好后，用温生理盐水润湿的无菌棉小心擦洗猕猴的阴茎龟头部，防止精液被污染；
[0028]3)用镊子夹持一个灭菌擦拭物，在龟头和阴茎根部间反复轻轻擦拭I?2min ;
[0029]4)采用振动采精仪对猕猴进行刺激，采精仪的振动幅度始终设置为3mm，先以频率90Hz，以打圈的方式刺激猕猴的阴囊中线部位和附睾，刺激时间为5min ;然后以频率100Hz，以阴茎为中心，以打圈的形式刺激周围的部位，刺激时间为3mins ;最后以频率110?120Hz，集中刺激阴茎体部和包皮结合处，刺激时间为2min ;整个刺激过程中，采精仪都不接触龟头；
[0030]5)猕猴射精后，将胶块部分转移到离心管中，液体部分用移液枪移吸取也转移到离心管中，获得猕猴精液；然后置于37°C的恒温水浴锅中备用，猕猴采精频率每周最多2次，注意适当补充营养。
[0031]步骤I)中所述的适应训练为:实验前I?2周开始为需要进行采精的猕猴佩戴猴颈圈；佩戴猴颈圈后，每天把猕猴安置到猴椅上进行保定，保定时间从5min开始，并不断延长至30min，保定结束后把猕猴放回笼子里；保定的操作每天重复3?4次，保定前后和过程中都给猕猴喂吃新鲜水果或者坚果作为奖励，使猕猴消除对保定的恐惧和反抗；猕猴都能在低应激状态下接受猴椅保定，且不会有明显的反抗和攻击行为。
[0032]所述的猕猴为猕猴属非人灵长类动物，为猕猴、食蟹猴或恒河猴。
[0033]步骤I)过程中猕猴若出现排尿，立即用温生理盐水润湿的无菌棉球擦洗干净。
[0034]步骤3)中所述的灭菌擦拭物为灭菌棉球或灭菌绒布中的一种。
[0035]步骤3)中的擦拭过程中若猕猴有射精即可停止，收集精液。
[0036]步骤4)中若猕猴没有射精，则略作休息后，重复步骤4) 一次，累计刺激时间不超过20min ;若累计刺激时间超过20min没有射精，可以认为这一次采精失败，休息一天再重复刺激。
[0037]步骤4)所述的振动接触棒由0.5ml或1.5ml的EP (eppendorf)管加工而成，具体为:把EP管的管盖去除，并把用于接触猕猴生殖器的管口端打磨光滑，EP管的底部外壁刻上螺纹后安装在振动采精仪的卡槽里。
[0038]通过训练使猕猴能在低应激水平下接受非麻醉保定；所用的猴椅和猴颈圈可以根据猕猴体重选择成不同型号；采精仪振动探头为改装的，可以根据需求不同做成适合需要的长度；采精的过程中猕猴的表现很安静舒适，不需要麻醉。
[0039]实施例1提供的猕猴采精方法获得的猕猴精子可以用于猕猴人工授精，精子冷冻保存，转基因和基因敲除猕猴的创制，生殖毒理学和生殖生物学研宄。
[0040]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种猕猴采精方法，其特征在于:具体操作步骤如下: 1)将经过适应训练的佩戴了猴颈圈的猕猴置于猴椅上，把猴颈圈固定于相应的卡槽中，猕猴面向前方，暴露生殖器部位，实现猕猴的保定； 2)猕猴保定好后，用温生理盐水润湿的无菌棉小心擦洗猕猴的阴茎龟头部，防止精液被污染； 3)用镊子夹持一个灭菌擦拭物，在龟头和阴茎根部间反复轻轻擦拭I?2min; 4)采用振动采精仪对猕猴进行刺激，采精仪的振动幅度始终设置为3mm，先以频率90Hz，以打圈的方式刺激猕猴的阴囊中线部位和附睾，刺激时间为5min ;然后以频率10Hz，以阴茎为中心，以打圈的形式刺激周围的部位，刺激时间为3min ;最后以频率110?120Hz,集中刺激阴茎体部和包皮结合处，刺激时间为2min ;整个刺激过程中，采精仪都不接触龟头； 5)猕猴射精后，将胶块部分转移到离心管中，液体部分用移液枪移吸取也转移到离心管中，获得猕猴精液。
2.根据权利要求1所述的猕猴采精方法，其特征在于:步骤I)中所述的适应训练为:实验前I?2周开始为需要进行采精的猕猴佩戴猴颈圈；佩戴猴颈圈后，每天把猕猴安置到猴椅上进行保定，保定时间从5min开始，并不断延长至30min，保定结束后把猕猴放回笼子里；保定的操作每天重复3?4次，保定前后和过程中都给猕猴喂吃新鲜水果或者坚果作为奖励，使猕猴消除对保定的恐惧和反抗。
3.根据权利要求1所述的猕猴采精方法，其特征在于:所述的猕猴为猕猴属非人灵长类动物。
4.根据权利要求1所述的猕猴采精方法，其特征在于:步骤I)过程中猕猴若出现排尿，立即用温生理盐水润湿的无菌棉球擦洗干净。
5.根据权利要求1所述的猕猴采精方法，其特征在于:步骤3)中所述的灭菌擦拭物为灭菌棉球或灭菌绒布中的一种。
6.根据权利要求1所述的猕猴采精方法，其特征在于:步骤4)中若猕猴没有射精，则略作休息后，重复步骤4) 一次，累计刺激时间不超过20min。
7.根据权利要求1所述的猕猴采精方法，其特征在于:步骤4)所述的振动接触棒由.0.5ml或1.5ml的EP管加工而成，具体为:把EP管的管盖去除，并把用于接触猕猴生殖器的管口端打磨光滑，EP管的底部外壁刻上螺纹后安装在振动采精仪的卡槽里。
【专利摘要】本发明公开了一种猕猴采精方法，属于生物技术领域。所述的猕猴采精方法，具体操作步骤如下：1.猴椅保定猕猴；2.用温生理盐水擦洗阴茎龟头部；3.用灭菌擦拭物擦拭龟头和阴茎根部；4.使用振动采精仪进行刺激；5.收集精液。本发明的猕猴采精方法可以用于猕猴人工授精，精子冷冻保存，转基因和基因敲除猕猴的创制，生殖毒理学和生殖生物学研究，充分发挥优良雄性猕猴的繁殖效率，也有利于保存优良猕猴的遗传基因；采集的精液的量更多，质量更好；避免了麻醉对猕猴伤害和采精过程的影响；此采精方法操作简单、快速，对猕猴温和无创伤，更符合动物福利保护的要求。
【IPC分类】A61D19-02
【公开号】CN104758082
【申请号】CN201510100034
【发明人】杨世华, 仇思恩, 黄群山, 王歌, 卢红宇, 吴绮琪, 徐冬冬
【申请人】华南农业大学
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年3月6日