针对人乳头状瘤病毒的接种方法

针对人乳头状瘤病毒的接种方法
【专利摘要】本公开提供了包含来自一种或多种HPV类型的HPVVLPs组合包含TLR激动剂的佐剂的免疫原性组合物，其用于预防个体中的HPV感染或疾病的方法中，其中施用第一剂量的包含HPVVLPs和TLR激动剂的免疫原性组合物，随后施用第二剂量的包含来自一种或多种HPV类型的HPVVLPs、但不包含TLR激动剂的免疫原性组合物。
【专利说明】针对人乳头状瘤病毒的接种方法
[0001] 背景 本公开涉及人疫苗领域。更具体地，本公开涉及用于预防或治疗人乳头状瘤病毒（HPV) 感染或疾病的药物组合物和免疫原性组合物，和用于针对HPV感染或疾病接种的方法。
[0002] 乳头状瘤病毒是小的高物种特异性的DNA肿瘤病毒。人乳头状瘤病毒是感染基底 上皮（皮肤或粘膜）细胞的DNA病毒。己经描述了超过100种个别的人乳头状瘤病毒（HPV) 基因型。HPV通常对皮肤（例如HPV-1和HPV-2)或粘膜表面（例如HPV-6和HPV-11)的鳞 状上皮是特异性的，并且通常引起持续数月或数年的良性肿瘤（疣）。
[0003] 致癌性人乳头状瘤病毒（HPV)类型的持续感染是全球女性中癌症死亡第二最常 见原因宫颈癌的必然原因。国际间已有共识，即"高风险"基因型，包括基因型16、18、31、 33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68和73，可导致宫颈癌，并且与其它粘膜肛门生殖器癌 和头颈癌有关。全世界，HPV-16和HPV-18是主要的致癌型，累计占所有侵袭性宫颈癌病例 的70-80%以上。
[0004] 被称为"低风险"的其它基因型感染，可引起良性或轻度子宫颈组织改变和生长在 女性子宫颈、阴道、外阴和肛门以及男性阴茎、阴囊或肛门上的生殖器疣（尖锐湿疣）。
[0005] 它们还会引起需要外科手术的儿童和成人声带上的上皮生长（青少年呼吸道乳 头状瘤病或复发性呼吸道乳头状瘤病）。
[0006] 两种预防性HPV疫苗目前已在许多国家得到许可。两者均使用由个别HPV型的重 组L1衣壳蛋白构成的病毒样颗粒（VLP)以预防HPV-16和HPV-18宫颈癌前病变和癌症。
[0007] Cervarix? (GlaxoSmithKline Biologicals)含有使用杆状病毒表达载体系统在 粉纹夜蛾/72·)昆虫细胞基质中产生并用免疫刺激剂3-0-脱酰基-4'-单磷 酰脂质A (3D MPL，也称为MPL)和氢氧化铝盐配制的HPV-16和HPV-18 VLP。Gardasil? (Merck)含有在酵母酿酒酵母（S'accAaro/ffjces ce/wisiae)中产生并用无定形轻基磷酸 硫酸错盐（amorphous aluminium hydroxyphosphate sulphate salt)配制的 HPV-16 和 HPV-18 VLP。另外，Gardasil?含有涉及75-90%生殖器疣的来自非致癌型HPV-6和HPV-11 的VLP。对于两种疫苗，在随机临床试验中已证实对致癌型HPV-16和HPV-18感染以及相关 癌前病变的特异性保护作用。
[0008] 负责引发宫颈癌的致癌性HPV型的列表至少包括宫颈癌中发现的HPV类型16、18、 31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68和73值&11(1&￥1等人，2005;01111^等人，2006)。 [0009] 现有疫苗能够提供针对由这些HPV型中的一些引起的感染和/或疾病提供不同程 度的特异性保护。例如，Cervarix?提供了针对HPV类型33、31、45和51的交叉保护功效。 HPV-16/18和这四种类型引起约85%的宫颈癌；此外，存在HPV-33感染进展到宫颈病变的 特别高的风险，并且HPV-45在腺癌中过表达(Wheeler等人，2012)。然而，提供由Cervarix? 实现的针对宫颈癌的高度保护且还提供针对由其它HPV类型引起的感染或疾病一些保护 将是潜在有益的。提供针对宫颈癌的高度保护且还提供比现有疫苗提供的针对由HPV-6和 HPV-11引起的生殖器捷的改善的保护将是潜在有益的。
[0010] 现在已经发现，通过施用一个或多个剂量的包含佐剂MPL的HPV疫苗，在用不含 MPL佐剂的不同HPV疫苗的接种方案中，可以实现某些优点。例如，与仅使用铝佐剂的接种 方案相比，可以增加针对疫苗中存在的某些HPV类型，诸如HVP 18的免疫应答。当首先施 用含有MPL的疫苗时，特别、但不排他地看到这一点。可选地或额外地，与仅使用铝佐剂化 的疫苗的接种相比，通过首先施用含有MPL的疫苗、随后施用铝佐剂化的疫苗，针对MPL铝 佐剂化的疫苗中不存在、但在铝佐剂化的疫苗中存在的某些HPV类型的交叉反应免疫应答 可以是相等的或增加的。
[0011] 概述 本公开涉及含有TLR激动剂的HPV疫苗增强针对HPV的接种的用途。本公开进一步涉 及在接种方案中以特定顺序使用包括含TLR激动剂疫苗的不同HPV疫苗。具体而言，本公 开涉及通过在采用不含TLR激动剂的HPV疫苗的接种方案中使用含有TLR激动剂的HPV疫 苗而改善针对某种HPV类型的应答。本公开进一步涉及以下接种方案，其采用引发疫苗，所 述引发疫苗诱导针对所述引发疫苗中不存在的一种或多种HPV类型的交叉反应性免疫应 答，和随后的加强疫苗，所述加强疫苗含有所述引发疫苗中不存在的一种或多种HPV类型， 并且对其的交叉反应性应答已由所述引发疫苗诱导。针对不存在的HPV类型的免疫应答被 加强疫苗加强至以下水平，所述水平至少等于且可高于相等数目剂量的单独的加强疫苗诱 导的免疫应答。使用不同的引发和加强疫苗还使得能够在接种方案中使用不同的疫苗。
[0012] 在一个方面，本发明提供了包含组合含有TLR激动剂的来自一种或多种HPV类型 的HPV VLP的佐剂的第一免疫原性组合物，其用于在预防个体中的HPV感染或疾病的方法 中的用途，所述方法包括： (i) 将至少一个剂量的第一免疫原性组合物施用于个体；随后 (ii) 将至少一个剂量的包含来自一种或多种HPV类型的HPV VLP的第二免疫原性组 合物施用于个体，所述第二免疫原性组合物不含TLR激动剂； 其中所述第一免疫原性组合物增加了针对第二免疫原性组合物中存在、且第一免疫原 性组合物中不存在的HPV类型的类型特异性免疫应答或交叉反应性免疫应答中的至少一 种。
[0013] 在进一步方面，本发明提供了包含组合含有铝盐但不含TLR4激动剂的佐剂的来 自至少一种HPV类型的HPV VLP的免疫原性组合物，其用于在预防个体中的HPV感染或疾 病的方法中使用，所述方法包括： (i) 将至少一个剂量的包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自一种或多种HPV类型的 HPV VLP的第一免疫原性组合物施用于个体；且 (ii) 将至少一个剂量的第二免疫原性组合物施用于个体，所述第二免疫原性组合物 是包含组合铝盐的HPV VLP无 TLR4激动剂的免疫原性组合物； 其中所述第一免疫原性组合物增加了针对第二免疫原性组合物中存在、且第一免疫原 性组合物中不存在的HPV类型的类型特异性免疫应答或交叉反应性免疫应答中的至少一 种。
[0014] 在另一个方面，本发明提供了用于预防个体中的HPV感染或疾病的方法，所述方 法包括： (i)将至少一个剂量的包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自一种或多种HPV类型的 HPV VLP的第一免疫原性组合物施用于个体；且 (ii)将至少一个剂量的包含来自一种或多种HPV类型的HPVVLP的第二免疫原性组 合物施用于个体，第二免疫原性组合物不含TLR激动剂； 其中所述第一免疫原性组合物增加了针对第二免疫原性组合物中存在、且第一免疫原 性组合物中不存在的类型的类型特异性免疫应答或交叉反应性免疫应答中的至少一种。 [0015]在另一个方面，本发明提供了试剂盒，所述试剂盒包含： (i) 包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自至少一种hpv类型的VLP的第一免疫原性 组合物；和 (ii) 包含来自至少一种HPV类型的VLP且不含TLR激动剂的第二免疫原性组合物。 [0016]在另一个方面，本发明提供了用于诱导人的针对HPV的抗体的方法，所述方法包 括将本文所述的第一和第二免疫原性组合物施用于人。
[0017]在另一个方面，本发明提供了用于诱导人中针对HPV的中和抗体的方法,所述方 法包括将本文所述的第一和第二免疫原性组合物施用于人。此类方法还可诱导交叉中和抗 体。
[0018]在另一个方面，本发明提供了用于诱导人中针对HPV的细胞免疫的方法，所述方 法包括将本文所述的第一和第二免疫原性组合物施用于人。
[0019] 在另一个方面，本发明提供了用于诱导人中针对HPV的中和抗体和细胞免疫的方 法，所述方法包括将本文所述的第一和第二免疫原性组合物施用于人。此类方法还可诱导 交叉中和抗体。
[0020] 在进一步方面，本公开涉及包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自一种或多种 HPV类型的HPV VLP的第一免疫原性组合物，其用于在增强HPV感染或疾病的预防的方法中 的用途，其中所述方法包括将一个或多个剂量的免疫原性组合物施用于个体，所述个体已 经接受一个或多个剂量的包含来自一种或多种HPV类型的HPV VLP、但不包含TLR激动剂 的第二免疫原性组合物。
[0021] 附图简述 图1-20和22-33显示了在用具有Cervarix?和Gardasil?的不同接种方案免疫后的 小鼠中，分别通过ELISA和假病毒中和测定法测量的小鼠中的总体和中和抗体应答。这些 是三次独立实验的结果，实施例1的数据分组为图^6,实施例2的数据分组为图20, 且实施例3的数据分组为图22-33。图21显示形成实施例2的部分的保护测定法的结果， 且图34-38显示形成实施例3的部分的保护测定法的结果。
[0022] 进一步详情如下： 图1显示总抗HPV 16 LI VLP抗体应答。
[0023]图2显示总抗HPV -16应答的统计分析的总结。
[0024] 图3显示中和抗HPV -16 LI VLP抗体应答。
[0025]图4显示中和抗HPV 16应答的统计分析的总结。
[0026] 图5显示总抗HPV 18 LI VLP抗体应答。
[0027]图6显示总抗HPV -18应答的统计分析的总结。
[0028] 图7显示中和抗HPV -18 LI VLP抗体应答。
[0029]图8显示中和抗HPV 18应答的统计分析的总结。
[0030] 图9显示总抗HPV -6 LI VLP抗体应答。
[0031]图10显示总抗HPV 6抗体应答的统计分析的总结。
[0032]图11显示中和抗HPV -6 LI VLP抗体应答。
[0033]图12显不中和抗HPV 6抗体应答的统计分析的总结。
[0034]图13显示总抗HPV -11 LI VLP抗体应答。
[0035]图14显示总抗HPV -11抗体应答的统计分析的总结。
[0036] 图I5显示中和抗HPV -11 LI VLP抗体应答。
[0037] 图16显示中和抗HPV 11抗体应答的统计分析的总结。
[0038]图17显示总抗HPV-18抗体应答（实施例2)。 °
[0039] 图18显示中和抗HPV-18抗体应答（实施例2)。
[0040] 图19显示总抗HPV-11抗体应答（实施例2)。
[0041] 图20显示中和抗HPV-11抗体应答（实施例2)。
[0042]图21显不头施例2中的阴道内攻击实验之后小鼠中II后1个月的比较保护百分 比和生物发光信号。
[0043] 图22显示在1M ΡΙΠ 的总抗HPV-18 LI VLP抗体（实施例3)。
[0044] 图23显示在6M PIII的总抗HPV-18 LI VLP抗体（实施例3)〔
[0045] 图24显示在1M ΡΠΙ的中和抗HPV-18 LI VLP抗体（实施例3)。
[0046] 图25显示在6M PIII的中和抗HPV-18 LI VLP抗体（实施例3)。
[0047] 图26显示在1M PIII的总抗HPV-6 LI VLP抗体（实施例3)。
[0048] 图27显示在枷PIII的总抗HPV-6 LI VLP抗体（实施例3)。
[0049] 图28显示在1M PIII的中和抗HPV-6 LI VLP抗体（实施例3)。
[0050] 图29显示在6M PIII的中和抗HPV-6 LI VLP抗体（实施例3)。
[0051] 图30显示在1Μ PIII的总抗HPV-11 LI VLP抗体（实施例3)。
[0052] 图31显示在6M PIII的总抗HPV-11 LI VLP抗体（实施例3)。
[0053] 图32显示在1M PIII的中和抗HPV-11 LI VLP抗体（实施例3)。
[0054] 图33显示在6M PIII的中和抗HPV-11 LI VLP抗体（实施例3)。
[0055]图34显示在III后6M的比较保护百分比和生物发光信号（辐射，Ph/Sec/cm2) (实施例3)。
[0056] 图35显示在III后1M的比较保护百分比和生物发光信号（辐射，Ph/Sec/cm2) (实施例3)。
[0057] 图36显示在III后册的比较保护百分比和生物发光信号（辐射，Ph/Sec/cm2) (实施例3)。
[0058] 图37显示在III后1M的比较保护百分比和生物发光信号（辐射，Ph/Sec/cm2) (实施例3)。
[0059] 图38显示在ΙΠ 后6M的比较保护百分比和生物发光信号（辐射，Ph/Sec/cm2) (实施例3)。
[0060] 详述 本发明首次描述了含有TLR激动剂的HPV疫苗在还接受不含TLR激动剂的HPV疫苗的 个体中增加针对所述疫苗中存在的一种或多种HPV类型、特别是对于宫颈癌的高风险HPV 类型或引起生殖器疣的低风险HPV类型的免疫应答的用途。本发明进一步描述了含有TLR 激动剂的HPV疫苗生成针对第二种不含TLR激动剂的疫苗中施用的HPV类型的交叉反应性 免疫应答的用途。更具体地，本发明描述了通过施用不同的引发和加强疫苗而预防HPV相 关疾病或感染的方法，且其中所述引发疫苗诱导针对所述引发疫苗中不存在、但所述加强 疫苗中存在的HPV类型的免疫应答。本发明提供了在疫苗时间表中用一种疫苗替代另一种 疫苗,而不降低针对一种疫苗中不存在的HPV类型的免疫应答，且更重要地，同时改善针对 某些HPV类型的免疫应答的可能性。
[0061] 在一个实施方案中，第一免疫原性组合物包含HPV16和/或HPV 18 VLP。在一个 具体实施方案中,第一免疫原性组合物仅包含HPV 16和HPV 18 VLP，且不含其它HPV VLP。 [0062] 在一个实施方案中，第一免疫原性组合物增强了针对HPV 16或HPV 18或HPV 16 和HPV 18两者的类型特异性免疫应答。
[0063]当与施用相等数目剂量的仅第二免疫原性组合物（即没有用TLR佐剂化的组合 物）的针对具体HPV类型的免疫应答相比时，类型特异性免疫应答的增加可以是免疫应答 的增加。
[0064] 在一个实施方案中，第一免疫原性组合物生成针对第二免疫原性组合物中存在的 一种或多种高风险或低风险HPV类型的交叉反应性免疫应答。
[0065] 负责宫颈癌的所谓的"高风险"HPV类型是基因型16、18、31、33、35、39、45、51、52、 56、58、59、66、68和73,但将被认识到，随着发现更多HPV类型，该列表可以随着时间推移 被添加。所谓的"低风险"粘膜HPV类型是具有低致癌风险的类型，诸如引起生殖器疣的HPV 6和11，与寻常疣相关的类型，诸如与良性皮肤疣相关的HPV 2和3以及HPV 76。在一个实 施方案中，本发明中使用的组合物中存在的低风险HPV类型是HPV 6或HPV 11或HPV 6 和 HPV 11。
[0066] 在一个实施方案中，与当施用相等数目剂量的仅第二免疫原性组合物时对第二免 疫原性组合物中存在、但第一免疫原性组合物中不存在的类型的免疫应答相比，第一免疫 原性组合物增加了针对该类型的交叉反应性免疫应答。
[0067] 针对具体HPV类型生成的免疫应答可以通过对于针对该HPV类型的特异性抗体的 合适测定法来测量，例如ELISA和/或假中和测定法，诸如在本文实施例中或Harper等人 2004, Dessy等人2008或Pastrana等人2004中所述的那些。
[0068] 在一个实施方案中，第二免疫原性组合物包含HPV 6、HPV 11、HPV I6和HPV 18 VLP，且含有或不含其它HPV VLP。此类其它HPV类型可以包括额外的高风险致癌HPV类型， 诸如HPV 31、HPV 33、HPV 45、HPV 52和HPV 58中的一种或多种，其可以以任何组合存在。 在具体实施方案中，HPV 6、11、16、18、31、33、45、52和58 VLP存在于9价HPV疫苗的第二 免疫原性组合物中。
[0069] 如本文中所使用，引发组合物是在加强组合物之前施用的免疫原性组合物。
[0070] 类似地，加强组合物是在引发组合物之后施用的免疫原性组合物。
[0071] 本文所述的引发和加强组合物是免疫原性组合物，即它们是适于施用于人或动物 对象（例如，在实验设置下）的能够引发特异性免疫应答，例如针对病原体（诸如人乳头状 瘤病毒）的特异性免疫应答的物质的组合物。因此，免疫原性组合物包括一种或多种抗原 (例如，病毒的抗原亚基，例如其多肽）或抗原表位。免疫原性组合物还可包含一种或多种 能够引发或提高免疫应答的其它组分，诸如赋形剂、载体和/或佐剂。在某些情况下，施用 免疫原性组合物以引发保护对象免于由病原体引起的症状或状况的免疫应答。在一些情况 下，在对象暴露于病原体后，通过抑制病原体（例如，人乳头状瘤病毒）的复制来预防（或 治疗，例如，减轻或改善）由病原体引起的症状或疾病。例如，在本公开的背景下，旨在施用 于对象或对象群体目的在于引发针对人乳头状瘤病毒的保护性或缓和性免疫应答的免疫 原性组合物的某些实施方案是疫苗组合物或疫苗。
[0072] 术语"疫苗"指包含能够在个体诸如人中激发免疫应答的免疫原性组分的组合物， 其中所述组合物任选地含有佐剂。合适地，用于HPV的疫苗引发针对由一种或多种HPV类 型引起的偶发感染（incident infection)、或持续感染、或细胞学异常诸如ASCUS、CIN1、 CIN2、CIN3、或宫颈癌的保护性免疫应答。
[0073] 如本文所述的免疫原性组合物的剂量可以是人剂量。术语"人剂量"指体积适合 于人使用的剂量。人剂量包含适合于在人中生成免疫应答的量的抗原。通常，人剂量的体 积是体积在0. 3和1. 5 ml之间的液体。在一个实施方案中，人剂量是〇. 5 ml。在进一步实 施方案中，人剂量高于〇.5 1111，例如0.6、0.7、0.8、0.9或11111。在进一步实施方案中，人剂 量在1 ml和1. 5 ml之间。
[0074] 由一种HPV类型生成的针对另一种HPV的免疫应答是交叉反应性免疫应答。如本 文所述的交叉反应性免疫应答的存在与否可以通过用于测量针对相关HPV类型、特别针对 相关HPV类型的VLP的特异性抗体的任何合适的测定法来检测和测量。用于筛选抗体的方 法是本领域众所周知的。ELISA可用于评价抗体的交叉反应性，例如如本文中实施例中所述 的ELISA。合适的ELISA还描述于Harper等人2004(参见网络附件）。交叉反应性应答还 可以是交叉中和的，且可以使用合适的测定法诸如假病毒中和测定法，例如如本文中实施 例中所述，测试抗体的中和和交叉中和特性。合适的假病毒中和测定法描述于Dessy等人 2008 和 Pastrana 等人 2004。
[0075] 本文所述的典型的第一和第二免疫原性组合物通常包括至少一种药学可接受的 稀释剂或载体和任选地（对于第二免疫原性组合物）佐剂。
[0076] "佐剂"是以非特异性方式增强免疫应答的产生的试剂。常见佐剂包括抗原吸附在 其上的无机物（明矾、氢氧化铝、磷酸铝）的悬浮液；乳液，包括油包水和水包油乳液（及其 变体，包括复合乳液和可逆乳液）、脂糖（liposaccharide)、脂多糖、免疫刺激性核酸（诸如 CpG寡核苷酸）、脂质体、Toll样受体激动剂（具体地TLR2、TLR4、TLR7/8和TLR9激动剂） 和此类组分的各种组合。
[0077] 在一个实施方案中，第一或第二免疫原性组合物或两者中的VLP可以与铝组合使 用，并且可以被吸附或部分吸附到铝佐剂(例如氢氧化铝，或无定形羟基磷酸硫酸铝盐）上。 [0078] 在一个实施方案中，第一免疫原性组合物中的TLR激动剂是脂质A的无毒衍生物， 诸如单磷酰脂质A或更具体地3-0-脱酰-4'-单磷酰脂质A (3D-MPL)或QSW。在一个实施 方案中，MPL与氢氧化铝组合使用。
[0079] 在一个实施方案中，第二免疫原性组合物包含铝盐，例如无定形羟基磷酸硫酸铝 盐。
[0080] 当将VLP吸附至含有铝的佐剂上时，可以将VLP吸附至铝佐剂，然后混合VLP以形 成最终的疫苗产品。
[0081] 因此，在一个实施方案中，引发组合物包含铝盐。
[0082] 可以将VLP吸附或部分吸附到铝盐上。在一个具体实施方案中，佐剂是氢氧化铝 和 3D MPL。
[0083] 包含此类佐剂的本公开的组合物可以如例如W0 00/23105 (通过引用并入本文） 中所述进行制备。
[0084] 在一个实施方案中，第二免疫原性组合物包含铝盐。可以将VLP吸附或部分吸附 到铝盐上。在一个具体实施方案中，铝盐是无定形羟基磷酸硫酸铝盐。
[0085] 在一个具体实施方案中，第一免疫原性组合物包含氢氧化铝和3D MPL，且第二免 疫原性组合物包含无定形羟基磷酸硫酸铝盐。
[0086] 在一个实施方案中，用于与本文所述的第一免疫原性组合物中的HPV抗原使用的 TLR激动剂是无毒细菌脂多糖衍生物。如已经描述，合适的脂质A无毒衍生物的实例是单磷 酰脂质A或更具体而言是3-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)。3D-MPL由GlaxoSmithKline Biologicals N.A.以名称MPL销售，且在本文件通篇中称为MPL或3D-MPL。参见例如， 美国专利号 4,436,727; 4,877,611; 4,866,034 和 4,912,094。30-]\0^主要促进具有 IFN-γ (Thl)表型的CD4+T细胞应答。3D-MPL可以根据GB2220211 A中公开的方法生产。 从化学上来说，它是具有3、4、5或6个酰基化链的3-脱酰基单磷酰脂质A的混合物。在本 发明的组合物中，可以使用小颗粒3D-MPL。小颗粒3D-MPL的颗粒大小使它能够经0. 22 μ m 滤器过滤除菌。W094/21292中描述了此类制品。
[0087] 在其它实施方案中，脂多糖可以是如美国专利号6, 005, 099和欧洲专利号0 729 473 B1中描述的β (1-6)葡萄糖胺二糖。本领域技术人员根据这些参考文献中的教导，很 容易能够生产各种脂多糖，诸如3D-MPL。除了以上提到的免疫刺激剂（其与LPS或MPL或 3D-MPL结构相似），作为以上MPL结构的亚部分的酰基化单糖和二糖衍生物也是合适的佐 齐!J。在其它实施方案中，佐剂是脂质Α的合成衍生物，其中的一些为TLR-4激动剂，并包括 但不限于： 0M174 (2-脱氧-6-0-[2-脱氧-2-[(R)-3-十二酰基氧基十四酰基氨基]-4-0-膦酰 基- β -D-吡喃葡萄糖基]-2- [ (R) -3-羟基十四酰基氨基]-β -D -吡喃葡萄糖基二氢磷酸 酯）（W0 95/14026) 0Μ 294 DP (3S，9R)-3-[(R)-十二酰基氧基十四酰氨基]-4-氧代-5-氮 杂-9(R)-[(R)-3_羟基十四酰基氨基]癸烷-1，10-二醇1，10_双（二氢磷酸酯）（W0 99/64301 和 W0 00/0462) 0M 197MP-Ac DP(3S-，9R)-3-[(R)-十二酰基氧基十四酰基氨基]-4-氧代-5-氮 杂-9-[ (R) -3-羟基十四酰基氨基]癸烷-1，10-二醇，1-二氢磷酸酯10-(6-氨基己酸酯） (W0 01/46127)。 t〇〇88] 其它可以使用的TLR4配体是烷基葡萄糖胺磷酸酯（AGP)，诸如W0 98/5〇399或美 国专利号6, 303, 347 (还公开了 AGP的制备过程）中公开的那些，合适的是RCM7或RC529 或者美国专利号6, 764, 840中公开的AGP的药学可接受的盐。一些AGP是TLR4激动剂，一 些是TLR4拮抗剂。两种都被认为可以作为佐剂使用。
[0089] 其它能够通过TLR-4引起信号传导应答（Sabroe等人，JI 2〇03 P1630-5)的合适 的TLR-4配体是例如，来自革兰氏阴性细菌的脂多糖及其衍生物或者它们的片段，特别是 LPS的无毒衍生物（诸如3D-MPL)。其它合适的TLR激动剂是：热休克蛋白（HSP) 1〇、6〇、65、 7〇、75或90 ;表面活性蛋白A、透明质酸寡糖、硫酸肝素片段、纤连蛋白片段、纤维蛋白原肽 和b-防御素_2以及胞壁酰二肽（MDP)。在一个实施方案中，TLR激动剂是HSP 60、70或 90 〇
[0090] 其它合适的TLR-4配体描述于WO 2003/011223和WO 2003/099195中，诸如 W02003/011223的第4-5页或者W02003/099195的第3-4页公开的化合物I、化合物II和 化合物 III，特别是 W02003/011223 中公开为 ER803022、ER803058、ER803732、ER804053、 ER804〇57、ER804〇58、ER804059、ER8〇4442、ER 8〇468〇 和 ER804764 的那些化合物。例如一种 合适的TLR-4配体是ER804057。
[0091]在本发明的一个实施方案中，使用了能够通过TLR-1引起信号传导应答的TLR 激动剂。合适地，能够通过TLR-1引起信号传导应答的TLR激动剂选自：三酰基化脂肽 (LPs);酚溶性调节蛋白；结核分枝杆菌 LP;模拟细菌脂蛋白乙酰化氨基端的s-(2,3_双 (掠桐酸基氧基）- (2-RS)-丙基）-N-掠榈醜基-(R) -Cys- (S) -Ser- (S) -Lys (4) -0H,三盐酸 (卩81113〇丫8)]^：);和来自伯氏疏螺旋体（50/7^_// <3加_/'识/0_?'/(92/)的〇邓4 1^。
[0092]在替代实施方案中，使用了能够通过TLR-2引起信号传导应答的TLR激动 剂。合适地，能够通过TLR-2引起信号传导应答的TLR激动剂是来自结核分枝杆菌(# 伯氏疏螺旋体或苍白螺旋体（r押从'泣您）的脂蛋白、肽聚糖、细菌脂肽； 来自包括金黄色葡萄球菌aurem)的种的肽聚糖；脂磷壁酸、甘露糖醛 酸、奈瑟氏菌孔蛋白、细菌纤毛、耶尔森氏菌毒力因子、CMV病毒粒、麻疹病毒血凝素以及来 自酵母的酵母聚糖中的一种或多种。在替代实施方案中，使用了能够通过 TLR-3引起信号 传导应答的TLR激动剂。合适地，能够通过TLR-3引起信号传导应答的TLR激动剂是双链 RNA(dsRNA)或聚肌胞苷酸（P〇ly 1C)，后者是与病毒感染相关联的分子核酸模式。在替代 实施方案中，使用了能够通过TLR-5引起信号传导应答的TLR激动剂。合适地，能够通过 TLR-5引起信号传导应答的TLR激动剂是细菌鞭毛蛋白。在替代实施方案中，使用了能够 通过TLR-6引起信号传导应答的TLR激动剂。合适地，能够通过TLR-6引起信号传导应答 的TLR激动剂是分枝杆菌脂蛋白、二酰基化lp和酚溶性调节蛋白。其它TLR6激动剂在W0 2〇〇3/04：3572中有描述。在替代实施方案中，使用了能够通过TLR- 7引起信号传导应答的 TLR激动剂。合适地，能够通过TLR-7引起信号传导应答的TLR激动剂是单链RNA (ssRNA)、 洛索立宾（loxoribine，位置N7和C8的鸟嘌呤核苷类似物）或咪唑并喹啉化合物或其衍 生物。在一个实施方案中，TLR激动剂是咪喹莫特（imiquimoci)。其它TLR7激动剂在W0 2002/085905中有描述。
[0093]用于剂量中的3D-MPL的量合适地能够在人中增强针对抗原的免疫应答。具体地， 相比于未佐剂化的组合物，或相比于用另一种量的3D MPLK剂化的组合物，合适的3D MPL 量改善所述组合物的免疫效力，同时从反应原性概况上是可接受的。疫苗的每个人剂量中 3D-MPL的量可以是，例如卜200 yg之间，或10-100 yg之间，或2〇-8〇 μ§之间，例如25 U g/剂量，或40_6〇 μ g之间，例如50 μ g/剂量。
[0094]本文所述的免疫原性组合物还可以包含作为稳定剂的铝或铝化合物。
[0095]在一个实施方案中，施用一个剂量的第一免疫原性组合物，随后施用一个或多个 剂量的第二免疫原性组合物，例如，一个或两个或三个剂量的第二免疫原性组合物。
[0096]在另一个实施方案中，施用两个剂量的第一免疫原性组合物，随后施用一个或多 个剂量的第二免疫原性组合物，例如，一个或两个剂量的第二免疫原性组合物。
[0097] 在具体实施方案中，施用一个剂量的第一免疫原性组合物，随后施用两个剂量的 第二免疫原性组合物，或施用两个剂量的第一免疫原性组合物，随后施用一个剂量的第二 免疫原性组合物。
[0098] 在一个具体实施方案中，施用不超过两个剂量的第一免疫原性组合物。
[0099] 对于如本文所述的试剂盒，每个组合物的剂量数可以如所述用于用途或方法。
[0100]因此，本文所述的方法和用途和试剂盒可以采用单一剂量的第一免疫原性组合 物，或单一剂量的第二免疫原性组合物，或者单一剂量的第一免疫原性组合物和第二免疫 原性组合物两者。
[0101] 在一个实施方案中，第一和第二免疫原性组合物包含以20 Pg或更多/剂量的量 的HPV VLP。每个剂量可以含有，例如，30 Pg每种VLP，或40 Pg每种VLP，或60 Pg每种 VLP。不同的VLP可以相同或不同的量存在。第一和第二免疫原性组合物可以包含不同量 的相同HPV VLP。
[0102] 在一个实施方案中，第一免疫原性组合物包含以20 Kg/剂量的量的HPV 16和HPV 18 VLP。
[0103] 在一个实施方案中，第二免疫原性组合物分别包含以2(^g、40 Pg、40 Pg和20 Mg/剂量的量的 HPV 6、HPV 11、HPV 16 和 HPV 18 VLP。
[0104] 免疫原性组合物的施用可以遵循对于2个或3个或更多个剂量接种的任何时间 表，例如，对于2剂量疫苗的0、1个月时间表，〇、2个月时间表，0、3个月时间表，〇、4个月时 间表，0、5个月时间表或〇、6个月时间表；对于3剂量疫苗的0、1、6个月时间表，〇、2、6个月 时间表，〇、3、6个月时间表，0、4、6个月时间表。因此，第二剂量可以在第一剂量后例如一个 月或两个月或三个月或四个月或五个月或六个月或最多十二个月或最多二十四个月施用。 类似地，第三剂量可以在第二剂量后一个月或两个月或三个月或四个月或五个月或六个月 或最多十二个月或最多二十四个月施用。
[0105] HPV VLP和用于产生VLP的方法是本领域中众所周知的。VLP通常由病毒的HPV L1 蛋白构建，并且还可以包括L2蛋白。对于VLP，参见例如W09420137、US5985610、W09611272、 US6599508B1、US6361778B1、EP595935。
[0106] 在本文中所描述的任何实施方案中，HPV VLP可以包含HPV L1蛋白或其免疫原性 片段，其具有或不具有另一种蛋白或肽，诸如L2蛋白或肽。
[0107] 在一个实施方案中，第一免疫原性组合物中的VLP由其中插入L2的一个或多个表 位的HPV L1蛋白或其免疫原性片段构成，例如诸如通过引用并入本文的W0 2010/149752 中所述。在一个具体实施方案中，第一免疫原性组合物包含此类插入L2的一个或多个表位 的HPV LI VLP，连同仅含HPV L1的VLP，例如HPV 16和仅含HPV 18 L1的VLP连同L1中 插入L2的一个或多个表位的HPV LI VLP的组合。
[0108]在另一个实施方案中，第一免疫原性组合物中的VLP是仅含L1的VLP，其是包含 L1或其免疫原性片段且不含L2的VLP。
[0109] 在一个实施方案中，第二免疫原性组合物中的VLP是仅含L1的VLP，其包含L1或 其免疫原性片段且不含L2。
[0110] 在一个实施方案中，第一免疫原性组合物中的VLP包含截短的L1。
[0111] 在一个实施方案中，第二免疫原性组合物中的VLP包含全长的Ll。
[0112] HPV L1的合适的免疫原性片段包括L1的截短、缺失、取代、或插入突变体。此类免 疫原性片段可以能够引起免疫应答，所述免疫应答能够识别来自衍生L1蛋白的HPV类型的 L1蛋白诸如病毒颗粒或VLP形式的L1。
[0113] 可以使用的免疫原性L1片段包括截短的L1蛋白。在一个实施方案中，截短除去核 定位信号，而且任选地还除去LI C端区中的DNA结合样式。在另一个方面，截短是C端截 短。在进一步方面，C端截短除去少于50个氨基酸诸如少于40个氨基酸。在L1来自HPV 16的情况中，则在另一个方面，C端截短自HPV 16L1的羧基端除去34个氨基酸。在L1来 自HPV 18的情况中，则在进一步的方面，C端截短自HPV 18 L1的羧基端除去35个氨基酸。 如此，截短的L1蛋白可以是与野生型L1相比在C端截短的，以便除去核定位信号，而且任 选地还有DNA结合样式，这可以通过例如从蛋白的C端末端除去少于50或少于40个氨基 酸来进行。来自HPV 16和HPV 18的L1的此类截短的蛋白的例子在下文以SEQ ID N〇:l 和2给出。截短的L1蛋白还记载于US 6, 060, 324、US 6, 361, 778、和US 6, 599, 508,通过 引用并入本文。
[0114] 在一个实施方案中，HPV 16 L1氨基酸序列是以下序列：（SEQ ID NO: 1)
【权利要求】
1. 第一免疫原性组合物，其包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自一种或多种HPV类 型的HPV VLP,其用于在预防个体中的HPV感染或疾病的方法中的用途，所述方法包括： (i) 将至少一个剂量的所述第一免疫原性组合物施用于所述个体；随后 (ii) 将至少一个剂量的包含来自一种或多种HPV类型的HPVVLP的第二免疫原性组 合物施用于所述个体，所述第二免疫原性组合物不包含TLR激动剂； 其中所述第一免疫原性组合物增加了针对所述第二免疫原性组合物中存在、且所述第 一免疫原性组合物中不存在的HPV类型的类型特异性免疫应答或交叉反应性免疫应答中 的至少一种。
2. 免疫原性组合物，其包含组合含有铝盐但不含TLR4激动剂的佐剂的来自至少一种 HPV类型的HPV VLP，其用于在预防个体中的HPV感染或疾病的方法中的用途，所述方法包 括： (i) 将至少一个剂量的包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自一种或多种HPV类型的 HPV VLP的第一免疫原性组合物施用于所述个体；且 (ii) 将至少一个剂量的第二免疫原性组合物施用于所述个体，所述第二免疫原性组 合物是包含HPV VLP且不含TLR4激动剂的免疫原性组合物； 其中所述第一免疫原性组合物增加了针对第二免疫原性组合物中存在、且第一免疫原 性组合物中不存在的HPV类型的类型特异性免疫应答或交叉反应性免疫应答中的至少一 种。
3. 用于预防个体中的HPV感染或疾病的方法，所述方法包括： (i) 将至少一个剂量的包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自一种或多种HPV类型的 HPV VLP的第一免疫原性组合物施用于所述个体；且 (ii) 将至少一个剂量的包含来自一种或多种HPV类型的HPVVLP的第二免疫原性组 合物施用于所述个体，所述第二免疫原性组合物不包含TLR激动剂； 其中所述第一免疫原性组合物增加了针对第二免疫原性组合物中存在、且第一免疫原 性组合物中不存在的类型的类型特异性免疫应答或交叉反应性免疫应答中的至少一种。
4. 根据权利要求1_3中任一项的用途或方法，其中所述第一免疫原性组合物包含HPV 16 或 HPV 18 VLP、或 HPV 16 和 HPV 18 VLP。
5. 根据权利要求4的用途或方法，其中所述第一免疫原性组合物增加了针对Hpv 16或 HPV 18或HPV 16和HPV 18两者的类型特异性免疫应答。
6. 根据权利要求1_5中任一项的用途或方法，其中与当施用相等数目剂量的仅所述第 二免疫原性组合物时针对该HPV类型的免疫应答相比，所述第一免疫原性组合物增加了类 型特异性免疫应答。
7·根据权利要求1_6中任一项的用途或方法，其中所述第一免疫原性组合物生成针对 所述第二免疫原性组合物中存在的一种或多种高风险或低风险HPV类型的交叉反应性免 疫应答。 8_根据权利要求1_7中任一项的用途或方法，其中所述第一免疫原性组合物生成针对 所述第二免疫原性组合物中存在的一种或多种低风险HPV类型的交叉反应性免疫应答。
9·根据权利要求1-8中任一项的用途或方法，其中所述第一免疫原性组合物生成针对 HPV 6的交叉反应性免疫应答，且所述第二免疫原性组合物包含jpv 6 VLP。
10.根据权利要求1-9中任一项的用途或方法，其中所述第一免疫原性组合物生成针 对HPV 11的交叉反应性免疫应答，且所述第二免疫原性组合物包含ΗΡν n vLP。 >11·根据权利要求i-K)中任一项的用途或方法，其中与当施用相等数目剂量的仅所述 第二免疫原性组合物时针对所述第二免疫原性组合物中存在、但所述第一免疫原性组合物 中不存在的类型的免疫应答相比，所述第一免疫原性组合物增加了针对该类型的交叉反应 性免疫应答。
12.根据权利要求1-11中任一项的用途或方法，其中所述第二免疫原性组合物包含 邢￥6、11、16、和18￥1^和任选地其它类型。 I3·根据权利要求1-12中任一项的用途或方法，其中所述第二免疫原性组合物包含 HPV 6、11、16、18、31、45、52 和 58。
14.根据权利要求1-13中任一项的用途或方法，其中所述第一免疫原性组合物包含 TLR4激动剂。 I5·根据权利要求14的用途或方法，其中所述TLR4激动剂是MPL。
16·根据权利要求I5的用途或方法,其中所述第一免疫原性组合物包含MPL和铝盐。
17. 根据权利要求ie的用途或方法,其中所述铝盐是氢氧化铝。
18. 根据权利要求1-Π 中任一项的用途或方法，其中所述第二免疫原性组合物包含铝 盐。
19·根据权利要求1S的用途或方法，其中所述第二免疫原性组合物中的铝盐是羟基磷 酸硫酸铝盐。
20. 根据权利要求1-19中任一项的方法或用途，其中施用两个剂量的所述第一免疫原 性组合物，随后施用一个或多个剂量的所述第二免疫原性组合物。
21. 根据权利要求1-19中任一项的用途或方法，其中施用一个剂量的所述第一免疫原 性组合物，随后施用一个或两个或更多个剂量的所述第二免疫原性组合物。
22. 根据权利要求20或21的用途或方法，其中施用三个剂量，且与当仅施用三个剂量 的所述第二免疫原性组合物时针对所述第一和第二免疫原性组合物两者中存在的一种或 多种HPV类型的免疫应答相比，针对该HPV类型的免疫应答得到增加。
23. 根据权利要求20或22的用途或方法，其中施用三个剂量，且与当仅施用三个剂量 的所述第二免疫原性组合物时针对仅在所述第二免疫原性组合物中存在的一种或多种HPV 类型的免疫应答相比，针对该HPV类型的免疫应答更高。
24. 根据权利要求1-23中任一项的用途或方法，其中所述HPV VLP包含L1或其免疫原 性片段。
25. 根据权利要求1-24中任一项的用途或方法，其中所述HPV VLP是仅含L1的VLP。
26. 试剂盒，所述试剂盒包含： (i) 包含组合含有TLR激动剂的佐剂的来自至少一种Hpv类型的VLP的第一免疫原性 组合物；和 (ii) 包含来自至少一种HPV类型的VLP且不包含TLR激动剂的第二免疫原性组合物。 27_根据权利要求26的试剂盒，其中所述第一和第二免疫原性组合物包含HPV16和 HPV 18 VLP。
28.根据权利要求26或27的试剂盒，其中所述第二免疫原性组合物进一步包含所述第 一免疫原性组合物中不存在的HPV 6和/或HPV 11 VLP。
29. 根据权利要求26-28中任一项的试剂盒，其中所述第二免疫原性组合物包含HPV 6、11、16、和18￥1^和任选地其它类型。
30. 根据权利要求26-29中任一项的试剂盒，其中所述第一免疫原性组合物包含TLR4 激动剂。
31. 根据权利要求30的试剂盒，其中所述TLR4激动剂是MPL。
32. 根据权利要求26-31中任一项的试剂盒，其中所述第一免疫原性组合物包含铝盐。
33. 根据权利要求26-32中任一项的试剂盒，其中所述第二免疫原性组合物包含铝盐。
34. 根据权利要求33的试剂盒，其中所述第一免疫原性组合物包含氢氧化错，且所述 第二免疫原性组合物包含羟基磷酸硫酸铝盐。
【文档编号】A61P31/20GK104203270SQ201380014959
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2013年3月18日 优先权日:2012年3月18日
【发明者】B.D.A.科劳, S.贾尼尼, L.洛克曼 申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司