专利名称：：乳头瘤病毒疫苗组合物的制作方法
技术领域：
：本发明一般涉及预防人乳头瘤病毒(HPV)感染。更具体地说，本发明涉及药物组合物和制剂，其包含HPV的病毒样颗粒(VLPs),所述VLPs吸附到铝佐剂上，和第二个佐剂，第二个佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂。本发明还涉及包含HPVVLPs和抗菌防腐剂的药物组合物和制剂。进一步提供了使用本公开的药物组合物和制剂的方法。
背景技术：
：有80个以上类型的人乳头瘤病毒(HPV),它们中的许多与病变相关，这种病变范围从宫颈的良性增生疣至恶性癌瘤(综述参见McMurray等人，/"f.丄￡平尸a组82(1):15-33(2001》。HPV类型6和11称为"低危险，，的，并且是通常与生殖器或呼吸粘膜的良性疣、非恶性的尖锐湿疣和/或轻度发育异常最相关的HPV类型。大约90%的生殖器疣由这两种HPV类型引起。相反，HPV16和HPV18称为"高危险"的HPV类型，因为它们常常与宫颈、阴道、外阴和胆管的原位和浸润癌最相关。70%以上的宫颈癌由HPV16和HPV18的感染所引起。与较不普通的致癌类型HPV31、-33、-45、-52和-58—起，这些类型占子宫颈癌的90%以上(Schiffman等人，丄Ato/.Ca"ce〃"W.85(12):958-64(1993))。在在世界范围内的女性中，子宫颈癌是癌死亡的第二个最普遍的原因。乳头瘤病毒是小的(50-60nm)、未包膜的、二十面体的DNA病毒，其编码高达八个早期(E1-E7)和两个晚期(L1-L2)基因。Ll蛋白是主要衣壳蛋白，并且具有55-60kDa的分子量。Ll蛋白或Ll和L2蛋白组合在酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞或细菌中的表达可以导致病毒样颗粒(VLPs)的自组装(综述参见Schiller和Roden,尸fl^〃omflwn^Wewews:CurrentResearchonPapillomaviruses;Lacey,ed.Leeds,UK:LeedsMedicalInformation,pp101-12(1996))。VLPs形式上与真实的病毒体相似，并且一旦给予动物或人类，能够引起中和抗体的高滴度。因为VLPs不包含潜在致癌的病毒基因组，因此它们在HPV疫苗研制中可以给使用活病毒提供安全的替代品(综述参见Schiller和Hidesheim,JC/m.Wra/.19:67-74(2000))。为此，已经将LI和L2基因确定为HPV感染和疾病的预防性和治疗性疫苗的免疫靶向。已经证明，基于VLP的疫苗在接种二价HPV16和18(Harper等人丄a"c"364(9447):1757隱65(2004))和四价HPV6、11、16和18基于VLP的疫苗(Villa等人F"ccz脱24:5571-5583(2006))的人患者中引起免疫应答方面是有效的。然而，疫苗开发的普通目标是增加对目标抗原的免疫应答，以引起长效的保护性免疫。与可针对使人感兴趣的抗原增加免疫应答的化合物(称为佐剂)一起共同给予疫苗已经得到了广泛的研究。除了可针对使人感兴趣的抗原J的^;、的量,、或降低临床方案(所需要的注射数目，以^起持久的2疫应答，提供免于疾病的保护。在60年前，确定基于铝的化合物具有佐剂活性(综述参见Lmdblad，E.B./附mw朋/,Ce〃82:497-505(2004);Baylor等人Kac""e20:S18-S23(2002))。当以合适的剂量4吏用时，通常i人为铝佐剂是安全的。在世界范围内，管理机构已经批准了许多用于给予人类的铝佐剂。尽管没有完全理解铝佐剂的作用机理，但通常认为，在疫苗制剂中，为了最佳免疫促进效果，靶向抗原应该吸附在铝上(参见Lmdblad,上文)。当用这样的方式配制时，铝佐剂能够引起针对许多抗原的有效抗体(TH2)应答；但很少促进细胞(THl)免疫应答。对于HPV，已经表明，与相应的无铝LlVLP疫苗所引起的响应相比，基于HPV6、11、16和18LlVLP的疫苗(其中VLPs吸附到铝佐剂上)在恒河猴中可以产生显著增强的免疫应答(Ruiz等人JcwW(3/q/7wmz/"e5a化(i77^ra/^a"JFaccz."e53(1):2(2005))。重要的是，应该指出，尽管铝佐剂疫苗引起显著增高的抗体滴度(相对于单独的VLPs),但由于佐剂和非佐剂疫苗产生类似的同型特性，免疫应答没有本质上的不同。为了形成具有长期效果的预防性的HPV疫苗，有利的是，获得包括强烈的体液以及细胞免疫应答的更高幅度的免疫应答。还有利的是，形成可针对HPVL1产生充分增强的免疫应答的基于VLP的疫苗，以降低疫苗注射数量(相对于现行的预防性临床计划)。本发明概述本发明提供了药物组合物和制剂，其可以在患者中引起对HPV的免疫应答，并且可以防止患者的HPV感染，其是消除与HPV有关的发病率和致死率的最有效的方法。本发明还提供了本文所提供的组合物和制剂的使用方法。在一方面，本发明涉及药物组合物，其包含HPV的至少一种类型的VLPs、铝佐剂、ISCOM型佐剂和设计成可便于以目标数量给予患者组合物的可药用载体，例如赋形剂、稀释剂、稳定剂、緩冲液或替代性物质；其中所述VLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1十L2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于所述铝佐剂上。本文提供的组合物还可以包含其它生理学可接受的组分，例如緩冲液、生理盐水或磷酸盐緩冲盐水、蔗糖、其它盐和/或聚山梨酸酯。本发明进一步提供了HPV疫苗制剂，其包含(a)大约10Mg至大约100jug至少一种HPV类型的HPVVLPs,其中HPV类型选自HPV6,HPV11,HPV16,HPV18,HPV26,HPV31，HPV33,HPV35,HPV39，HPV45，HPV51,HPV52，HPV53，HPV55,HPV56,HPV58,HPV59，HPV66，HPV68,HPV73和HPV82;所述HPVVLPs包括HPV的重组体L1或重组体L1十L2蛋白；(b)大约150ng至大约600ng的铝佐剂；和(c)大约10jug至大约200jug的ISCOM型佐剂，所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂；其中所述HPVVLPs吸附到所述铝佐剂上。在本发明该方面的具体实施方案中，HPV疫苗制剂包含(a)大约20jug至大约60jug至少一种HPV类型的VLPs;(b)大约200jug至大约300jug的铝佐剂；和(c)大约15jug至大约120jug的ISCOM型佐剂。在另外其它具体实施方案中，本发明提供了HPV疫苗制剂，其包含(a)大约20jug至大约60jugHPV类型6、11、16、18、31、45、52和58中每一种的VLPs,所述HPVVLPs由HPV的重组体Ll或重组体Ll+L2蛋白组成；(b)大约200jug至大约300jug的铝佐剂；和(c)大约30jag至大约120iag的ISCOM型佐剂，所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和石舞脂；其中所述HPVVLPs吸附在所述铝佐剂上。在本发明的进一步方面，提供了药物组合物，其包含HPVVLPs,选自间甲酚、苯酚和苯曱醇的抗菌防腐剂，和可药用载体。包含抗菌防腐剂的HPV疫苗组合物可以任选包含上文所描述的铝佐剂和ISCOM型佐剂；然而，还要包括的是没有佐剂的包含抗菌防腐剂的HPVVLP组合物。本发明还提供了在人类患者中引起对于HPV的免疫应答的方法，其包括给予患者药物组合物，所述药物组合物包含HPVVLPs、铝佐剂和ISCOM型佐剂，所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂；其中所述HPVVLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+1>2蛋白组成，其中所述VLPs吸附于铝佐剂上。本发明进一步涉及预防人类患者被HPV感染的方法，其包括给予患者药物组合物，所述药物组合物包含重组体HPVVLPs、铝佐剂和ISCOM型佐剂，其中所述ISCOM型佐剂，其中HPVVLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+1>2蛋白组成，其中所述VLPs吸附于铝佐剂上。说明书和附加权利要求中使用的单数形式"一个"、"一种"和"这个，，包括复数形式，除非上下文另外清楚地规定。说明书和附加权利要求中所使用的下列定义和缩写适用于术语"HPV"和"PV"分别指的是人乳头瘤病毒和乳头瘤病毒。术语"有效量，，是指将足够的VLP疫苗组合物引入到患者中，产生预期效果，例如，针对患者中的HPV引起免疫应答或预防HPV感染。本领域技术人员能够认识到，这种水平可以变化。术语"患者"是指接受本文所描述的HPV疫苗或药物组合物的任何人。本文定义的"患者"包括已经感染上HPV的那些患者，以及需要预防HPV感染的那些患者。"病症"是受益于本发明组合物治疗的任何症状。术语"病症"包括与HPV感染有关的任何病症或病变。本发明的组合物意欲用作治疗或预防以HPV感染为特征的病症或症状，包括但不限于生殖器或呼吸粘膜的良性疣、非恶性的尖锐湿疣和/或轻度的发育异常，和宫颈、阴道、外阴和肛管的原位和浸润癌。"制剂"是指单一剂量的疫苗，其可以包含在任何适合于注射的体积中，在具体实施方案中，将制剂制备为0.5mL总体积。除非另有说明，术语"制剂，，的使用可以适用于单一剂量的疫苗，可以将其给予需要其的单个患者。术语"多剂量，，是指包含一个剂量以上疫苗的HPV制剂，可以将其给予一个以上患者。"VLP"或"VLPs"是指病毒样颗粒或多种病毒样颗粒。"MAA"是指Merck铝佐剂。MAA是非晶形的铝的羟基磷酸盐硫酸盐佐剂。本文中，术语"MAA"可与术语"AAHS"互换使用。"cLIA"是指竟争性的Luminex(LuminexCorp.,AustinTX)免疫测定技术，其例子描述在美国专利US7,067,258和Opalka等人C7z力D&g"/wwwwo/.10(1):108-15(2003)中。"GMT"是指几何平均滴度。"ISCOM型佐剂"是包含免疫促进复合物(ISCOM)的佐剂，其由皂草苷、胆固醇和磷脂组成，它们一起形成有特色的笼状颗粒，具有有助于其功能的独特的球形、笼状结构(综述参见BarrandMitchell,ImmunologyandCellBiology74:8-25(1996))。该术语包括两种ISCOM佐剂，它们是用抗原制备的，其包含在ISCOM颗粒中的抗原和ISCOM基质佐剂，它们是不用抗原制备的空心ISCOM型佐剂。在本文提供的组合物和方法的优选实施方案中，ISCOM型佐剂是ISCOM基质颗粒佐剂，例如ISCOMATRIX,其不用抗原就可以制备(ISCOM和ISCOMATRIX⑧是CSLLimited,Parkville,Australia的注册商标)。附图的简要说明图1显示了在用实验性八价HPVVLP疫苗免疫的恒河猴之中接种组抗HPV16几何平均滴度(GMT)随时间的变化。按照注明的免疫接种程序表，疫苗用MAA或MAA+IMX进行佐剂化，如实施例1中描述的内容。图2显示了在用实验性的八价HPVVLP疫苗免疫的恒河猴之中接种组的抗HPV31几何平均滴度(GMT)随时间的变化。按照注明的免疫接种程序表，疫苗用MAA或MAA+IMX进行佐剂化，如实施例1中描述的内容。图3显示了在人患者(在第l天，其对于有关的HPV类型是血清阴性的)之中接种组的抗HPV6、11、16或18cUA几何平均滴度(GMT)的概述(阶段A结果)。临床方案的简要说明列在实施例3中。图4显示了在人患者(在第1天，其对于有关的HPV类型是血清阴性的)之中接种组的抗HPV6、11、16或18cLIA几何平均滴度(GMT)的概述(阶段B结果)。临床方案的简要说明列在实施例3中。图5显示了在37。C存储的八价HPVVLP疫苗样品的完整单体随着时间推移的百分数。显示的是八价疫苗制剂土ISCOMATRIX和土MAA佐剂的SDS-PAGE分析结果(参见实施例4和5)。数据是在时间=0(有点的条)、l个月(斑紋条)、3个月(实心条)和6个月(带有口形的条)时提供的图6显示了IVRP分析测定的八价HPV溶液和MAA样品(有和没有IMX)的体外抗原性(单位/mL)(参见实施例4和6)。图7显示了在没有IMX的情况下防腐剂对八价HPV疫苗制剂的稳定性的影响(参见实施例12)。图8显示了在IMX存在下防腐剂对八价HPV疫苗制剂的稳定性的影响(参见实施例12)。图9(区域A)显示了在没有IMX的情况下HPV疫苗制剂中的防腐剂稳定性。区域B显示包含IMX的HPV疫苗制剂中的防腐剂稳定性(参见实施例l3)。本发明的i羊细i兌明按照本发明，已经表明，在动物模型和人患者中，与包含单独的铝佐剂的VLP疫苗相比，包含至少一种HPV类型的HPVVLPs、ISCOM型佐剂和铝佐剂的HPV疫苗制剂能够对靶向的HPV类型引起更高的Ab滴度。为此，本文提供了HPVVLP疫苗制剂和药物组合物，其包含HPVVLPs,HPVVLPs吸附在铝佐剂(与ISCOM型佐剂组合)上，如下面所详述o按照本文描述的本发明的另一个方面，已经表明，在2-8°C,向包含HPVVLPs的药物组合物和制剂中加入选自下列的抗菌防腐剂可有效降低或消除微生物，并且不会消极影响VLPs的结构和热稳定性间甲酚、苯酚和苯曱醇。由此，本发明还涉及包含HPVVLPs和抗菌防腐剂的HPV疫苗制剂和药物组合物，抗菌防腐剂选自间曱酚、苯酚和苯甲醇。按照本发明该方面的疫苗组合物还可以包括如上所述的ISCOM型佐剂和铝佐剂。已经证明，基于病毒样颗粒的疫苗在人患者中针对许多类型的HPV可引起有效的免疫应答。当L1(人和动物乳头瘤病毒的主要衣壳蛋白)在酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞或细菌中表达时，VLPs可以自我纟且装(纟宗述参见Schiller禾口Roden,尸"//〃cwzav/n^^evz'eviAs1:CurrentResearchonPapillomaviruses;Lacey,ed.Leeds,UK:LeedsMedicalInformation,pp101-12(1996))。形式不确定的HPVVLPs还可以通过表达LI和L2衣壳蛋白的组合来产生。在T=7的二十面体结构中，VLPs由LI的72个五聚体组成(Baker等人，说o;/z".丄60(6):1445-56(1991))。VLPs形式上与真实的病毒体相似，并且一旦给予动物，能够引起中和抗体的高滴度。用VLPs给兔子(Breitburd等人，JK,>o/.69(6):3959-63(1995))和狗(Suzich等人，尸roc.Ato/.爿c^/.USA92(25):11553-57(1995))免疫，显示二者可诱导中和抗体并防止实-睑性的乳头瘤病毒感染。另外，用HPV16VLPs给成年女性免疫，显示可防止HPV16感染和HPV16宫颈上皮内瘤样病变(Koutsky等人，五"g/.J.Met/.347:1645-51(2002))。因为VLPs不包含潜在致癌的病毒基因组，并且当用单个基因表达时，可以自我组装，因此它们在HPV疫苗研制中可以给使用活病毒提供安全的替代品(综述参见Schiller和Hidesheim,</Kzra/.19:67-74(2000))。如上所述，已经证明，基于VLP的疫苗在许多动物模型和人患者中可有效引起免疫应答。然而，疫苗开发的目标常常是引起更高的抗体滴度，以引起长效的保护性免疫。为此，已经开发了包含至少一种HPV类型的HPVVLPs、ISCOM型佐剂和铝佐剂的药物组合物和疫苗，如本文所公开。与包含单独铝佐剂的VLP疫苗相比较，所述药物组合物和疫苗能够对于靶向的HPV类型引起更高的IgGAb滴度。该组合物可以导致针对HPV感染诱导持久有效的免疫预防、降低抗原剂量和包括随着时间推移而降低注射数量的免疫程序。由此，本发明涉及药物组合物和制剂，其包含HPV病毒样颗粒、铝佐剂、ISCOM型佐剂和可药用载体，其中所述VLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1十L2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于所述铝佐剂上。任何基于HPVVLP的疫苗适合于在本发明的药物组合物和方法中使用。可以将已知的HPVVLP疫苗进行修饰，以包含铝佐剂和ISCOM型佐剂。另外，新疫苗可以按照本发明所描述的进行开发，使其包含HPVVLP形式的至少一种HPV类型，HPVVLP吸附于与ISCOM型佐剂组合的铝佐剂上。示范性的HPVVLP疫苗是四价人乳头瘤病毒(类型6、11、16、18)重组体疫苗，本文通过它的专用商标名GARDASIL⑧来引用(参见Bryan,J.T.Facc&e25(16):3001-6(2007》Shi等人C"m'ca/尸/z"，aco/ogyT7^ra/e她^81(2):259-64(2007))。GARDASIL⑧是非感染性的重组体四价疫苗，用HPV类型6、11、16和18的主要衣壳(L1)蛋白的高度纯化的VLPs制备。L1蛋白是通过在重组体酿酒酵母中进行独立发酵产生的，并且自我组装到VLPs中。除了VLPs之夕卜，每个GARDASIL⑧疫苗剂量还包含铝佐剂(例如非晶形的羟基磷酸铝硫酸盐)、氯化钠、L-组氨酸、聚山梨酸酯80、硼酸钠和水。因此，本发明包括GARDASIL⑧与ISCOM型佐剂例如ISCOMATRIX⑧(CSLLtd.,Parkville,Australia)的组合。在本发明的替代性实施方案中，药物组合物和制剂包含基于HPVVLP的疫苗，该疫苗是单价、二价或三价体。例如，包含HPV16和/或HPV18的VLPs的药物组合物(不包含其它HPVVLP类型)包括在本发明范围内。包含与GARDASIL⑧所包含HPV类型不同的HPVVLPs的四价疫苗也包括在本文中。例如，包含HPV类型31、45、52和58的VLPs的药物组合物在本发明的范围之内。在其它实施方案中，药物组合物包含基于VLP的疫苗，该疫苗具有四个以上不同类型的VLPs。在一个优选实施方案中，药物组合物包含八个不同的HPVVLP类型。特别优选的八价疫苗描述在实施例1和2中，并且包含HPV类型6、11、16、18、31、45、52和58。本发明的替代品/V^介组合物包含HPV类型6、11、16、18、31、35、45和58。其它八价HPVVLP疫苗也包括在本文中；例如HPV33可以代替HPV31。其它HPVVLPs也可以加入到本文描述的疫苗制剂中，产生9价、IO价等等的HPV疫苗。如上所述，本发明的药物组合物和制剂包含至少一种HPVVLP类型，例如HPV16或18。在本文公开组合物的优选实施方案中，疫苗进一步包含至少一种其它HPV类型的VLPs。在特别优选实施方案中，至少一种其它的HPV类型选自HPV6,HPV11,HPV16,HPV18，HPV26,HPV31,HPV33,HPV35,HPV39,HPV45,HPV51，HPV52,HPV53,HPV55，HPV56,HPV58,HPV59，HPV66,HPV68，HPV73和HPV82。本发明的药物组合物包含由HPV的重组体L1或重组体L1+L2蛋白组成的HPVVLPs。HPVL1或L1+L2蛋白可以通过如下方式进4亍重组表达Ll或Ll+L2DNA分子克隆到包括合适启动子及其它合适转录调控要素的表达载体中，并转移到原核生物或真核宿主细胞中，产生重组蛋白。这种操作技术由Sambrook等人进行了充分描述(MolecularCloning:ALaboratoryManual;ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NewYork,(1989)),将其结合到本文中作为参考。当Ll蛋白在宿主细胞中重组表达时，VLPs可以自我组装。本发明的重组体HPVLl蛋白可以是任何全长Ll蛋白序列，该序列可以在能够自我组装到VLPs中的自然或任何突变或截断的Ll蛋白中找到。通过从一或多种包含所选择HPV类型的临床样品中分离DNA、测序列中，可以测定用于本发明的Ll蛋白序列。适合用于本发明中的许多示范性的Ll序列可以在文献中找到。参见，例如，美国专利Nos.5,820,870;7,250,170;7,276,243;和5,437,951;Kirii等人(W油gy185(1):424-427(1991))。用于本发明组合物和制剂中的其它Ll蛋白包括HPVLl序列的生物学活性片段和/或突变抹，包括但不一定局限于氨基酸取代、消除、加入、氨基末端缺失和羧基端部缺失，以使这些突变提供能够形成VLP的Ll蛋白或蛋白片段。参见例如，国际公开WO2006/114312和美国专利No.6,599,508。表达重组体HPVLl或重组体Ll+L2并且随后自组装VLPs的合适的宿主细胞包括但不局限于酵母细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞或细菌。在本发明的示范性实施方案中，VLPs是在酵母细胞中产生的，例如选自下列的酵母酿酒酵母，汉逊酵母，巴斯德毕赤氏酵母，脆壁克鲁维酵母，乳酸克鲁维酵母和粟酒裂殖酵母。HPVVLPs在酵母细胞中的表达提供了下列优点有成本效益，在发酵罐中容易大规模培养。本发明还包括包含HPVVLPs的突变抹形式的药物组合物，例如由HPVLl或L2蛋白的生物学活性片段和/或突变抹组成的HPVVLPs,包括但不一定局限于氨基酸取代、消除、加入、氨基末端缺失和羧基端部缺失，以使这些突变提供能够治疗或预防性使用的Ll蛋白或蛋白片段，并且可用于HPVVLP疫苗开发。HPVL1蛋白的任何这种突变林形式应该能够形成VLPs,而且当给予人时能够针对目标HPV类型引起免疫应答。另外，本领域技术人员可以认识到，用于自我组装VLPs(用于包含在本文公开的组合物中)的Ll或LI+L2蛋白可以通过全长野生型HPVLl或L2多核苷酸进行编码，或可以通过已知的野生型序列的片賴二或突变4朱进4亍编码。编码可表达HPVLl或L2蛋白的mRNA的野生型多核苦酸序列在本领域是可获得的。任何突变抹多核苷酸可以编码蛋白或蛋白片段(其至少基本上模拟HPVLl或L2蛋白的药理学特性，包括当给予人时能够形成有能力针对使人感兴趣的HPV类型引起免疫应答的VLPs)。任何这种多核苦酸包括但不一定局限于核普酸取代、消除、加入、氨基端部缺失和羧基端部纟夹失。包含在本发明制剂和组合物中的每个HPV类型的病毒样颗粒的量取决于所表达基因产物的免疫原性。通常，免疫或预防有效剂量包括大约10jug至大约lOOjug的VLPs,优选大约20jug至80|ug。铝已经长久显示其可促进针对共同给予的抗原的免疫应答，主要通过促进Tu2响应。除了HPVVLPs和ISCOM型佐剂之外，本发明该方面的制剂还吸附于铝佐剂上。优选，本文所提供组合物的铝佐剂不是铝沉淀形式。铝沉淀的疫苗可以提高对靶向抗原的免疫应答，但显示了高度非均质制剂，并且具有不一致的结果(参见LmdbladE.B./mmw"o/ogy朋JCe〃Pzo/ogy82:497-505(2004))。相反，铝吸附的疫苗可以用标准化方式预先形成，这是给予人的疫苗制剂的基本特征。此外，人们认为，通过从注射部位较慢地清除，或使抗原通过抗原递呈细胞得到更有效的吸收，目标抗原物理吸附在铝佐剂上在佐剂功能方面(或许部分地)具有重要的作用。本发明的铝佐剂可以是下列形式氢氧化铝(Al(OH)3),磷酸铝(A1P04),羟基磷酸铝，非晶形的羟基磷酸铝硫酸盐(AAHS)或所谓的"明矾，，(KA1(S04)-12H20)(参见Klein等人，Analysisofaluminumhydroxyphosphatevaccineadjuvantsby(27)AlMASNMR.,/尸/z"削.5""..89(3):311-21(2000))。在本文提供的本发明的示范性实施方案中，铝佐剂是羟基磷酸铝或AAHS。在铝佐剂中，磷酸^f艮与铝的比例可以在0至1.3的范围。在本发明该方面的优选实施方案中，磷酸根与铝的比例在实施方案中，磷酸根与铝的比例在0.2至0.50范围之内。在本发明的一些实施方案中，铝佐剂是AAHS形式(本文可与Merck铝佐剂(MAA)互换地引用)。在中性pH值下，MAA带有零电荷，而在中性pH值下，A10H带有净正电荷，而A1P04典型地带有净负电荷。与A10H相比较，MAA具有结合HPVVLPs的更高容量。另夕卜，在小鼠中，与吸附于A10H上的VLPs相比较，吸附于MAA上的VLPs可以引起更大的体液免疫应答。Caulfield等人，//ww,Kac"."^3:139-146(2007)。尽管不希望被理论束缚，铝佐剂的净电荷有可能影响其结合VLP抗原的能力，具有强带电的佐剂不能与中性带电佐剂那样强地结合抗原。为此，优选，本发明药物组合物的铝佐剂在中性pH值下具有零点表面电荷。本领域技术人员能改变緩冲液、游离磷酸盐的盐浓度和/或百分数，以便在中性pH值下具有零点表面电荷。本领域技术人员可以确定在提高对粑向HPV类型的免疫应答方面既安全又有效的铝佐剂的最佳剂量。对于铝的安全特性以及包含在FDA特许疫苗中的铝数量的讨论，参见Baylor等人，&ccwe20:S18-S23(2002)。通常，铝佐剂的有效和安全剂量在150至600jug/剂量(300至1200jug/mL浓度)之间。在本发明制剂和组合物的具体实施方案中，每剂量疫苗的铝佐剂在200和300|ug之间。在本发明制剂和组合物的替代性实施方案中，每剂量疫苗的铝佐剂在300和500jug之间。如上所述，本发明的一个方面才是供了疫苗和制剂，其包含HPVVLPs与铝佐剂和ISCOM型佐剂的组合。在本文提供的制剂和方法中，ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂，并且形成促进免疫的复合物或ISCOM。在80多年前，首先证明了皂草苷(其典型地从皂树的茎皮中分离)的有岁支的佐剂活性(综述参见Barr和Mitchell,/www"o/ogya"<iCe〃Ao/ogy74:8-25(1996);以及Skene和Sutton,M"/w^40:53-59(2006))。与铝佐剂相比，ISCOM型佐剂或ISCOMs能够对共同给予的抗原引起广泛的免疫应答，包括T细胞和抗体应答二者。然而，在那时，发现了毒性和溶血活性的可能性，限制了皂草苷用于人或动物的希望。从那以后，人们发现，当与胆固醇和磷脂组合时，皂草苷可以形成有特色的颗粒，其具有由二十或更多亚单位组成的笼状结构。该独特结苷与胆固醇和磷脂一起引入到ISCOMs中，可以消除皂草苷的溶血活性。还显示，与游离皂草苷相比，当ISCOMs用作佐剂时，需要较少的佐剂就可以引起免疫应答(参见Skene和Sutton,上文)。为此，已经将ISCOMs作为有潜力的疫苗佐剂进行了积极的研究。按照本发明，已经发现，在基于VLP的疫苗中，与用单独铝佐剂配制的相同疫苗相比较，铝佐剂和ISCOM型佐剂的组合可以引起更强的抗体滴度。另夕卜，人们发现，在存在或不存在ISCOMATRIX⑧的条件下，与不用铝佐剂配制的VLP疫苗相比较，包含铝和IMX两者的HPVVLP疫苗制剂更稳定。为此，本发明涉及药物组合物，其包含至少一种类型HPV的VLPs、铝佐剂、ISCOM型佐剂和可药用载体，所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂，其中所述VLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+L2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于所述铝佐剂上。在本发明该方面的具体实施方案中，至少一种类型HPV的VLPs包括选自下列的HPV类型HPV6,HPV11,HPV16,HPV18,HPV26,HPV31,HPV33,HPV35,HPV39,HPV45,HPV51,HPV52,HPV53,HPV55,HPV56,HPV58,HPV59,HPV66,HPV68,HPV73和HPV82。然而，与病理症状或病症有关的任何HPV类型都适合于包含在本文提供的药物组合物中。在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含HPV类型6、11、16和18的VLPs。在替代性实施方案中，组合物包含HPV类型6、11、16、18、31、45、52和58的VLPs。在其它实施方案中，组合物包含HPV类型6、11、16、18、31、35、45和58的VLPs。在更进一步实施方案中，本发明的组合物，包括上文描述的四价和八价组合物，进一步包含至少一个其它HPV类型的VLPs,其中至少一个其它HPV类型选自HPV26,HPV33,HPV35,HPV39,HPV51,HPV53,HPV55,HPV56,HPV59,HPV66,HPV68,HPV73和HPV82。本发明该方面的药物组合物包含铝佐剂，当VLPs吸附于铝佐剂上并给予患者时，其可有效地增强对使人感兴趣的HPV类型的体液免疫应答。在本发明的具体实施方案中，铝佐剂是羟基磷酸铝(AH)或非晶形的羟基磷酸铝硫酸盐(AAHS)。优选，在这些具体实施方案中，铝佐剂包括磷酸根和铝，以大约0.1至大约1.1的磷酸根(P04)与铝(A1)的摩尔比存在。更优选，铝佐剂包括磷酸根和铝，以大约0.2至大约0.5的PCVA1的摩尔比存在。在本文该方面的替代性实施方案中，铝佐剂是氢氧化铝。本文所4是供组合物的ISCOM型佐剂可以利用本领域已知的任意一种制备ISCOMs的一些已知方法来制备(综述参见Barr和Mitchell,/mww"o/ogyCe〃说o/ogy74:8-25(1996))。众所周知的制备方法包招「离心方法和渗析方法，如上文Barr所述。ISCOM佐剂还可以从商业渠道获得。ISCOM型疫苗与皂草普、胆固醇和磷脂(例如卵磷脂)一起配制，尽管已经发现，几乎任何磷脂可有效用于ISCOM颗粒的形成(参见上文的Barr和Mitchell)。在本发明的优选实施方案中，ISCOM型佐剂是所谓的ISCOM基质佐剂，例如ISCOMATRIX(CSLLtd.,Parkville，Australia),其包括ISCOPREP⑧皂草芬(CSLLtd.,Parkville,Australia)胆固醇和二棕榈酰磷酯酰胆碱。本发明的组合物最好每0.5mL剂量的VLP疫苗包含10和200jug之间的ISCOM基质佐剂(20-400pg/mL)。在本发明该方面的示范性实施方案中，ISCOM型佐剂是ISCOMATRIX⑧。本发明还涉及HPV疫苗制剂，其包括人乳头瘤病毒(HPV)疫苗制剂，其包含(a)至少一种HPV类型的HPV病毒样颗粒(VLPs),其中HPV类型选自HPV6,HPV11,HPV16,HPV18,HPV26，HPV31,HPV33,HPV35，HPV39,HPV45,HPV51,HPV52,HPV53，HPV55,HPV56，HPV58,HPV59,HPV66，HPV68,HPV73和HPV82;所述HPVVUPs由HPV的重组体L1或重组体L1十L2蛋白组成；其中任何一种HPV类型的VLPs以大约10jLig至大约100jug的浓度存在，且其中总VLP浓度在lOiug和600iug之间；(b)大约150jug至大约600jug的铝佐剂；和(c)大约lOjug至大约200iug的ISCOM型佐剂；其中所述HPVVLPs吸附在所述铝佐剂上。在本发明该方面的具体实施方案中，HPV疫苗制剂包含(a)大约20jug至大约80jug的至少一种HPV类型的VLPs;(b)大约200jug至大约300jug的铝佐剂；和(c)大约15Mg至大约120jug的ISCOM型佐剂。在其它实施方案中，制剂进一步包含大约20jug至大约60jug的至少一种其它HPV类型的VLPs。在一个实施方案中，本发明涉及包含HPV类型6、11、16和18的VLPs的HPV疫苗制剂。本发明还提供了HPV疫苗制剂，其进一步包含HPV类型31、45、52和58的VLPs。本发明进一步提供了HPV疫苗制剂，如上所述，其进一步包含HPV类型31、35、45和58。在本文提供的本发明的某些方面，提供了包含ISCOM型佐剂的HPV疫苗制剂，其中ISCOM型佐剂是ISCOMATRIX⑧。本文还提供了HPV疫苗制剂，其包含(a)大约20pg至大约40jugHPV类型6、11、16、18、31、45、52和58中每一种的VLPs,所述HPVVLPs由HPV的重组体Ll或重组体L1+L2蛋白组成；(b)大约200jug至大约300jig的铝佐剂；和(c)大约30jug至大约120jug的ISCOM型佐剂，所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂；其中所述HPVVLPs吸附在所述铝佐剂上。用于上面疫苗制剂中的HPV类型可以用其它HPV类型或其组合代替，例如包含HPV类型6、11、16、18、31、35、45和58的八价疫苗制剂。本发明的药物组合物和制剂可以在患者中用来引起对HPV的持久和有效的免疫应答，和预防HPV感染。为此，本发明提供了在人类患者中引起对于HPV的免疫应答的方法，其包括给予患者药物组合物，所述药物组合物包含HPVVLPs、铝佐剂和ISCOM型佐剂，所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂；其中所述HPVVLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+1^2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于铝佐剂上。本发明还提供了预防人类患者被HPV感染的方法，其包括给予患者药物组合物，所述药物组合物包含重组体HPVVLPs、铝佐剂和ISCOM型佐剂，其中所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、甾醇和^^脂，其中HPVVLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+L2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于铝佐剂上。在本文所提供方法的具体实施方案中，给予患者的药物组合物包含HPV类型6、11、16和18的VLPs。在其它实施方案中，组合物进一步包含HPV类型31、45、52和58的VLPs。在进一步实施方案中，组合物进一步包含HPV类型31、35、45和58的VLPs。在其它实施方案中，组合物进一步包含至少一种选自下列的其它HPV类型的VLPs:HPV26,HPV33，HPV35,HPV39，HPV51,HPV53,HPV55,HPV56,HPV59,HPV66,HPV68,HPV73和HPV82。本发明的疫苗组合物可以以最佳抑制HPV感染、同时具有最小潜在毒性的合适的剂量单独使用。另外，可能希望共同给予或顺序给予其它药剂。本发明的制剂和组合物可以通过肌肉注射、皮下注射、真皮内引入或通过皮肤压印来给予患者。还包括其它给予模式，例如腹腔内、静脉内或吸入递送。在本发明的优选实施方案中，通过肌肉注射给予疫苗和药物组合物。在本发明的一些实施方案中，使本文公开的HPV药物组合物和制剂在各种引发/力口强组合物中给予患者，以便引起增强的、持久的免疫应答。在这种情况下，用"引发和加强"方案给予两种药物组合物。例如，给予一或多次第一个组合物，然后，在预定时间之后，例如2周、l个月、2个月、6个月或其它合适的间隔，给予一或多次第二个组合物。优选，临床方案中使用的两种或多种HPV药物组合物包含相同HPV类型或HPV类型组合的VLPs。然而，还合乎需要的是，按照临床方案，给予患者两种不同的HPV药物组合物，具有分开给予两种疫苗的合适的时间间隔。例如，可以在一个时间点给予包含HPV16和18VLPs的疫苗组合物，而后在已经通过预先确定的时间长度之后，在第二个时间点给予包含HPV31、45、52和58VLPs的HPV疫苗组合物。在此情况下，两种不同HPV疫苗组合物中的每一种可以应会予患者一次或一次以上(通过合适的时间长度分开)。:t姿照本发明的一个方面，可以表明，〗吏用HPVVLP疫苗(用AAHS和ISCOMATRIX⑧佐剂化)的双剂量临床方案，可以引起与使用VLP疫苗(用单独的AAHS佐剂化)的三剂量方案类似幅度的免疫应答(参见实施例1)。在这方面，本发明提供了预防人患者HPV感染的方法，包括(a)给予患者第一个药物组合物，第一个药物组合物包含重组体HPVVLPs、铝佐剂和ISCOM型佐剂，其中所述ISCOM型佐剂包括急草苷、甾醇和磷脂，其中HPVVLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+L2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于铝佐剂上；(b)经过预定量的时间；和(c)给予患者第二个药物组合物，第二个药物组合物包含重组体HPVVLPs、铝佐剂和ISCOM型佐剂，其中所述ISCOM型佐剂包括皂草苷、甾醇和磷脂，其中HPVVLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+L2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于铝佐剂上。在如上所述方法的具体实施方案中，第一和第二个组合物是相同的，且临床方案包括至少一次注射组合物，以"引发"对HPV的免疫应答，和至少一次注射，以"加强"免疫应答。然而，本文所描述的本发明还包括其它方法，在这些方法中进行多次注射，以引发和/或加强免疫应答。在一些情况下，合乎需要的是，提供多剂量HPV疫苗制剂，在相同管瓶中，其包含一个剂量以上的疫苗。如果需要多剂量制剂，应该使用抗微生物的防腐剂，以便杀死或防止微生物例如细菌和真菌的生长。与单剂量制剂相比，包含抗菌防腐剂的多剂量疫苗制剂提供了一些优点，包括在一段时期内从管瓶中取出多剂量疫苗，不用考虑第一次取出时无意中引入的微生物污染(Meyer等人，丄尸/2w附.96(12):3155-3167(2007))。许多销售的疫苗产品(其与HPV无关)包含苯氧乙醇(DAPTACEL(SanofiPasteur，Lyon,France),PEDIARIX,INFANRIX,HAVRIX⑧和TWINRIX⑧(GlaxoSm池Klme(GSK),Brentford,Middlesex,UnitedKingdom)或硫汞撒(PEDIARIX⑧和ENGERIX-B⑧(GSK))作为抗菌防腐剂(参见上文的Meyer等人)。另外，PNEUMOVAX23(Merck&Co.,Inc.，WhitehouseStation,NJ)制剂包含酚作为抗菌防腐剂。然而，过去没有致力于包含HPVVLP的疫苗制剂与抗微生物防腐剂的相容性的工作。由此，按照本发明的一个方面，可以表明，在2-8。C,向包含HPVVLPs的疫苗制剂中加入选自下列的抗菌防腐剂可有效降低或消除微生物，并且不会消极影响VLPs的结构和热稳定性间曱酚、苯酚和苯甲醇。本文还说明，在包含HPVVLPs与ISCOM型佐剂组合的HPV疫苗制剂中，选自间甲酚、苯酚和苯甲醇的抗微生物防腐剂是有效的防腐剂。由此，本发明还涉及包含HPVVLPs和抗菌防腐剂的HPV疫苗制剂，抗菌防腐剂选自间曱酚、苯酚和苯甲醇。按照本发明该方面的疫苗制剂还可以包括如上所述的ISCOM型佐剂和铝佐剂。在本发明该方面的一些优选实施方案中，间甲酚包含在多剂量HPV疫苗制剂中，其浓度为大约0.15至大约0.31%。在更优选实施方案中，多剂量疫苗制剂包含大约0.25至大约0.31%浓度的间甲酚。在一个优选实施方案中，间甲酚以大约0.3%的浓度包含在多剂量制剂中。在本发明的替代性实施方案中，苯酚包含在多剂量HPVVLP疫苗制剂中，其浓度为大约0.25至大约0.55%。在更优选实施方案中，包含苯酚，其浓度为大约0.4至大约0.55%。在一个特别优选实施方案中，提供了包含大约0.5。/。浓度苯酚的多剂量HPVVLP疫苗制剂。在更进一步实施方案中，多剂量HPV疫苗制剂包含大约0.75至大约1.2%浓度的苯曱醇。在更优选实施方案中，苯甲醇包含在多剂量疫苗制剂中，其浓度为大约0.8%至大约1.0%。在本发明该方面的特别优选实施方案中，苯曱醇的浓度是0.9%。相应地，本发明的一个方面涉及多剂量HPV疫苗制剂，其包含(a)至少一种HPV类型的HPV病毒样颗粒(VLPs),其中HPV类型选自HPV6,HPV11,HPV16，HPV18,HPV26，HPV31,HPV33,HPV35,HPV39,HPV45，HPV51，HPV52,HPV53,HPV55,HPV56,HPV58,HPV59，HPV66,HPV68,HPV73和HPV82;所述HPVVLPs由HPV的重组体L1或重组体L1+!^2蛋白组成；(b)铝佐剂；和(c)选自间曱盼、苯酚和苯曱醇的抗;微生物的防腐剂；其中所述HPVVLPs吸附在所述铝佐剂上。如上所述的多剂量HPV疫苗制剂可以任选包含ISCOM型佐剂。为了描述和公开方法和物质，本文引入本文提及的所有出版物作为参考，其可以与本发明结合使用。本文中的任何记载均不被理解为承认本发明由于在前发明而不具有早于这样的公开的权利。参考附图描述了本发明的优选实施方案，但应该理解，本发明不局限于那些明确的实施方案，在不背离附加权利要求所定义的本发明的范围或精神的条件下，本领域技术人员可以对其进行各种改变和修饰。下列实施例举例说明本发明，但不限制本发明。包含佐剂的HPV制剂的形成实施例1给予恒河猴HPV八价疫苗(含有Iscomatrix佐剂)为了测定针对HPVVLP基疫苗的免疫应答是否可以增加到高于单独铝佐剂所获得的滴度，将八价HPVVLP疫苗(与非晶形的羟基磷酸铝硫酸盐(AAHS)加上ISCOMATRIX⑧佐剂组合)给予恒河猴。该疫苗由八种不同的HPVLl病毒样颗粒组成。使VLPs吸附在磷酸氢氧化铝佐剂(MAA)上，以450mcg/mL浓度存在。在进一步加入ISCOMATRIX⑧(CSLLimitedABN，Parkville,Australia)(以200mcg/mL存在)或没有加入其的条件下，试验MAA吸附的疫苗。使疫苗在由0.32MNaCl、10mM组氨酸(pH6.2)和0.01%聚山梨酸酯-80组成的緩冲液中。将0.5mL体积疫苗单一注射到每个印度恒河猴的右侧三角肌处。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>试-验下列免疫程序(对于每个组，n=4):在第0和8周，用MAA佐剂化的八价疫苗使I组接受免疫；在笫0和8周，用MAA/IMX佐剂化的疫苗使II组接受免疫；在第0、8和24周，用MAA/IMX佐剂化的疫苗使III组接受免疫；在第0和24周，用MAA/IMX佐剂化的疫苗使IV组接受免疫。以4周间隔从每个动物处收集血清样品。结果表明，对于八个HPV类型的每一个，用MAA佐剂化的或MAA/IMX佐剂化的疫苗免疫的所有动物出现了血清转化。当比4支I和II组时，与MAA佐剂化的疫苗接受者(I组)相比，在MAA/IMX佐剂化的疫苗接受者(II组)中，针对每一HPV类型的几何平均滴度一致地提高。在第52周，提高保持很明显，表示效果是长久的。当比较I和IV组时，结果表明，在单一剂量之后，MAA/IMX佐剂化的疫苗组(IV组)的峰滴度不但比单一剂量MAA疫苗(I组)所引起的峰滴度高，而且比得上双剂量的MAA疫苗所引起的峰滴度(HPV16和31的代表性的结果，参见图l和2)。0、24剂量方案的第52周的滴度(用MAA-IMX佐剂化的疫苗(IV组))，仅仅比0、8、24-剂量方案(用相同疫苗(m组))的滴度稍微低一些。这说明，与使用MAA佐剂化疫苗的3剂量方案相比，使用MAA/IMX佐剂化疫苗的双剂量方案具有引起类似水平的免疫应答的潜力。实施例2HPV竟争性的Lummex试-睑为了表明免疫应答，利用竟争性的Luminex免疫测定法(cLIA)来分析从免疫猴子中提取的血清。HPVcUA使用八个特定类型的构型依赖的mAbs,以监控对于使用HPV八价疫苗的免疫的免疫应答。竟争性Luminex免疫测定法的更详细说明(其使用基于颗粒的流动細胞分析，以在试-验样品中同时测定针对许多HPV类型的抗体的存在)在下列中列出美国专利No.7,067,258,和Opalka等人，C/z"Z^agw丄W/www"o/.10(1):108-15(2003)。在包含抗体枯竭的人血清(ADHS)的预筛选试验基质中，制备每个HPV类型的八价参考标准溶液。参考标准是源于恒河猴的血清样品库，恒河猴是用HPV单价L1VLP类型6、11、16、18、31、45、52、58高免疫的。所有的标准样品、对照物和样品以一式两个分的形式试验。用1:4、1:40、1:400或1:4000稀释物进行血清样品的试^^。读出荧光单位，并将双份孔进行平均。基于每个试验平皿的标准曲线的四参数逻辑拟合法，计算稀释校正的mMU/mL血清值。将超出标准曲线定量范围的样品以更高稀释物形式进行再试验。没有报道额外变化性不合格的复制物，然后将样品重复试验，直到它们复制物参数通过为止。形成试验的对照物说明，建立每个HPV类型的定量限制。实施例3HPVVLP疫苗与MAA和Iscomatrix⑧佐剂组合的免疫原性在临床试验中，评价ISCOMATRIX⑧(IMX)在人患者中增强对于HPV的免疫应答的能力。开始两个阶段的、随^L化的、双盲的、多中心的、IMX剂量逐步上升的控制研究，其试验用非晶形的羟基磷酸铝硫酸盐(MAA)佐剂化的八价HPVVLP疫苗。在两个独立的研究阶段，使患者随机化。在包含固定浓度HPVVLPs(用MAA(281mcg)配制)的实验性八价疫苗的背景下，评价每0.5mL剂量的15或30mcg(阶段A)和60或120mcg(阶段B)的IMX浓度，并和GARDASIL⑧对比。八价疫苗包含类型6(20mcg)、11(40mcg)、16(40mcg)、18(20mcg)、31(20mcg)、45(20mcg)、5(20mcg)和58(20mcg)的HPVVLPs。GARDASIL⑧是用高度纯化的LlVLPs制备的四价HPV(类型6、11、16、18)重组体疫苗.除了VLPs之外，每个疫苗剂量包含MAA(225mcg)、氯化钠、L-组氨酸、聚山梨酸酯80、硼酸钠和7K。在研究的每个胳臂上，在第1天、2个月和6个月以0.5mL月几肉注射(八〗介L1VLP(含有如上所述的MAA/IMX)的四个制剂中的一个或GARDASIL)的形式给予疫苗。该研究包括~150个健康女性，在登记的时候，年龄在18和24岁之间。使用实施例2所述的竟争性Luminex免疫测定法(cLIA),将第1天、2个月、3个月(剂量2之后1个月)、6个月、7个月(剂量3之后1个月)和12个月获取的血样用于对相关HPV类型的免疫应答的评价。进行对疫苗制剂的免疫应答(相对于GARDASIL的免疫应答)的分析，其中145个受试者在阶段A和阶段B(97%)具有3个月(Postdose2)的免疫原性可用数据，73个受试者在阶段A(97%)还具有7个月(Postdose3)的免疫原性可用数据。分析包括阶段A中的受试者，条件是他们(i)在合适的天数范围内，接受所有3个接种，(ii)具有在合适的天数范围内收集的血清样品，(iii)在第1天对于相关的HPV类型是血清阴性的，和(iv)具有在合适的天数范围内收集的有效的7个月血清学结果。分析包括阶段B中的受试者，条件是他们(i)在合适的天数范围内，接受头2个接种，(ii)具有在合适的天数范围内收集的血清样品，和(iii)在第1天对于相关的HPV类型是血清阴性的。在3个月(剂量2后)和7个月(剂量3后)时间点(阶段A(15和30mcgIMX,+MAA)中受试者的治疗组)和3个月时间点(阶段B(60和120mcgIMX,+MAA)中受试者)的结果分别展现在图3和4中。结果表明，与单独用MAA佐剂化的GARDASIL⑧的结果相比，IMX剂量相关性地提高了对相关HPV类型的免疫应答。实施例4在存在和不存在ISCOMATRIX⑧(IMX)条件下的八价HPVMAA和溶液制剂的稳定性配制四个不同的八1"介HPV样品(土MAA和土IMX)。所有的制剂包含下面数量的HPVVLPs:40yg/mLHPV6,80|ug/mLHPV11,80jug/mLHPV16和40mg/mLHPV18、31、45、52和58VLPs中的每一个。在每一制剂中还包含0.32MNaCl、10mM组氨酸(pH6.2)和0.01%聚山梨酸酯80(PS80)。第一个制剂不包含IMX或MAA佐剂。第二个制剂包含240jug/mLIMX,不包含MAA。试验的第三个制剂不包含IMX,包含562.5|ag/mL(1.25X)MAA。试验的第四个制剂包含240ing/mLIMX和562.5jug/mL(1.25X)MAA。在4。C和37。C存储6个月之后，利用SDS-PAGE分析这四个制剂的HPVVLP完整性，利用体外相对功效试验(IVRP)分析其体外抗原性。由SDS-PAGE分析(实施例5)以及IVRP试验(实施例6)得到的结果表明，在没有MAA的条件下，HPVVLPs不稳定，并且在MAA的存在下，IMX对HPVVLP稳定性没有影响。结果表明，MAA应该包含在含有IMX的HPV疫苗制剂中。实施例5利用SDS-PAGE评价HPVVLP完整性通过SDS-PAGE分析样品(用Invitrogen4-20%或14%,1.5mm,10孔Tns-甘氨酸凝胶)。在还原样品緩冲液(0.25MTris，PH6.8,8%SDS,40%丙三醇，0.008%溴酚蓝，二硫苏糖醇，在70。C加热IO分钟)中制备样品。在制备样品之前，将含有铝佐剂的样品浓缩至762ng/mL,并包括0.5MEDTA(pH8.0),以溶解铝。将高负荷加入到1X还原样品緩冲液(一份4X还原样品緩冲液三份MilliQ水)中，制备低负荷(2.5ng)。对于每个样品，操作12mcg(高)和2.5mcg(低)负荷。电泳之后，使用12%(w/v)三氯乙酸溶液固定凝胶，用Pro-Blue胶体考马斯蓝进行染色。使用光密度计获得谱图，使用ImageQuant软件(GEHealthcareBiosciences;Piscataway,NJ)进4亍分析。高负荷用于测定降解物的相对量，^氐负荷用于测定完整HPV的相对量。结果表明，在37。C存储6个月之后，两个加上-MAA样品(±IMX)的％完整单体有小的降低(小于10%)(图5)。然而，在相同时点和贮存条件下，两个减去MAA样品的％完整单体有非常大的降低，对于减去IMX的样品，降低达69%,对于加上IMX的样品，降低达39%。数据表明，在IMX的存在下，HPVVLPs在MAA制剂中比在溶液制剂中更稳定。实施例6通过IVRP试-验评〗介HPVVLPs的体外抗原性相对于参考标准，利用体外相对效能(IVRP)试验来定量HPV类型6、11、16、18、31、45和52VLP样品的效能。IVRP试验是夹层式免疫测定法，其使用独立的单克隆抗体用于捕获和检测。利用StrategicBioSolutions(Newark,DE)，制备在八个血清型特异性试验的每一个中所使用的抗体。在IVRP试验中，使用下列血清型-特异性捕获抗体H6.M48mAb(IgG0用于HPV6，K11.B2mAb(IgGO用于HPV11,H16.J4mAb(IgG2a)用于HPV16,H18.J4mAb(IgG2a)用于HPV18,H31.5F12.D4mAb(IgG0用于HPV31,H45.6G6.A8mAb(IgG2b)用于HPV45,H52.8D11.C4mAb(IgG2b)用于HPV52，H58.2C3.F7mAb(IgGO用于HPV58。在试验中使用下列血清型-特异性检测抗体H6.B10.5mAb(IgG2b)用于HPV6,H11.B2mAb(IgG2b)用于HPV11,H16.V5mAb(IgG2b)用于HPV16,H18.R5mAb(IgG2b)用于HPV18,M31.5D10.E4mAb(IgG2b)用于HPV31,H45.10B4.H4mAb(IgG!)用于HPV45,H52.9F7.E10mAb(IgG2a)用于HPV52,H58.6E11.F4mAb(IgG2b)用于HPV58。<吏用白色FluoroNuncMaxiSorp96孑L4設孑L4反(FisherScientific;Pittsburgh,PA)，在TecanFreedomEVO工作站(TecanUSA;ResearchTriangle,NC)上进行试验。在用10mMTris(pH8)緩沖的1M硫酸铵中，首先用捕获抗体涂渍试验平皿(100juL/孔)，而后在2-8。C培养16-24小时。培养之后，用Tris-緩冲盐水(TBS)(含有0.05%Tween20)洗涤平皿，而后用200juL/孔的试验稀释剂(TBS,含有0.05%Tween20和1%牛血清白蛋白)封闭一,J、时。在加入样品之前，将佐剂吸附的样品和标准样品在6。/。柠檬酸盐磷酸盐緩冲液(pH6.7-6.8)(含有1MNaCl和0.04%Tween80)中稀释5倍，在章动器上、在环境温度下培养2±0.5小时，使佐剂溶解。将没有吸附于佐剂上的样品也在溶解緩冲液中稀释，但不培养。然后在Nunc96孔聚丙烯微孔板(源于FisherScientific(Pittsburgh,PA))中，用试验稀释剂将每个样品和参考标准稀释至血清型-特异性靶向浓度。用该初始稀释物，在试验平皿中制备每个样品和参考标准的十一个两倍系列稀释物。在室温下培养12-20小时之后(摇动)，洗涤平i,随后将100juL检测抗体加入到每个孔中。在室温下培养平皿一'J、时，再次洗涤。然后，将100pL与碱性磷酸酶共轭的大鼠抗小鼠单克隆抗体(IgGhIgG2a或IgG2b)(S0uthernBiotechnology(Birmingham,AL)或BDPharmingen(BDBiosciences;SanJose,CA)提供)力。入到每个孔中。在室温下培养一个小时之后，洗涤平皿，除去任何未结合的共轭物。然后，加入100juL4-甲基伞形基(umbelliferyl)磷酸盐(4-MUP)基质溶液(得自于ViroLabs(SuperPhos;Chantilly,VA)),反应一'J、时。如下测定每个孔的荧光在360nm的激发波长处和450nm的发射波长处，在TecanUltraEvolution384平皿读数器(TecanUSA;ResearchTriangle,NC)上将平皿读数。将得到的荧光强度相对于稀释因数作图，使用四参数逻辑斯谛;溪型分析数据<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>其中X是样品稀释度，y是测定的荧光响应，A是渐近最大值，B是斜率，C是ED50(即产生等于50%最大响应的响应时的理论稀释度)，D是渐近最小值。将相同的渐近最大值和最小值用于标准和样品，反复调节每个样品和标准的ED50和斜率，直到均方根误差减到最小为止。一旦确定了每个独立样品和标准的最佳ED50和斜率，对样品进行平行试验。如果样品斜率在参考标准斜率的20%范围之内，认为试验样品与标准平行，使用普通斜率模型重新分析数据。将普通斜率、渐近最大值和渐近最小值用于样品和标准，并将样品和标准的ED50独立地最佳化，使均方根误差减到最小。使用下列方程式计算最终IVRP:IVRP=(ED50样。。。/ED50标准)x参考标准效能随后通过除以蛋白浓度将结果归一化，由此产生IVRP与蛋白的比率。IVRP与蛋白的比率提供了每单位质量的功能性抗原决定部位(epitopes)的测定方法。结果表明，在40。C存储6个月之后，在加上和减去MAA的两个样品中，所有八个类型的HPV抗原保持了100%抗原性，与存在和不存在IMX无关(参见图6)。在两个减去MAA制剂(土IMX)中，在37°C6个月之后，所有HPV类型的抗原性仅仅保持10%。然而，在两个加上MAA的制剂(土IMX)中，每个HPV类型还高于75%活性，表明HPVVLPs在没有MAA的情况下是不稳定的。IVRP结果比得上SDS-PAGE数据(date),表明在基于IMX的HPV制剂中需要MAA。包含防腐剂的HPV制剂的形成实施例7抗微生物的防腐剂的效果评价使用抗菌试-验(抗微生物的效果(AME)试-睑)，评价各种防腐剂在候选HPV疫苗制剂中的效果。AME试验用于测定防腐剂降低或消除可能在产品取出之后引入管瓶中的微生物的能力。对于试^r的说明，参见UnitedStatesPharmacopoeia(USP)<51>,EuropeanPharmacopoeia5.1.3,和Meyer等人J.Pharm.Sci.96(12):3155画3167(2007)，将其结合到本文中作为参考。简要地说，AME试验包括EPA、EPB和USP标准，其包括在时间零点，每个容器接种105106CFU/mL微生物(例如细菌和真菌)，并且评价随着时间推移的对数减少(Meyer等人，上文)。使用下列七个防腐剂进行初始防腐剂筛选苯曱醇，氯丁醇(加上EtOH)，间甲酚，对轻基苯曱酸曱酯，对羟苯曱酸丙酯，苯酚和2-苯氧乙醇，以各种剂量和组合形式。这些防腐剂已经在商品化的肠胃外产品中用作抗微生物的防腐剂。也包括硫汞撒作为参考。基于先前的工作和可利用的文献，选择防腐剂的初始剂量和组合。更具体地-说，在下列范围内来试-睑浓度；0.5-1.2%苯曱醇；0.25-0.5%氯丁醇(0.5。/oEtOH或3.0。/oEtOH);0.15-0.3%间甲酚；0.045-0.18%对羟基苯曱酸曱酯;0.005-0.02%对羟苯甲酸丙酯;0.25-0.5%苯酚;0.25-0.5%2-苯氧乙醇；和0.002-0.01%硫汞撒。所有的样品含有562.5mcg/mLMAA、0.32MNaCl、10mMHis、0.01%聚山梨酸酯-80(PS-80),pH6.2。在加入和未加入120mcg/mLISCOMATRIX⑧的条件下，试-险含有氯丁醇和对羟苯曱酸丙酯的制剂。以溶液形式提供苯甲醇、苯酚、2-苯氧乙醇和间曱酚，并且直接加入到HPV制剂中。以粉末形式提供氯丁醇，并且溶于100%乙醇中，制备储备溶液。将硫汞撒溶于USP水中，制备储备溶液。通过称出每个粉末，并且在100%乙醇中制备储备溶液，来制备对羟基苯曱酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯的组合。用6.2的粑向pH值来调节溶液的pH值。将防腐剂加入到八价HPV制剂中，制剂包含8个类型的HPVVLPs,如实施例1所述，并且在AME试验之前在2-8。C存储一周。使含有1.2%苯曱醇、0.5%氯丁醇和0.3%间甲酚的制剂通过AME试验的USP、EP-B和EP-A标准(参见Meyer等人，上文)。使含有0.4%和0.5%苯酚的制剂通过USP和EP-B试验，而不通过EP-A试验。试验含有其它防腐剂的制剂，使其只通过USP试验。因此，选择含有1.2%苯甲醇、0.5%氯丁醇、0.3%间甲酚和苯酚(在0.4%或0.5%的浓度下)的制剂，用于更进一步的评价。实施例8评价防腐剂对HPVVLP抗原的结构稳定性的影响差示扫描量热法(DSC)用于评价防腐剂对蛋白结构和热稳定性的影响。使用VP-CapillaryDSC平台(MicroCal,LLC,Northampton,MA),测定抗原热稳定性的分析。所使用的条件的详细说明公开在下列中Ionescu等人(2007)(丄尸/ar肌5"d97(4):1414-1426(2008》。选择HPV18VLPs作为模型HPV抗原，用于DSC分析，因为与其它试验类型相比，这类VLP产生最实用的DSC信号，并且代表不太稳定的VLP类型。在各种防腐剂(浓度有所变化)的存在下，进行DSC评价。结果表明，0.5%氯丁醇、0.15%间甲盼、0.25%苯酚、0.5%乙醇(氯丁醇的溶剂)和0.25%2-苯氧乙醇对HPV类型18的热稳定性具有最小的影响(数据未显示)。对于硫汞撒、1.2%苯曱醇和0.045/0.005对羟基苯曱酸曱酯，观察到对热稳定性的最大影响。然而，因为1.2%苯甲醇制剂通过了EP-A(实施例7),并且还具有高biacore响应(实施例9),因此仍然选择它用于更进一步的稳定性试验(实施例11-12)。同样，当与较低浓度的这些防腐剂相比时，虽然高浓度的间甲酚(0.3%)和苯酚(0.5%)对热稳定性具有相对更大的影响，但还是选择更高浓度用于更进一步评价，这是由于通过了EP-A(0.3。/。间甲盼)和EP-B(0.5o/。苯酚)(参见实施例7)。不考虑防腐剂2-苯氧乙醇用于更进一步的评价，因为它没有通过EP-B或EP-A(参见实施例7)。实施例9防腐剂对HPVVLP抗原活性的影响4吏用中和抗体结合试马全(Biacore,SurfacePlasmonResonance),评{介包含HPV18VLPs和各种防腐剂的HPV疫苗制剂的体外抗原性。使用Biacore2000(VPR332)和Biacore3000(VPR696)(Biacore,Inc.,Piscataway,NJ)，测定抗原生物活性的分一斤。使用的条件描述在Mach等人(J.尸/z鍾.5"cz'.95:2195-2206(2006))中，对其做了修改。在通过铝溶解进行样品处理之前，在2-8。C培养样品2个月，而后进行最终的Biacore分析。Biacore结果表明，试验的防腐剂对HPV类型18VLPs的生物活性没有显著的影响(数据未显示)。除对羟基苯曱酸曱酯/对羟苯甲酸丙酯(相对体外抗原性，平均值77%,n-2)和^L汞撒(thim画al)(相对体外抗原性，平均值80%,n-2)之外，所有结果在试验的变化范围之内(+/-15%最大值)。实施例10防腐剂与铝和IMX、小玻璃管和塞子的相互作用使用反相(RP)-高压液相色谱(HPLC),进行防腐剂稳定性的分析，如下列所述Dunn等人(丄P/wmSc/72:277-80(1983》。该方法用于评价防腐剂与铝佐剂、玻璃容器和塞子的可能的相互作用。结果表明，接触铝佐剂之后，没有检测到防腐剂的损失(数据未显示)。该结果与我们先前的研究一致，这表明试-验的防腐剂没有与MAA结合。这些研究还表明，IMX不影响防腐剂浓度或HPV稳定性。用小玻璃管(数据未显示)和塞子进行类似的研究。用四个不同的防腐剂(在HPV制剂緩冲液中)，评价防腐剂与Teflon涂渍的塞子(FluroTec,WestPharmaceuticalServices,Inc.,Lionville,PA)的相容性。试验的制剂包含1.2%苯曱醇、0.5%苯酚、0.5%氯丁醇或0.3%间曱酚的最后浓度。将每个样品以0.75mL的体积填充到两个3mL小玻璃管(带有FluroTec⑧涂渍的塞子)中。将管瓶在室温下存储6个月，其中一个管瓶倒置，另一个正置。使用如上所述的RP-HPLC方法，测定防腐剂的浓度。结果表明，对于与塞子接触的那些样品，在室温下贮存6个月之后，没有检测到防腐剂丧失。这些结果表明，在HPV制剂緩冲液中，防腐剂不会与FluorTec涂渍的塞子相互作用或吸附到其上面。RP-HPLC方法还用于评价防腐剂在HPV疫苗制剂中的稳定性。短期的初步研究表明，当HPV疫苗在2-8。C存储时，所选才奪的防腐剂相当稳定(数据未显示)。对于长期稳定性研究的更详细评价描述在实施例11-12中。实施例11HPV疫苗制剂的稳定性评价物质和方法基于从AME、DSC和Biacore分析(实施例7-9)获得的原始数据，选择五个含有防腐剂的制剂(1.2%和0.9%苯曱醇、0.5%氯丁醇、0.3%间曱酚和0.5%苯酚)，用于更进一步的在长期稳定性研究中的分析。在存在或不存在IMX佐剂的条件下，试验一些HPV疫苗制剂(具有防腐剂的不同剂量和组合)。4吏每个类型的HPVVLP含水团块吸收在MAA上(独立地具有0.71的蛋白与佐剂比例)，在0.32MNaCl、10mM组氨酸(pH6.2)、0.01%(w/v)PS-80中形成单价疫苗。然后将八个独立的单价疫苗掺合在一起，获得40、80、80、40、40、40、40和40mcg/mL的蛋白浓度，分别用于HPV类型6、11、16、18、31、45、52和58。这种组合形成八价疫苗。另夕卜，一些制剂含有Isocomatrix⑧(IMX,CSLLtd.,Parkville，Australia)佐剂。在HPV疫苗缓冲液中制备原料IMX(如上所述)。然后将IMX加入到八价疫苗中，至240mcg/mL的最后浓度，使用沉降-倾析工艺，形成含有IMX佐剂的八价HPV疫苗。将制剂平缓混合，在40。C存储过夜。初始防腐剂筛选(实施例7)使用120mcg/mLIMX(在氯丁醇制剂中)，因为当这些实验进行时，最终IMX浓度没有确定。将制剂以0.75mL的体积填充在3mL小玻璃管(带有Teflon涂渍的塞子(FluroTec⑧，WestPharmaceuticals,Lionville,PA))中，在试l全之前，在2-8、25、30和37。C保存在受控的热单元中。在无菌条件下进行制剂和填充工艺。对于在2-8。C保存的制剂，计划在第0、8、12、24和36个月进行测定，用于防腐剂、HPVVLP和IMX佐剂试验。实施例12HPV疫苗制剂的稳定性评价利用AME试验评价防腐效果使用AME试验，首先评价制剂(得自于实时研究(2-8。C))在0时间点的防腐效果。在存在或不存在IMX的条件下下，使含有0.5%氯丁醇和0.3%间甲酚的制剂通过USP、EP-B和EP-A试验。使含有1.2%苯甲醇(没有IMX)的制剂通过USP、EP-B和EP-A,但含有IMX的制剂不通过EP-A.在存在或不存在IMX的条件下，使没有通过EP-A的制剂也包含0.9%苯曱醇和0.5%苯酚。3.3.3.在2-8°CJi&存8个月和在30和37°C贮存3个月的稳定性数据对于HPVVLPs,使用体外抗原性(Biacore)来评价多剂量的、含有防腐剂的样品的稳定性，RP-HPLC用于评价防腐剂和IMX稳定性。源于促进的稳定性研究的数据(图7和8)表明，在30和/或37°C,所有的防腐剂对八价HPV疫苗的稳定性具有负面影响。然而，当在2-8。C保存制剂时，防腐剂显示没有显著地影响HPV疫苗稳定性，甚至贮存8个月之后(图7和8)。该数据还表明，对HPV疫苗的防腐效果随着防腐剂类型而变化。促进的稳定性研究的结果(在30。C)表明，比较所有试验的防腐剂，0.3%间甲酚是最佳防腐剂，对多剂量HPV疫苗的稳定性具有最小影响，而1.2y。苯甲醇和0.5。/c)氯丁醇防腐剂对HPV疫苗稳定性具有最大的影响。总的说来，仅仅三个防腐剂(0.9%苯甲醇、0.5%苯酚和0.3%间曱酚)对HPV疫苗稳定性具有相对较小的影响。实施例13利用RP-HPLC试-验来评价防腐剂在HPV疫苗制剂中的稳定性利用先前描述的RP-HPLC分析(实施例10),检测防腐剂在多剂量HPV疫苗中的稳定性。结果表明，在存在或不存在IMX的条件下，所有五个防腐剂在多剂量疫苗制剂中是稳定的(图9)。与贮存温度或持续时间没有关系，在该研究期间，对于所有的试验用制剂，没有观察到防腐剂损失。权利要求1.药物组合物，其包含至少一种类型的人乳头瘤病毒(HPV)的病毒样颗粒(VLPs)、铝佐剂、ISCOM型佐剂和可药用载体，其中所述VLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+L2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于所述铝佐剂上。2.权利要求1的药物组合物，其中HPVVLPs的至少一种类型选自HPV6,HPV11,HPV16,HPV18,HPV26,HPV31,HPV33,HPV35,HPV39,HPV45,HPV51,HPV52,HPV53,HPV55,HPV56，HPV58,HPV59,HPV66,HPV68,HPV73和HPV82。3.权利要求1或2的药物组合物，包含HPV类型6、11、16和18的VLPs。4.权利要求1或2的药物组合物，包含HPV类型31、45、52和58的VLPs。5.权利要求2-4的任一项的药物组合物，进一步包含选自下列的其它HPV类型的VLPs:HPV26,HPV33,HPV35，HPV39，HPV51，HPV53,HPV55,HPV56,HPV59,HPV66,HPV68,HPV73和HPV82。6.权利要求1-5的任一项的药物组合物，其中铝佐剂选自羟基磷酸铝(A1P04)、非晶形的羟基磷酸铝硫酸盐(AAHS)和氬氧化铝(Al(OH)3)。7.权利要求6的药物组合物，其中铝佐剂包括A1P04或AAHS,该佐剂包含以大约0.1至大约1.1的磷酸根(P04)与铝(A1)的摩尔比存在的^岸酸一艮和铝。8.权利要求6或7的药物组合物，其中铝佐剂包括以大约0.2至大约0.5的PCVA1摩尔比存在的磷酸根和铝。9.3又利要求1-8的4壬一项的药物组合物，其中ISCOM型佐剂是ISCOMATRIX⑧。10.人乳头瘤病毒(HPV)疫苗制剂，其包含(a)至少一种HPV类型的HPV病毒样颗粒(VLPs),其中HPV类型选白HPV6,HPV11,HPV16,HPV18,HPV26,HPV31,HPV33,HPV35,HPV39,HPV45，HPV51,HPV52,HPV53,HPV55,HPV56,HPV58,HPV59,HPV66,HPV68,HPV73和HPV82;所述HPVVLPs由HPV的重组体L1或重组体L1+L2蛋白组成；其中任何一种HPV类型的VLPs以大约10jug至大约100jug的浓度存在，且其中总VLP浓度在10|ug和600jLig之间；(b)大约150jug至大约600jug的铝佐剂；和(c)大约10iug至大约200jug的ISCOM型佐剂；其中所述HPVVLPs吸附在所述铝佐剂上。11.权利要求10的HPV疫苗制剂，进一步包含抗菌防腐剂，抗菌防腐剂选自间甲酚、苯酚和苯曱醇。12.权利要求11的HPV疫苗制剂，其中抗菌防腐剂包括大约0.15至大约0.31%浓度的间曱盼、大约0.25至大约0.55%浓度的苯纷、或大约0.75至大约1.2%浓度的苯甲醇。13.权利要求10的HPV疫苗制剂，包含(a)大约20jug至大约80jug的^f壬何一种HPV类型的VLPs;(b)大约200jug至大约300jug的铝佐剂；和(c)大约15jug至大约120jug的ISCOM型佐剂。14.4又利要求10的HPV疫苗制剂，包含(a)大约20jug至大约80jug的任何一种HPV类型的VLPs;(b)大约300jug至大约500jug的铝佐剂；和(c)大约15jig至大约120|ug的ISCOM型佐剂。15.权利要求10的HPV疫苗制剂，包含HPV类型6、11、16和18的VLPs。16.权利要求15的HPV疫苗制剂，进一步包含HPV类型31、45、52和58的VLPs。17.权利要求10的HPV疫苗制剂，包含HPV类型31、45、52和58的VLPs。18.权利要求16或17的HPV疫苗制剂，进一步包含选自下列的其它HPV类型的VLPs:HPV26,HPV33，HPV35，HPV39,HPV51，HPV53，HPV55，HPV56，HPV59,HPV66,HPV68,HPV73和HPV82。19.权利要求10的HPV疫苗制剂，其中ISCOM型佐剂是ISCOMATRIX⑧。20.权利要求10的HPV疫苗制剂，包含(a)大约20lug至大约80jugHPV类型6、11、16、18、31、45、52和58中每一种的VLPs，所述HPVVLPs由HPV的重组体Ll或重组体Ll+L2蛋白组成；(b)大约200jug至大约500jug的铝佐剂；和(c)大约30jug至大约120iug的ISCOM型佐剂；其中所述HPVVLPs吸附在所述铝佐剂上。21.在人患者中对人乳头瘤病毒(HPV)引起免疫应答的方法，包括给予患者权利要求1-9的任一项的药物组合物。22.防止人患者感染人乳头瘤病毒(HPV)的方法，包括:给予患者权利要求1-9的任一项的药物组合物。23.防止人患者感染人乳头瘤病毒(HPV)的方法，包括(a)给予患者第一个药物组合物，第一个药物组合物包含重组体HPV病毒样颗粒(VLPs)、铝佐剂和ISCOM型佐剂，其中HPVVLPs由HPV的重组体L1蛋白或重组体L1+1>2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于铝佐剂上；(b)经过预定量的时间；和(c)给予患者第二个药物组合物，第二个药物组合物包含重组体HPVVLPs、铝佐剂和ISCOM型佐剂，其中HPVVLPs由HPV的重组体Ll蛋白或重组体L1+!^2蛋白组成，且其中所述VLPs吸附于铝佐剂上。24.权利要求23的方法，其中第二个药物组合物包含在第一个药物组合物中不存在的HPV类型的HPVVLPs。25.多剂量HPV疫苗制剂，包含(a)至少一个HPV类型的HPV病毒样颗粒(VLPs);所述HPVVLPs由HPV的重组体L1或重组体L1十L2蛋白组成；(b)铝佐剂；和(c)抗菌防腐剂，选自间曱酚、苯酚和苯甲醇，其中所述HPVVLPs吸附在所述铝佐剂上。26.权利要求25的多剂量HPV疫苗制剂，其中抗菌防腐剂包括大约0.15至大约0.31%浓度的间甲酚、大约0.25至大约0.55%浓度的苯酚、或大约0.75至大约1.2%浓度的苯甲醇。27.权利要求26的多剂量疫苗制剂，其中抗菌防腐剂包括大约0.3%浓度的间曱酚、大约0.5%浓度的苯酚、或大约0.9%浓度的苯曱醇。全文摘要本发明涉及药物组合物，其包含HPV的病毒样颗粒(VLPs)，所述VLPs吸附到铝佐剂上，和ISCOM型佐剂，ISCOM型佐剂包括皂草苷、胆固醇和磷脂。在优选实施方案中，铝佐剂包括非晶形的羟基磷酸铝硫酸盐。本发明的另一个方面提供了多剂量的HPV疫苗制剂，其包含HPVVLPs和选自间甲酚、苯酚和苯甲醇的抗菌防腐剂。还提供了在人类患者中使用本公开药物组合物和制剂来针对HPV引起免疫应答至预防HPV感染的方法。文档编号A61K39/12GK101622008SQ200880006855公开日2010年1月6日申请日期2008年3月6日优先权日2007年3月9日发明者B·K·迈尔,B·胡,D·凯西米罗,J·T·布赖恩,L·施,M·K·布朗罗,W·L·麦克莱门茨申请人:默克公司