用于预防对乳蛋白过敏和用于诱导口服耐受的低变应原性交联蛋白的制作方法
【专利说明】用于预防对乳蛋白过敏和用于诱导口服耐受的低变应原性 交联蛋白 发明领域
[0001] 本发明涉及用于预防对乳蛋白，如牛乳蛋白，过敏或用于诱导对这种蛋白的口服 耐受的低变应原性交联蛋白。本发明还涉及营养组合物，所述组合物包含用于预防对乳蛋 白过敏或用于诱导对乳蛋白的口服耐受的低变应原性交联蛋白，以及涉及低变应原性营养 组合物。
[0002] 发明背景
[0003] 在大多数情况下，与食物中的蛋白的反应导致食物过敏，其中在一生中最早出现 的通常为牛乳过敏。各种牛乳蛋白，例如，β乳球蛋白、酪蛋白、α-乳清蛋白和血清白蛋白 已被确定为过敏原（Wal，J.M. (1998) Cow's milk allergens, Allergy, 53, 1013-1022)。还 从牛乳中得到的蛋白质，如酪蛋白，已被确认为过敏原。
[0004] 在生命的早期，人的免疫系统还在形成，以及可能无法形成对食物性抗原的（口 服）耐受。其结果是：人类个体（如婴儿或儿童）对膳食蛋白显示夸张的免疫应答，并对其 形成过敏应答。
[0005] 通常，易感婴儿或儿童第一次遇到包含潜在过敏原的新食物之后立即形成食物过 敏。除了其母亲的乳汁之外，人类婴儿通常遇到的第一种膳食蛋白是牛乳蛋白，以及如上所 指出，牛乳蛋白是人类婴儿最常见的食物过敏原。人们通常接受如下观点：对牛乳过敏的婴 儿也具有增加的形成对其它膳食蛋白（如蛋和谷物蛋白）的风险。所有这些过敏可能临床 地表现为特应性疾病，如特应性皮炎、肠问题、湿疹和哮喘。因此，需要预防或治疗这样的过 敏。
[0006] 不打算限于任何理论，人们相信，在易于食物过敏的人体中，源于食物的蛋白为初 次致敏作用之后的诱导1型（急性）超敏反应的原因。导致食物过敏的对食物蛋白的1型 过敏反应的主要特征在于免疫应答的T辅助细胞2 (Th2)的极化，导致生成过敏原特异性的 IgE (致敏阶段）。
[0007] IgE结合到位于肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的高亲和力受体Fcs ε Rl，接着通过 特异性过敏原的受体的后续交联引起脱粒（效应器/激发阶段）。在特定的食物摄入之后 的几分钟至一小时内，介质（如组胺、白细胞三烯和细胞因子类）的释放导致涉及皮肤、胃 肠道、气道的临床症状并在某些时候导致过敏反应。
[0008] 从膳食的角度看，因而需要预防形成对乳蛋白，如牛乳蛋白，过敏。这是重要的，因 为通常牛乳或来自其它哺乳动物的乳被用来补充或完全代替人母乳来喂养婴儿。
[0009] 一般而言，推迟与完整乳蛋白（intact milk protein)的接触预防个体形成对乳 蛋白（如牛乳蛋白）过敏。基本上，存在两种方法来推迟与完整乳蛋白的接触。
[0010] 第一种方式是完全避免含有乳蛋白的食物。然而，这样的饮食具有依从性低的缺 点，因为可用的食品是非常有限的。此外，对于婴幼儿而言，基于牛乳蛋白的配方已被确定 为人类母乳的最佳替代品。
[0011] 预防形成对牛乳蛋白质过敏的第二种方式是：通过蛋白的构象变化来隐蔽、破 坏或暴露过敏的抗原决定位，或者通过改善位于蛋白内的隐蔽抗原决定位接近胃肠道 酶来改变过敏性能（Guo et al·，（1995) ,Susceptibility of β-lactoglobulin and sodium caseinate to proteolysis by pepsin and trypsin. , Journal of Dairy Science, 78, 2336-244)。
[0012] 一种常用的方法是广泛水解（潜在的）过敏性食物蛋白。然而，大多数情况下，这 些种类的产物具有较差的味道和差的功能特性，如不溶性，受损的乳化能力，和/或差的流 变性能。此外，通过广泛水解，这些蛋白可能会失去其诱导口服耐受的能力。这意味着所述 个体在摄取完整蛋白时将仍然容易形成过敏。
[0013] 预防食物过敏的另一种方式是通过在几周时间内向人个体给予相对少量的过敏 蛋白（如牛乳蛋白）的方式以诱导口服耐受。它也可能是以形成（轻微）改变形式将过敏 蛋白给予有过敏风险的个体。基于此目的，给予（部分地）水解蛋白。
[0014] 在 Fritsche 等人的著作（J. Allergy Clin. Immunol, Vol 100, No. 2, pages 266-273, 1997)显示使用具有18%的水解度的酶水解的乳蛋白能够诱导对完整牛乳蛋白 的口服耐受。这些实验的结果表明：使用这种水解的牛乳蛋白饲养的大鼠抑制了过敏反应， 其中，与未处理的蛋白相比，所述大鼠的变应原性已经降低了超过100倍。
[0015] 此外，在van Esch等人（Pedriatic allergy and immunology, 2011:22:820-826) 显示乳清蛋白水解产物具有诱导对乳清的口服耐受的能力。
[0016] 然而，如上面所指出，食物蛋白，特别是牛乳蛋白的酶水解导致差的味道和差的功 能性和/或流变性质，其中酪蛋白水解的食品的情形下更严重。这种差的味道和缺乏良好 的功能性和/或流变性质不得不用其它成分掩蔽，这进一步增加了所述方法和产品的成本 和复杂性。
[0017] 降低食物蛋白的抗原性另一种方式是聚合或交联这些蛋白（Clare, D.A.et al. , 2007, Transglutaminase polymerization of peanut proteins.Journal of Agriculture and Food Chemistry, 55, 432-438)〇
[0018] 在Villas-Boas等人的研究中，已经研究了转谷氨酰胺酶诱导的聚合 对 β 乳球蛋白的抗原性的作用（Villas-Boas, Μ. B.，et al. 2010, The effect of transglutaminase-induced polymerization in the presence of cysteine on β -Iactoglobulin antigenicity, International Dairy Journal, 20, 6, pp 386-392)。 在该研究中，必须使用额外的试剂（例如半胱氨酸）从而能够利用转谷氨酰胺酶处理β乳 球蛋白。此外，它显示进行聚合的样品的胃蛋白酶消化不抑制β乳球蛋白的抗原性。
[0019] 在Stanic等人的文章（Mol. Nutr. Food Res. 2010)中已经描述了通过酶处理的酪 蛋白的交联。然而，在这篇文章中仅研究了已经形成对酪蛋白过敏的个体。Stanic等人没 有公开交联酪蛋白的抗敏性能力，也没有描述预防形成对酪蛋白的过敏，也没有描述交联 酪蛋白或酪蛋白盐对诱导口服耐受的潜能。
[0020] 在乳中的重要的乳蛋白为酪蛋白。酪蛋白构成了牛乳蛋白的约80%，以及构成了 人乳蛋白的20%至45%。
[0021] 鉴于酪蛋白在乳（如牛乳）或乳产品中的相对高含量，对这种蛋白质、其盐类（酪 蛋白盐）或其衍生物过敏可能导致相当大的问题。因此，迫切需要预防对这些蛋白的过敏 和诱导对它们口服耐受。
[0022] 发明简述
[0023] 令人惊奇的是，本发明的发明人已经找到预防对乳蛋白过敏的方法，和对诱导它 们，特别是酪蛋白和酪蛋白盐的口服耐受的方法。
[0024] 本发明人已发现：将交联酪蛋白或交联酪蛋白盐给予倾向于形成乳蛋白过敏的哺 乳动物（包括人类个体，如婴儿）显著降低形成对乳蛋白（特别是牛乳蛋白，如酪蛋白或酪 蛋白盐）的过敏的致敏作用。因此，预防形成对乳蛋白，如酪蛋白或酪蛋白盐，的过敏。
[0025] 还发现：交联酪蛋白或交联酪蛋白盐诱导对完整蛋白，即酪蛋白或酪蛋白盐，的口 服耐受。因此，提供了通过脱敏疗法预防对乳蛋白，如酪蛋白或酪蛋白盐，的过敏的方法。 [0026] 当使用已经通过酶处理（如利用转谷氨酰胺酶处理）的已经交联酪蛋白或酪蛋白 盐时，已经得到预防对乳蛋白过敏的特别良好的结果。
[0027] 因此，根据本发明的交联酪蛋白或交联酪蛋白盐可用于在易感人群，如年幼的儿 童，例如至多12个月的儿童，优选至多6个月的儿童，中预防过敏，即，预防对乳蛋白（如酪 蛋白或酪蛋白盐）的致敏作用（例如测量为减轻的临床相关症状）。而且，它可被用来在这 些人群中诱导对乳蛋白，如酪蛋白和酪蛋白盐，的口服耐受。
[0028] 定义
[0029] 本文所用的术语"低变应原性"具有其正常的科学含义并且指的是其中没有或只 触发轻微的过敏反应的情形。
[0030] 本文所用的术语"蛋白"指的是包含至少10个氨基酸残基的线性多肽。
[0031] 本文所用的术语"乳蛋白"指的是存在于来自非人的哺乳动物（如牛（例如奶牛）、 山羊、绵羊或骆驼）的乳中的蛋白，或这类蛋白的盐（例如酪蛋白盐）。
[0032] 术语"牛乳"或"牛乳蛋白"分别指的是来自牛（包括奶牛）的乳或乳蛋白。
[0033]