3-(3-(苯并呋喃-2-羰基)硫脲基)-4-甲氧基苯甲酸的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及一种小分子化合物的医药应用，具体涉及 3- (3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲基）-4-甲氧基苯甲酸或其可药用盐在制备用于治疗与MIF 相关的炎症性疾病的药物，特别是MIF抑制剂中的用途。
【背景技术】
[0002] 巨细胞移动抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor，MIF)是一 种集细胞因子、酶活性、神经内分泌激素于一身的多功能蛋白质。作为一种细胞因子，MIF 几乎参与所有炎症性疾病过程，它通过活化巨噬细胞和T细胞来促进先天性和获得性免疫 响应，是先天性免疫系统的重要调节因子，被认为是连接内分泌系统和免疫体系的介导剂。 MIF与多种免疫性和炎症性疾病的发病机制密切相关，如MIF在单核/巨噬细胞的血管壁粘 附、跨膜移动、内皮下聚集、泡沫细胞形成及斑块稳定中的作用，涉及到类风湿性关节炎、动 脉粥样硬化发生和发展的多个方面。MIF还直接影响正常细胞的分裂和瘤基因诱导的恶性 转化，或间接通过调节机体免疫反应，促进细胞增殖、迀移以及血管增生等。
[0003] 由于具有广泛的生物活性，MIF与多种免疫、炎症以及肿瘤等疾病密切相关，已经 成为治疗这些疾病的一个重要靶点。在与MIF相关的抗炎药物研宄方面，国外许多医药公 司和科研机构正在开发新的具有抗炎效果的MIF抑制剂，但目前还没有成功上市的MIF抑 制剂。因此，积极寻找和设计新的MIF抑制剂，并探索其抗炎效果，具有重要的临床意义和 广阔的应用前景。
【发明内容】
[0004] 针对上述情况，本发明提供了一种小分子化合物一一3-(3-(苯并呋喃-2-羰基） 硫脲基）_4_甲氧基苯甲酸或其可药用盐在制备用于治疗与MIF相关的炎症性疾病的药物 中的用途，其中所述3-(3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲基）-4-甲氧基苯甲酸的结构式如下：
[0UU5J 1兀选的，仕上还忟不力菜干，所还n」约用盐包括（但不限于）3-(3-(苯并呋 喃-2-羰基）硫脲基）_4_甲氧基苯甲酸与盐酸、磷酸、硫酸等无机酸形成的酸加成盐以及 与醋酸、马来酸、枸橼酸、苯磺酸、甲基苯磺酸、富马酸、酒石酸等有机酸形成的酸加成盐。
[0006] 优选的，在上述技术方案中，所述与MIF相关的炎症性疾病包括(但不限于)类风湿 性关节炎、动脉粥样硬化和败血症。
[0007] 优选的，在上述技术方案中，所述用于治疗与MIF相关的炎症性疾病的药物为MIF 抑制剂。
[0008] 本发明对上述小分子化合物进行了生物学活性测定，发现其对MIF具有明显的酶 抑制活性，对小鼠腹腔巨噬细胞RAW264. 7中的糖皮质激素具有负向调节效果，可以显著抑 制脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS)诱导的炎性因子（TNF-a和NO)的释放，该化合物 还可以抑制MIF引起的巨噬细胞的趋化迀移。此外，MTT法检测证实该化合物在10、20和 40 y M三个浓度下对小胶质细胞BV-2和巨噬细胞RAW264. 7的活力均没有显著影响。在此 基础上，进一步研宄化合物抗炎作用是否与抑制MIF对ERK1/2的活化有关，发现这个化合 物可以抑制ERK1/2的磷酸化。
[0009] 本发明中的小分子化合物3-(3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲基）-4_甲氧基苯甲酸 具备MIF抑制剂的功能，对与MIF相关的炎症性疾病具有明显的抑制作用，可以用于制备与 MIF相关的抗炎药物。
【附图说明】
[0010] 图1为实施例1中化合物对MIF的酶抑制活性曲线。
[0011] 图2为实施例2中化合物对MIF引起的巨噬细胞趋化迀移的影响效果图。
[0012] 图3为实施例3中化合物对培养细胞的敏感性效果图。
[0013] 图4为实施例4中化合物对小胶质细胞中LPS诱导炎性因子的影响效果图。
[0014] 图5为实施例5中化合物对MIF刺激的RAW264. 7巨噬细胞中ERK活化的影响效 果图。
【具体实施方式】
[0015] 下面将结合附图及具体实施例对本发明做出进一步的描述。
[0016] 实施例1 :化合物对MIF的酶抑制活性实验。
[0017] 实验原理：MIF具有多巴色素互变异构酶活性，可以将橙色的D、L型多巴色素甲 醋转化为无色的 11引噪衍生物，吸光度采用Tecan Infinite M1000酶标仪在475nm波长下进 行3分钟吸光度测试。
[0018] 实验试剂的准备：脂多糖(大肠杆菌血清型055:B5)、（L)-3, 4-二羟基苯丙酮酸甲 酯和高碘酸钠购买自西格玛奥德里奇(美国密苏里州东部城市圣路易斯）；（S，R) -3- (4-羟 苯基）-4, 5-二氢-5-异恶唑乙酸甲酯（IS0-1)为MIF的典型抑制剂，购买自德国Merck公 司旗下的生化试剂品牌Calbiochem公司，在这里作为阳性对照；将化合物溶解在10mM的 DMS0储备溶液中，最后在缓冲液中DMS0的浓度低于0. 25%情况下，将RAW264. 7巨噬细胞 在37°C条件下添加5%热灭活胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS)，庆大霉素（50g/ml)和 5%(1)2的达尔伯克改良伊格尔培养基（Dulbecco' s modified Eagle's medium，DMEM)中生 长和维持，重组人类MIF在大肠杆菌中表达，并且进行纯化。
[0019] 实验步骤：为了制备（L)-多巴色素甲酯，将等体积（L)-3, 4-二羟基苯甲基丙氨酸 甲酯（4mM)和高碘酸钠（10mM)混合，并且在室温下培养3~5分钟，然后将（L)-多巴色素甲 酯（30yL)添加到包含重组人类MIF (120nM)和10mM磷酸钾缓冲液的96孔板中，另外添加 0. 5mM EDTA并保持pH=6. 2。为了测试化合物对MIF互变异构酶活性的抑制效应，将浓度为 1、5、10、25、50和100 y M的化合物分别添加到包含重组人类MIF( 120nM)的96孔板中，在添 加（L)-多巴色素甲酯之前培养30分钟，将孔板中的气泡去掉，采用Tecan InfiniteMlOOO 酶标仪在475nm波长下进行3分钟吸光度测试。
[0020] 实验结果：将浓度为1、5、10、25、50和1001^的3-(3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲 基）-4-甲氧基苯甲酸进行MIF的酶抑制活性实验，发现该化合物有很好的抑制活性，其半 抑制浓度IC 5Q为7. 47 yM/L (如图1所示)。
[0021] 实施例2:化合物对MIF引起的巨噬细胞趋化迀移的影响实验。
[0022] 实验原理：MIF对巨噬细胞有趋化迀移作用，抑制剂作用于MIF，可以在一定程度 上抑制MIF引起的巨噬细胞的趋化迀移。
[0023] 实验步骤：将重组人类MIF在添加或者缺失MIF互变异构酶抑制剂的情况下，分别 置于CM-16板的下室，然后在上室将RAW264. 7巨噬细胞接种于包含20000个细胞的无血 清培养基中。然后将CIM-16孔板转移到xCELLigence RTCA-DP中(德国曼海姆罗氏诊断公 司），在4小时的检测周期内每隔15分钟采集一次数据，最后通过RTCA 1. 2软件进行数据 分析。
[0024] 实验结果：Hit MIF表示热灭活的（Heat-inacti