试剂可用来治疗预先存在肿瘤的动物。在这种情况下，将16个小鼠肝癌MH-22细胞或类似细胞皮下注射到C3HA小鼠的侧腹来建立肿瘤。一旦在肿瘤细胞植入后形成肿瘤，即在随意提供的饮用水中给实验组小鼠施用含有Famvir胃内(1.g.)溶液的组合物，而对照组小鼠接受不含该药物的相同组合物(例如蒸馏水)。每2 — 3天监测一次肿瘤生长。Famvir含有泛昔洛韦，即口服给药的喷昔洛韦的前药。在化学上，泛昔洛韦被称为二乙酸2-[2-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)乙基]-1，3-丙二醇。当给这些荷瘤动物施用Famvir 21 一 28天时，观察到肿瘤生长迟缓。这种肿瘤细胞生长的抑制在对照组中未发现。治疗开始几周后，只有用Famvir处理的动物显示100%的存活率。
[0090]在另一个实施方案中，也可采用确定细胞凋亡促进的体内试验。在这个实施方案中，可以检测用治疗性组合物治疗的带有异种移植物的动物中凋亡灶的存在，并与未治疗的带有异种移植物的对照动物相比较。在治疗组动物的肿瘤中发现凋亡灶的程度提供了关于该组合物的治疗效果的指示。
[0091]在设计用于治疗端粒酶介导的人类癌症(早期肿瘤和血管化的肿瘤)的药物的适当剂量时，可由本文描述的动物研宄外推而容易地获得用于临床给药的合适剂量。为了实现这种转换，需考虑每单位质量的实验动物所施用的药物质量，优选地考虑实验动物和人类患者之间体表面积的差异。所有这些计算对本领域普通技术人员来说是已知的和常规的。因此，治疗有效剂量的确定属于本领域技术人员的能力范围之内。
[0092]例如，采用在细胞培养试验和小鼠研宄中成功的GCV或ACV (V-GCV或V-ACV)剂量，并且应用基于质量和表面积的标准计算，得出用于成人患者的有效剂量是每名患者每天大约100mg到大约6000mg的GCV或ACV，优选地是每名患者每天大约500mg到大约100mg的V-GCV或V-ACV。因此，应用这些信息，本文预期用于人类给药的治疗剂(例如阿昔洛韦、更昔洛韦、喷昔洛韦及相应的前药，即，伐昔洛韦、缬更昔洛韦、泛昔洛韦)的低剂量可以是每名患者每天大约1、5、10、20、25或大约30mg ;用于人类给药的治疗剂的有用高剂量可以是每名患者每天大约250、300、400、450、500或大约600mg。有用的中等剂量可以是每名患者大约40mg到大约200mg。
[0093]尽管提到这些范围，但是应当理解，考虑到本文所述的参数和详细指导，在本发明的范围内也包括活性或最佳范围的进一步变化。本发明的治疗方案的目的总的是产生明显的抗肿瘤效果，同时仍然使剂量保持在与不可接受的毒性有关的水平以下。除了改变剂量本身外，也可以改变给药方案以优化治疗策略。目前优选的一种治疗策略是在大约60天的期限内施用大约I 一 500mg、优选地大约1-1OOmg的端粒酶抑制剂或拮抗剂或包含它们的治疗性混合物，大约4次。例如，可以在大约第1、第3或第4天和第6或第7天给予剂量。可通过口服单个或分开的剂量进行给药，或者例如直接向实体瘤部位给药，或者以缓释制剂形式给药。负责给药的医生根据本发明的公开内容，将能够确定适合受试个体的剂量、给药的形式和途径。这种优化和调整在本领域中常规进行，不需要过多的实验。在施用特定剂量本身时，根据关于无菌性、致热原性、纯度和对人类患者全身的总体安全性的管理标准，优选地提供药物学上可接受的组合物。当然，身体检查、肿瘤测量和实验室检验应当在治疗前进行，并且在治疗后以最多I到几个月的间隔进行，本领域技术人员应当知道如何进行这种常规程序。临床反应可用任何可接受的指标来定义。例如，完全有效可以定义为在治疗后特定期限内所有可测到的肿瘤均消失。
[0094]工作实施例
[0095]提供下列工作实施例是为了证明本发明的优选实施方案，而绝不应视为限制本发明的范围。除了另外详细说明外，下述实施例采用本领域技术人员公知的常规技术进行。此夕卜，本领域技术人员还应当理解，该实施例中公开的技术代表了本发明人发现的在实施本发明中工作良好的技术，因此可以被视为构成了优选实施模式。然而，本领域技术人员根据本申请的公开内容应当理解，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以对公开的具体实施方案进行许多改变，而仍然获得同样的或类似的结果。
[0096]端粒酶阳性癌细胞中端粒酶缩短、G2停滞和细胞凋亡的诱导已经如下所述进行。
[0097]使用端粒酶阳性(HeLa)和端粒酶阴性(U-20S)细胞系。进行适当的试验以检测和证实这些细胞中的端粒酶/LlRT比活性。
[0098]这些细胞系用治疗浓度的ACV (3.0 μ M)、GCV (1.5 μ M)或PCV (1.5 μ Μ)处理，以证明这些细胞内的端粒DNA合成可被抑制，由此诱导端粒缩短。ACV、GCV和PCV处理的和未处理的细胞系中的端粒长度采用端粒特异性肽核酸(PM)探针通过流式细胞术进行测量23’24。为了确定细胞周期分布，用二碘化丙锭(PD将细胞染色23。在处理后10天和14天，证明两种细胞系发生端粒缩短、大规模细胞凋亡和G2停滞(图1、2、3)。
[0099]为了证明细胞周期分布的变化，用ACV、GCV或PCV处理HeLa和U-20S细胞14天，用PI染色，并同时通过流式细胞术进行分析。结果显示细胞周期G2停滞。重要的是注意到这种变化是快速的，并且在ACV处理仅仅几天后就可检测到。
[0100]该研宄中使用的U-20S(骨肉瘤)和HeLa(子宫颈)细胞系从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collect1n) (Rockville, MD)获得。细胞在 37°C和 5%CO2的潮湿气氛下在补充10%胎牛血清的D-MEM培养基中培养。为了用ACV处理细胞，向培养基中补加3 μΜ阿昔洛韦(阿昔洛韦，TEVA Pharm.1nd.Ltd,以色列)。为了用GCV处理细胞，向培养基中补加1.5 μΜ GCV(Cymevene, Hoffman-La Roche)。为了用PCV处理细胞，向培养基中补加1.5 μΜ PCV(喷昔洛韦，Merck&C0.)。
[0101]实时TRAP 试验如前所述进行(Wege 等人，SYBR Green real-time telomericrepeat amplificat1n protocol for the rapid quantificat1n of telomeraseactivity.Nucleic Acids Res.2003 ;31(2):E3_3)。
[0102]对于通过流式细胞术进行的端粒长度测量，如Rufer等人，1998，Telomerelength dynamics in human lymphocyte subpopulat1ns were measured by flowcytometry, Nat.B1technol.16, 743-747所述，将细胞用端粒特异性FITC偶联的(C3TA2)3PNA(Applied B1systems)探针染色，并且用 0.06 μ g/ml PI 复染。
[0103]因此，本文已经证实了核苷类似物ACV、GCV和PCV显然导致端粒长度缩短。绝不应认为有用的抑制性化合物仅限于以上具体举例说明的特定化合物或核苷类似物和衍生物。实际上，可以证明根据本申请公开内容设计和合成的大多数有用的药理学化合物是第二代衍生物或进一步化学修饰的无环核苷类似物。
[0104]引用的参考文献:
[0105]下列编号为I 一 26的参考文献在上述说明书中被引用(带有相应的上标号)，因此本领域的技术人员会将这些参考文献与上文中适当的上标号相对应。
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