治疗乳头瘤病毒感染的方法

专利名称：治疗乳头瘤病毒感染的方法
技术领域：
本发明涉及用下文定义的产品R对感染了乳头瘤病毒的患者进行治疗的方法。
对人的病毒感染疾病的治疗是医学的一个焦点。尽管目前取得了一定的进展，但是病毒感染依然属于最难医治的疾病。随着检测技术的进步和治疗水平的提高，人们对病毒疾病有了进一步的认识，尽管如此，到目前为止，只有少数几种抗病毒剂被证明是有效的。某些病毒疾病如HIV是危及生命的；另外一些如单纯疱疹病毒和流感病毒经常会引起一些严重的问题。另外，演化的结果必然会经常出现一些新的病毒疾病。因此，研究治疗病毒疾病的有效的新方法仍然是必不可少的，并且是具有挑战性的。
二十世纪三十年代的产品R(已知该药剂的商标为“Reticulose”，是Advanced Viral Research Corp.的商标)可作为抗病毒产品。但最初人们确信该产品是由蛋白胨、肽和核酸(下文将给出完整的定义)组成的，其确切的组成没有被鉴定出来。然而，已经证明产品R能够快速抑制某些病毒疾病的病程。它们是无毒的、可与组织液和血浆相溶混的，以及无过敏原的性能。
尽管存在早期的这些临床报告，也很少进行系统的研究以确定其临床应用。如上所述，将产品R用于治疗病毒感染的最佳剂量也很少进行研究。事实上，在评价产品R的效果时，大多数临床报告都缺少必要的对照和统计学上令人满意的试样。值得注意的是，有两份早期的文献提到产品R没有显示出抗病毒活性。根据这些争论，此领域目前的状况是应用产品R治疗病毒感染仍然存在一定的问题。在产品R开发的过程中，最接近的试验表明没有什么有特殊意义的类型可以被指定为用于治疗特定的病毒感染，因为从基因特征或/和病理来看，引起这些感染的病毒是多种多样的。此外，在早期的临床报告中，产品R仅仅是单独施用的药物。既从来没有人建议把产品R与其他抗病毒药物结合使用，也没有人建议其用药时间为两个月以上的较长时间。对现有技术作出一定的限制，用产品R开发出新的治疗方法是合乎需要的。
在开发抗病毒剂的过程中，我们知道一种抗病毒剂对一特定病毒的抑制活性并不等于它对其他的病毒有抑制活性。例如，已经证明对单纯疱疹病毒1和2有特殊效果的无环鸟苷(acyclovir)却不能抑制巨细胞病毒(CMV)，即使HSV和CMV属于同一疱疹家族，共有一定的基因特征也不行。无环鸟苷的特异性依赖于其对只有HSV1和2才有的胸苷激酶基因的活性，指出各种病毒的区别特征构成研究抑制不同病毒的特定抗病毒药剂的基础。换句话说，如果用某种抗病毒剂能够治疗一种病毒感染，不一定说明用同一抗病毒剂治疗另一种病毒感染时能够达到同样的效果。病毒基因的多样性需要我们进一步鉴定抗病毒剂对不同病毒的新应用的有效性。
抗病毒剂通常会与病毒感染各阶段的分子进行相互作用早期如吸收、穿透(内化作用)和病毒脱壳；在病毒复制阶段，特征是各种病毒基因组和核蛋白复合物的各种组分的复制；以及化学代谢途径。由抗病毒剂来抑制的最好的靶为其功能是只有病毒才有的分子，在宿主细胞中没有类似的对应物。为了用设想的抗病毒剂的相互作用鉴别病毒特有的分子(virus-specific molecule)，重要的是借助于颗粒和基因组的结构使病毒特征化，以及确定在感染的细胞中发生的特殊的生化作用。虽然在发现病毒吸收、复制和代谢所必需的分子方面已经有了进展，但是现有的知识依然不足以解释这些过程中的许多问题。其结果是，通过抗病毒剂与靶病毒在一种或一系列指定的过程的相互作用不能完全确定各种抗病毒剂的作用；可以理解的是，用一种抗病毒剂治疗一种新的病毒感染的就更少，特别是在该抗病毒剂被认为很差的情况下更是如此。因为未了解病毒基因特征和其抗病毒剂的化学性质，因此病毒感染的治疗就变的无法预见。
因此，本发明的目的是开发一种对感染了乳头瘤病毒的患者，或显示出与乳头瘤病毒相关症状的患者，或具有乳头瘤病毒抗体的患者进行治疗的方法，该方法是给患者经肠胃外施用产品R。产品R是由肽和核酸构成的抗病毒剂。
动物的乳头瘤病毒与纯的鳞状上皮增生病灶(瘤)有关，它们可以是皮肤的，或包括口腔咽部，食道或生殖道黏膜的鳞状上皮细胞的增生。某些人类皮肤上的乳头瘤病毒(HPVs)在鳞状细胞癌生成的过程中其起着重要的作用，鳞状细胞癌是一种皮肤癌，是由罕见的皮肤病的瘤损伤——疣状表皮发育不良(EV)引起的。某些生殖道的HPVs能够产生生殖道瘤，在HPVs中，它们的主要作用是感染其他的黏膜部位，如呼吸道、口腔和结膜。现在，已经知道感染生殖道的HPV最普遍的传播方式是通过性传播而感染的，并且与某些生殖道，特别值得注意的是与子宫颈的鳞状细胞癌有关，这是人类的一种主要癌症。在世界范围内每年大约有500,000新的子宫颈癌发病的病例被诊断出来。在发展中国家，子宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤，在女性恶性所有的肿瘤中能达到大约24％。在发达国家，这种肿瘤排在乳癌、肺癌、子宫癌和卵巢癌之后，在所有的女性恶性肿瘤中能达到大约7％。
患有爱滋病(AIDS)的患者或受到爱滋病病毒(HIV)感染的人被许多不同类型的感染所困扰，这些感染在免疫活性患者中并不常见。这些感染被称为机会感染。在这患者中，最常见的性传播感染之一是爱滋病，是通过各种不同的HPV经生殖道传播而引起的。
一般来说，乳头瘤病毒是小的，非包膜的病毒，是二十面体对称，72病毒壳粒，是大约8,000bp.的双链环状DNA基因组。乳头瘤病毒的基因组织的特征之一是基因组所有的可读框位于一个链，所有的病毒基因位于一个链。所有的乳头瘤病毒具有类似的基因构成。病毒基因组可分成早期区、后期区和调节区，在早期区需要对病毒DNA复制和细胞转化需要的基因编码，在后期区给病毒壳体蛋白质编码，在调节区含有复制的起始点，以及转录和复制的控制因子。
乳头瘤病毒具有两条病毒DNA复制的形式。第一条出现在表皮较低部分的细胞中，包括基细胞，以及在乳头瘤的皮内的成纤细胞中。在这些细胞中，病毒DNA显然作为稳定的多拷贝质粒被留下来。在S期，按照与宿主细胞染色体的同步分裂，病毒基因组平均每个细胞循环复制一次，并可精确的分配到子细胞。这种类型的DNA复制确保皮下的干细胞持续感染和潜伏感染。第二种类型的DNA复制是营养性的DNA复制，其发生在更分化的乳头瘤上皮细胞中。由质粒调节开关维持营养性的病毒DNA复制的机理还是未知的。这些开关可包括在分化的角质细胞中有或没有可控制的细胞因素。
乳头瘤病毒的基因组含有多个顺式调节因子，并对一些转录因素进行编码，这些因素能够调节病毒基因的表达。由于存在多种启动子，存在另外的和多种的剪接类型，以及在不同细胞中多种mRNA产生分化，乳头瘤病毒的转录是很复杂的。在感染细胞中的转录是完全可以调节的。
除了乳头瘤病毒不同的基因组结构，复制和转录的形式以外，两种主要的生物特征也是由于乳头瘤病毒不同于其他病毒而确立的。第一，乳头瘤病毒具有高度的物种特性，还没有HPVs天然的转化成其它物种的已知实例。乳头瘤病毒还表现出很大程度的细胞趋性。HPVs仅仅感染皮肤的鳞状上皮表面或黏膜，生成大部分良性上皮肿瘤。通过乳头瘤病毒产生的细胞感染可分成早期和晚期阶段。各阶段与上皮细胞的分化状态有关。细胞蛋白与病毒基因组调节区的各种因子之间的相互作用提供了HPVs细胞质粒的分子基础。特定的细胞类型似乎是优先选择皮肤和黏膜的类型。例如，HPV-11不容易感染身体其他部位的皮肤的上皮细胞，但是可以感染生殖道或呼吸道的黏膜上皮细胞。
第二，乳头瘤病毒的基本性质是诱导细胞的增生和转化。乳头瘤病毒感染后的最常见的临床表现是生成瘤，是良性肿瘤。良性乳头瘤转化成癌症的过程具有以下特征1)只有某些类型的病毒具有致癌的趋势；2)初期感染和发展成为癌症之间的时间可能是长的；在人体的生殖道癌症的情况下，这个时间间隔可能是几十年；3)转化成癌症的过程需要有协同因子。对转化的乳头瘤病毒细胞感兴趣的特性进行研究表明，乳头瘤病毒DNA常常保持为多拷贝质粒，对开始和保持转化状态而言，不需要病毒基因组的同化作用。
关于病毒的附着物、受体、病毒粒的进入、未包膜、装配或释放知道的很少。
乳头瘤病毒的各种治疗方法包括施用苛性药剂、冷疗法、应用DNA合成抑制剂、外科治疗法和免疫治疗法都已经被尝试过，但是难于评价这些治疗方法的有效性，因为一方面会自然退化，另一方面会复发。
已经发现，可用于治疗确诊为具有与乳头瘤病毒有关的症状的患者，以及确诊为感染了乳头瘤病毒，或带有乳头瘤病毒，或具有乳头瘤病毒抗体的患者。本发明涉及对上述被确诊的患者进行治疗的方法，该方法通过给上述患者经肠胃外施用乳头瘤病毒治疗有效量的产品R，以无菌注射制剂施用时，每天每公斤体重为大约5微升至大约40微升。
通过说明书下文的详细描述，并结合附图
，使本发明的其他目的和特征更加清楚。但可以理解的是，该附图仅仅是为了说明而设计的，不会限制本发明，为此，请参见本发明提交的权利要求书。
本发明公开了应用产品R对确诊为具有与乳头瘤病毒有关症状的患者进行治疗的方法，该方法通过经肠胃外施用乳头瘤病毒治疗有效量的产品R。
本发明也公开了应用产品R对确诊为感染了乳头瘤病毒，或带有乳头瘤病毒的患者进行治疗的方法，应用产品R以抑制感染患者细胞的乳头瘤病毒的复制，和防止已经感染乳头瘤病毒的病人的乳头瘤病毒感染不再发展。
本发明还公开了对具有乳头瘤病毒抗体的患者进行治疗的方法，该方法通过经肠胃外施用治疗有效量的产品R。
下文中所使用的产品R是用下述任意一种方法制备的产品。
制备产品R的方法I在大约3-7℃，于适当的容器中，将大约35.0g酪蛋白、大约17.1g牛蛋白胨、大约22.0g核酸(RNA)和大约3.25g牛血清白蛋白悬浮于大约2.5升水中，制成注射用USP，缓慢搅拌，直到所有的组分被适当的湿润。在搅拌的同时小心的加入大约16.5g氢氧化钠(试剂级，ACS)，继续搅拌直到氢氧化钠完全溶解。在大约9磅压力的高压灭菌器中，于200-230°F经过一定时间直到RNA全部消化，例如经过约4小时。在这段时间结束后，停止高压灭菌器操作，使反应瓶和内容物缓慢冷却至室温。然后，于约3-8℃冷却至少6小时时间。用惰性气体如氮气或氩气，在低压(1-6磅)下通过2微米和0.45微米的过滤器过滤得到的溶液。以类似的方式，通过0.2微米致热原保留过滤器过滤该溶液。对得到的滤液进行取样和检测总氮。然后，进行计算以确定定量加入滤液的冷却水的量，得到稀释的滤液用于注射，稀释滤液中的氮含量在大约165-210mg/100ml，最后体积为大约5升。然后，用浓盐酸(试剂级，ACS)或1.0当量的氢氧化钠调节pH至大约7.3-7.6的范围内。然后在低压下，于惰性气体中，再通过2微米的过滤器过滤得到稀释溶液。然后，于惰性气氛中将最后的滤液充入2ml玻璃安瓿，并密封。收集安瓿，并于240°F和20-30磅的压力下进行最后的高压灭菌，时间大约30分钟。在进行灭菌操作过程后，冷却和洗涤装有产品R的安瓿。
对pH值、体积和分析校正值，所有的定量数据可加或减变化2.5％。
制备产品R的方法II在大约3-7℃，于适当的容器中，将大约35.0g酪蛋白、大约17.1g牛蛋白胨、大约22.0g核酸(RNA)和大约3.25g牛血清白蛋白悬浮于大约2.5升水中，制成注射用USP，缓慢搅拌，直到所有的组分被适当的湿润。在搅拌的同时缓慢加入大约11.75ml盐酸(试剂级，ACS)，继续搅拌直到盐酸完全溶解。在大约9磅压力的高压灭菌器中，于200-230°F经过一定时间直到RNA全部消化，例如经过约4小时。在这段时间结束后，停止高压灭菌器操作，使反应瓶和内容物缓慢冷却至室温。然后，于约3-8℃冷却至少6小时时间。用惰性气体如氮气或氩气，在低压下(1-6磅)通过2微米和0.45微米的过滤器过滤得到的溶液。以类似的方式，通过0.2微米致热原保留过滤器过滤该溶液。对得到的滤液进行取样和检测总氮。然后，进行计算以确定定量加入滤液的冷却水的量，得到稀释的滤液用于注射，稀释滤液中的氮含量在大约165-210mg/100ml，最后体积为大约5升。然后，用浓盐酸(试剂级，ACS)或35％(w/v)的氢氧化钠调节pH至大约7.3-7.6的范围内。然后在低压下，惰性气体中，再通过0.2微米的过滤器过滤该稀释溶液。然后，于惰性气体的气氛中将最后的滤液充入2ml玻璃安瓿，并密封。收集安瓿，并于240°F和20-30磅的压力下进行最后的高压灭菌，进行大约30分钟。在进行灭菌操作过程后，冷却和洗涤装有产品R的安瓿。
对pH值、体积和分析校正值，所有的定量数据可加或减变化2.5％。
对包括患有爱滋病或HIV感染在内的上述乳头瘤病毒感染患者，不管是患者已出现出与乳头瘤病毒有关的症状、感染或抗体响应的情况，以无菌注射的剂型施用时，产品R的适当有效剂量为每天每公斤体重大约5微升至大约40微升，优选每天每公斤体重大约10微升至大约25微升。最优选产品R的施用量为每天每公斤体重大约30微升，施用大约一周，接着每天每公斤体重施用大约15微升，直到患者无症状，或不能检测出病毒。所需剂量可以适当的时间间隔，分成2、3或多次分剂量施用，通常在一天里采用相等的时间间隔。优选一天的剂量一次施用。
产品R可以任何适当的注射途径施用，这包括，但不限定为静脉、腹膜内、皮下、肌肉和真皮内注射等。优选的用药途径是肌肉注射。可以理解的是，优选的用药途径可根据，例如受者的症状和年龄变化。
产品R也可以与包括皮质类固醇、丙种球蛋白、葡萄糖、或维生素、抗病毒剂如干扰素或白介素等其它药物结合使用。
也可以将产品R作为药物制剂的一部分使用，优选单独使用，虽然产品R也可以在各自使用一种或多种其他药物时的大致相同的时间来使用。如果把产品R作为药物制剂的一部分使用，本发明的制剂至少包括上文定义的一种给药组分，以及一种或多种其可接受的载体，和选择地包括其他治疗组分。一种或多种载体必须是“可接受的”，其意义是能够与制剂中的其他组分相溶混，并且对受者无害。
本发明的制剂通常以单位剂量或多剂量药盒的形式存在，例如封装的安瓿和药瓶。
优选的单位剂量制剂是含有日剂量的，或含有每天的分剂量单位的，或给药成分的适当组分的剂量形式。
因此，在已经说明、描述和指明了应用于本发明优选实施方案的本发明的新特征的同时，可以理解的是，对本领域的熟练技术人员而言，各种形式上的省略、替代和变化，所述方法和操作的详细说明都没有背离本发明的实质。例如，将所有这些要素和/或方法步骤的结合是显而易见的变化，是按照基本相同的方式，进行基本相同的作用，达到基本相同的结果，这仍然是在本发明的范围之内。因此，其意图是，仅仅是要限制在本申请所附的权利要求书所指出的范围之内。
权利要求
1.对具有与乳头瘤病毒有关症状的患者进行治疗的方法，该方法包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用乳头瘤病毒治疗有效量的产品R。
2.权利要求1的方法，其中所述产品R的治疗有效量范围为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约5微升至大约40微升。
3.权利要求1的方法，其中所述产品R的治疗有效量范围为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约10微升至大约25微升。
4.权利要求1的方法，其中所述产品R的治疗有效量为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约30微升，施用大约一周，接着以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约15微升，直到患者无症状，或不能检测出病毒。
5.权利要求1的方法，其中所述患者是爱滋病患者或感染了HIV的患者。
6.对感染乳头瘤病毒，或带有乳头瘤病毒的患者进行治疗的方法，该方法包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用乳头瘤病毒治疗有效量的产品R。
7.权利要求6的方法，其中所述产品R的治疗有效量范围为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约5微升至大约40微升。
8.权利要求6的方法，其中所述产品R的治疗有效量范围为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约10微升至大约25微升。
9.权利要求6的方法，其中所述产品R的治疗有效量为以无菌注射剂型每天每公斤体重大约30微升，施用大约一周，接着以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约15微升，直到患者无症状，或不能检测出病毒。
11.权利要求6的方法，其中所述患者是爱滋病患者或感染了HIV的患者。
12.对具有乳头瘤病毒抗体的患者进行治疗的方法，该方法包括以无菌注射剂型给所述的患者经肠胃外施用乳头瘤病毒治疗有效量的产品R。
13.权利要求12的方法，其中所述产品R的治疗有效量范围为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约5微升至大约40微升。
14.权利要求12的方法，其中所述产品R的治疗有效量范围为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约10微升至大约25微升。
15.权利要求12的方法，其中所述产品R的治疗有效量为以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约30微升，施用大约一周，接着以无菌注射剂型每天每公斤体重施用大约15微升。
16.权利要求12的方法，其中所述患者是爱滋病患者或感染了HIV的患者。
全文摘要
本发明公开了应用产品R对具有与乳头瘤病毒有关症状的、或带有或感染了乳头瘤病毒,或具有乳头瘤病毒抗体的患者进行治疗的方法,产品R是肽—核酸制剂。
文档编号A61K9/08GK1251969SQ9880415
公开日2000年5月3日 申请日期1998年4月15日 优先权日1997年4月15日
发明者沙洛姆·Z·赫希曼 申请人:领先病毒研究公司