绿原酸在制备预防和治疗原发性皮肤t细胞淋巴癌的药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，尤其是原发性皮肤T细胞淋巴癌治疗领域，具体为绿 原酸在制备预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 原发性皮肤T细胞淋巴瘤（cutaneous T cell lymphoma, CTCL)，曾被称为蕈状肉 芽肿（granuloma fungoid)，是T淋巴细胞（特别是T辅助细胞亚群）起源的一种皮肤原发 淋巴癌。其作为一组具有明显异质性的淋巴增生性疾病，缺乏标准化治疗方案。
[0003] 在其发病早期，以增强患者免疫力和局部治疗为主，可用干扰素、卡介菌或转移因 子等；局部治疗可选用氮芥或芳香维A酸外用，电子束照射，X线、光化学疗法等均有一定疗 效。目前，尚未见用于该病治疗的新的化疗药及靶向治疗药物的报道。
[0004] 绿原酸（即3-咖啡奎宁酸）作为一种多酚类的化合物，其结构中的多羟基、不饱 和酯以及邻二酚结构可使绿原酸具有高抗氧性。目前，对绿原酸生理/药理活性研宄报道 的文献已有许多，如US5, 788, 971中报道了绿原酸的抗氧化作用对清除氧自由基的影响及 治疗炎症反应的作用。W099/34812报道了由三羟基酮、连翘精醇和绿原酸组成的制剂具有 的抗病毒、抗菌或免疫调节剂的功能。US20050282892记载了绿原酸治疗慢性粒细胞白血 病。SanR.H.C.等在MutaionRes. 1987,117:229~239中报道了关于多酚类化合物绿原酸 对黄曲霉素B1和苯并[a ]芘致癌物质活性的抑制作用。同时，中国专利CN201110373137. 8 公开了绿原酸在制备治疗肾癌的药物中的用途，CN201210086313. 4公开了一种治疗膀胱 癌的药物组合物，CN200710140602. 7公开了绿原酸在制备治疗小细胞肺癌的药物中的用 途，CN200610021897. 1公开了绿原酸在制备具有预防和治疗鼻咽癌功效的药物中的应用， CN200610021591. 6公开了绿原酸在制备具有预防和治疗宫颈癌功效的药物中的应用。
[0005]目前，还没有任何文献公开绿原酸用于治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的发明目的提供一种绿原酸在制备预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌 的药物中的用途。本发明通过实验证明，绿原酸能够激活CD4T淋巴细胞和CD8T淋巴细胞， 并以CD4T淋巴细胞和CD8T淋巴细胞为靶点，预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌。本发 明通过绿原酸促进机体T淋巴细胞的增殖，并激活T淋巴细胞，以达到治疗原发性皮肤T细 胞淋巴癌的目的。同时，绿原酸还能抑制原发性皮肤T细胞淋巴癌细胞的增殖，且抑制效果 与干扰素的抑制效果相近。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] 绿原酸在制备预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的药物中的用途。
[0009] 绿原酸在制备以CD4淋巴细胞为靶点预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的药物 中的用途。
[0010] 绿原酸在制备以CDS淋巴细胞为靶点预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的药物 中的用途。
[0011] 绿原酸在制备以CD4和CD8为靶点预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的药物中 的用途。
[0012] 以绿原酸为有效成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制成药物。
[0013] 其中，所述药物的剂型为注射制剂或口服制剂。
[0014] 其中，每制剂单位含有绿原酸l-1000mg。
[0015] 其中，药物临床使用剂量为l-100mg/kg。
[0016] 绿原酸与抗肿瘤药物在制备治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的联合用药物中的用 途，所述抗肿瘤药物为环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、白介素12、白介素2、Y干扰素中的一种或几 种。
[0017] 其中，所述绿原酸与抗肿瘤药物的剂量配比为1:5~5:1。
[0018] 原发性皮肤淋巴瘤属结外非霍奇金淋巴瘤，研宄证明：原发性皮肤淋巴瘤与有相 同组织学亚型的原发性淋巴结淋巴瘤在累及皮肤时，在临床及组织学特征、生物学行为及 预后，都有明显不同。此外，皮肤淋巴瘤的基因易位，癌基因表达，病毒片段，黏附分子，均有 不同于淋巴结淋巴瘤的特点。不同部位起源的形态学一致的淋巴瘤是许多不同的、器官相 关的淋巴细胞亚群的单克隆扩增，这些淋巴细胞保留了他们相应良性部分的许多特征。原 发性皮肤T细胞淋巴瘤（primary cutaneous T-cell lymphoma，PCTCL)是主要的原发性皮 肤淋巴瘤，以皮肤内辅助T细胞的单克隆扩增为特征，患都在数年内死亡，预后差。
[0019] 针对这一问题，申请人提供绿原酸在制备预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌的 药物中的用途。申请人通过研宄发现，绿原酸能够以T淋巴细胞亚群⑶4、⑶8细胞为靶点， 激活T细胞的功能，以达到预防和治疗原发性皮肤T细胞淋巴瘤。同时，绿原酸还能抑制原 发性皮肤T细胞淋巴癌细胞的增殖，且抑制效果与干扰素的抑制效果相近。
[0020] 基于上述发现，绿原酸可以和药学上可接受的辅料或辅助性成分制成药物，采用 各种制药技术，制备成注射制剂、口服制剂或外用透皮给药制剂等剂型。
[0021] 以下通过实验对绿原酸所具有的上述功效加以证实。应该理解的是，本发明的实 验例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改 进都属于本发明要求保护的范围。
【附图说明】
[0022] 本发明将通过例子并参照附图的方式说明，其中：
[0023] 图1为实施例1中，T淋巴细胞增殖检测结果（p〈0. 05)图。
[0024] 图2为实施例1中，⑶4T淋巴细胞检测结果图。
[0025] 图3为实施例1中，原发性皮肤T细胞淋巴癌细胞检测结果（p〈0. 05)图。
[0026] 图4为实施例2中，T淋巴细胞增殖检测结果（p〈0. 05)图。
[0027] 图5为实施例2中，⑶8T淋巴细胞检测结果图。
[0028] 图6为实施例2中，原发性皮肤T细胞淋巴癌细胞检测结果（p〈0. 05)图。
【具体实施方式】
[0029] 本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥 的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
[0030] 本说明书中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的 替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子 而已。
[0031] 实施例1以CD4T淋巴细胞为靶点治疗原发性皮肤T细胞淋巴癌
[0032] (1)动物模型建立及分组
[0033] 小鼠原发性皮肤T细胞淋巴癌模型，选取成年BABL/c小鼠，雄性，18-22g。实验 时，取生长良好的肿瘤组织，剪碎，研磨，过滤，用无菌生理盐水按1 :3比例稀释后，制成肿 瘤细胞悬液，每只小鼠腋背部接种〇. 2ml肿瘤细胞悬液。接种后次日动物随机分组，分为8 组，分别为：（1)阴性对照组（生理盐水组，NS)，（2)绿原酸给药组（CHA，5mg/kg)，（3)绿原 酸给药组（CHA，10mg/kg)，（4)绿原酸给药组（CHA，20mg/kg)，（5)干扰素给药组（IFN-y)， (6)绿原酸和干扰素同时给药组（CHA+IFN-y，5mg/kg)，（7)绿原酸和干扰素同时给药组 (CHA+IFN-y，10mg/kg)，⑶绿原酸和干扰素同时给药组（CHA+IFN-y，20mg/kg);每组20 只，称重，并开始给药。
[0034] 绿原酸给药组每天采用腹腔给药的方式注射各剂量的注射用绿原酸（拟给药时 间为15天）；干扰素给药组以腹腔给药的方式，隔天注射500单位的干扰素；绿原酸和干扰 素同时给药组以腹腔给药的方式，隔天注射500单位的干扰素和各剂量的注射用绿原；阴 性对照组每天采用皮下给药的方式注射相同剂量的生理盐水。分别于给药的第3、6、9、12 和15天分别各组小鼠3只，采用眼球取血法进行取血，离心后检测；同时对已经处死的小鼠 进行解剖，观察脾脏、胸腺和肿瘤，评价给药的效果。采用生物样品保存法对分离得到的小 鼠血清、脾脏、胸腺和肿瘤进行保存以备后期检测。
[0035] (2)T淋巴细胞增殖实验
[0036] 无菌条件下取小鼠的脾脏，加适量的Hank's液研磨，以200目细胞筛滤过，1500r/ m离心5分钟，弃上清，加Hank' s液重复洗涤2次。收集脾细胞，加适量的RPMI1640培养 液混悬，以0. 4%的台盼兰拒染色法计数，活细胞数不小于95%，加RPMI1640完全培养液稀 释，并调整细胞浓度至lxlO7个/ml。于96孔微量板中，每孔加100 y L脾细胞悬液和等体 积的ConA溶液（终浓度为5 y g/ml)、LPS溶液（终浓度为10 y g/ml)或RPMI1640培养液， 重复3孔。另设空白对照组。然后，再在37°C、5%C02培养4小时后，各孔加入50yl MTT 溶液（2mg/ml)，继续培养4小时。然后，再1000r/m离心5分钟，弃去各孔上清，分别加入 150 y 1酸性DMS0溶液，振荡，于室温暗处放15分钟，以酶标仪于波长578nm处测定0D值。
[0037] (3) CD4T淋巴细胞检测
[0038] 取血加抗体，取小鼠血1ml，用EDTAk3血常规管抗凝全血，试管标号。取50 y 1抗凝 全血，分别加入试管①、试管②，直接加至底部，不可触试管壁。试管①加入5 y 1抗体⑶4+， 试管②统一加入5 y 1抗体⑶3+和5 y 1抗体⑶4 +，用振荡器混匀后暗室放置20~30分钟， 使抗体与血样充分的结合；避光常温30分钟后，加裂解液：试管在振荡中加入500 y 1裂解 液，在30°C水浴中放置15分钟，达到透亮；裂解后，1500r/m离心5分钟，用PBS液洗2次， 加lmlPBS液1500r/m离心5分钟后去上液；再加入lmlPBS液，1500r/m离心5分钟后去上 液，加500 y 1PBS液，用流式细胞仪检测。
[0039] (4)原发性皮肤T细胞淋巴癌细胞检测
[0040] 用CFSE流式细胞实验检测原发性皮肤T细胞淋巴癌细胞。
[0041] 无菌条件下，取小鼠的瘤块，加适量的Hank' s液研磨，以200目细胞筛滤过， 15