含作为有效成份的天然α干扰素和白细胞介素2，以及药学上认可的辅料，所述天然α干扰素的含量为每片100-500IU，白细胞介素2的含量为每片1000-10000IU；更好的是，天然α干扰素的含量为每片200-300IU，白细胞介素2的含量为每片2000-3000IU。
用于本发明的天然α干扰素可以用人脾脏细胞经新城鸡瘟病毒诱导产生，含有30多种亚型，是天然α干扰素混合物。也可以是购买的天然α干扰素商品。例如上海生物制品研究所的商品天然α干扰素。
用于本发明的白细胞介素2可以是由外周血淋巴细胞、脾脏细胞、扁桃体细胞等制备的天然人白细胞介素2，或者是通过DNA重组技术获得的重组人白细胞介素2。例如上海华新生物高技术公司的商品白细胞介素2。
本发明使用的药学上认可的辅料是药学上认可的常用稳定剂和赋形剂等。其中包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白，甘露醇、聚乙二醇、乳糖、葡萄、淀粉、糊精、硬脂酸镁等。
本发明采用的剂型为舌下含片。
本发明还提供了一种制备天然α干扰素白细胞介素2复方含片的方法。它包括取无菌天然α干扰素和白细胞介素2，与药学上认可的辅料混合，冷冻干燥成冻干粉；将药学上认可的辅料制备湿软材，将湿软材过筛，干燥，制备成空白颗粒；将α干扰素与白细胞介素2冻干粉与等量空白颗粒充分混合，混合物再与剩余空白颗粒充分混合；在低温至常温条件下直接压片。
由于白细胞介素2也可以通过口腔粘膜吸收，从而激活全身免疫系统，发挥抗肿瘤、抗感染和免疫调节作用。因此，本发明在口服α干扰素的基础上再加上能刺激机体免疫系统活性的另外一种细胞因子白细胞介素2，利用它们的协同作用大大加强了疗效，而毒副作用没有进一步增加，初步治疗乙肝病人，有效率达90％以上。所以，本发明的含片适用于乙型肝炎、丙型肝炎等病毒性感染及肿瘤的治疗，而且具有疗效好、病人耐受性高、服药方便、价格低廉等优点。
由于本发明选用了白蛋白、甘露醇、聚乙二醇等稳定剂，以及淀粉、硬脂酸镁和糊精等赋形剂，并且采用低温至常温的工艺条件，使得本发明的天然α干扰素和白细胞介素2复方含片还具有制备过程中失活少，稳定性好，能够在口腔内缓慢释放等优点。
以下将结合实施例进一步详细说明本发明。本发明的优点和有益效果也将由此变得显而易见。
实施例1为制备10,000片复方α干扰素含片，取无菌天然α干扰素(上海生物制品研究所)240万IU和3600万IU白细胞介素2(上海华新生物高技术公司)(压片后α干扰素和白细胞介素2的活性损失率为20％)，与100g无菌甘露醇(上海长征制药厂)(20％的溶液(适量))和20g人血白蛋白(上海生物制品研究所)混合，置于无菌不锈钢盘中，用冷冻干燥机(Virtis公司)冻成于粉。
取硬脂酸镁(上海药用辅料厂)100g、糊精(上海药用辅料厂)180g混合均匀，再与淀粉400g混合均匀，制备软材，将湿软材过20目筛制备颗粒，将此颗粒于60℃的烘箱(Hereaus公司)内干燥，至含水量为5-10％。
将α干扰素与白细胞介素2冻干粉与等量空白颗粒充分混合，混合物再与剩余空白颗粒充分混合，以保证混合物中α干扰素和白细胞介素2含量均匀。
压片机(德国克利安公司)预先调节温度为-4至20℃，并保证操作温度不超过20℃，将混合物直接压片成10,000片。
实施例2根据权利要求1所述的方法，按照以下配方制备本发明的α干扰素和白细胞介素2复方含片，共1,000片。
组成 含量天然α干扰素(上海生物制品研究所) 10万IU白细胞介素2(上海华新生物高技术公司) 100万IU人血白蛋白(上海生物制品研究所) 4g甘露醇(上海长征制药厂) 5g淀粉(上海亚东药业公司) 45g硬脂酸镁(上海药用辅料厂) 10g糊精(上海药用辅料厂) 16g实施例3根据权利要求1所述的方法，按照以下配方制备本发明的α干扰素和白细胞介素2复方含片，共1,000片。
组成 含量天然α干扰素(上海生物制品研究所) 50万IU白细胞介素2(上海华新生物高技术公司)1000万IU人血白蛋白(上海生物制品研究所) 1g甘露醇(上海长征制药厂) 15g淀粉(上海亚东药业公司) 40g硬脂酸镁(上海药用辅料厂)5g糊精(上海药用辅料厂)19g实施例4根据权利要求1所述的方法，按照以下配方制备本发明的α干扰素和白细胞介素2复方含片，共1,000片。
组成 含量天然α干扰素(上海生物制品研究所) 20万IU白细胞介素2(上海华新生物高技术公司)250万IU人血白蛋白(上海生物制品研究所) 2g甘露醇(上海长征制药厂) 10g淀粉(上海亚东药业公司) 40g硬脂酸镁(上海药用辅料厂) 10g糊精(上海药用辅料厂) 18g测试实验测试1以健康昆明种小鼠(由第二军医大学实验动物中心提供)进行急性毒性实验，用最大浓度、最大容积0.5ml，对20只小鼠经灌胃给予本发明的复发天然α干扰素含片。连续观察7天，未发现任何毒副作用。实验结果表明，本发明复发天然α干扰素含片的最大耐受量是人用剂量，即250IU/日的50000倍。试验同时设置单用同剂量α干扰素的对照，结果表明与单用α干扰素制成的含片比较，毒性没有增加。
测试2取一片实施例6制备的本发明含片粉碎，加入5-10ml的RPMI-1640培养基中混合搅拌，然后于4℃放置过夜。然后用50um的滤膜(Whattman公司)过滤，收集滤液。用常规方法，即WISH法测定其中有效成份的含量。经测定，其中α干扰素和白细胞介素2的含量为标示量的100±10％。
将本发明含片在4至10℃环境下放置2年，经WISH法测定，活性无明显变化。
比较实施例临床测试6例乙型肝炎患者，平均病史为6.8年，平均年龄为33.2岁；双盲法分为3组。分别为治疗组服用本发明实施例6所述的复方天然α干扰素和白细胞介素2含片，对照1组含服安慰剂，对照2组含服α干扰素含片(200IU/片)，各组的患者每晨起取一片含片，于舌下含服10-30分钟。通过为期一年的疗效观察，主要测试结果如下
动物实验裸鼠40只，随机分为4组，A组口服生理盐水作为对照，B组口服α干扰素10IU/kg,C组口服白细胞介素2 200IU/kg,D组服用α干扰素和白细胞介素2复方含片(α干扰素10IU/kg，白细胞介素2 200IU/kg)，连续服药一周，检测裸鼠脾细胞NK活性，结果如下
*与B、C组比较，P＜0.01由于存在种属差异，人α干扰素对小鼠无效，故不能用小鼠评价干扰素的作用，而裸鼠体内缺乏T细胞，只能检测NK活性作为免疫指标。试验结果表明α干扰素和白细胞介素2可以发生协同增强免疫系统的作用。
权利要求
1．一种复方α干扰素含片，其特征在于，其中包含作为有效成份的天然α干扰素和白细胞介素2，以及药学上认可的辅料，所述天然α干扰素的含量为每片100-500IU，白细胞介素2的含量为每片1000-10000IU，所述的药学上认可的辅料选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白，甘露醇、聚乙二醇、乳糖、葡萄、淀粉、糊精、硬脂酸镁。
2．根据权利要求1所述的复方α干扰素含片，其特征在于，所述天然α干扰素的含量为200-300IU，所述白细胞介素2的含量为2000-3000IU。
3．根据权利要求1所述的复方α干扰素含片，其特征在于，所述天然α干扰素的含量为250IU，所述白细胞介素2的含量为2500IU。
4．一种制备权利要求1所述的复方α干扰素含片的方法，其特征在于，它包括取无菌天然α干扰素和白细胞介素2，与药学上认可的辅料混合，冷冻干燥成冻干粉；将药学上认可的辅料制备湿软材，将湿软材过筛，干燥，制备成空白颗粒；将α干扰素与白细胞介素2冻干粉与等量空白颗粒充分混合，混合物再与剩余空白颗粒充分混合；在低温至常温条件下直接压片。
全文摘要
本发明提供一种复方α干扰素含片，包含作为有效成分的低剂量的天然人α干扰素与白细胞介素2，以及药学上认可的辅料。本发明还提供了通过在低温至常温工艺条件下压片来制备以上含片的方法。该含片适用于乙型肝炎、丙型肝炎等病毒性感染及肿瘤的治疗。具有剂量低、疗效好、病人耐受性高、服药方便、价格低廉、性能稳定等优点。
文档编号A61K38/21GK1227125SQ9810538
公开日1999年9月1日 申请日期1998年2月25日 优先权日1998年2月25日
发明者曹雪涛, 鞠佃文, 陶群 申请人:上海华晨生物技术研究所