专利名称：治疗再狭窄的DNAzyme和方法
技术领域：
本发明涉及采用DNAzyme抑制再狭窄的起病。所述DNAzyme通过切割编码c-myc的mRNA达到这一目的，而在血管平滑肌细胞中c-mcy的表达是再狭窄的发生所需要的。
人们认为再狭窄是由(至少部分是由)在血管形成术过程中发生的血管损伤之后平滑肌细胞(“SMC’s”)过分增殖而引起的。认为几种生物调节剂有助于这种SMC的增殖。这些调节剂包括血小板衍生生长因子(“PDGF”)、成纤维细胞生长因子(“FGF”)和胰岛素样生长因子(“IGF”)(Ross；Banscota；Libby；Gay)。这些调节剂对SMC增殖的诱导作用经由许多重要基因的胞内反式激活作用而发生(Kindy；Gadeau)。这些基因包括c-myc、c-myb、c-fos和PCNA(增殖细胞核抗原)，且一般是细胞周期特异性的。
具体地说，在血管损伤30分钟至2小时内，c-myc在SMC’s中过量表达，且表达在此后12小时内降低至正常水平。也就是说，血管成形术引起血管SMC损伤，后者引起c-myc在损伤后30分钟至2小时开始过量表达，而在损伤后12小时结束。
目前采用放射疗法和药理学疗法治疗再狭窄。放射疗法包括放射性植入物或将放射性组合物传递到正在治疗的位点上。尽管放射治疗已经显示出一些有希望的成果，却产生了内冠状放射的长期副作用。关于药理学疗法，到此为止使用的抗-thrombotin和抗增殖的方法一般都没有效果(Bennet)。
DNAzvme在人类基因治疗中，反义核酸技术已经是选择用于使那些表达引起疾病并因此不希望有的基因失活的主要方法之一。所述反义的方法使用一种核酸分子，它互补于编码不希望有的基因的mRNA分子，并因此与之杂交。这种杂交导致了基因表达的抑制。
反义技术有某些缺点。反义杂交的结果是DNA/目标mRNA异源双链体的形成。该异源双链体作为RNA酶H介导的降解目标mRNA成分的底物。在此，所述DNA反义分子以被动方式作用，因为它仅仅有助于内源RNA酶H的所需切割。这种对RNAse H的依赖在反义分子的化学性质和与其目标mRNA形成稳定异源双链体的能力方面，限制了反义分子的设计。反义DNA分子也有与非特异性活性的相关问题，在较高浓度下甚至有与毒性相关问题。
作为反义分子的替代物，催化核酸分子已表明有希望作为用于抑制基因表达的治疗剂，且在文献中广泛讨论(Haseloff；Breaker(1994)；Koizumi；Otsuka；Kashani-Sabet；Raillard；和Carmi)。这样，不同于常规的反义分子，催化核酸分子通过真正切割它的目标mRNA分子而不是仅仅与之结合而起作用。如果目标序列满足某些最低需要，则催化核酸可以只切割目标核酸序列。所述目标序列必须互补于催化核酸的杂交区域，并且该目标必须在切割位点包含特异序列。
有许多资料记载了催化RNA分子(“核酶”)(Haseloff；Symonds；和Sun)，并且已经表明它们既能够切割RNA分子(Haseloff)又能够切割DNA分子(Raillard)。事实上，在体外选择和进化技术的发展已经使采用已知核酶的随机变体或随机序列RNA作为起始点而获得针对已知底物的新核酶成为可能(Pan；Tsang；和Breaker(1994))。
然而，核酶在它们进行作用的细胞中对酶水解作用是高度敏感的。这本身又限制了它们的药学应用。
近来，创造了一类新的名为“DNAzyme”的催化分子(Breaker(1995)；Santoro)。DNAzyme是单链的，切割RNA(Breaker(1994)；Santoro)，也切割DNA(Carmi)。已经提出了DNAzyme的一般模型，称为“10-23”模型。按照“10-23”模型的DNAzyme，也简称为“10-23DNAzyme”，它包含一个15个脱氧核糖核苷酸的催化域，侧翼为两个分别含7-9个脱氧核糖核苷酸的底物识别域。体外分析表明，这种类型的DNAzyme能在生理条件下在嘌呤嘧啶连接处有效地切割它的底物RNA(Santoro)。
DNAzyme表明有希望成为治疗药物。然而，DNAzyme成功对抗由于已知mRNA的存在而导致的疾病是不可预料的。这种不可预料性部分归因于两个因素。首先，某些mRNA二级结构可能阻碍DNAzyme结合并切割其目标mRNA的能力。其次，表达目标mRNA的细胞对DNAzyme的吸入可能不够有效地提供有治疗意义的结果。由于这些原因，仅仅知道疾病和它的成因目标mRNA序列不能单独允许人们合理地预料针对目标mRNA的DNAzyme的治疗成功，因为缺少一个发明性步骤。
本发明也提供了用于抑制再狭窄起病的药用组合物，它包含所述DNAzyme和适用于局部给药的药用可接受的载体。
本发明还提供用于抑制再狭窄起病的血管成形术斯滕特固定模，它包括可操作地涂上预防有效剂量的所述药用组合物的血管成形术斯滕特固定模。
本发明还提供了用于抑制经受血管成形术的受治疗者中再狭窄起病的方法，它包括在血管成形术时前后一般给予所述受治疗者预防有效剂量的所述药用组合物。
最后，本发明提供用于抑制经受血管成形术的受治疗者中再狭窄起病的方法，它包括在血管成形术时前后局部给予所述受治疗者所述的血管成形术斯滕特固定模。
图2显示c-myc RNA-切割DNAzyme的设计。c-myc DNAzyme的切割位点选在人类c-myc mRNA(第二个外显子)的AUG起始子密码子。如图所示，切割发生在A和U之间。
图3显示最佳化的DNAzyme臂长和化学修饰。基于“10-23”型设计了具有不同臂长的c-myc-切割DNAzyme。由阴影C或G(3’INV)表示在3’端的3’-3’末端碱基倒置。
图4显示多转换(multiple turnover)动力学。图A显示16％聚丙烯酰胺凝胶的光密度测量图象，它是采用磷光成像器(PhosphorImager)(Molecular Dynamics)而获得的，显示在多转换条件下对合成的c-mycmRNA的切割。所有的反应均用200pM DNAzyme和2nM、4nM、8nM、16nM和32nM的底物mRNA(如所示)进行。每个反应的温育时间在0-60分钟之间，在每道的顶端注明。图B显示每个底物浓度的DNAzyme切割进程(nM)曲线。这些数据是从图A所示的切割条带的光密度测定中得到的。
图5显示体外c-myc mRNA的切割。在有32P-UTP的情况下从PGEM载体中转录1.5kb c-myc mRNA底物。切割反应于10mMMgCl2、50mM Tris.HCl pH7.5、37℃下进行60分钟。
图6显示人类血清中3’-倒置DNAzyme的稳定性分析。DNAzyme与AB型人类血清(Sigma)一起温育。在所示的不同时间点收集样品，并用32P标记。该标记的DNAzyme在16％聚丙烯酰胺凝胶中分析。这里显示了未修饰的DNAzyme的典型凝胶带型(上右角)和3’-倒置的DNAzyme的典型凝胶带型(下右角)。
图7显示在SV-LT-SMC’s中对c-myc mRNA切割DNAzyme的测试。生长停滞的SMC’s用10％FBS-DME(包含0.5％牛胎血清的Dulbecco改进的Eagle培养基)在有以下物质的情况下刺激10mM称为Rs-6的抗-c-myc mRNA DNAzyme(下述)、10mM对照寡核苷酸(与Rs-6相同的臂序列，含倒置催化核心序列)或单独的脂质体(DOTAP；即N-[1-(2,3-二油酰氧基)]-N,N,N-三甲铵-甲基硫酸盐)。数据以均值±SD表示。
图8显示SMC’s中Rs-6 DNAzyme的剂量-反应实验。该实验详述按照图7。数据以对照的百分数表示。
图9显示在DNAzyme处理的SMC’s中c-myc的表达。如实施例7所述用35S-甲硫氨酸标记细胞，并进行免疫沉淀法以确定DNAzyme处理的SMC’s中c-myc蛋白的表达水平。
图10显示人类c-myc基因的基因组DNA序列(外显子1和2)。
发明详述本发明目的在于采用DNAzyme技术抑制再狭窄起病。所述疾病的起病，是在血管成形术过程中由动脉平滑肌的物理性损伤而触发的，其特征是在此后不久c-myc过量表达几个小时。这种c-myc过量表达导致SMC过度增殖，而抑制这种过量表达本身又抑制再狭窄起病。本发明通过在血管成形术时的前后应用c-myc mRNA特异性DNAmye于损伤区而利用这个c-myc过量表达的“时机窗口”，因此而切割mRNA并抑制再狭窄起病。
更具体的说，本申请提供了特异性切割c-myc mRNA的DNAzyme，其包含(a)一个催化域，它具有核苷酸序列GGCTAGCTACAACGA，并在朝着它的任何嘌呤嘧啶切割位点切割，(b)邻接催化域5’末端的一个结合域，和(c)邻接催化域3’末端的另一个结合域；其中所述结合域分别地互补于侧翼紧接c-myc mRNA中需要DNAzyme催化切割的切割位点的嘌呤残基的两个区域，并因此与之杂交，且其中每个结合域长度至少为6个核苷酸，两个结合域结合的总长至少为14个核苷酸。
这里所用的“DNAzyme”是指特异性识别并切割特殊的目标核酸序列的DNA分子，它可以是DNA或RNA。所述DNAzyme切割RNA分子，如图1所示它是“10-23”型的，如此命名是由于历史原因。在Santoro中描述了这种类型的DNAzyme。10-23 DNAzyme需要的RNA目标序列是由NNNNNNNR*YNNNNNN、NNNNNNNNR*YNNNNN或NNNNNNR*YNNNNNNN构成的任何RNA序列，其中R*Y是切割位点，R是A或G,Y是U或C,N是任意的G、U、C或A。
在本发明的参量中，结合域的长度(这里也称为“臂长”)可以任意变更，可以相同或不同。预想了各种变更如7+7、8+8和9+9，且在后面的实施例中更全面地列举。已经很好地证实了结合域的长度更长，那么它与互补的mRNA序列就结合得更紧。因此，在优选的实施方案中，每个结合域的长度为9个核苷酸。在一个实施方案中，所述DNAzyme具有TGAGGGGCAGGCTAGCTACAACGACGTCGTGAC序列(在此也称为“Rs-6”)。
在应用基于DNAzyme的治疗中，DNAzyme在胞内环境下抗降解而尽可能地稳定是重要的。达到这一目的的一个方法是通过在所示DNAzyme的一个或更多个末端加入一个3’-3’-倒置。更具体地说，3’-3’-倒置(在此也简称为“倒置”)是指末端核苷酸及与其相邻的核苷酸的3’碳原子间的共价磷酸键合。这种类型的键合与相邻核苷酸的3’和5’碳原子间的一般磷酸键合反向，从而有“倒置”一词。因此，在优选的实施方案中，3’末端核苷酸残基在邻接催化域3’末端的结合域中倒置。除倒置外，所述DNAzyme还可以包含修饰的核苷酸。修饰的核苷酸包括如N3’-P5’磷酰胺(phosphoramidate)键和肽-核酸键。这些在本领域是众所周知的(Wagner)。
在本发明中，在c-myc mRNA中的任何邻接的嘌呤嘧啶核苷酸对都可以作为切割位点。在优选的实施方案中，嘌呤尿嘧啶是希望的嘌呤嘧啶切割位点。
包含所述切割位点的c-myc mRNA区域可以是任何区域。例如，c-myc mRNA中需要DNAzyme-催化切割的位置可以是翻译起始位点、剪接识别位点、5’非翻译区和3’非翻译区。在一个实施方案中，切割位点位于翻译起始位点。
人类c-myc mRNA序列和/或编码所述序列的DNA是众所周知的(Bernard)。如这里所用的“c-myc mRNA”是指由图10所示的人类c-myc DNA序列或由其任何自然存在的多态形式编码的任何mRNA序列。c-myc mRNA包括成熟mRNA和不成熟mRNA。在本发明的参量中，确定c-myc mRNA切割位点、每个结合域的所需序列和因此确定完整DNAzyme序列可以按照众所周知的方法进行。
本发明也提供了用于抑制再狭窄起病的药用组合物，它包含所述DNAzyme和适用于局部给药的药用可接受载体。
在本发明中，局部给予所述药用组合物可以采用本领域技术人员已知的任何不同方法和传递系统实现或完成。例如，局部给予可以经由导管和局部注射和经由如下讨论的涂层斯滕特固定模完成。
用于局部给予的药用载体在本领域中广为人知，将所述载体与待传递的活性剂混合的方法也是广为人知。以下使用许多常规使用的载体的传递系统，只是许多预想用于给予所述组合物的实施方案的代表。
局部传递系统包括如凝胶和溶液，并可以包含赋形剂如增溶剂、渗透增强剂(如脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪族醇和氨基酸)，和亲水聚合物(如polycarbophil和聚乙烯吡咯烷酮)。在优选实施方案中，所述药学上可接受的载体是脂质体或生物可降解的聚合物。可以用于本发明的脂质体的例子包括如下(1)CellFectm，阳离子类脂N,NⅠ,NⅡ,NⅢ-四甲基-N,NⅠ,NⅡ,NⅢ-四棕榈基(palmityl)精胺和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)(GIBCO BRL)的1∶1.5(M/M)脂质体制剂；(2)CytofectinGSV，一种阳离子类脂和DOPE的2∶1(M/M)脂质体制剂(GlenResearch)；(3)DOTAP(N-[1-(2,3-二油酰氧基)-N,N,N-三甲基铵-甲基硫酸盐](Boehringer Manheim)；(4)Lipofectamine，聚阳离子类脂DOSPA和中性类脂DOPE的3∶1(M/M)脂质体制剂(GIBCO BRL)。
本发明还提供用于抑制再狭窄起病的血管成形术斯滕特固定模，它包括可操作涂上预防有效剂量的所述药用组合物的血管成形术斯滕特固定模。
血管成形术斯滕特固定模，也叫其它名称如“血管内斯滕特固定模”或简单的“斯滕特固定模”，它们是本领域中众所周知的。它们经常用于阻止由物理性异常引起的血管闭合，如外科损伤引起的不希望有的血管组织向内生长的。它们经常含有一个与它们的功能相称的管状的、膨胀的格栅型结构，并且可选择地可被生物降解。
在本发明中，所述斯滕特固定模可以采用任何适合的本领域所知的方法可操作地涂上所述药用组合物。在此，“可操作地涂上”斯滕特固定模是指以这样的方式涂布一旦给予所述涂布的斯滕特固定模，则允许适时释放所述药用组合物于待治疗的周围组织。这种涂布方法，例如，可以采用聚合物聚吡咯(polypyrrole)。斯滕特固定模、用于涂上上述物质的方法和组合物在美国序列号60/091,217中详细讨论。
确定所述药用组合物的预防有效剂量可以采用常规计算方法基于动物数据完成。在一个实施方案中，所述预防有效剂量包含在约0.1mg和约1g之间的所述DNAzyme。在另一个实施方案中，预防有效剂量包含在约1mg和100mg之间的所述DNAzyme。在再一实施方案中，所述预防有效剂量包含在约10mg和50mg之间的所述DNAzyme。在又一实施方案中，所述预防有效剂量包含约25mg的所述DNAzyme。
本发明还提供了抑制经受血管成形术的受治疗者中再狭窄起病的方法，所述方法包括在血管成形术时的前后局部给予受治疗者有效剂量的所述药用组合物。如这里所用的，在血管成形术时的“前后”给予所述药用组合物，可以在该手术期间或紧随之前或之后进行。给予可以按照已知的方法进行，如导管传递。“抑制”再狭窄起病是指减弱发生于血管成形术之后的再狭窄的严重性，或完全阻止再狭窄起病。在优选的实施方案中，抑制再狭窄起病是指完全阻止再狭窄起病。
最后，本发明提供了抑制经受血管成形术的受治疗者中再狭窄起病的方法，所述方法包括在血管成形术时局部给予受治疗者所述血管成形术斯滕特固定模。
通过参考以下的实施例将更好地理解本发明，但是本领域技术人员将易于理解，它们只是说明如后面的权利要求书中更全面描述的本发明。另外，本申请中列举了不同的文献。这些文献的内容通过引用结合到本申请中，以更全面地描述本发明所属领域的技术状况。实施例采用多转换动力学检测合成的短c-myc RNA序列的体外DNAzyme催化切割的效力(图4)。含对称的7、8和9个碱基对底物结合臂的三种修饰的DNAzyme和它们未修饰对照与过量的32P-标记的合成c-myc RNA一起温育。根据kobs值确定动力学参量Km和kcat(表1)。
通过kat/Km的比率测定的每个DNAzyme的总催化效率在修饰的种类和未修饰的种类之间明显不同。在短臂DNAzyme(7+7bp)中，包含一个倒置碱基的修饰产生kcat/Km的3倍减小。与这种切割活性的负相应相反，长臂种类(9+9bp)由于有倒置碱基修饰，相对效率增强了10倍。中间长度(8+8bp)的结合臂DNAzyme受修饰作用的影响最小，显示kcat/Km值增加2倍。因此，3’-倒置末端碱基的影响根据底物结合臂的长度而不同。在短臂(7+7bp)DNAzyme中，发现修饰作用对催化效率有害。然而，在长臂(9+9bp)分子中，它的确改善催化活性。未修饰的DNAzyme的活性以8bp底物结合臂最佳。在短臂(7bp)DNAzyme中，其总效率主要由于较高的Km(3.4-23nM)而较低。在臂长超过8bp(如9bp)的DNAzyme中，由于Km的相对升高(3.4-7nM)和kcat的减小(0.11-0.06min-1)，总活性减小。
这样，对于c-myc mRNA切割DNAzyme而言，发现未修饰型式的最佳切割效率是含8bp臂的型式。根据各自的kcat/Km值，未修饰的c-myc DNAzyme的7bp和9bp的型式总效率较低。
这三种不同大小的c-myc切割分子的动力学型式由于包含3’-末端核苷酸倒置而明显地改变。这种DNA修饰作用对c-myc RNA切割动力学的影响在短的7bp臂DNAzyme中特别明显。与未修饰型对比，这种分子按照它的kcat/Km值基本上没有效率。然而这种催化效率的减弱通过在8bp修饰型中添加另外两个核苷酸而恢复甚至增强。这表明短DNAzyme活性的减弱是由于DNA/RNA相互作用的一些干扰(由核苷酸倒置而引起的)引起的，它可以通过增加臂长度至8bp而得到恢复。通过进一步增加修饰型DNAzyme的长度至9bp，发现催化效率的另一个轻微改进。这与未修饰型DNAzyme的情况形成对照，未修饰型DNAzyme的情况证明当从8bp增加臂的长度至9bp时发现活性急剧下降。
这些结果证明8bp是未修饰型DNAzyme对c-myc RNA切割的最佳长度。在3’-倒置型DNAzyme中9bp的臂长度好象提供了最佳催化切割活性。含9bp臂的未修饰型DNAzyme中所见的催化效率的下降部分反映酶转换率的减弱，表现为较低的kcat值。这种较低的转换率可能是由于所述DNAzyme对反应物亲和力增强的结果，亲和力本身又减慢产物的解离。在通过末端碱基倒置修饰的DNA中避免了这种活性的减弱，这可能是对酶-产物相互作用的去稳定作用的结果。
表1c-myc-切割DNAzyme的动力学
分析三种不同长度、都针对起始子的DNAzyme(修饰的和未修饰的)的c-myc RNA切割的动力学。反应在有10mM MgCl2和50mMTris·HCl pH7.5的情况下，在含至少10倍过量的底物的多转换条件下进行。
图5显示了所有的DNAzyme以20-50％的切割速率有效地切割c-myc mRNA。如所预料的，较长臂的DNAzyme更有效地切割底物。3’-倒置碱基的修饰作用减小了7+7臂DNAzyme的切割效率，但增强了9+9臂DNAzyme的切割效率。有趣的是，预热和不预热的DNAzyme之间的DNAzyme切割效率没有不同。这种结果表明c-mycmRNA中的切割位点的可及性不受mRNA二级结构的影响。实施例3DNAzyme的化学修饰和稳定性以下方法分析在100％人类AB血清中DNAzyme的稳定性。简要的说，将150μM未标记的DNAzyme在37℃培养于100μl 100％的人类血清中温育，在时间点0、2、4、8、24、48和72小时取出重复样品5μl。取样时，立即将295μl TE(10mM Tris·HCl,pH7.5,1mlEDTA)加入到5μl的等分样品中，且进行酚/氯仿提取。每个时间点的所有样品用γ-32P-ATP末端标记，并且没有进一步纯化或沉淀就直接在16％PAGE凝胶中跑电泳，这样显示了所有完整的DNAzyme和降解产物。结果表明在3’-末端的3’-3’倒置大大地改善了DNAzyme在人类血清中的稳定性(t1/2=20小时)，而未修饰的DNAzyme显示半衰期＜2小时(图6)。
表2抗-c-myc DNAzyme对血清-刺激的平滑肌细胞增殖的影响
实施例6DNAzyme转染的SMC’s中c-myc蛋白的表达为了在分子水平上说明抗-c-myc DNAzyme的效力，采用免疫沉淀法分析DNAzyme处理的SMC’s中c-myc蛋白的表达。简单地说，SMC’s在没有血清的培养基中停滞72小时，然后在无met-free培养基(包含5％的透析胎牛血清)中于37℃培养1小时。除去培养基后，为细胞更换含5％的透析胎牛血清、100mCi/ml35S-Met和5mMDNAzyme的met-free培养基，并另外培养2小时。采用如所描述的方法制备细胞溶胞产物，并采用琼脂糖结合的抗-c-myc抗体检测c-myc蛋白。如图9所示，如通过代谢标记材料的免疫沉淀法确定，用抗-c-myc DNAzyme处理SMC’s明显地抑制c-myc蛋白的合成。SMC与对照寡核苷酸(Rs-8)一起温育对c-myc的表达没有影响。
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权利要求
1．特异性切割c-myc mRNA的DNAzyme，其包含(a)一个催化域，它具有核苷酸序列GGCTAGCTACAACGA，并在朝着它的任何嘌呤嘧啶切割位点切割，(b)邻接所述催化域5’末端的一个结合域，和(c)邻接所述催化域3’末端的另一个结合域；其中所述结合域分别地互补于侧翼紧接c-myc mRNA中需要DNAzyme催化切割的切割位点的嘌呤残基的两个区域，并因此与之杂交，且其中每个结合域长度至少为6个核苷酸，两个结合域结合的总长至少为14个核苷酸。
2．权利要求1的所述DNAzyme，其中每个结合域的长度为9个核苷酸。
3．权利要求1的所述DNAzyme，其中邻接所述催化域3’末端的所述结合域中的3’-末端核苷酸残基是倒置的。
4．权利要求1的所述DNAzyme，其具有TGAGGGGCAGGCTAGCTACAACGACGTCGTGAC序列。
5．权利要求1的所述DNAzyme，其中在c-myc mRNA中的切割位点是嘌呤尿嘧啶。
6．权利要求1的所述DNAzyme，其中c-myc mRNA中的切割位点位于选择以下的区域翻译起始位点、剪接识别位点、5’非翻译区和3’非翻译区。
7．用于抑制再狭窄起病的药用组合物，它包含权利要求1的所述DNAzyme和适用于局部给药的药学上可接受的载体。
8．权利要求7的所述的药用组合物，其中所述药学上可接受的载体选自脂质体和生物可降解的聚合物。
9．用于抑制再狭窄起病的血管成形术斯滕特固定模，它包括可操作地涂上有效预防量的权利要求7的药用组合物的血管成形术斯滕特固定模。
10．用于抑制经受血管成形术的受治疗者中再狭窄起病的方法，所述方法包括在所述血管成形术的前后局部给予所述受治疗者有效预防量的权利要求7的药用组合物。
11．用于抑制经受血管成形术的受治疗者中再狭窄起病的方法，所述方法包括在所述血管成形术的前后局部给予所述受治疗者权利要求9的血管成形术斯滕特固定模。
全文摘要
本申请提供了特异性切割c－mycmRNA的DNAzyme,它包含一个15个核苷酸的催化域和两个结合域,其中一个结合域邻接催化域的5’末端,另一个结合域邻接催化域的3’末端。本发明也提供用于抑制再狭窄起病的药用组合物,它包含所述的DNAzyme和适用于局部给药的药用可接受载体。本发明还提供了用于抑制再狭窄起病的血管成形术斯滕特固定模,它包括可操作涂上有效预防量的所述药用组合物的血管成形术斯滕特固定模。最后。本发明提供了用于抑制经受血管成形术的受治疗者再狭窄起病的方法,它包括局部给予受治疗者所述的药用组合物或血管成形术斯滕特固定模。
文档编号A61P9/00GK1323344SQ99811966
公开日2001年11月21日 申请日期1999年8月12日 优先权日1998年8月13日
发明者L·-Q·孙, M·J·凯恩斯 申请人:庄臣及庄臣研究股份有限公司