紫萼玉簪花总皂苷的制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域；具体涉及紫萼玉簪花总皂苷的制备新方法。
【背景技术】
[0002] 紫萼玉簪（Hosta ventricosa Stearn)为百合科玉簪属多年生草本植物。《全国 中药汇编》记载紫玉簪具有散瘀止痛、解毒功效，可治跌打损伤、胃痛、咽喉肿痛等疾病。化 学成分主要是留体皂苷、黄酮类（山萘酚苷）、苯丙素类（7-羟基香豆素）等。我们前期研 宄发现紫萼玉簪花具有抗肿瘤作用。经过MTT法跟踪筛选发现，总留体皂苷是紫萼玉簪抗 肿瘤的活性部位，且增殖抑制作用显著；同时发现其具有良好的抗氧化作用，是一种非常具 有开发前景的肿瘤预防和治疗药物，同时也可作为保健品开发应用。但目前紫萼玉簪总甾 体皂苷的制备方法皂苷得率和纯度都很低，制约了其深度开发和应用。本发明主要是建立 了紫萼玉簪总留体皂苷的高效、高纯度、低成本的制备工艺，为后续药品和保健品的研发奠 定基础。
[0003] 皂苷的提取方法有许多种，常用的有浸渍法、渗滤法、回流法、超声提取法等。浸渍 法、渗滤法操作简单，成本低廉，但耗时长。回流法提取过程中皂苷类成分长期受热，容易破 坏皂苷结构。超声法具有提取率高，加快细胞内有效成分的溶出，缩短提取时间，温度低的 特点，但限于提取器的容积不适合工业化大生产。文献报道采用超声提取，硅胶柱色谱结合 DlOl大孔树脂纯化紫萼玉簪花总皂苷，提取方法仅限于实验室研宄，纯化过程繁琐，总皂苷 纯度不高。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决现有提取紫萼玉簪总皂苷方法存在得率较少且皂苷的纯度不高的 技术问题。
[0005] 本发明的提供了一种紫萼玉簪花总皂苷的制备方法。
[0006] 本发明还提供了紫萼玉簪花总皂苷的应用。
[0007] 本发明紫萼玉簪花总皂苷提取方法高效、省时、节能、经济，采用AB8大孔树脂进 行纯化，获得精制总皂苷。采用MTT法，选择人乳腺癌细胞MCF-7,人肝癌细胞H印G2、人胃 癌细胞SGC-7901和人肺癌细胞A549四种肿瘤细胞进行体外活性筛选，从而进行药效学评 价。采用紫外分光光度法，评价紫萼玉簪花总皂苷对羟基自由基体系、DPPH自由基体系的 体外抗氧化活性。
[0008] 本发明中紫萼玉簪花总皂苷的制备方法是按下述步骤进行的：
[0009] 步骤一、取新鲜紫萼玉簪花，清洗后至于磨浆机中，按紫萼玉簪花与乙醇质量比为 1:10~15配比加入体积分数大于等于85%的乙醇，升温至50°C研磨IOmin~15min，然后 过滤或者离心，提取3次，合并乙醇提取液，浓缩得到浸膏。浸膏用热水分散成真溶液后用 1~3倍的水饱和正丁醇萃取5~8次，合并正丁醇萃取液，浓缩得到正丁醇萃取物。
[0010] 步骤二、AB8大孔树脂进行预处理，然后装入树脂柱，步骤一得到的正丁醇萃取物 用热水分散成真溶液后上样，先用蒸馏水洗脱至Molish反应呈阴性，再用体积分数为30% 乙醇洗脱除杂；然后用体积分数为70%的乙醇溶液作为洗脱液进行洗脱处理，洗脱液的用 量为6~8倍树脂柱体积，洗脱流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脱液后回收溶剂，蒸干，即得 到紫萼玉簪花总皂苷。
[0011] 本发明采用热磨，工艺简单，热磨加快了纤维的断裂，而且原料研磨的更加细小， 有利于有效成分的溶出。
[0012] 本发明方法获得紫萼玉簪花总皂苷的得率在5. 0%以上。
[0013] 本发明方法获得紫萼玉簪花的总皂苷纯度高，在60%以上。
[0014] 采用MTT法实验结果显示紫萼玉簪花总皂苷进对以人乳腺癌细胞MCF-7,人肝癌 细胞H印G2、人胃癌细胞SGC-7901和人肺癌细胞A549有较强的增殖抑制作用，IC5tl分别为 26. 47、21. 94、20. 54和22. 95 μ g/L，紫萼玉簪花总皂苷具有抗肿瘤活性。
[0015] 采用紫外分光光度法，通过与Vc对比，评价紫萼玉簪花总皂苷对羟基自由基体系 和DPPH自由基体系的体外抗氧化活性。实验结果表明，紫萼玉簪花总皂苷具有清除羟基自 由基和DPPH自由基的能力，且清除能力与样液浓度呈量效关系，其IC5tl分别为4. 67mg/mL， 0. 09mg/mL。抗氧化作用与紫萼玉簪花总皂苷含量呈正相关，紫萼玉簪花总皂苷具有抗氧化 活性。
[0016] 本发明的方法简单，操作方便。
[0017] 本发明紫玉簪花的总皂苷可以制成片剂、冲剂、胶囊剂等口服制剂用于癌症治疗。 此外，作为天然来源的抗氧化剂也可用于保健食品和化妆品。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0018] 一：本实施方式中紫萼玉簪花总皂苷的制备方法是按下述步骤进行 的：
[0019] 步骤一、取新鲜紫萼玉簪花，清洗后至于磨浆机中，按紫萼玉簪花与乙醇质量比为 1:10~15配比加入体积分数大于等于85%的乙醇，升温至50°C研磨IOmin~15min，然后 过滤或者离心，提取3次，合并乙醇提取液，浓缩得到浸膏。浸膏用热水分散成真溶液后用 1~3倍的水饱和正丁醇萃取5~8次，合并正丁醇萃取液，浓缩得到正丁醇萃取物。
[0020] 步骤二、对AB8大孔树脂进行预处理，然后装入树脂柱，步骤一得到的正丁醇萃取 物用热水分散成真溶液后上样，先用蒸馏水洗脱至Molish反应呈阴性，再用体积分数为 30 %乙醇洗脱除杂；然后用体积分数为70 %的乙醇溶液作为洗脱液进行洗脱处理，洗脱液 的用量为6~8倍树脂柱体积，洗脱流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脱液后回收溶剂，蒸干， 即得到紫萼玉簪花总皂苷。
[0021] 对AB8大孔树脂进行预处理（取大孔树脂适量，加入5倍量乙醇浸泡24h，充分溶 胀。装柱后用蒸馏水冲洗至无白色浑浊现象为止。5%HCL冲至流出液PH为3,静置2h，蒸 馏水洗至中性，再用5% NaOH冲至流出液PH为9,静置2h，蒸馏水洗至中性，备用。）
[0022] 采用下述实验验证发明效果
[0023] 对比例1 :取30g新鲜紫萼玉簪花，干燥后，粉碎，加入乙醇300mL放入50°C体积分 数等于80%的乙醇中浸提50min，过滤，浓缩乙醇，得到浸膏。浸膏用热水分散成真溶液后 用1~3倍的水饱和正丁醇萃取8次，合并正丁醇萃取液，浓缩得到正丁醇萃取物。
[0024] 对比例2 :取30g新鲜紫萼玉簪花，干燥后，粉碎，加入乙醇300mL放入50°C体积分 数等于80 %的乙醇超声提取50min，过滤，浓缩乙醇，得到浸膏。浸膏用热水分散成真溶液 后用1~3倍的水饱和正丁醇萃取8次，合并正丁醇萃取液，浓缩得到正丁醇萃取物。
[0025] 表1不同提取方法对正丁醇萃取物得率和皂苷纯度的影响
[0026]
【主权项】
1. 紫玉簪花总皂苷的制备方法，其特征在于紫玉簪花总皂苷的制备方法是按下述步骤 进tx的： 步骤一、取新鲜紫玉簪花，清洗后至于磨浆机中，按紫玉簪花与乙醇质量比为1:5~10 配比加入体积分数大于等于85%的乙醇，升温至50°C研磨IOmin~15min，然后过滤或者离 心，提取3次，合并乙醇提取液，挥去乙醇，浓缩，得到浸膏； 步骤二、AB8大孔树脂进行预处理，然后装入树脂柱，步骤一得到的乙醇浸膏用热水分 散成真溶液后上样，先用蒸馏水洗脱至Molish反应呈阴性，再用体积分数为20%乙醇洗脱 除杂；然后用体积分数为50%~70%的乙醇溶液作为洗脱液进行洗脱处理，洗脱液的用量 为6倍树脂柱体积，洗脱流速控制在2BV/h，收集乙醇洗脱液后回收溶剂，蒸干，即得到紫玉 簪花总皂苷。
2. 根据权利要求1所述的紫玉簪花总皂苷的制备方法，其特征在于步骤二中热水的温 度为（70~80) °C。
3. 根据权利要求1所述的紫玉簪花总皂苷的制备方法，其特征在于用HPD826大孔树脂 或NKA-9大孔树脂替换步骤二所述的AB8大孔树脂。
4. 根据权利要求1所述的紫玉簪花总皂苷的制备方法，其特征在于步骤二中用体积分 数为70 %的乙醇溶液作为洗脱液。
5. 紫玉簪花总皂苷在制备抗肿瘤药物及作为天然来源的抗氧化剂在保健食品和化妆 品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了紫玉簪花总皂苷的制备方法和应用，本发明属于医药技术领域。本发明要解决现有提取紫玉簪总皂苷方法存在得量较少且皂苷的纯度不高的技术问题。本发明的方法如下：一、取新鲜紫玉簪花，清洗后至于磨浆机中，加入乙醇，升温至50℃研磨，再过滤或者离心，挥去乙醇，浓缩，得到浸膏；二、对AB8大孔树脂预处理，装入树脂柱，上样，先用蒸馏水洗脱至Molish反应呈阴性，再用20％乙醇洗脱除杂，用50％～70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液后回收溶剂，蒸干。本发明中紫玉簪花总皂苷在制备抗肿瘤药物及作为天然来源的抗氧化剂在保健食品和化妆品中的应用。本发明紫玉簪花的总皂苷纯度高，在60％以上。
【IPC分类】A61P35-00, A61K36-896, A61K8-97, A23L1-30, A61Q19-08, A61P39-06
【公开号】CN104857245
【申请号】CN201510296765
【发明人】邹翔, 曲中原
【申请人】哈尔滨商业大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年6月3日