一种适用于膀胱修复重建的支架材料的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医疗技术领域，涉及一种组织工程膀胱修复重建研究领域中植入类生物支架材料构建方法，尤其涉及一种适用于膀胱修复重建的支架材料的制备方法。
【背景技术】
[0002]由于各种原因所导致的膀胱疾病历来是泌尿外科临床治疗中的一个难题。虽然多种自体组织作为替代材料已经在膀胱修复重建中获得理想的效果，但相比而言组织工程技术没有前者“牺牲正常组织为代价，以手术创伤修复组织缺损”的固有缺陷，因而更可作为未来尿道重建发展的主要方向。现有国内外文献报道中对于各种组织工程材料或者材料-种子细胞复合体在膀胱修复重建中的研究已逐渐从实验室向临床拓展。其中不乏有小范围实际膀胱疾病临床治疗的案例，并且获得另人满意的初步疗效。
[0003]但是相对于种子细胞研究的日趋完善，在膀胱组织工程修复重建中选择何种支架材料最为理想却始终未能达成共识。目前在膀胱的组织工程研究中主要采用两大类支架:脱细胞组织基质(acellulartissuematrices, ATM)和可降解高分子材料(syntheticpolymers, SP)两大类。前者理化性质(孔隙率，空隙大小等)并不能完全符合膀胱重建的求，而且极难量化调节；后者缺乏细胞识别信号，不利于细胞识别黏附，而且降解时所形成的酸性环境及其降解产物还会引起周围组织的无菌性炎性反应
[0004]基于上述背景，目前在该研究领域，利用细菌纤维素进行相关生物支架材料的构建正受到越来越多的研究者的关注。现有报道中，利用细菌纤维素进行生物支架构建的报道已经有成功的案例。但是，当各种不同空间构象的细菌纤维素支架被植入体内后，由于机体缺乏相应的化学组分或酶蛋白类，使得细菌纤维素中β -1，4糖苷键无法被打断，因而无法自行降解为小分子葡萄糖。长时间细菌纤维素支架留置于体内则可能增加晶体附着、结石形成、异物感染等的可能性，并限制周围正常组织沿支架表面的生长，这与组织工程膀胱修复的生理进程不甚相符。因此，促进组织工程膀胱尽可能早期、快速建成新血供是保证新建的长段组织工程膀胱术后能达到理想效果的重要因素之一。因而在利用制备的材料进行种子细胞复合和个体回植之前还需要对其进行进一步的修饰加工。以往的研究报道中多将支架材料与血管源性生长因子(VEGF)或者血管生发相关细胞(内皮细胞、内皮祖细胞)相结合，以促进支架材料的血管化，保证其上的种子细胞的增殖，乃至复合材料回植体内后的长期存活。但是该类方法操作相对复杂，成本较高，不适合大面积组织材料的修饰，因而在距离临床应用方面还有很长的距离。仅将外源性VEGF蛋白加入移植环境中并不能有效而持久地促其血管化。采用基因工程技术使种子细胞携带VEGF基因，通过细胞持续分泌VEGF蛋白促进缺血组织的血管形成，但此方法可控性差，且存在病毒感染的风险。
【发明内容】
[0005]有鉴于此，本发明提供了一种适用于膀胱修复重建的支架材料的制备方法。
[0006]为达到上述目的，具体技术方案如下:
[0007]—种适用于膀胱修复重建的支架材料的制备方法，包括以下步骤:
[0008]步骤I，制备葡聚糖-壳聚糖-VEGF缓释微球；
[0009]步骤2，将制备的微球进行重悬，细菌纳米纤维膜按不同梯度浸入重悬的不同孔径的微球溶液中，静置后干燥处理。
[0010]优选的，所述步骤I中将η μ 11?10mg/ml的rhVEGF168溶液与m μ 11% w/v的葡聚糖水溶液搅拌，其中n:m = 1:8?15 ;1?2.2ml0.1% w/v的壳聚糖溶液逐步滴加于上述溶液中，并搅拌，最后加入60?95 μ I硫酸锌搅拌，采用5%甘露醇孵育，离心并重悬。[0011 ] 优选的，所述步骤I中的n:m = 1:10，壳聚糖溶液为1.6ml。
[0012]优选的，所述步骤I中80 μ ll-10mg/ml的rhVEGF168溶液与800 μ I葡聚糖水溶液按700rpm转速搅拌30min。
[0013]优选的，所述步骤I中加入壳聚糖溶液后搅拌5min。
[0014]优选的，所述步骤I中加入80 μ I硫酸锌搅拌30min。
[0015]优选的，所述步骤I中采用5%甘露醇孵育30min。
[0016]优选的，所述步骤I中通过酸碱度调节以及冻干处理后，将微球孔径控制在260?320nmo
[0017]优选的，所述步骤2中按不同梯度浸入时每次在10°C环境下静置12小时。
[0018]优选的，所述步骤2中完成梯度浸渍处理后，50°C干燥处理并予以钴-60照射消毒。
[0019]相对于现有技术，本发明的技术方案具有以下优点:
[0020]1，本发明中在细菌纤维素中加入了不同比例的VEGF微球，其结果均能使得最终细菌纤维素支架产生相应的程序式释放VEGF活性蛋白的能力；
[0021]2，根据细菌纤维素及过VEGF微球成份比例的不同，可以使得不同支架的产VEGF速度和总量得到充分的调控，满足组织工程膀胱修复重建不同阶段的要求。
【附图说明】
[0022]构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中:
[0023]图1是本发明实施例的VEGF微球扫描电镜；
[0024]图2是本发明实施例的细菌纤维素支架-VEGF微球复合体扫描电镜图。
【具体实施方式】
[0025]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0026]需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0027]以下将结合附图对本发明的实施例做具体阐释。
[0028]本发明的实施例的一种适用于膀胱修复重建的支架材料的制备方法，通过制备获得的VEGF-微囊颗粒与制成的细菌纤维素材料有效复合，按预先