专利名称：促进红细胞生成的方法
技术领域：
本发明涉及用下文定义的产品R促进红细胞生成的方法。
所有的哺乳动物都有造血(血液形成)系统，该系统能够补充在健康动物中存在的各种类型的血液细胞，包括白细胞、形成凝血的细胞和红细胞(erythrocytes)。在成年哺乳动物中，主要的造血部位是骨髓。
如果把骨髓作为单个的组织来看，它是身体中最大的组织。成人骨髓的总重量平均为大约3公斤。骨髓充满了几乎全部骨骼的中心芯。骨髓有三类组织血管组织、脂肪组织和直接造血的组织或是形成血液的组织。血管组织是循环系统，其负责供应营养和从活的生长细胞中排除废物；造血组织负责红细胞、血小板、粒细胞和单核细胞、以及淋巴细胞前体的形成；脂肪组织由脂肪细胞构成，其对骨髓的功能没有什么贡献。
特化的亚型血液细胞的成熟和分化发生在胸腺、脾脏、淋巴结和肠道淋巴样组织中。目前的科学研究认为小量特定的造血生长因子使各种类型的造血细胞直接增生、分化和成熟，这些造血细胞来自于小种群的多潜能造血干细胞。各种生长因子在不同的时间作用于不同的细胞种群，最终形成了功能性的造血系统。
哺乳动物造血系统的一个特殊和重要的作用是生成红细胞，红细胞给动物体的各个组织输送氧气。生成红细胞(红细胞生成)的过程在动物体的整个生命过程中连续不断地进行，从而使红细胞的损毁得到补偿。典型的红细胞具有相对较短的生命周期，通常为100-120天。红细胞生成是一个准确控制的生理机制，因此需要生成足够数量的红细胞以便能够给各组织充氧，但是其数量又不能多到妨碍循环的地步。
所有的外周血细胞起源于被称作是多潜能造血干细胞的普通先祖细胞。干细胞的一个重要性质是其自身的再生，该性质能确保在动物个体的整个生命期有连续不断的供应。在需要时，多潜能细胞可以开始分化，在连续分裂之后，所述的细胞失去了自身再生的能力且其后代变成负责形成发育的特殊细胞系。然后这些先祖细胞会生成具有功能特性的所有血液细胞。
在此过程的最后形成成熟的血液细胞，该过程包括来自各个谱系的特定形成的先祖细胞的增生和成熟。因此，来自各个谱系的多潜能细胞能够生成由一些红细胞、粒细胞、血小板和淋巴细胞组成的纯系，其中还有它们的中间体先祖细胞。
在正常环境下，骨髓能够对需要增加特定类型细胞的要求很快作出反应。目前许多研究工作的目的就是研究这个过程是如何进行的。已经知道先祖细胞的增生和分化过程是在一些已知生长刺激物的控制之下进行的，这些生长刺激物为造血激素，如促红细胞生长素(EPO)和一些集落刺激因子。
红细胞的生成包括一个这样的过程，即开始于BFU-E(暴发形成单位—红细胞类，最早的红细胞前体)的早期形成阶段，主要由白介素-3(IL-3)控制，接着由促红细胞生长素(EPO)进一步成熟为CFU-E(集落形成单位—红细胞类)和晚幼红细胞。晚幼红细胞成熟为网织红细胞，然后成为红细胞，其是成熟的血液细胞。
现已知红细胞生成主要是由EPO控制，EPO是一种酸性的糖蛋白。EPO刺激新的红细胞生成以代替随着年老而损失的红细胞。此外，EPO的产生在低氧条件下受到刺激，此时尽管身体的各个组织被血液充满，但对各组织的氧气供应则是减低到正常生理水平以下。低氧可能是由于出血、放射性引起的红细胞损毁、各种贫血症、高海拔或长期的不省人事引起的。做为对组织处于低氧状态的反应，EPO将通过促进骨髓中的原生前体细胞向原红细胞转化而增加红细胞的生成，其然后成熟，合成血红蛋白，并做为红细胞被释放到循环系统中去。
某些疾病状态涉及非正常的红细胞生成。重组的人体EPO用于治疗与晚期肾疾病有关的贫血症。为了治疗这种疾病进行血液透析的患者是以患有严重的贫血症为特征的，这是由于透析治疗造成的红细胞破裂和早熟死亡而引起的。EPO也用于治疗其它类型的贫血症，例如用EPO治疗化疗引起的贫血症、与骨髓发育不良有关的贫血症、与各种先天性疾病有关的贫血症、与爱滋病有关的贫血症以及与早熟有关的贫血症。另外，在其它领域，EPO也起着重要的作用，例如帮助骨髓移植病人、准备进行自体输血的病人和患有铁过量疾病的病人更快的恢复正常的血细胞比容。
二十世纪三十年代的产品R(已知该药剂的商标为“Reticulose”，是Advanced Viral Research Corp.的商品名称)是抗病毒产品。最初人们确信该产品是由蛋白胨、肽和核酸(下文将给出完整的定义)组成的，其确切的组成没有被鉴定出来。然而，已经证明产品R能够快速抑制某些病毒疾病的病程。它们是无毒的、可与组织液和血浆相溶混的，并且无过敏原的性能。
据申请人所知，没有人提出产品R具有与EPO类似的功能。已发现产品R可用于促进红细胞的生成，因此可用于对严重的贫血症的患者进行治疗，所述的贫血症是由于慢性肾衰竭、放射性、化疗或爱滋病引起的。
因此，本发明的目的是提供一种促进红细胞生成的方法，该方法包括经肠胃外施用产品R。
本发明的另一目的是提供一种对患有贫血症的患者进行治疗的方法，所述的贫血症是由慢性肾衰竭、放射性、化疗或爱滋病引起的。
具体地说，以无菌注射剂型给患者经肠胃外施用产品R的量是每天每公斤体重为大约5微升至大约40微升。
通过说明书下文的详细描述，并结合附图
，本发明的其它目的和特征将会变得更加清楚。但可以理解的是，该附图仅仅是为了说明而设计的，不会限制本发明，为此，请参见本发明提交的权利要求书。
本文中所用的产品R是用下述任意一种方法制备的产品。
制备产品R的方法I在大约3-7℃，于适当的容器中，将大约35.0g酪蛋白、大约17.1g牛蛋白胨、大约22.0g核酸(RNA)和大约3.25g牛血清清蛋白悬浮于大约2.5升水中，制成注射用USP，缓慢搅拌，直到所有的组分被适当地湿润。在搅拌的同时小心地加入大约16.5g氢氧化钠(试剂级，ACS)，且继续搅拌直到氢氧化钠完全溶解。在大约9磅压力的高压灭菌器中，于200-230°F经过一定时间直到RNA全部消化，例如经过4小时。在这段时间结束后，停止高压灭菌器的操作，使反应瓶和内容物缓慢冷却至室温。然后，在大约3-8℃冷却至少6小时。用惰性气体如氮气或氩气，在低压下(1-6磅/英寸2)通过2微米和0.45微米的过滤器过滤得到的溶液。以类似的方式，通过0.2微米致热原保留过滤器对溶液进行再过滤。对得到的滤液进行取样和检测总氮。然后，进行计算以确定定量加入滤液的冷却水的量，以得到稀释的滤液用于注射，稀释滤液中的氮含量在大约165-210mg/ml，最后体积为大约5升。然后，用浓盐酸(试剂级，ACS)或1.0当量的氢氧化钠将pH调节至大约7.3-7.6的范围内。再在低压下，惰性气体中，通过0.2微米的过滤器过滤得到的稀释溶液。然后，于惰性气氛中将最后的滤液充入2ml玻璃安瓿，并密封。收集安瓿，并于240°F和20-30磅的压力下进行最后的高压灭菌，时间为大约30分钟。在灭菌周期后，冷却和洗涤装有产品R的安瓿。
对pH值、体积和分析校正值，所有的定量数据可加或减变化2.5％。
制备产品R的方法II在大约3-7℃，于适当的容器中，将大约35.0g酪蛋白、大约17.1g牛蛋白胨、大约22.0g核酸(RNA)和大约3.25g牛血清清蛋白悬浮于大约2.5升水中，制成注射用USP，缓慢搅拌，直到所有的组分被适当地湿润。在搅拌的同时缓慢加入大约11.75ml盐酸(试剂级，ACS)，且继续搅拌直到盐酸完全溶解。在大约9磅压力的高压灭菌器中，于200-230°F经过一定时间直到RNA全部消化，例如经过4小时。在这段时间结束后，停止高压灭菌器的操作，使反应瓶和内容物缓慢冷却至室温。然后，在大约3-8℃冷却至少6小时。用惰性气体如氮气或氩气，在低压下(1-6磅/英寸2)通过2微米和0.45微米的过滤器过滤得到的溶液。以类似的方式，通过0.2微米致热原保留过滤器对溶液进行再过滤。对得到的滤液进行取样和检测总氮。然后，进行计算以定量确定加入滤液的冷却水，以得到稀释的滤液用于注射，稀释滤液中的氮含量在大约165-210mg/ml，最后体积为大约5升。然后，用浓盐酸(试剂级，ACS)或35％(w/v)的氢氧化钠将pH调节至大约7.3-7.6的范围内。再在低压下，惰性气体中，通过0.2微米的过滤器过滤得到的稀释溶液。然后，于惰性气氛中将最后的滤液充入2ml玻璃安瓿，并密封。收集安瓿，并于240°F和20-30磅的压力下进行最后的高压灭菌，时间为大约30分钟。在灭菌周期后，冷却和洗涤装有产品R的安瓿。
对pH值、体积和分析校正值，所有的定量数据可加或减变化2.5％。
为了促进红细胞的生成，以便对由慢性肾衰竭、放射性治疗、化疗或爱滋病引起的贫血症的患者进行治疗，施用产品R的适当有效剂量为每天每公斤体重大约2.5微升至大约40微升，优选每天每公斤体重大约5微升至大约25微升。最优选产品R的施用量为每天每公斤体重大约15微升，施用大约二周，接着每天每公斤体重施用大约7.5微升。所需剂量可以适当的时间间隔，分成2次、3次或多次分剂量施用，通常在一天里采用相等的时间间隔。优选一天的剂量一次施用。
产品R可以任何适当的注射途径施用，其非限制性包括为静脉、腹膜内、皮下、肌肉、和皮内注射等。优选的用药途径是皮下注射。可以理解的是，优选的用药途径可根据如受者的症状和年龄的变化而改变。
同时也可以将产品R作为药物制剂的一部分使用，优选单独使用，虽然也可以在彼此独立施用一种或多种其他药物的大致相同的时间里施用产品R。如果把产品R作为药物制剂的一部分使用，那么本发明的制剂包括至少一种上文定义的组分，以及其一种或多种可接受的载体，和选择地包括其它的治疗组分。一种或多种载体必须是“可接受的”，其意义是能够与制剂中的其它组分相混溶，并且对其受者无害。
所述的制剂通常可以单位剂量或多剂量药盒的形式存在，例如封装的安瓿和药瓶。
优选的单位剂量形式是那些含有日剂量的，或含有每天的分剂量单位的，或给药成分的适当组分的剂量形式。
上述促进红细胞生成的方法可用于对各种形式的贫血症，如慢性肾衰竭、放射性治疗、化疗或爱滋病引起的贫血症患者进行治疗。
因此，在已经说明、描述和指明了应用于本发明优选实施方案的本发明的基本新特征的同时，可以理解的是，对本领域的熟练技术人员而言，各种形式上的省略、替代和变化，以及对所述装置和操作的详细说明都没有背离本发明的实质。例如，将所有这些要素和/或方法步骤的结合是显而易见的，其是按照实质上相同的方式，发挥实质上相同的作用来达到相同的结果，这仍然是在本发明的范围之内。因此对本发明来说，其仅仅是被限制在本申请所附的权利要求书所指出的范围之内。
权利要求
1.促进红细胞生成的方法，其包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用有效治疗量的产品R。
2.权利要求1的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约2.5微升至大约40微升。
3.权利要求3的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约5微升至大约25微升。
4.权利要求3的方法，其所述产品R的用药量为每天每公斤体重大约15微升，施用二周，接着以每天每公斤体重大约7.5微升施用。
5.对慢性肾衰竭引起的贫血症患者进行治疗的方法，其包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用有效治疗量的产品R。
6.权利要求5的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约2.5微升至大约40微升。
7.权利要求5的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约5微升至大约25微升。
8.权利要求5的方法，其所述产品R的用药量为每天每公斤体重大约15微升，施用二周，接着以每天每公斤体重大约7.5微升施用。
9.对放射性治疗引起的贫血症患者进行治疗的方法，其包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用有效治疗量的产品R。
10.权利要求9的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约2.5微升至大约40微升。
11.权利要求9的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约5微升至大约25微升。
12.权利要求9的方法，其所述产品R的用药量为每天每公斤体重大约15微升，施用二周，接着以每天每公斤体重大约7.5微升施用。
13.对放射性治疗引起的贫血症患者进行治疗的方法，其包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用有效治疗量的产品R。
14.权利要求13的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约2.5微升至大约40微升。
15.权利要求13的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约5微升至大约25微升。
16.权利要求13的方法，其所述产品R的用药量为每天每公斤体重大约15微升，施用二周，接着以每天每公斤体重大约7.5微升施用。
17.对放射性治疗引起的贫血症患者进行治疗的方法，其包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用有效治疗量的产品R。
18.权利要求17的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约2.5微升至大约40微升。
19.权利要求17的方法，其所述产品R的用药范围为每天每公斤体重施用大约5微升至大约25微升。
20.权利要求17的方法，其所述产品R的用药量为每天每公斤体重大约15微升，施用二周，接着以每天每公斤体重大约7.5微升施用。
全文摘要
本发明公开了应用产品R经肠胃外给药,通过促进红细胞生成治疗贫血症的方法,产品R是肽－核酸制剂。
文档编号A61P43/00GK1252074SQ98804154
公开日2000年5月3日 申请日期1998年4月15日 优先权日1997年4月15日
发明者沙洛姆·Z·赫希曼 申请人:领先病毒研究公司