4-甲氧基苄醇在制备抗氧化剂类药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及4-甲氧基苄醇在制备抗氧化剂类药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 氧化应激（Oxidative Stress)是指体内氧化与抗氧化作用失衡，倾向于氧化，导 致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。氧化应激是破坏了强氧 化剂和抗氧化剂的平衡导致的潜在伤害，氧化剂、抗氧化剂平衡的破坏是细胞损伤的主要 原因。氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，并被认为是导致衰老和疾病的一 个重要因素。另外，脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI) 是缺血性脑血管病（Ischemic cerebrovascular diseases，ICVD)的主要病理过程，而氧化 应激（oxidative stress，OS)是造成CIRI的重要因素，因此，抗氧化应激损伤对ICVD的治 疗及预后也具有重要意义。
[0003] 4-甲氧基苄醇，无色或微黄色液体。熔点23-25.5°C，沸点159°C，相对密度 1. 113 (15/15°C )，折光率1. 5442。易溶于醇和醚，几乎不溶于水，其化学式为：C8H1(l02,结构 式为、。。目前4-甲氧基苄醇通常作为食用香料食用，未见其用于抗氧化的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供4-甲氧基苄醇在制备抗氧化剂中的用途。
[0005] 抗氧化剂（AOA)也叫清除剂，是一类能够抑制或阻断自由基链式反应的启动和增 生（蔓延）过程，降低自由基浓度，延缓哀老进程，提高生命活力的化合物。
[0006] 本发明首先提供了 4-甲氧基苄醇在制备抗氧化剂类药物中的用途。
[0007] 进一步地，所述抗氧化剂类药物是抗氧化损伤的药物。
[0008] 更进一步地，所述抗氧化损伤的药物是预防和/或治疗氧化应激损伤的药物。
[0009] 再进一步地，所述药物是降低ROS水平、提高SOD活力、提高GSH含量和/或抗细 胞凋亡的药物。
[0010] ROS :活性氧；SOD :超氧化物歧化酶活力；GSH :谷胱甘肽。
[0011] 其中，所述制剂为口服制剂。
[0012] 其中，所述口服制剂是胶囊剂、片剂。
[0013] 本发明还提供了一种抗氧化损伤的药物，它是以4-甲氧基苄醇为活性成分，加上 药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
[0014] 所述制剂为口服制剂。
[0015] 4-甲氧基苄醇可通过降低细胞内ROS水平、提高SOD活力、提高GSH含量和/或抗 细胞凋亡发挥抗氧化损伤的作用，从而提高细胞存活率，可以制备成为抗氧化剂，用于预防 抗氧化损伤，应用前景良好。
[0016] 下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限 制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述 基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
【附图说明】
[0017] 图1 4-甲氧基苄醇对H2O2损伤PC12细胞后MMP变化（40 X 10)。
[0018] 图2 4-甲氧基节醇对!1202致PC12细胞氧化损伤后。Caspase-9、Caspase-12、 Caspase-3 表达的影响（注：lControl、2Model、3Eda-160、4MA-20、5MA-40、6MA-80) 〇
[0019] 图3 4-甲氧基苄醇对H2O2致PC12细胞氧化损伤后ERK1/2、P-ERK1/2、JNK、P-JNK、 p38、P-p38 蛋白表达的影响。（注：lControl、2Model、3Eda-160、4MA-20、5MA-40、6MA-80、 7Model+抑制剂、8Eda-160+抑制剂、9MA-20+抑制剂、10MA-40+抑制剂、11MA-80+抑制剂）。
【具体实施方式】
[0020] 实验例1 4-甲氧基苄醇的抗氧化作用
[0021] 第一部分、抗氧化损伤的作用
[0022] 1实验材料
[0023] I. 1实验细胞
[0024] 高分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PC12细胞），购自中国科学院上海生命科 学研宄院。
[0025] 1.2实验药品
[0027] 1. 3实验试剂
[0028]
[0032] I. 5· 1完全培养基
[0033] FBS与改良型RPMI-1640培养基以1:9的比例，配制为含10% FBS的RPMI-1640 完全培养基，同时加入l〇〇U/mL青霉素-链霉素溶液，密封4°C保存备用。
[0034] I. 5. 2PBS 缓冲液
[0035] 取9. 88g PBS液混合干粉溶解于IL双蒸水，完全溶解后调PH至7. 4,过滤除菌， 4 °C保存备用。
[0036] I. 5· 3MTT 溶液
[0037] MTT干粉0. 25g，加50mL PBS缓冲液，完全溶解后过滤除菌，2mL分装，-20°C保存 备用，全程避光操作。
[0038] 1. 5· 4H202造模液
[0039] 取30% H2O2原液ImL加入9mL无菌双蒸水，轻轻混勾，取混勾后的H2O 2液0· ImL加 入9. 9mL无菌双蒸水，轻轻混勾，再取第二次混勾后H2O2液ImL加入9mL无菌双蒸水，轻轻 混匀即得H 2O2造模液的高浓度储备液（lmmol/L)，配制过程和配制后的各浓度H2O 2溶液皆 注意严格避光和无菌操作，并贴好标签4°C避光保存，临用前取H2O2造模液的高浓度储备液 按1 : 19的比例加入到37°C温热过的无血清RPMI-1640培养基中轻轻混匀多次，即得浓度 为50 μ mol/L的H2O2造模液，H 202造模液现配现用，需多少配多少。
[0040] 1. 6药物配制
[0041] 1. 6. 1 4-甲氧基苄醇
[0042] 精密称取适量4-甲氧基苄醇加入DMSO配制成8. 0 X IO4 μ g/mL的高浓度储备液， 每管30 μ L定量分装，-20°C避光保存，实验前取一管用无血清RPMI-1640培养基稀释配制 成所需给药浓度组的最高浓度，过滤除菌，用此浓度依次稀释成所需的其余给药组浓度，务 必保证每个组的DMSO终浓度一致，并且终浓度小于0. 2 %。
[0043] 1. 6. 2 依达拉奉（Edaravone Injection)
[0044] 依达拉奉是一种脑保护剂（自由基清除剂），抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、 血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤.
[0045] 精密称取依达拉奉32mg加入到20mL无血清RPMI-1640培养基中，在55°C的水浴 中轻轻搅拌至全部溶解，于无菌生物安全柜中过滤除菌，即得浓度为I. 6mg/mL的依达拉奉 储备液，4°C避光保存，临用前按所需浓度换算稀释比例，用无血清RPMI-1640培养基进行 稀释给药。
[0046] 2实验方法
[0047] 2. 1PC12细胞的复苏、传代培养与冻存
[0048] 2. I. 1PC12细胞的复苏
[0049] 从-80 °C冰箱中取出一支PCl2细胞冻存管立即放入37 °C水中快速振摇，直至完全 融化，喷淋75 %酒精消毒外壁，于生物安全柜中将细胞悬液移入装有5mL完全RPMI-1640培 养基的25cm2培养瓶中，轻轻摇匀后置于37°C、5% CO2、95%空气、饱和湿度的0)2培养箱内 培养，4h后换液，过夜后再换液。
[0050] 2. I. 2PC12细胞的传代培养
[0051] 待复苏培养的PC12细胞长至70 %-80 %的贴壁率时，弃原培养基，取2mL PBS液清 洗一次，加入0. 25%胰酶2mL置于培养箱中消化3min，摇动培养瓶使细胞脱离瓶壁，显微镜 下观察当细胞收缩变圆，脱离瓶壁后，加入2mL完全RPMI-1640培养基终止消化，以1000 r/ min离心5min，弃上层液体，加入2mL完全RPMI-1640培养基，均匀吹打分散细胞制成细胞 悬液，分瓶传代，传代培养过程中，约2d更换一次新鲜培养液，取对数生长期的细胞用于实 验。
[0052] 2. I. 3PC12细胞的冻存
[0053] 当PC12细胞生长至对数生长期时，按2. 1. 2所述方法制成细胞浓度为IO6级的细 胞悬液，在每个I. 5mL的冻存管中加入0. 9mL悬液和0.1 mL 100 %的DMS0,吹打均匀，将密 封好的冻存管放入程序降温盒中直接放入-80 °C冰箱，过夜后移入-80°C冰箱里普通冻存 盒内保存。
[0054] 2. 2 4-甲氧基苄醇对氧化损伤PC12细胞存活率的影响
[0055] 2. 2. 1 方法
[0056] 当PC12细胞生长至对数生长期时，按2. 1. 2所述方法制成细胞浓度为3 X IO4个/ mL的细胞悬液，接种于96孔板上，置于37 °C、5 % CO2、95 %空气、饱和湿度的CO2培养箱内培 养24h后，分为正常对照组、H2O2损伤、依达拉奉组（160 μ g/m